检索结果-内蒙古大学图书馆

双重TaqMan实时荧光嵌套PCR快速检测α地中海贫血SEA缺失方法的建立与应用

中华检验医学杂志 2011年第8期34卷 681-685页

作者：袁晓文刘运科黄骞周万军南方医科大学医学遗传学教研室广州510515 广州市天河区妇幼保健院检验科

目的建立一种快速检测α地中海贫血（α地贫）SEA缺失的双重TaqMan实时荧光嵌套PCR方法。方法收集2010年5—7月在广州市天河区妇幼保健院进行地贫筛查的外周血标本100份，2010年12月至2011年2月东莞东华医院进行产前诊断的胎儿标本7份... 详细信息

目的建立一种快速检测α地中海贫血（α地贫）SEA缺失的双重TaqMan实时荧光嵌套PCR方法。方法收集2010年5—7月在广州市天河区妇幼保健院进行地贫筛查的外周血标本100份，2010年12月至2011年2月东莞东华医院进行产前诊断的胎儿标本7份（绒毛2份、羊水5份）。从本实验室样本资源库中选取α地贫SEA缺失已知基因型标本50份。采用双重TaqMan实时荧光嵌套PCR技术，于同一检测体系同时检测各标本α地贫SEA缺失截短序列及缺失范围内正常序列，根据荧光PCR阳性扩增结果结合其α值差异诊断受检个体的仪地贫SEA缺失基因型。同时采用检测α地贫SEA缺失的常规gap-PCR法，以PCR扩增结合产物凝胶电泳分析各标本α地贫SEA缺失基因型，以验证及对比分析新方法的准确性与实用性。结果所建立的双重TaqMan实时荧光嵌套PCR优化体系中2个PCR的扩增效率分析曲线的斜率分别为-3．153（SEA缺失截短目的片段）和-3．182（正常内参序列），扩增效率均接近100％。应用此方法检测50份仅地贫SEA缺失已知基因型标本，结果显示该方法不但能实现其快速分子诊断，而且能准确判断受检标本中的外源性污染，从而有效避免假阴性或假阳性误诊。100份外周血标本中，两种方法分别检出SEA缺失标本11份，对比分析两方法的诊断符合率为100％。7份胎儿标本中，gap—PCR法检出SEA缺失3份，而本方法则检出SEA缺失标本2份、受--SEA／（xet母源性污染的基因型为αα／αα的绒毛标本1份。结论本研究建立的双重TaqMan实时荧光嵌套PCR可以快速准确检测α地贫SEA缺失，操作简单实用，适合大规模人群筛查和常规分子诊断。

关键词： α地中海贫血基因缺失聚合酶链反应

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氟西汀对卒中后抑郁模型大鼠海马BDNF mRNA表达的影响

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哈尔滨医科大学学报 2011年第5期45卷 438-441页

作者：方力群王永贵张征白静张隽谷莹丽哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省第二职业医院医务科黑龙江哈尔滨150010 哈尔滨医科大学医学遗传学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨抗抑郁剂氟西汀对卒中后抑郁(post-stroke depression,PSD)模型大鼠海马脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达水平的影响。方法大脑中动脉新线栓法建立局灶脑缺血模型;加以慢性不可预知温和应激结... 详细信息

目的探讨抗抑郁剂氟西汀对卒中后抑郁(post-stroke depression,PSD)模型大鼠海马脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达水平的影响。方法大脑中动脉新线栓法建立局灶脑缺血模型;加以慢性不可预知温和应激结合孤养法建立PSD大鼠模型,并予以氟西汀干预。应用Western-blot、real time-PCR分别检测应激18天和25天时海马BDNF蛋白及mRNA表达水平。结果与对照组相比,应激13天后PSD组较对照组大鼠体重与糖水消耗比例降低,水平、垂直试验得分下降(P<0.01)。第18、25天,PSD组BDNF蛋白水平较对照组均显著下降(P<0.01)。PSD组BDNFmRNA的表达在应激18天时较正常组有下降趋势,但无统计学意义;至25d时,表达含量明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。第18、25天,氟西汀干预组BDNF蛋白及mRNA水平均较PSD组显著增加(P<0.01)。结论 BDNF对卒中后抑郁发生有促进作用,氟西汀能提高PSD中BDNF的表达。

