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GDNF基因修饰的NSCs移植对暂时性缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用研究

中国临床解剖学杂志 2020年第4期38卷 408-413页

作者：刘芳毛志蓉邓莉陈波袁琼兰高小青西南医科大学神经生物学研究室四川泸州646000 同济大学医学院解剖学和神经生物学教研室上海200092

目的探讨移植胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF)基因修饰的神经干细胞(neural stem cells,NSCs)对暂时性缺血性脑卒中大鼠的神经保护。方法用GDNF重组腺病毒载体转染新生大鼠NSCs(GDNF/NSCs)... 详细信息

目的探讨移植胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF)基因修饰的神经干细胞(neural stem cells,NSCs)对暂时性缺血性脑卒中大鼠的神经保护。方法用GDNF重组腺病毒载体转染新生大鼠NSCs(GDNF/NSCs),分化培养7 d后,行免疫细胞化学染色检测微管相关蛋白2(MAP2)。采用改良的插线法制作暂时性脑缺血再灌注模型,3 d后经脑室分别移植生理盐水、NSCs和GDNF/NSCs。于再灌注后1、2、3、5、7周末处死大鼠,行免疫组织化学染色观察移植细胞在脑内的神经元分化及星形胶质细胞在缺血区形成胶质界膜情况,行Luxol fast blue(LFB)染色显示神经纤维损伤情况。结果GDNF/NSCs体外分化为MAP2^+细胞的比例显著高于NSCs的分化。移植细胞在脑内分化为MAP2^+细胞,于再灌注第5周分化达高峰,GDNF/NSCs组于再灌注第3~7周,其MAP2^+细胞显著高于NSCs组。各组缺血区由星形胶质细胞形成的血管胶质界膜存在不同程度的破坏,其连续性中断。对照组在各个时间点,血管胶质界膜损伤严重,完整性差,两细胞移植组,其胶质界膜随时间延长逐渐完整,GDNF/NSCs组早于NSCs组完善对胶质界膜的修复。此外,GDNF/NSCs组的神经纤维损伤修复优于NSCs组。结论GDNF/NSCs比NSCs对暂时性缺血性脑卒中大鼠模型有更好的神经保护作用,可能是与GDNF提高了NSCs在脑内的神经元分化,增强了NSCs对胶质界膜及神经纤维修复有关。

关键词：神经干细胞基因治疗胶质细胞源性神经营养因子脑卒中胶质界膜

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IRGM/Irgm1调节自噬和凋亡在炎症性疾病中的研究进展

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医学综述 2021年第5期27卷 882-888页

作者：孙松郝欣然邹小乙万鑫张芳妮孙博于波房绍红心肌缺血教育部重点实验室哈尔滨150086 哈尔滨医科大学神经生物学教研室哈尔滨150086 哈尔滨医科大学附属第二医院心内科哈尔滨150086

免疫相关GTP酶(IRG)属于γ干扰素诱导性GTP酶家族成员,在γ干扰素介导的宿主抗感染和炎症免疫中起重要作用。正常情况下,IRGM(人类)/Irgm1(小鼠)表达水平较低,在机体受到感染或炎症刺激时,IRGM/Irgm1可被γ干扰素迅速诱导表达并迁移至... 详细信息

免疫相关GTP酶(IRG)属于γ干扰素诱导性GTP酶家族成员,在γ干扰素介导的宿主抗感染和炎症免疫中起重要作用。正常情况下,IRGM(人类)/Irgm1(小鼠)表达水平较低,在机体受到感染或炎症刺激时,IRGM/Irgm1可被γ干扰素迅速诱导表达并迁移至细胞吞噬溶酶体膜上。目前人们对IRGM/Irgm1在疾病中的研究主要集中在炎性肠病、神经系统疾病以及肿瘤等疾病中。IRGM/Irgm1可能通过介导细胞自噬和凋亡调控疾病的进展,但具体机制目前尚不明确。IRGM/Irgm1作为细胞自噬与凋亡共同的调节蛋白,对多种疾病的发生、发展和转归起重要作用。

关键词：免疫相关GTP酶M 自噬凋亡

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IRGM/Irgm1的生物学功能研究进展

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国际免疫学杂志 2020年第3期43卷 313-318页

