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中华医学会2012年医学遗传学年会暨全国第十一次医学遗传学学术会议

作者：赖光锐武晶晶赵彦艳中国医科大学医学遗传学教研室中国医科大学附属盛京医院临床遗传科沈阳 110001

高血压和高血糖是危害人们身体健康的常见疾病,且常常并发,因此二者之间可能存在共同的致病机理。众所周知,二十羟二十碳四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE)在血压调节方面发挥着重要作用。然而,近期研究显示高血压和糖... 详细信息

高血压和高血糖是危害人们身体健康的常见疾病,且常常并发,因此二者之间可能存在共同的致病机理。众所周知,二十羟二十碳四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE)在血压调节方面发挥着重要作用。然而,近期研究显示高血压和糖尿病鼠模型的20-HETE、血糖、胰岛素有不同程度的改变,我们推测20-HETE不仅在血压调节起重要作用,而且可能在血糖调控方面也存在重要意义。本研究旨在利用CYP4F2转基因高血压小鼠模型,辅助体外细胞培养,探讨20-HETE对血糖的调控。检测发现转基因小鼠空腹血糖明显高于野生型小鼠。鉴于空腹血糖主要源于肝糖原分解,我们进一步探索20-HETE对肝糖原分解的影响。发现转基因小鼠中糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase,GP)的活性及其磷酸化水平均明显高于野生型小鼠,而且转基因小鼠肝脏中环磷酸腺苷(cyclic AMP,cAMP),蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的活性及磷酸激酶(phosphorylase kinase,PhK)的磷酸化水平均提高。在对转基因小鼠添加HET0016(20-HETE的抑制剂)后,cAMP/PKA-PhK-GP通路活性下降,血糖降低。我们进一步利用20-HETE刺激Be17402细胞,发现cAMP/PKA-PhK-GP通路同样被激活。因此,我们首次发现20-HETE可以激活cAMP/PKA-PhK-GP通路,使肝糖原分解增强,继而导致高血糖的发生。

关键词： CYP4F2 20-HETE 高血糖 GP

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高盐与20-HETE协同调控肾脏NKCC2蛋白的研究

高盐与20-HETE协同调控肾脏NKCC2蛋白的研究

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中华医学会2012年医学遗传学年会暨全国第十一次医学遗传学学术会议

作者：武晶晶赖光锐赵彦艳中国医科大学医学遗传学教研室中国医科大学附属盛京医院临床遗传科沈阳 110001

细胞色素P450 4F2(Cytochrome P450 4F2,CYP4F2)编码的ω-羟化酶将花生四烯酸代谢生成20-HETE.20-HETE对血压调控发挥着极其重要的作用：一方面通过阻断ca2+激活的K+通道引起周身小血管收缩,起促高血压作用;另一方面通过抑制肾脏Na+-K+-... 详细信息

细胞色素P450 4F2(Cytochrome P450 4F2,CYP4F2)编码的ω-羟化酶将花生四烯酸代谢生成20-HETE.20-HETE对血压调控发挥着极其重要的作用：一方面通过阻断ca2+激活的K+通道引起周身小血管收缩,起促高血压作用;另一方面通过抑制肾脏Na+-K+-ATPase、钠钾氯共转运蛋白(Na+-K+-2C1-cotransporter,isoform 2,NKCC2)及Na+/H+交换体等,抑制肾脏水钠重吸收而起抗高血压作用.在对人群及动物的研究中发现,高盐饮食可引起尿中20-HETE排泄增加;而体内缺乏20-HETE时,会导致盐敏感性高血压的发生.因此,我们用高盐喂养CYP4F2转基因小鼠,旨在探讨高盐与20-HETE交互作用对肾脏水钠代谢的调控作用.我们检测了小鼠肾脏NKCC2蛋白,发现在高盐饮食情况下转基因小鼠肾脏NKCC2蛋白明显下调,但这一变化与人real-time PCR检测的mRNA结果不一致,因此我们推测可能存在翻译后蛋白降解.进一步研究发现在高盐饮食情况下转基因小鼠肾脏NKCC2蛋白泛素化增加,且肾脏蛋白酶体活性明显高于高盐饮食的野生型小鼠.而在应用了HET0016(20-HETE合成抑制剂)或MG132(蛋白酶体活性抑制剂)后,高盐饮食的转基因小鼠肾脏NKCC2蛋白表达均上调,并且MG132使泛素化NKCC2明显增加.以上结果显示,高盐与20-HETE协同作用诱导NKCC2蛋白泛素化并通过蛋白酶体途径降解,抑制肾脏水钠重吸收,发挥抗高血压的作用.由此我们推测,20-HETE在不同浓度的盐负荷情况下发挥不同的血压调控作用.