关键词：卒中后抑郁脑源神经生长因子氟西汀

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无精子症患者的染色体核型、Y染色体微缺失分析及诊断

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山东医药 2011年第42期51卷 24-26页

作者：刘春莲景万红彭亮焦海燕徐仙宁夏医科大学总医院银川750004 宁夏回族自治区生殖与遗传重点实验室宁夏医科大学医学遗传学与细胞生物学教研室

目的观察无精子症患者的异常染色体核型及Y染色体微缺失情况,并探讨诊断方法。方法采用染色体G显带及多重聚合酶链反应技术(PCR-RFLP)对96例无精子症患者(观察组)和40例正常生育者(对照组)进行外周血染色体核型分析及Y染色体基因检测,... 详细信息

目的观察无精子症患者的异常染色体核型及Y染色体微缺失情况,并探讨诊断方法。方法采用染色体G显带及多重聚合酶链反应技术(PCR-RFLP)对96例无精子症患者(观察组)和40例正常生育者(对照组)进行外周血染色体核型分析及Y染色体基因检测,采用放射免疫诊断技术检测血清性激素,采用经皮附睾穿刺精子抽吸术(PESA)/经皮睾丸穿刺精子抽吸术(TESA)进行睾丸精子学检查。结果观察组染色体核型异常者27例(占28.1%)、对照组2例;观察组共检出Y染色体AZF基因微缺失7例,其中AZFc缺失5例、AZFb+c缺失1例、AZFa+b+c缺失1例,对照组未检测到AZF缺失。观察组42例接受PESA/TESA,其中26例显微镜下可见精子(有精子组)、16例镜下未见精子(无精子组,术后组织病理学检查证实无精子);与有精子组相比,无精子组血清FSH及LH水平升高、T水平降低,P均<0.01。结论无精子症患者多表现为染色体核型异常和Y染色体基因AZF微缺失,遗传学分析和血清性激素水平检测有助于无精子症的诊断。

关键词：无精子症精子不育染色体核型 Y染色体 AZF微缺失性激素

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黏着斑激酶与肿瘤

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国际遗传学杂志 2011年第1期34卷 11-16页

作者：孟祥宁王柏春白静傅松滨哈尔滨医科大学医学遗传学研究室哈尔滨医科大学附属第一医院心外科

黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是近几年新发现的一种受体型酪氨酸激酶,它可以调节细胞的增殖、转移和生存等能力,它的异常表达与肿瘤的发生、发展及转移有密切的关系。研究FAK的作用机制、针对FAK靶点进行肿瘤的综合治疗,是肿... 详细信息

黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是近几年新发现的一种受体型酪氨酸激酶,它可以调节细胞的增殖、转移和生存等能力,它的异常表达与肿瘤的发生、发展及转移有密切的关系。研究FAK的作用机制、针对FAK靶点进行肿瘤的综合治疗,是肿瘤治疗的一个非常有前途的方向。本文对FAK在肿瘤中的表达、作用机制及其在肿瘤治疗中的应用前景作一综述。

关键词：黏着斑激酶肿瘤机制

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面向临床的医学遗传学教学

面向临床的医学遗传学教学

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全国高等院校遗传学教学改革研讨会

作者：张学龙徐丽丹孙海明陈峰傅松滨哈尔滨医科大学医学遗传学研究室

医学遗传学的飞速发展,使它已成为现代医学的前沿学科。临床医学作为医学教育的主体,亟待新鲜血液的注入。本文探讨通过关注学科前沿、丰富教学手段、利用网络资源、优化实验教学、开设开放式实验教学等一系列措施,使医学遗传学教学更... 详细信息

医学遗传学的飞速发展,使它已成为现代医学的前沿学科。临床医学作为医学教育的主体,亟待新鲜血液的注入。本文探讨通过关注学科前沿、丰富教学手段、利用网络资源、优化实验教学、开设开放式实验教学等一系列措施,使医学遗传学教学更好地面向临床实践。

关键词：医学遗传学教学方法临床实践

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利用基因工程技术制备HPV58E7蛋白

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西北大学学报（自然科学版） 2011年第2期41卷 265-267页

作者：王德普霍正浩张晨华闫小飞宁夏医科大学医学遗传学教研室宁夏银川750004 西安交通大学生命学院癌症研究所陕西西安710061

目的利用基因工程技术制备HPV58E7蛋白。方法设计E7基因片段特异性PCR引物,以HPV58全基因组为模板,经PCR扩增E7基因片段,利用pGEX-4T3表达质粒,构建pGEX-4T3/HPV58E7重组体,转化BL21宿主细胞,IPTG诱导表达带有GST标签的可溶性融合蛋白... 详细信息

