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中国遗传学会北方遗传资源的保护与利用研讨会

作者：马会平刘剑利孙绍华郭兴姜亮李福才中国医科大学医学遗传学教研室中国医科大学附属第一医院耳鼻喉科

丝氨酸/苏氨酸激酶15（serine threonine kinase 15,STK15）(又称BTAK/Aurora A)一种中心体相关激酶,定位于人类染色体20q13.2,已被证实为一种癌基因。STK15基因与恶性肿瘤的发生之间存在着密切的联系,其过表达会引起中心体扩增、染色... 详细信息

丝氨酸/苏氨酸激酶15（serine threonine kinase 15,STK15）(又称BTAK/Aurora A)一种中心体相关激酶,定位于人类染色体20q13.2,已被证实为一种癌基因。STK15基因与恶性肿瘤的发生之间存在着密切的联系,其过表达会引起中心体扩增、染色体不稳定及细胞的转化。它主要参与DNA合成后期（G）进入细胞分裂期（M）的转换,以及M期染色体分离过程的调控。前期研究工作表明,STK15基因的扩增及过表达可通过引起中心体异常导致非整倍体形成及细胞的转化,与诱导肿瘤的发生、发展密切相关。RNA干扰（RNAinterference,RNAi）技术是目前研究基因功能强有力的工具之一,能够用于研究特定基因的表达抑制,有望对喉癌的基因治疗提供新思路。目的探讨RNA干扰STK15基因对其表达、细胞增殖和细胞周期的影响。方法构建STK15基因特异性shRNA载体,酶切,连接,测序验证;转化感受态细菌,提取质粒;转染hep-2细胞,提取RNA及蛋白;应用real-time定量PCR及western blot检测干扰前后STK15 mRNA及蛋白质水平的表达变化:MTT法检测细胞增殖能力的变化;流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果干扰STK15基因后,其mRNA和蛋白质水平表达明显下降,real-time PCR结果显示,转染后72小时,干扰组STK15 mRNA水平较对照组降低了57%,western blot灰度比半定量检测显示,STK15蛋白水平干扰组较对照组降低了51.7%;转染后72小时细胞的抑制率达到33.86%;流式细胞仪检测发现,干扰后72小时,STK15干扰组G2期DNA含量细胞平均值为17.56%,而对照组为10.67%（P<0.05）,细胞增殖速度减慢。结论 STK15基因在hep-2细胞有丝分裂过程中起着关键作用,阻断其表达可能导致hep-2细胞有丝分裂停滞,在喉癌的早期可能就存在着STK15基因的高表达引起中心体的扩增,后者又通过细胞有丝分裂的异常而导致染色体不稳定,这可能是喉癌发生的重要机制之一,并为进一步探讨喉癌的发生机理和生物治疗肿瘤提供了一定的科学依据。

关键词：细胞增殖中心体 STK15 基因沉默

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S100A8基因在喉鳞癌发生中作用机制的研究

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现代肿瘤医学 2010年第6期18卷 1090-1093页

作者：黄带发富伟能尚超徐振明孙开来沈阳军区总医院辽宁沈阳110840 中国医科大学医学遗传学教研室辽宁沈阳110001

目的:研究S100A8与喉癌发生的关系,揭示炎症在喉癌发生中的作用。方法:应用RT-PCR、Western Blot、免疫组化检测S100A8表达,RNAi方法检测其功能、Transwell检测细胞侵袭力,TUNEL和流式细胞仪检测细胞凋亡,MTT检测细胞生长活性。结果:36... 详细信息

目的:研究S100A8与喉癌发生的关系,揭示炎症在喉癌发生中的作用。方法:应用RT-PCR、Western Blot、免疫组化检测S100A8表达,RNAi方法检测其功能、Transwell检测细胞侵袭力,TUNEL和流式细胞仪检测细胞凋亡,MTT检测细胞生长活性。结果:36例喉鳞癌组织中17例出现S100A8 mRNA表达上调(47.2%),而7例喉部良性肿瘤中2例出现表达上调(28.5%)。13例病人喉鳞癌组织中7例S100A8蛋白表达增高。免疫组化分析喉鳞癌组织S100A8蛋白阳性率为54.3%。在高分化喉鳞癌组织为71.4%,而分化程度差的喉癌组织中阳性率为12.8%(P=0.023)。RNAi抑制S100A8基因使Hep2细胞凋亡率增高近9倍,使Hep2细胞侵袭力下降,影响Bcl-2基因表达,但对Hep2细胞的IKKα表达无明显影响。结论:S100A8与喉鳞癌发生相关并参与喉鳞癌分化,S100A8基因具有抑制喉癌细胞凋亡,促进Hep2细胞侵袭的作用。S100A8基因可能部分通过NF-κB通路参与喉癌发生、发展,在此通路中S100A8基因位于p65下游。

