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2005国际暨第八届全国头颈肿瘤大会

作者：杨雯君赵旭东张陈平王铸钢上海第二医科大学附属第九人民医院口腔颌面外科上海第二医科大学医学遗传学教研室上海南方模式生物研究中心上海第二医科大学附属第九人民医院口腔颌面外科上海第二医科大学医学遗传学教研室上海南方模式生物研究中心

目的克隆人PLAG1基因,构建PLAG1组织非特异性和特异性表达载体,并建立PLAG1转基因小鼠模型,研究PLAG1基因的高表达与唾液腺肿瘤发生的关系。材料与方法取PLAG1高表达的瘤组织或正常胎盘组织,提取总RNA,RT-PCR 扩增获得PLAG1 cDNA 全部... 详细信息

目的克隆人PLAG1基因,构建PLAG1组织非特异性和特异性表达载体,并建立PLAG1转基因小鼠模型,研究PLAG1基因的高表达与唾液腺肿瘤发生的关系。材料与方法取PLAG1高表达的瘤组织或正常胎盘组织,提取总RNA,RT-PCR 扩增获得PLAG1 cDNA 全部编码框序列。将PLAG1分别克隆至pCMV-EGFP和pMMTV-EGFR-stop 载体获得pCMV-EGFP/PLAG1和pMMTV-PLAG1表达载体。用pCMV-EGFP/PLAG1瞬时转染NIH3T3细胞以观察融合基因的表达及PLAG1的细胞内定位。经显微注射分别获得pCMV-EGFP/PLAG1和pMMTV—PLAG1转基因小鼠。结果从不同组织来源的RNA 克隆的PLAG1 eDNA 经测序后发现与GenBank中的PLAG1基因（GenBank No.U65002）比较有一多态性位点,相应氨基酸由苏氨酸变为脯氨酸。构建的组织非特异性表达载体pCMFV—EGFP/PLAG1和组织特异性表达载体pMMTV-PLAG1经酶切和测序鉴定,证实PLAG1序列及插入方向正确。用pCMV—EGFP/PLAG1转染NIH3T3细胞,在细胞水平证明PLAG1的表达及其在细胞核的定位。两种表达载体分别经显薇注射,获得了多个转基因阳性小鼠（Founders,G代）,经交配繁育,建立了相应的转基因小鼠模型。转基因的表达分别经RT-PCR 和Northern 杂交证实。表型观察发现pMMTV—PLAG1转基因小鼠系M42在出生后3个月内,100%的阳性小鼠发生唾液腺肿瘤。结论从多个肿瘤标本及正常胎盘组织克隆的PLAG1基因在同一位置与GenBank 中的相应序列相比,发现相同的核苷酸变异,说明这种核苷酸的变异并非由肿瘤组织内的基因突变或PCR 错配所致。可能是一个单核苷酸多态性（SNP）位点。PLAG1在细胞内定位于细胞核,符合转录因子的细胞核分布规律。PLAG1转基因小鼠的表型提示该基因的高表达与唾液腺肿瘤的发生密切相关。

关键词：多形性腺瘤基因1(PLAG1) 转基因小鼠唾液腺肿瘤

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BCG-DNA和BCG-PSN对诱导IFN-γ产生的比较研究

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河北医科大学学报 2009年第8期30卷 757-760页

作者：王静霍树平左连富孙树汉河北医科大学第四医院肿瘤研究所流式分析室河北石家庄050011 河北医科大学第三医院麻醉科河北石家庄050051 第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

目的比较研究卡介菌基因组DNA(genomic DNA from mycobacterium bovis bacillus calmetteguerin,BCG-DNA)和卡介菌多糖核酸(polysaccharide nucleic acid fraction from mycobacterium bovis bacilluscalmette-guerin,BCG-PSN)的免疫调控活性。方法制备高纯度BCG-DNA,小鼠脾细胞和人外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cell,hPBMC)分别与BCG-DNA和BCG-PSN共同培养72h,采用酶联免疫吸附方法检测细胞培养上清中干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的水平。结果所制备的BCG-DNA纯度较高(DNA95.3%),片断大小均匀一致,集中于200～250bp。BCG-DNA与BCG-PSN均可诱导小鼠脾细胞和hPBMC产生IFN-γ,且当浓度≥10mg/L时,BCG-DNA诱导产生IFN-γ水平显著强于BCG-PSN(P<0.01),IFN-γ水平与BCG-DNA浓度呈正相关。结论 BCG-DNA可显著诱导辅助性T细胞1型细胞因子IFN-γ的产生,其免疫调控活性优于BCG-PSN。