目的利用基因工程技术制备HPV58E7蛋白。方法设计E7基因片段特异性PCR引物,以HPV58全基因组为模板,经PCR扩增E7基因片段,利用pGEX-4T3表达质粒,构建pGEX-4T3/HPV58E7重组体,转化BL21宿主细胞,IPTG诱导表达带有GST标签的可溶性融合蛋白。经谷胱甘肽凝胶柱亲和层析纯化,凝血酶切GST标签。结果 SDS-PAGE分析显示在分子量约为40KD处有新生蛋白条带,经凝血酶消化融合蛋白,所获纯化HPV58E7蛋白与预期理论值相吻合。结论利用带有GST标签的原核表达系统及其相应纯化策略,获得HPV58E7蛋白的高效制备。

关键词： GST-HPV58E7融合蛋白 HPV58E7蛋白人乳头瘤病毒58型

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DICER基因在急性髓性白血病中的作用

DICER基因在急性髓性白血病中的作用

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中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会

作者：白颖孙开来高峰巩丽颖关奕中国医科大学医学遗传学教研室

DICER属于RNaseⅢ(双链RNA特异性核酸内切酶)家族成员,由DICER基因编码。人类的DICER1基因定位于14q32.2,在各种组织中广泛表达。对DICER1基因功能的认识,除了其剪切RNA形成miRNA和siRNA外,它还参与哺乳动物的生长、发育,人们对其在疾病... 详细信息

DICER属于RNaseⅢ(双链RNA特异性核酸内切酶)家族成员,由DICER基因编码。人类的DICER1基因定位于14q32.2,在各种组织中广泛表达。对DICER1基因功能的认识,除了其剪切RNA形成miRNA和siRNA外,它还参与哺乳动物的生长、发育,人们对其在疾病中(尤其是肿瘤)的作用的研究也越来越深入。我们首先检测DICERl基因在急性髓性白血病(AML)

关键词： DICER基因急性髓性白血病

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靶向干扰Hep-2细胞P/N1的研究

靶向干扰Hep-2细胞P/N1的研究

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中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会

作者：孙绍华马会平刘剑利李福才中国医科大学医学遗传学教研室

喉癌是一种头颈部恶性肿瘤,由于地域因素,我国东北地区是喉癌的高发区域。由于喉癌对放疗及化疗均不敏感,从分子细胞遗传学水平上寻找喉癌治疗的突破点有其重要意义。PIN1是人类肽基氨酰基异构酶,能特异性地催化磷酸化的丝/苏一脯氨酸... 详细信息

喉癌是一种头颈部恶性肿瘤,由于地域因素,我国东北地区是喉癌的高发区域。由于喉癌对放疗及化疗均不敏感,从分子细胞遗传学水平上寻找喉癌治疗的突破点有其重要意义。PIN1是人类肽基氨酰基异构酶,能特异性地催化磷酸化的丝/苏一脯氨酸基序发生异构,改变底物蛋白的构象,调节底物蛋白的功能。PIN1在肿瘤的发生过程中发挥重要作用,被称为是肿瘤发生的催化分子,可通过多种机制诱导细胞增殖和抑制细胞凋亡,导致肿瘤的发生。研究表明,PIN1在人类许多肿瘤中过表达。本研究应用RT-PCR方法检测喉癌组织中PIN1mRNA表达情况,结果在喉癌组织中PIN1 mRNA的表达明显高于癌旁组织。为了进一步研究该基因在喉癌中的作用机制,构建了靶向PIN1基因的短发夹RNA(shRNA)干扰真核表达质粒,并检测其对喉癌Hep-2细胞PIN1基因的抑制作用。应用RT-PCR和Western blot分别检测了干扰PIN1基因后的mRNA、蛋白表达水平,应用MTT方法检测了RNA干扰P1N1基因细胞增殖能力的变化,应用transwell分析细胞侵袭能力的改变,流式细胞术检测干扰后细胞凋亡情况,免疫荧光检测转染前后中心体变化。结果显示,RNAi有效的抑制了PIN1基因mRNA和蛋白表达,喉癌细胞增殖力以及体外迁移力显著降低,促进喉癌细胞凋亡,并有效抑制了中心体的扩增,与对照组相比干扰后出现多极中心体的细胞数目显著减少。结论 :shRNA真核表达载体稳定转染Hep-2细胞能够有效沉默PIN1基因的表达,进而抑制喉癌细胞的增殖,因此干扰PIN1为临床靶向治疗提供了一个新的思路。