关键词： CYP4F2 20-HETE NKCC2 高血压

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我国16个人群谷胱甘肽硫转移酶GSTO1基因Ala140Asp位点的多态分布特征

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中国地方病学杂志 2012年第1期31卷 16-19页

作者：付松波吴杰孙殿军哈尔滨医科大学中国疾病预防控制中心地方病预防控制中心卫生部病因流行病学重点实验室、黑龙江省普通高校病因流行病学重点实验室 150081 哈尔滨医科大学中国疾病预防控制中心地方病预防控制中心卫生部病因流行病学重点实验室医学遗传学教研室 150081

目的研究谷胱甘肽硫转移酶GSTO1基因Ala140Asp位点多态性在我国16个人群的分布特征.方法 1369个DNA样本来源于人类基因组计划——中国少数民族遗传资源库建立和保存项目,采用PCR-限制性片断长度多态性方法（PCR-RFLP）检测GSTO1基因Ala... 详细信息

目的研究谷胱甘肽硫转移酶GSTO1基因Ala140Asp位点多态性在我国16个人群的分布特征.方法 1369个DNA样本来源于人类基因组计划——中国少数民族遗传资源库建立和保存项目,采用PCR-限制性片断长度多态性方法（PCR-RFLP）检测GSTO1基因Ala140Asp位点Ala/Ala（C/C）、Ala/Asp （C/A）、Asp/Asp （A/A）的基因型分布；采用分子方差分析（AMOVA）,通过估计等位基因或基因型之间的进化距离,进行民族、地域之间遗传变异的等级分析.结果在1369个样本中,Ala/Ala （C/C）、Ala/Asp （C/A）、Asp/Asp（A/A）基因型各检出979、365、25个,分别占总样本的71.51％、26.66％和1.83％；总体样本Ala140Asp位点突变型等位基因A频率为15.16％[ （365＋ 50）/（ 1369×2）].AMOVA分析结果表明,GSTO1基因Ala140Asp遗传变异在我国14个民族之间比较差异有统计学意义（P＜0.05）；南方与北方人群之间的遗传变异比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 GSTO1基因Ala140Asp位点突变型等位基因频率在我国不同地区和人群中存在较大差别.

关键词：谷胱甘肽硫转移酶基因多态性遗传学,群体

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乙酰化对人胃腺癌细胞系BGC-823中WNK4基因表达的影响

乙酰化对人胃腺癌细胞系BGC-823中WNK4基因表达的影响

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中华医学会2012年医学遗传学年会暨全国第十一次医学遗传学学术会议

作者：李春义张媛媛李英慧吕晶玉赵彦艳中国医科大学医学遗传学教研室中国医科大学附属盛京医院临床遗传科沈阳 110001

WNK4(With No lysine[K] kinase 4)基因编码一种特殊类型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,通过调节多种离子通道和离子转运体,参与机体水盐代谢和血压调节。阐明该基因表达调控分子机制具有重要意义。乙酰化在基因的表达调控中具有重要作用。... 详细信息