关键词：喉鳞状细胞癌 S100A8基因 RNA干涉 NF-κB通路

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胰岛素启动子在肝干细胞分化研究中的应用

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癌变．畸变．突变 2010年第3期22卷 171-174页

作者：金彩霞李文林李元杰徐方胡以平第二军医大学细胞生物学教研室上海200433 宁夏医科大学医学遗传学与细胞生物学教研室宁夏银川750004

目的:利用报告基因监测肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。方法:通过PCR从大鼠鼠尾基因组中克隆胰岛素启动子片段,构建大鼠胰岛素Ⅰ启动子调控的红色荧光蛋白报告载体(pRIP Ds Red),并利用报告载体标记的肝原始细胞系(liver epithelialpr... 详细信息

目的:利用报告基因监测肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。方法:通过PCR从大鼠鼠尾基因组中克隆胰岛素启动子片段,构建大鼠胰岛素Ⅰ启动子调控的红色荧光蛋白报告载体(pRIP Ds Red),并利用报告载体标记的肝原始细胞系(liver epithelialprogenitor cells,LEPCs)及经逆转录病毒感染后表达MafA的肝原始细胞系(LEPCs-MafA),观察肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。结果:获得胰岛素启动子调控的报告载体、报告载体标记的LEPCs及LEPCs-MafA。结论:pRIP DsRed报告载体的成功构建为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化提供了简捷的分子工具。

关键词：肝干细胞胰岛素启动子转分化红色荧光蛋白

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S100A4通过影响癌细胞增殖凋亡及侵袭参与喉癌发生发展

S100A4通过影响癌细胞增殖凋亡及侵袭参与喉癌发生发展

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中国遗传学会北方遗传资源的保护与利用研讨会

作者：刘佳符爽李巍尚超孙开来富伟能中国医科大学医学遗传学教研室中国医科大学第一临床医院耳鼻喉科中国医科大学神经生物学教研室

目的 S100A4参与广泛的细胞内外功能,如影响细胞骨架形成、改变细胞形状、参与信号传导等,并且S100A4表达升高与食管癌、胃癌、结肠癌及黑色素瘤等的发生有关,但目前S100A4参与肿瘤发生的机制仍不十分清楚,因此本研究将通过对S100A4基... 详细信息

目的 S100A4参与广泛的细胞内外功能,如影响细胞骨架形成、改变细胞形状、参与信号传导等,并且S100A4表达升高与食管癌、胃癌、结肠癌及黑色素瘤等的发生有关,但目前S100A4参与肿瘤发生的机制仍不十分清楚,因此本研究将通过对S100A4基因在喉癌Hep2细胞中的生物特性进行分析,探讨S100A4基因在喉癌发生中的作用。方法 1.体外合成S100A4基因特异性的SiRNA,应用RT-PCR和Western-blot方法检测Hep2细胞中S100A4基因的干扰效果。2.应用MTT方法检测转染S100A4-siRNA后Hep-2细胞增殖能力。3.应用Annexin V-FITC/PI双染法检测转染S100A4-siRNA后Hep-2细胞凋亡情况。4.应用Transwell检测转染S100A4-siRNA后Hep-2细胞侵袭能力的变化。结果 1.S100A4-siRNA转染Hep2细胞第5天,S100A4 mRNA表达水平在S100A4-siRNA组较对照组显著降低。S100A4-siRNA转染Hep2细胞第7天,S100A4蛋白表达水平在S100A4-siRNA组较对照组显著降低,表明S100A4表达受到抑制;2.与空白对照组Hep-2细胞系相比,在nonsilencing siRNA组及S100A4-siRNA组中,细胞的增值能力分别为61.46±10.35%、58.68±11.76%和47.09±10.45%(P<0.05),喉癌Hep2细胞的增殖能力显著降低。3.在空白对照组、nonsilencing siRNA组及S100A4-siRNA组中,凋亡细胞的百分数分别为2.54±0.46%,3.51±0.62%和8.63±0.75%(P<0.05)。4.在空白对照组、nonsilencing siRNA组及S100A4-siRNA组中,穿过Transwell小室滤膜的细胞数分别为32±1.25、30.67±0.95和11.58±0.52(P<0.05)。结论 S100A4基因在喉癌Hep2细胞系中具有促进癌细胞的增殖和侵袭、抑制细胞凋亡的能力,提示其通过影响细胞的增殖、凋亡和侵袭参与喉癌的发生发展。