作者：黄凯徐红薇王广友哈尔滨医科大学神经生物学教研室 150081 哈尔滨医科大学免疫学教研室 150081

免疫相关鸟苷三磷酸酶M蛋白(immune-related guanosine triphosphatase M protein,IRGM/Irgm1)是免疫相关GTPases(immunity related GTPases,IRGs)家族的一员。IRGs是参与机体早期免疫应答的一类蛋白,不同物种的IRGs蛋白,其家族成员也大不相同。人类体内仅进化出两个IRG基因,一个功能性的IRGM和一个不参与免疫的IRGC。然而,在小鼠体内,IRGs是一个干扰素诱导的GTPase大家族,其Irgm1(LRG-47)功能也较为广泛,主要包括广谱的抗感染与宿主防御、细胞自噬以及在部分炎性疾病中的促炎作用。大量研究发现人类IRGM蛋白与小鼠的Irgm1发挥着相似但不完全相同的生物学功能。人类IRGM基因在自噬靶向消灭结核分枝杆菌中起着重要作用,并且IRGM与克罗恩病(Crohn's disease,CD)的发病风险密切相关,现就人类IRGM/Irgm1的功能及其作用机制进行综述。

关键词：免疫相关鸟苷三磷酸酶M蛋白抗感染细胞自噬炎性作用

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社交环境下小鼠超声发声特征及机制的研究进展

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神经解剖学杂志 2021年第2期37卷 226-230页

作者：莫辉明赵秋影黄鑫陈娣刘海鹰王文挺杨彦玲延安大学医学院生理学教研室延安716000 空军军医大学基础医学院神经生物学教研室西安710032 空军军医大学西京医院神经内科西安710032 广州医科大学附属第二医院神经研究所广州510220

小鼠能够发出的超出人耳听域范围(>20 kHz)的声音,称之为超声发声(USVs),幼鼠在母婴分离、受到低温刺激和触觉刺激下可发出USVs,从而引起母鼠探索、哺乳和筑巢等母性行为。成年小鼠在求偶行为、领地社交和等级社交时发出USVs。作为... 详细信息

小鼠能够发出的超出人耳听域范围(>20 kHz)的声音,称之为超声发声(USVs),幼鼠在母婴分离、受到低温刺激和触觉刺激下可发出USVs,从而引起母鼠探索、哺乳和筑巢等母性行为。成年小鼠在求偶行为、领地社交和等级社交时发出USVs。作为一种无创的、灵敏的、可量化的以及在出生后即可记录的实验指标,小鼠US-Vs被广泛用于社会行为、情感表达以及相关神经系统疾病模型研究中。本文就实验室用小鼠USVs的发声特征、社交环境下的诱发因素和发声机制做一综述,为进一步加深对相关社交行为特征的认识和其内在神经机制的理解提供新思路。

关键词：超声发声社交隔离求偶行为小鼠

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神经元膜蛋白功能及鉴定技术研究进展

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国际免疫学杂志 2020年第5期43卷 525-529页

作者：姜岩王菁华哈尔滨医科大学基础医学院神经生物学教研室 150081

神经元膜蛋白在神经细胞的生长发育和神经相关疾病的发展中发挥着关键作用,同时也是一些疾病治疗的潜在靶点。进一步了解神经元膜蛋白有助于加深对神经元功能的理解和寻找相关疾病的新的解决方法。文章总结了近几年发现的几种神经元膜... 详细信息

神经元膜蛋白在神经细胞的生长发育和神经相关疾病的发展中发挥着关键作用,同时也是一些疾病治疗的潜在靶点。进一步了解神经元膜蛋白有助于加深对神经元功能的理解和寻找相关疾病的新的解决方法。文章总结了近几年发现的几种神经元膜蛋白及其功能,以及一些新兴的研究技术。

关键词：神经元膜蛋白蛋白质鉴定

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高盐饮食促进脑缺血后巨噬细胞浸润及CCL3表达

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国际免疫学杂志 2021年第4期44卷 365-369页

作者：朱邦鉴夏艳玲王晓东张彤帅张瑶王广友汪丹丹黑龙江省第三医院神经外科黑龙江北安164092 黑龙江省第三医院神经内科黑龙江北安164092 哈尔滨医科大学神经生物学教研室 150081 哈尔滨医科大学附属第一医院伍连德纪念医院 150020

目的探讨高盐饮食(high salt diet,HSD)对脑缺血后巨噬细胞浸润及趋化因子C-C-基元配体3(chemokine C-C-Motif Ligand 3,CCL3)表达的影响。方法将实验小鼠分为正常饮食组(Normal组80只)和高盐饮食组(HSD组80只),分别喂养21 d,建立永久... 详细信息