关键词：分枝杆菌,牛干扰素Ⅱ型小鼠

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半定量RT-PCR检测人唾液腺肿瘤PLAG1表达水平

半定量RT-PCR检测人唾液腺肿瘤PLAG1表达水平

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2005国际暨第八届全国头颈肿瘤大会

通过半定量RT-PCR 方法,定量检测PLAG1基因在人唾液腺肿瘤及相应的肿瘤旁正常唾液腺组织中的表达水平,了解PLAG1基因与人唾液腺肿瘤尤其是良性肿瘤的关系。【材料和方法】1.收集术中新鲜唾液腺肿瘤及瘤旁正常唾液腺组织标本共40对为实验... 详细信息

通过半定量RT-PCR 方法,定量检测PLAG1基因在人唾液腺肿瘤及相应的肿瘤旁正常唾液腺组织中的表达水平,了解PLAG1基因与人唾液腺肿瘤尤其是良性肿瘤的关系。【材料和方法】1.收集术中新鲜唾液腺肿瘤及瘤旁正常唾液腺组织标本共40对为实验组;舌癌及其癌旁正常组织1对,胎盘及脐带组织1对,共2对,作为对照组。分别取800ng 总RNA,35个循环,行RT-PCR。将GAPDH 持家基因作为内参照;***-PCR 法扩增人PLAGl cDNA 序列,克隆入pGEM-T easy 载体,酶切鉴定正确后用双链四色荧光标记法测序。【结果】1.应用半定量RT-PCR 方法,检测了在不同的组织中PLAG1表达情况。研究表明:唾液腺肿瘤PLAG1表达率为70%。其中,良性唾液腺肿瘤PLAG1表达率为84.38%(27/32),多形性腺瘤更是高达89.2%(25/28);而恶性唾液腺肿瘤PLAG1表达率仅为12.5%(1/8)。每个唾液腺肿瘤的瘤旁正常腺体组织均未检及PLAG1表达。1例胎盘组织表达PLAG1,而舌癌组织未及表达;2.对6例中国汉族人标本中PLAG1 cDNA 测序发现:PLAG1编码序列1372bp 处发生A→C 点突变。【结论】1.半定量RT-PCR 方法对不同的唾液腺肿瘤及瘤旁正常腺体组织中PLAG1表达情况检测结果进一步提示:PLAG1的激活和表达与唾液腺肿瘤尤其是良性唾液腺肿瘤的发生有一定的相关性;2.发生于PLAG1编码序列1372bp 处A→C 点突变可能为中国汉族人PLAG1的一个多态性位点。

关键词： PLAG1 唾液腺肿瘤半定量 RT-PCR

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UBE2C在斑马鱼胚胎发育过程中的功能研究

UBE2C在斑马鱼胚胎发育过程中的功能研究

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2014全球华人遗传学大会暨全国第十三次医学遗传学学术会议

作者：胡月阳王芳张铃刘峰刘超谢英张力王鹏飞郑龙刘树锋王俊霞河北医科大学分子生物学研究室河北省实验动物实验室第二军医大学医学遗传学教研室

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5-羟色胺受体基因多态性位点与海洛因依赖的关联性研究

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现代生物医学进展 2013年第30期13卷 5900-5903页

作者：党伟陈湘钟慧军刘显阳王珊西安市精神卫生中心陕西西安760060 宁夏医科大学医学遗传学与细胞生物学教研室/教育部生育力保持重点实验室宁夏银川750004

目的：5-HT（5-hydroxytryptamine,5-HT）参与了多种中枢神经活动的生理过程,其功能异常可以影响很多行为障碍,已有研究显示,5-HT水平与多种精神疾病密切相关。5-HT受体及其转运体基因在海洛因依赖发生发展中起到了重要的作用,是海洛因... 详细信息

目的：5-HT（5-hydroxytryptamine,5-HT）参与了多种中枢神经活动的生理过程,其功能异常可以影响很多行为障碍,已有研究显示,5-HT水平与多种精神疾病密切相关。5-HT受体及其转运体基因在海洛因依赖发生发展中起到了重要的作用,是海洛因依赖的主要候选基因。探讨5羟色胺2A受体（Serotonin 2A receptor,HTR2A）基因启动子区-1438A/G（rs6311）、外显子区102T/C（rs6313）与5羟色胺1B受体（Serotonin 1B receptor,HTR1B）基因外显子区861G/C（rs6296）3个单核苷酸多态性和海洛因依赖的关联性分析。方法：严格按照诊断标准,选取无亲缘关系的海洛因依赖个体616例及健康个体600例提取基因组DNA,采用PCR-RFLP方法检测rs6311、rs6313和rs6296 3个SNPs位点的基因型频率,采用SPSS16.0软件分析各位点等位基因、基因型频率在病例-对照组间差异。结果：HTR2A基因rs6311和HTR1B基因rs6296位点的等位基因及基因型频率分布在2组间存在统计学差异（P〈0.05）,病例组rs6311位点的等位基因A频率显著高于对照组（X2=5.436,P=0.020,OR=1.208,CI=1.031~1.417）,rs6296位点的等位基因C频率显著高于对照组（X2=12.116,P=0.000,OR=1.329,CI=1.132~1.560）。连锁不平衡检验结果显示,HTR2A基因rs6311、rs6313位点处于不连锁状态,D＇〈0.5。结论：HTR2A基因rs6311和HTR1B基因rs6296多态性可能与海洛因成瘾有关,携带有rs6311 A等位基因与rs6296 C等位基因的人可能更容易对海洛因产生依赖。我们的研究为海洛因依赖易感人群筛选及药物靶向治疗提供了理论依据。