WNK4(With No lysine[K] kinase 4)基因编码一种特殊类型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,通过调节多种离子通道和离子转运体,参与机体水盐代谢和血压调节。阐明该基因表达调控分子机制具有重要意义。乙酰化在基因的表达调控中具有重要作用。组蛋白乙酰基转移酶(histone acetylase,HAT)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)参与调节蛋白质乙酰化状态,是调节染色体结构和基因表达的关键激酶。乙酰化转移酶抑制剂曲古抑菌素A(TrichostatinA,TSA)通过特异性抑制HDAC活性可引起组蛋白和一些转录相关因子乙酰化。目的研究乙酰化作用对人胃腺癌细胞系BGC-823中WNK4基因表达的影响。方法常规方法体外培养人胃腺癌细胞系BGC-823,以TSA作为乙酰化诱导因素刺激细胞,Trizol法提取BGC-823细胞总RNA后应用试剂盒反转录为cDNA,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测BGC-823细胞中WNK4基因mRNA表达水平,从而比较TSA刺激前后BGC-823细胞中mRNA表达变化情况。结果 TSA刺激24小时后BGC-823细胞中WNK4基因mRNA表达水平明显升高,乙酰化作用参与调节BGC-823细胞中WNK4基因表达。结论乙酰化作用上调人胃腺癌细胞系BGC-823中WNK4基因mRNA表达。

关键词： WNK4 乙酰化 TSA 基因表达调控

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非同源末端连接途径在含双微体肿瘤的功能研究

非同源末端连接途径在含双微体肿瘤的功能研究

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遗传资源的保护和开发利用——2012年中国青年遗传学家论坛

作者：于旸朱鹏飞张慧媛白静傅松滨哈尔滨医科大学医学遗传学研究室黑龙江生物医药工程重点实验室

目的:探讨NHEJ途径在双微体形成过程中的功能以及对肿瘤细胞本身的影响。方法:利用pSUPER siRNA基因沉默系统,在含双微体的人卵巢癌细胞系UACC-1598中将NHEJ通路相关蛋白DNA-PKcs、XRCC4、Artemis基因沉默,通过Western Blot检测基因沉... 详细信息

目的:探讨NHEJ途径在双微体形成过程中的功能以及对肿瘤细胞本身的影响。方法:利用pSUPER siRNA基因沉默系统,在含双微体的人卵巢癌细胞系UACC-1598中将NHEJ通路相关蛋白DNA-PKcs、XRCC4、Artemis基因沉默,通过Western Blot检测基因沉默效果后,利用Real-Time PCR检测双微体携带基因扩增情况;免疫荧光检测双链断裂的标志γH2AX;制备中期染色体核型检测双微体数目;荧光原位杂交检测微核及均质染色区。利用DNA-PKcs特异性抑制剂NU7441对含双微体的细胞系UACC-1598、NCI-H508和NCI-H716进行长期抑制后,Real-Time PCR检测双微体携带基因扩增情况;制备中期染色体核型检测双微体数目。同时针对DNA-PKcs基因沉默的细胞株,利用MTT法检测细胞生长情况;流式细胞术检测细胞周期以及凋亡情况;划痕实验检测细胞迁移能力。结果:在UACC-1598细胞中NHEJ途径相关蛋白基因沉默后,所携带基因EIF5A2扩增下降;细胞DNA双链断裂增加;双微体数目减少;含双微体的微核以及均质染色区增多。NU7441长期抑制细胞DNA-PKcs活性后,UACC-1598和NCI-H716中双微体数目减少,而NCI-H508无变化。另外,在DNA-PKcs基因沉默的细胞株中发现其生长减慢;G1期阻滞,S期细胞减少;早期凋亡增加。结论:在UACC-1598细胞中,NHEJ途径可抑制均质染色区的形成,从而维持细胞双微体的表型。

关键词：非同源末端连接双微体 DNA-PKcs XRCC4 Artemis

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氯化钴对神经型一氧化氮合酶在人神经母细胞瘤细胞表达的影响

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解剖科学进展 2012年第6期18卷 534-536,540页

作者：李光宇李英慧王郡吕晶玉赵彦艳中国医科大学第一医院神经外科辽宁沈阳110001 中国医科大学医学遗传学教研室辽宁沈阳110001

目的研究CoCl2刺激后nNOS及其产物在人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞中的表达变化。方法培养SK-N-SH细胞,用CoCl刺激细胞,Real-TimePCR检测nNOS mRNA表达变化,Western-blot检测蛋白表达,荧光法检测NO产量的变化。结果 CoCl2刺激后nNOS ... 详细信息