关键词： S100A4 Hep2 MTT Apoptosis Transwell

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人RNF181基因表达的降低可以抑制人肺癌细胞系A549的增殖

人RNF181基因表达的降低可以抑制人肺癌细胞系A549的增殖

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中国遗传学会北方遗传资源的保护与利用研讨会

作者：于旸史忠诚杜玉荣刘珊珊刘芳莉傅松滨哈尔滨医科大学医学遗传学研究室黑龙江省生物医药工程重点实验室

目的 :探讨E3-泛素蛋白连接酶RNF181在肺癌中的作用。方法 :利用RT-PCR在12个非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系中对hRNF181基因的转录水平进行检测;采用RNAi技术,建立RNF181稳定knock-down的A549细胞系,对细胞增殖及细胞周期进行检测,明确目... 详细信息

目的 :探讨E3-泛素蛋白连接酶RNF181在肺癌中的作用。方法 :利用RT-PCR在12个非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系中对hRNF181基因的转录水平进行检测;采用RNAi技术,建立RNF181稳定knock-down的A549细胞系,对细胞增殖及细胞周期进行检测,明确目的基因在A549细胞中的功能。结果 :RNF181在不同NSCLC细胞系中的表达存在差异;降低RNF181的表达可以抑制A549细胞的增殖。结论 :降低RNF181的表达可以抑制A549细胞的增殖。

关键词： RNF181 非小细胞肺癌 RNAi

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癌基因EIF5A2转录调节的功能研究

癌基因EIF5A2转录调节的功能研究

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2010中国青年遗传学家论坛

作者：于旸耿冬峰刘芳莉左璐璐白静傅松滨哈尔滨医科大学医学遗传学研究室黑龙江省生物医药工程重点实验室

【目的】真核细胞翻译起始因子5A2(eukaryotic translation initiation factor 5A2,EIF5A2)基因是近年来新发现的一个癌基因,它定位于人类染色体3q26.2,该区域的扩增常见于多种恶性肿瘤中。本研究的目的在于分析人EIF5A2基因启动子区的... 详细信息

【目的】真核细胞翻译起始因子5A2(eukaryotic translation initiation factor 5A2,EIF5A2)基因是近年来新发现的一个癌基因,它定位于人类染色体3q26.2,该区域的扩增常见于多种恶性肿瘤中。本研究的目的在于分析人EIF5A2基因启动子区的结构及与其作用的反式作用因子,为进一步研究该基因的表达调控机制奠定基础。【方法】本研究首先选取该基因自转录起始位点上游2000 bp基因组DNA序列作为研究对象,分别构建四种不同长度截短片段的重组质粒,利用pGL3报告基因系统分析各截短片段的活性,最终确定EIF5A2基因核心启动区。进一步应用定点突变、凝胶阻滞(EMSA)和染色质共沉淀(ChIP)技术对核心启动区内的潜在的转录因子结合元件进行确认。此外,使用实时定量PCR方法对EIF5A2基因与目的转录因子在卵巢癌组织中的表达情况进行了检测,并对二者在卵巢癌中转录水平的相关性进行了分析。【结果】研究表明,EIF5A2基因启动子核心启动区位于-106bp～+13bp范围。该区域存在四个Sp1转录因子结合位点,研究发现四个位点对EIF5A2基因启动子活性均具有重要调节作用。在Sp1高表达卵巢癌细胞系UACC-1598中,使用Sp1转录因子结合位点特异的抑制剂可以使EIF5A2蛋白的表达水平下降,此过程呈现剂量依赖性。此外,在卵巢癌组织样本中,EIF5A2基因与Sp1基因二者在转录水平p值在以0.01为阈值的水平下是显著的,即二者存在显著相关。【结论】EIF5A2基因启动子核心启动区位于-106bp～+13bp范围。该区域包含的四个Sp1转录因子结合位点,对EIF5A2基因启动子具有明显的正调节作用。同时,EIF5A2基因与Sp1基因在卵巢癌组织中的转录水平呈现显著正相关(P<0.01)。