目的探讨高盐饮食(high salt diet,HSD)对脑缺血后巨噬细胞浸润及趋化因子C-C-基元配体3(chemokine C-C-Motif Ligand 3,CCL3)表达的影响。方法将实验小鼠分为正常饮食组(Normal组80只)和高盐饮食组(HSD组80只),分别喂养21 d,建立永久性大脑中动脉闭塞(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)模型,分为假手术(sham)组(40只),缺血12 h组(40只),缺血1 d组(40只)和缺血3 d组(40只);流式细胞仪检测缺血脑组织中巨噬细胞浸润情况;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测缺血脑组织中CCL3 mRNA表达情况;Western blot方法检测缺血脑组织中CCL3蛋白表达情况。结果与正常饮食(Normal)组相比,HSD组小鼠缺血脑组织中巨噬细胞浸润数量明显增多[12 h:(4.98±0.46)比(8.13±0.78),t=3.475,P_(12h)<0.05;1d:(7.30±0.89)比(13.41±0.66),t=5.519,P_(1d)<0.05;3d:(14.66±0.80)比(17.56±1.24),t=1.953,P_(3d)>0.05];与Normal组相比,HSD组小鼠缺血脑组织中CCL3 mRNA表达明显增多[12h:(7.10±0.24)比(14.09±0.92),t=6.302,P_(12h)<0.05;1d:(5.75±0.41)比(9.60±1.42),t=3.773,P_(1d)<0.05;3d:(4.37±0.37)比(7.36±0.77),t=4.560,P_(3d)<0.05],12 h时表达最高;CCL3蛋白表达明显增多[12 h:(0.13±0.01)比(0.24±0.02),t=4.230,P_(12h)<0.05;1d:(0.24±0.03)比(0.36±0.03),t=3.207,P_(1d)<0.05;3d:(0.14±0.02)比(0.25±0.02),t=4.381,P_(3d)<0.05],1d时表达最高。结论高盐饮食促进脑缺血后巨噬细胞浸润,促进CCL3的表达。

关键词：高盐饮食脑缺血巨噬细胞趋化因子C-C-基元配体3

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电针对神经免疫性疾病影响的研究进展

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国际免疫学杂志 2020年第2期43卷 184-189页

作者：陈昕李长宇赵丽刘玉梅哈尔滨医科大学医学神经生物学教研室 150081 海南省肿瘤医院海口571159 复旦大学附属妇产科医院心内科上海200011

多种疾病,如多发性硬化、脑缺血、脑损伤等都会累及神经系统,造成神经系统损伤、功能异常,从而导致全身性病变。而神经干细胞具有无限的自我增殖和产生细胞的能力,将神经干细胞应用于治疗中枢神经免疫性及神经退行性疾病已成为热点话题... 详细信息

多种疾病,如多发性硬化、脑缺血、脑损伤等都会累及神经系统,造成神经系统损伤、功能异常,从而导致全身性病变。而神经干细胞具有无限的自我增殖和产生细胞的能力,将神经干细胞应用于治疗中枢神经免疫性及神经退行性疾病已成为热点话题。除此之外,运用电针辅助性治疗神经免疫性疾病也得到了良好的效果。以下将对电针对神经干细胞的作用及神经系统疾病影响的研究进展作以总结。

关键词：电针神经干细胞神经免疫性疾病

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慢病毒介导的稳定表达miR-23b的骨髓间充质干细胞株的建立

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国际免疫学杂志 2019年第3期42卷 251-256页

作者：胡瑞雪吕玮琦李呼伦王广友刘玉梅孔庆飞穆莉莉刘希君哈尔滨医科大学神经生物学教研室 150081

目的通过慢病毒包装系统感染小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),建立能够稳定、高效表达microRNA-23b(miR-23b)的细胞株miR23b-BMSCs。方法从C57BL/6小鼠股骨及胫骨分离出来的原代BMSCs,经过多次传代培养... 详细信息

目的通过慢病毒包装系统感染小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),建立能够稳定、高效表达microRNA-23b(miR-23b)的细胞株miR23b-BMSCs。方法从C57BL/6小鼠股骨及胫骨分离出来的原代BMSCs,经过多次传代培养,依然能保持干细胞特有的螺旋生长状态以及自我更新的潜能。利用带有pre-miR23b基因的质粒pEZX-MR03与pMDLg/pRRE、pRSV Rev、pLP/VSVG进行慢病毒包装,收集病毒液感染BMSCs,显微镜下观察带有eGFP荧光标记的间充质干细胞,利用嘌呤霉素(2.5μg/mL)进行药筛。结果成功筛选出稳定表达miR-23b的BMSCs,提取干细胞内RNA进行逆转录、实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,qPCR)进行表达鉴定。qPCR结果显示,过表达BMSCs组miR-23b的表达量较对照组BMSCs提高100倍(t=4.572,P<0.05)。结论利用慢病毒包装可以成功地将miR-23b整合到干细胞的基因组中,得到稳定表达miR-23b的小鼠BMSCs细胞株。这种基因改造的方法为干细胞移植治疗疾病提供了一种新的联合方法与治疗思路。