关键词：喉癌 PIN1基因 RNA干扰凋亡

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C/EBP与先天性马蹄内翻足相关性及其对COL9A1基因的调控作用

C/EBP与先天性马蹄内翻足相关性及其对COL9A1基因的调控作用

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中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会

作者：高铭金春莲中国医科大学医学遗传学教研室

为探讨C2/EBPβ与先天性马蹄内翻足的相关性,并初步探究其与COL9A1基因的相互作用关系,从而为阐明C2/EBPβ的调控机制和先天性马蹄内翻足的发生机制提供实验依据,为产前诊断和基因治疗奠定基础。我们首先通过PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳... 详细信息

为探讨C2/EBPβ与先天性马蹄内翻足的相关性,并初步探究其与COL9A1基因的相互作用关系,从而为阐明C2/EBPβ的调控机制和先天性马蹄内翻足的发生机制提供实验依据,为产前诊断和基因治疗奠定基础。我们首先通过PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳技术)筛查C/EBFβ基因在84例先天性马蹄内翻足患者静脉血中的突变情况,通过Real-Time PCR(实时定量PCR)、Western Blot和免疫组化等方法检测15例先天性马蹄内翻足患儿足部肌肉组织中C/EBPβ基因在mRNA及蛋白质水平的表达情况,6例同年龄组外伤及尸检患儿的相应组织作为正常对照,并通过免疫荧光方法观察C/EBPβ表达部位。其次,本课题组前期实验已证实在COL9A1基因在先天性马蹄内翻足患儿足部肌肉组织中表达下调,且其启动子上游-403到-275之间可能存在负调控元件。我们在前期实验结果基础上,采用P-Match等软件预测该区域内可能存在的转录因子,并采用EMSA(凝胶阻滞实验)及ChIP(染色质免疫沉淀技术)等实验进行结合位点验证。实验证实84例先天性马蹄内翻足患者外周血中未发现C/EBPβ基因启动子及外显子区突变,C/EBPβ基因mRNA水平表达明显低于正常对照组织,蛋白质水平表达变化与mRNA水平表达变化具有一致性,免疫荧光显示在ICTEV患者肌肉组织中C/EBPβ与COL9A1基因同时表达于肌膜、肌内膜及肌束膜内,且位置重合,提示二者在ICTEV足踝部软组织中可能存在某种关系。经预测发现COL9A1基因启动子上游-403到-275之间可能存在C/EBPβ转录因子的结合位点,EMSA及ChIP结果均证实在人COL9A1基因上游-362到-347区域存在C/EBPβ转录因子结合位点。以上结果提示C/EBPβ基因启动子及外显子区突变可能不是先天性马蹄内翻足的发病原因,而C/EBPβ的表达下调,并通过与COL9A1基因启动子-362到-347区直接结合引起COL9A1基因的表达上调,可能与先天性马蹄内翻足畸形的发生有关。

关键词：先天性马蹄内翻足外显子基因启动子 C/EBP COL9A1

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心房颤动中间质纤维化的分子生物学研究

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国际遗传学杂志 2011年第4期34卷 213-216+222页

作者：李荣淼孟祥宁王柏春刘宏宇哈尔滨医科大学附属第一医院心血管外科哈尔滨医科大学医学遗传学研究室

心房颤动是临床上最常见的一种心律失常,临床及实验均发现心房颤动中心房存在明显纤维化。心房纤维化被认为是发生心房颤动的结构基础,改变了心房的结构进而使心房功能受损。心房颤动心房纤维化的发生机制尚未完全明确。目前对心房颤动... 详细信息

心房颤动是临床上最常见的一种心律失常,临床及实验均发现心房颤动中心房存在明显纤维化。心房纤维化被认为是发生心房颤动的结构基础,改变了心房的结构进而使心房功能受损。心房颤动心房纤维化的发生机制尚未完全明确。目前对心房颤动心房纤维化结构改变的研究发现:一系列细胞因子特别是肾素-血管紧张素系统、转化生长因子-β1、基质金属蛋白酶等在心房颤动及纤维化的发生、维持中作用明显。该文探讨了心房颤动心房纤维化的分子生物学发生机制及研究进展。

关键词：心房纤维化心房颤动分子生物学

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