关键词： EIF5A2 转录调节染色质共沉淀 Sp1转录因子

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面肩肱型肌营养不良症的分子遗传学研究进展

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临床荟萃 2010年第4期25卷 353-355页

作者：张玮熊符苏全喜南方医科大学医学遗传学教研室广东广州510515 广州药学院附属第一医院神经内科广东广州510080

面肩肱型肌营养不良症(Facioscapulohumeral muscular dystrophy,FSHD)是继杜氏肌营养不良症和强直性肌营养不良症后发病率居第3位的遗传性神经肌肉疾病。该病呈常染色体显性遗传,同时存在着大量散发病例,发病率约为1/20000。其临床症... 详细信息

面肩肱型肌营养不良症(Facioscapulohumeral muscular dystrophy,FSHD)是继杜氏肌营养不良症和强直性肌营养不良症后发病率居第3位的遗传性神经肌肉疾病。该病呈常染色体显性遗传,同时存在着大量散发病例,发病率约为1/20000。其临床症状主要表现为面肌、肩胛带肌及上肢肌群的进行性无力和萎缩,致残率高。[第一段]

关键词：肌营养不良染色体基因诊断

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多巴胺D4受体基因启动子区多态性与精神分裂症的相关性

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现代生物医学进展 2010年第17期10卷 3231-3234页

作者：钟慧军刘军红彭亮朱永生党洁霍正浩宁夏生殖与遗传重点实验室宁夏医科大学医学遗传学与细胞生物学教研室宁夏银川750004 宁夏大学生命科学院生理教研室宁夏银川750021

目的:探讨多巴胺D4受体(Dopamine D4 receptor,DRD4)基因启动子区的3个功能多态性与精神分裂症是否存在相关性。方法:严格按照诊断标准,选取无亲缘关系的精神分裂症患者220例,健康对照组200例提取基因组DNA,采用聚合酶链反应及等位基因... 详细信息

目的:探讨多巴胺D4受体(Dopamine D4 receptor,DRD4)基因启动子区的3个功能多态性与精神分裂症是否存在相关性。方法:严格按照诊断标准,选取无亲缘关系的精神分裂症患者220例,健康对照组200例提取基因组DNA,采用聚合酶链反应及等位基因特异性扩增技术检测DRD4基因启动子区-521C/T、-616C/G和-1240L/S3个功能位点的基因型,采用Haplo View 4.0及SPSS11.5软件分析各位点基因型、等位基因频率及组间差异。结果:DRD4基因-1240L/S的基因型及等位基因频率分布在精神分裂症与正常对照组存在显著性差异(p<0.05)。DRD4基因启动子区-521C/T和-616C/G位点的基因型及等位基因频率分布在精神分裂症组与正常对照组无统计学差异(p>0.05)。结论:DRD4基因-1240L/S多态性与精神分裂症相关联,携带有-1240L/S多态性位点L等位基因的个体可能更容易患精神分裂症。

关键词：多巴胺D4受体启动子精神分裂症多态性

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14-3-3epsilon通过影响癌细胞凋亡及侵袭能力在喉癌中发挥抑癌作用

14-3-3epsilon通过影响癌细胞凋亡及侵袭能力在喉癌中发挥抑癌作用

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中国遗传学会北方遗传资源的保护与利用研讨会

作者：车兴华陈洪徐振明尚超孙开来富伟能中国医科大学医学遗传学教研室中国人民解放军第463医院耳鼻喉科中国医科大学神经生物学教研室

目的 14-3-3epsilon参与多种生物过程的调控,其中包括对细胞周期、细胞增殖以及细胞凋亡的调控,并且在神经发生以及恶性肿瘤形成的过程中具有重要的作用。目前,14-3-3epsilon在喉癌发生中的功能以及调节机制并不十分清楚,因此,本实验将... 详细信息