关键词： 5-羟色胺2A受体 5-羟色胺1B受体海洛因依赖多态性

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同型半胱氨酸代谢相关酶基因多态性与习惯性流产相关性的研究

同型半胱氨酸代谢相关酶基因多态性与习惯性流产相关性的研究

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：钟慧军朱永生刘军红焦海燕彭亮陈银涛霍正浩宁夏医科大学医学遗传学与细胞生物学教研室宁夏回族自治区生殖与遗传重点实验室宁夏大学生命科学学院

为了探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因 C677T、胱硫醚β合成酶(CBS)基因 844ins68和甲硫氨酸合成酶(MS)基因 A2756G 三种同型半胱氨酸代谢相关酶基因突变与宁夏汉族群体习惯性流产的关系,采用 PCR—RFLP 方法检测了141例习惯性流产... 详细信息

为了探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因 C677T、胱硫醚β合成酶(CBS)基因 844ins68和甲硫氨酸合成酶(MS)基因 A2756G 三种同型半胱氨酸代谢相关酶基因突变与宁夏汉族群体习惯性流产的关系,采用 PCR—RFLP 方法检测了141例习惯性流产患者和160例有正常妊娠史的妇女血中的 CBS、MS、MTHFR 基因位点突变。结果表明,习惯性流产病例组 MTHFR C677T 纯合突变(TT)型、杂合突变(CT)型和野生(CC)型基因型频率分别为:11.35%、37.59%和51.06%, 对照组分别为:1.87%、26.88%和71.25%。其中 TT 基因型在两组间比较有显著性差异(P<0.05), CT 基因型在两组间比较无显著性差异(P>0.05)。流产病例组 T 等位基因频率显著高于对照组 (P<0.05)。MS A2756G 位点 AA(96.45%)、AG(3.54%)和 GG(0)基因型频率与对照组间(分别为94.38%、5.62%和0)无统计学差异;CBS844ins68位点 DD(70.21%)、DI(19.86)、 II(9.93)基因型频率与对照组间(分别为71.25%、25.00%和3.75%)亦无统计学差异(P>0.05)。提示,MTHFR C677T 纯合子突变与习惯性流产有明确的相关关系:CBS 844ins68、MS A2756G 突变与宁夏汉族群体中的习惯性流产没有相关性。

关键词：习惯性流产甲基四氢叶酸还原酶胱硫醚β合成酶甲硫氨酸合成酶基因多态性

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UBE2C在斑马鱼胚胎发育过程中的功能研究

UBE2C在斑马鱼胚胎发育过程中的功能研究

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2014全球华人遗传学大会全国第十三次医学遗传学学术会议

目的:本课题旨在观察ube2c在斑马鱼胚胎发育过程中的时空表达规律,并对其功能进行研究。方法:选择2hpf(受精后2h)、4hpf、8hpf、12 hpf、24 hpf、48 hpf、72 hpf、7dpf(受精后7d)的斑马鱼胚胎,进行Real-Time RCR、western blot对ube2c... 详细信息

目的:本课题旨在观察ube2c在斑马鱼胚胎发育过程中的时空表达规律,并对其功能进行研究。方法:选择2hpf(受精后2h)、4hpf、8hpf、12 hpf、24 hpf、48 hpf、72 hpf、7dpf(受精后7d)的斑马鱼胚胎,进行Real-Time RCR、western blot对ube2c在不同时间段的表达检测;对各时期胚胎进行整胚原位杂交,观察ube2c在斑马鱼不同时期胚胎中时间

关键词：斑马鱼胚胎发育过程 UBE2C 整胚原位杂交胚胎发育功能研究

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酵母表达质粒pGBKT7-hPROKR2-Ct的构建及hPROKR2C端蛋白的自激活鉴定