目的研究CoCl2刺激后nNOS及其产物在人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞中的表达变化。方法培养SK-N-SH细胞,用CoCl刺激细胞,Real-TimePCR检测nNOS mRNA表达变化,Western-blot检测蛋白表达,荧光法检测NO产量的变化。结果 CoCl2刺激后nNOS mRNA和蛋白在SK-N-SH细胞表达水平从刺激后12h开始表达增强,持续到48h,同时NO的生成量也明显升高。结论 CoCl2刺激引起SK-N-SH细胞nNOS表达水平及其产物NO明显升高。

关键词：人神经母细胞瘤细胞系神经型一氧化氮合酶氯化钴脑缺血

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冲动与多巴胺系统在毒品依赖中的作用机制

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西安交通大学学报（医学版） 2012年第1期33卷 1-4页

作者：李生斌朱永生西安交通大学医学院法医学系陕西西安710061 西安交通大学卫生部法医学重点实验室陕西西安710061 西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室陕西西安710061 宁夏医科大学医学遗传学与细胞生物学教研室宁夏银川750004

毒品依赖是严重的社会和生物医学问题。虽然研究表明毒品依赖与中枢神经系统多巴胺及其受体密切相关,但是还未阐明多巴胺系统在毒品依赖中的具体作用机制。冲动性行为是不同成瘾物质依赖者的标志性特征,最近的研究提示,冲动在可卡因依... 详细信息

毒品依赖是严重的社会和生物医学问题。虽然研究表明毒品依赖与中枢神经系统多巴胺及其受体密切相关,但是还未阐明多巴胺系统在毒品依赖中的具体作用机制。冲动性行为是不同成瘾物质依赖者的标志性特征,最近的研究提示,冲动在可卡因依赖形成中也扮演着重要角色,但尚未见报道在其他毒品依赖发生过程中的作用机制。因此需要改进现有的研究方法和思路,对冲动性行为与多巴胺系统的联合效应进行研究。这必将为毒品依赖遗传学的具体机制提供重要依据;为药理学开发最佳的治疗药物奠定基础;为毒品依赖治疗提供新的策略。

关键词：冲动多巴胺毒品依赖

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***抗血清介导的体外杀伤细粒棘绦虫原头节作用的观察

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宁夏医科大学学报 2012年第10期34卷 1000-1004页

作者：王娅娜张炎朱佳宁夏医科大学医学科学技术研究中心银川750004 宁夏医科大学医学遗传学与细胞生物学教研室银川750004 宁夏回族自治区遗传与生殖重点实验室银川750004

目的体外观察细粒棘球绦虫重组铁蛋白(***)抗血清对细粒棘球蚴原头节(PSC)的杀伤作用。方法用纯化的***免疫新西兰家兔制备抗血清,以不同浓度的抗血清与细粒棘球绦虫原头蚴体外共培养,光镜观察培养不同时间点细粒棘球原头节的变化,透射... 详细信息

目的体外观察细粒棘球绦虫重组铁蛋白(***)抗血清对细粒棘球蚴原头节(PSC)的杀伤作用。方法用纯化的***免疫新西兰家兔制备抗血清,以不同浓度的抗血清与细粒棘球绦虫原头蚴体外共培养,光镜观察培养不同时间点细粒棘球原头节的变化,透射电子显微镜观察原头节超微结构的改变。结果抗血清组的原头蚴的死亡率及破坏程度与抗血清的浓度呈正相关,与对照组相比,抗血清对原头节有杀伤作用(P<0.01)。在20%抗血清组中,原头节内部被大量空泡及髓样结构代替或无结构。结论细粒棘球蚴重组铁蛋白抗体对细粒棘球绦虫有明显的杀伤作用。

关键词：重组铁蛋白抗血清细粒棘球原头节

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反相高效液相色谱快速分离珠蛋白肽链及其应用研究

反相高效液相色谱快速分离珠蛋白肽链及其应用研究

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中华医学会2012年医学遗传学年会暨全国第十一次医学遗传学学术会议