目的 14-3-3epsilon参与多种生物过程的调控,其中包括对细胞周期、细胞增殖以及细胞凋亡的调控,并且在神经发生以及恶性肿瘤形成的过程中具有重要的作用。目前,14-3-3epsilon在喉癌发生中的功能以及调节机制并不十分清楚,因此,本实验将通过对14-3-3epsilon在LSCC中的表达及生物特性的分析,探讨14-3-3epsilon在LSCC的发生和侵袭中的作用。方法 1.应用RT-PCR和western-blot方法检测14-3-3epsilon在喉癌组织中的表达水平。2.构建14-3-3epsilon-GFP真核表达载体。3.利用MTT方法检测转染14-3-3epsilon-GFP表达载体后Hep-2细胞增殖能力。4.利用Cell Cycle检测转染14-3-3epsilon-GFP表达载体后Hep-2细胞周期变化。5.应用Annexin V-PE/7-AAD双染法检测转染14-3-3epsilon-GFP表达载体后Hep-2细胞凋亡情况。6.应用Transwell检测转染14-3-3epsilon-GFP表达载体后Hep-2细胞侵袭能力变化。结果 1.喉癌组织中14-3-3epsilon mRNA及蛋白质表达水平显著低于癌旁对照组织,转移淋巴结中14-3-3epsilon蛋白质表达水平显著低于肿瘤组织,Ⅲ期或Ⅳ期肿瘤组织中14-3-3epsilon蛋白质表达水平显著低于Ⅰ期或Ⅱ期肿瘤组织。2.与空白对照组Hep-2细胞系相比,在转染GFP组及14-3-3epsilon-GFP组中,活细胞的百分数分别为71.68±12.10%和36.68±14.09%(P<0.05)。3.空白对照组、转染GFP组以及转染14-3-3epsilon-GFP组中,细胞处于S期的百分数分别为22.47±3.36%,28.17±3.97%和46.15±6.82%(P<0.05),处于凋亡亚G1期的百分数分别为1.23±1.02%,2.92±1.59%以和13.72±3.89%(P<0.05)。4.在空白对照组、转染GFP组以及转染14-3-3epsilon-GFP组中,晚期凋亡细胞的百分数分别为0.84±0.25%,1.08±0.24%和2.93±0.13%(P<0.001)。5.在空白对照组、转染GFP组以及转染14-3-3epsilon-GFP中,穿过Transwell小室滤膜的细胞数分别为20.65±1.94,17.63±1.04和9.1±0.24(P<0.001)。结论 14-3-3epsilon在喉癌细胞系中具有促进癌细胞凋亡以及抑制癌细胞侵袭的能力,其在喉癌中的低表达可能是促进喉癌发生及进展的原因之一。

关键词： 14-3-3epsilon LSCC MTT Cell Cycle apoptosis Transwell

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常染色体隐性遗传性成骨不全症的分子遗传学研究进展

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国际遗传学杂志 2010年第3期33卷 179-183页

作者：曹丽华张学中国医科大学医学基因组学教研室中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究院医学遗传学系

成骨不全症(osteogenesis imperfecta,OI)又称脆骨症,由于遗传缺陷而引起Ⅰ型胶原结构或功能异常,表现为全身骨骼等结缔组织异常。临床特点是多发性骨折,同时可伴有巨头畸形、蓝巩膜、耳聋、牙齿改变和脊柱后侧凸等。成骨不全症不仅临... 详细信息

成骨不全症(osteogenesis imperfecta,OI)又称脆骨症,由于遗传缺陷而引起Ⅰ型胶原结构或功能异常,表现为全身骨骼等结缔组织异常。临床特点是多发性骨折,同时可伴有巨头畸形、蓝巩膜、耳聋、牙齿改变和脊柱后侧凸等。成骨不全症不仅临床表型变异度大,而且遗传异质性高,以常染色体显性或隐性遗传方式传递,本文就常染色体隐性遗传性成骨不全症的分子遗传学研究进展加以综述。

关键词：成骨不全症常染色体隐性遗传 I型胶原脯氨酸-3-羟化酶

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