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生物技术通讯 2016年第4期27卷 479-482页

作者：周晓涛夏开德周文涛刘化蝶彭震汤勇李家大新疆医科大学基础医学院免疫学教研室新疆乌鲁木齐830011 贵州省妇幼保健医院贵州贵阳550000 新疆医科大学第五附属医院新疆乌鲁木齐830011 中南大学医学遗传学国家重点实验室湖南长沙410000

目的:检测Y2HGold酵母株中表达的h PROKR2 C端蛋白是否有毒性及自激活,为后期利用酵母双杂交技术研究h PROKR2 C端相互作用蛋白奠定基础。方法:构建酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct质粒,将其转入酵母感受态中验证其是否表达并计算转... 详细信息

目的:检测Y2HGold酵母株中表达的h PROKR2 C端蛋白是否有毒性及自激活,为后期利用酵母双杂交技术研究h PROKR2 C端相互作用蛋白奠定基础。方法:构建酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct质粒,将其转入酵母感受态中验证其是否表达并计算转化率;通过观察SD/-Trp平板上酵母菌落生长状态进行h PROKR2 C端蛋白的毒性检测;通过观察SD/-Trp、SDO/-Trp/X、SDO/-Trp/X/Aba平板上酵母菌落生长状态进行h PROKR2 C端蛋白自活性检测。结果:构建了酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct,将其转入酵母感受态中,转化率为8.5×104cfu/μg;毒性及自活性检测均显示h PROKR2 C端蛋白对酵母菌株无毒性、不具有自活性。结论:可以利用酵母双杂交系统研究hPROKR2 C端相互作用蛋白。

关键词：酵母双杂交 PROKR2 自激活实验

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CAGE基因在颅脑肿瘤中的表达及其机制

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癌变．畸变．突变 2007年第3期19卷 239-241页

作者：高飞由田吕晶玉王运杰中国医科大学第四临床学院神经外科沈阳110032 中国医科大学第一临床学院急诊科沈阳110001 中国医科大学医学遗传学教研室沈阳110001 中国医科大学第一临床学院神经外科沈阳110001

背景与目的:检测颅脑肿瘤组织中CAGE基因的表达及启动子区甲基化情况,探讨将其用于肿瘤免疫治疗的可能性。材料与方法:采用RT-PCR及甲基化特异性PCR,检测8种正常组织(17例),35例脑膜瘤和32例胶质瘤组织CAGE基因表达及启动子区甲基化情... 详细信息

背景与目的:检测颅脑肿瘤组织中CAGE基因的表达及启动子区甲基化情况,探讨将其用于肿瘤免疫治疗的可能性。材料与方法:采用RT-PCR及甲基化特异性PCR,检测8种正常组织(17例),35例脑膜瘤和32例胶质瘤组织CAGE基因表达及启动子区甲基化情况。结果:CAGE基因在除睾丸以外的正常组织中不表达,4例脑膜瘤(11.3%)和26例胶质瘤(81.25%)CAGE基因表达阳性;CAGE基因表达阳性的组织非甲基化扩增均为阳性,表达阴性的组织甲基化扩增均为阳性。结论:CAGE基因启动子区甲基化与其表达密切相关,CAGE可能成为胶质瘤的肿瘤特异性抗原。

关键词： CAGE基因甲基化胶质瘤肿瘤免疫

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siRNA干扰沉默S100A4基因表达对喉癌Hep2细胞周期和侵袭的影响

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解剖科学进展 2014年第3期20卷 207-210页

作者：刘佳符爽史晓宇富伟能中国医科大学实验动物部辽宁沈阳110001 中国医科大学附属盛京医院血液研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学辽宁省科学技术情报研究所辽宁沈阳110001 中国医科大学医学遗传学教研室辽宁沈阳110001

目的应用RNA干扰技术下调喉癌Hep2细胞中S100A4基因的表达,探讨其对Hep2细胞周期和细胞侵袭力的影响。方法脂质体法转染S100A4siRNA至Hep2细胞。Real-time PCR和Western blot验证S100A4基因mRNA和蛋白水平的表达,流式细胞术和transwell... 详细信息

目的应用RNA干扰技术下调喉癌Hep2细胞中S100A4基因的表达,探讨其对Hep2细胞周期和细胞侵袭力的影响。方法脂质体法转染S100A4siRNA至Hep2细胞。Real-time PCR和Western blot验证S100A4基因mRNA和蛋白水平的表达,流式细胞术和transwell实验分别检测下调S100A4表达对Hep2细胞周期和侵袭能力的影响。结果 S100A4 mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞增殖指数显著降低,并且处于G1期细胞数明显增多,细胞侵袭能力显著降低。结论 S100A4siRNA转染喉癌Hep2细胞能有效下调S100A4基因的表达,从而影响Hep2的细胞周期和抑制细胞的侵袭能力。

关键词： S100A4 喉癌Hep2细胞细胞周期侵袭

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