作者：万均辉田佩玲熊符周万军韦相才徐湘民南方医科大学医学遗传学教研室广州510515 广东省计划生育科学技术研究所广州510600

目的建立一种简便快速高分辨率的珠蛋白肽链反相液相色谱分离技术并探讨其临床应用价值,为同类工作提供一种有参考价值的经验.方法采用梯度洗脱,菲罗门Jupiter C 18(250×4.6mm,5μm,300A)色谱柱,流动相A为乙腈/甲醇(90：10),流动... 详细信息

目的建立一种简便快速高分辨率的珠蛋白肽链反相液相色谱分离技术并探讨其临床应用价值,为同类工作提供一种有参考价值的经验.方法采用梯度洗脱,菲罗门Jupiter C 18(250×4.6mm,5μm,300A)色谱柱,流动相A为乙腈/甲醇(90：10),流动相B为0.5％三氟乙酸(TFA)水溶液(调节至pH2.6),流速2.0ml/min,柱温40℃,检测波长280nm,50μl全血溶解于1ml去离子超纯水,3000r/min离心5min后直接进样10μl,选择25％-60％乙腈疏水性范围内筛选并优化色谱条件;观察不同流速、pH、梯度时间以及波长对珠蛋白肽链色谱分离行为的影响并进行保留时间和峰面积重复性评价;用所建立的最优色谱条件分析临床标本共301份(其中正常成人样本106份,α静止性/标准型60份,HbH病59例,β携带者46份,β中重型30份),基于正常组与各病例组多重比较结果,采用ROC曲线分析δ/β,α/β,α/preβ+β+δ,δ,α/preβ+β,δ/preβ+β六个指标对于β地中海贫血携带者、α/β和α/preβ+β对于HbH病的筛查效率,通过比较获得最优指标及其截断值;另外用此色谱条件对常见异常血红蛋白HbE及HBWS进行分析.结果经过筛选得到最优色谱条件如下：0-1 min 51％流动相B,1-2min 51-50％流动相B,2-12min 50-40％流动相B;在此色谱条件下,heme,preβ,β,δ,α,Gγ,Aγ在12min内得到很好分离,同一样品连续五次进样,各成分保留时间变异系数(CV)为0.11-1.29％,峰面积变异系数(CV)为0.32-4.86％;提高流速使各成分保留时间均提前,缩短梯度时间主要使各珠蛋白肽链保留时间缩短,但分离度稍下降,降低pH主要引起heme保留时间缩短,而对各珠蛋白肽链影响并不显著,在210-220nm波长范围内,α链和β链峰面积比约等于1,且灵敏度较280nm大大提高,但基线不平;多重比较结果提示,α/preβ+β在正常组与HbH病组、β携带者组、β中重型组均具有显著性差异(P＜0.05),但正常组与α静止性/标准型组则不具有显著性差异(P＞0.05);ROC曲线分析获得筛查β地中海贫血携带者最优指标为δ/β,其截断值为0.026,特异性敏感性均达100％,提示HBH病的最优指标为α/preβ+β,其截断值为0.626,敏感性为96.6％,特异性为89.6％;另外,7例HBWS和13例HBE均被准确筛查出.结论本研究建立了一种简便快速高分辨率的珠蛋白肽链反相液相色谱分离技术,可应用于地中海贫血、异常血红蛋白的临床筛查、地中海贫血治疗评价以及其他相关研究,同时本研究所采用方法开发策略对于类似工作具有一定的参考价值.

关键词：反相液相色谱珠蛋白肽链地中海贫血异常血红蛋白

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前列腺癌的遗传流行病病因学研究进展

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国际遗传学杂志 2012年第6期35卷 350-355页

作者：张琳琳陈国强幸荣臻杨泽哈尔滨医科大学(大庆)护理学院临床教研室卫生部北京医院老年病研究所医学遗传学研究室大庆油田总医院泌尿外科佳木斯大学研究生院

已知前列腺癌(prostate cancer,PCa)的重要危险因素是遗传因子,而环境因素也起着不可忽略的作用。该文中作者主要对PCa遗传流行病病因的研究现状和研究进展作较为系统地阐述,为相关研究提供参考依据。

关键词：前列腺癌遗传流行病病因

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