关键词：骨髓间充质干细胞慢病毒包装 MiR-23b

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实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠体内免疫细胞变化的动态检测

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国际免疫学杂志 2019年第2期42卷 136-141页

作者：孙博刘江恒刘宇汪丹丹李呼伦王广友哈尔滨医科大学基础医学院神经生物学教研室 150081

目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠体内CD4^+和CD8^+T细胞动态变化.方法 C57BL/6小鼠用MOG35-55多肽和完全弗式佐剂皮下两点免疫,并设立对照组,在EAE小鼠免疫后的不同时间点检测淋... 详细信息

目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠体内CD4^+和CD8^+T细胞动态变化.方法 C57BL/6小鼠用MOG35-55多肽和完全弗式佐剂皮下两点免疫,并设立对照组,在EAE小鼠免疫后的不同时间点检测淋巴结中活化的CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的比例变化,检测脊髓内浸润的CD4^+T细胞和CD8^+T细胞.结果成功建立EAE动物模型,在免疫后第11天开始发病,病理学检测发现脊髓内有大量淋巴细胞浸润和脱髓鞘的现象,免疫荧光染色发现在发病高峰期脊髓内开始出现CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的浸润,而外周免疫器官淋巴结里,活化的CD4^+T细胞比例明显增多(P<0.05).结论 EAE中虽然外周活化的CD4^+T细胞比例升高,但CD4^+T细胞和CD8^+T细胞都会浸润到脊髓中.

关键词：实验性自身免疫性脑脊髓炎 CD4^+T细胞 CD8^+T细胞单核细胞

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加热灭活及4 ℃储存对血浆新型冠状病毒总抗体稳定性影响的研究

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国际免疫学杂志 2021年第5期44卷 493-499页

作者：李爱敏于思洋董晓宇童山石林宝月彭译漫陈晓杭张丽婷张明霞张政魏兰兰深圳市人民医院龙华分院检验科 518020 深圳市第三人民医院肝病研究所 518112 哈尔滨医科大学微生物学教研室 150081 南方科技大学医学院深圳518055 深圳市龙岗区妇幼保健院中心实验室 518172

目的探讨严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染患者的血液标本经不同灭活和储存处理后,SARS-CoV-2总抗体稳定性的变化,从而论证以56℃,60 min加热作为患者血液标本安全有效的... 详细信息

目的探讨严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染患者的血液标本经不同灭活和储存处理后,SARS-CoV-2总抗体稳定性的变化,从而论证以56℃,60 min加热作为患者血液标本安全有效的灭活方法的可行性。方法选取2020年2月24日至2020年3月30日深圳市第三人民医院收治的47例2019新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)确诊患者,另外选取同期因其他疾病入院的已排除患有COVID-19可能的33例住院患者。抽取两组研究对象的肘静脉乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)抗凝血液,应用化学发光微粒子免疫检测法检测56℃,30 min灭活前后和60 min灭活前后血浆SARS-CoV-2总抗体水平,并在指定时间点检测SARS-CoV-2总抗体,进一步比较不同灭活处理方式及不同储存时间对SARS-CoV-2总抗体的影响。结果56℃,30 min灭活前后和60 min灭活前后,血浆样本中SARS-CoV-2总抗体检测阳性结果一致率分别为96.15%和100%,灭活前后总抗体样本临界指数(cut-off index,COI)值的Pearson相关系数分别为0.9965(95%CI:0.9920~0.9984,P<0.05)和0.9981(95%CI:0.9962~0.9990,P<0.05)。血浆样本经先离心再灭活处理与先灭活再离心处理,SARS-CoV-2总抗体阳性结果一致率为100%,两组总抗体COI值的Pearson相关系数为0.9995(95%CI:0.9950~0.9999,P<0.05)。未灭活样本4℃储存30 d;56℃,30 min或60 min灭活样本4℃储存10 d,SARS-CoV-2总抗体COI值均未出现显著性变化。结论56℃,30 min或60 min灭活处理血浆样本及灭活后4℃储存10 d,未灭活4℃储存30 d均不会对SARS-CoV-2总抗体的检测结果造成影响。

关键词：新型冠状病毒抗体稳定性病毒灭活离心储存时间

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