检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究与临床康复 2009年第23期13卷 4517-4522页

作者：谭季春李扬曲文玉孙开来刘丽英蒋丽郭帅帅中国医科大学医学遗传学教研室辽宁省沈阳市110003 北京大学医学部北京市100083 沈阳妇婴医院生殖中心辽宁省沈阳市110014

背景：目前人胚胎干细胞建系的技术路线主要有囊胚法、核移植法和胚胎单卵裂球法，但由于破坏胚胎，涉及诸多伦理问题。目的：探讨利用冷冻胚胎建立人类胚胎干细胞系的可行性。设计、时间及地点：细胞学体内外实验，于200501／200608在... 详细信息

背景：目前人胚胎干细胞建系的技术路线主要有囊胚法、核移植法和胚胎单卵裂球法，但由于破坏胚胎，涉及诸多伦理问题。目的：探讨利用冷冻胚胎建立人类胚胎干细胞系的可行性。设计、时间及地点：细胞学体内外实验，于200501／200608在沈阳市妇婴医院生殖中心完成。材料：妊娠13．5d的ICR鼠20只用于制各小鼠胚胎成纤维细胞饲养层，10周龄SICD鼠2只用于人胚胎干细胞体内分化实验。行IVF／ICSI助孕患者自愿捐献的冷冻胚胎，由沈阳市妇婴医院生殖中心提供。方法：复苏冷冻的胚胎，采用序贯培养法进行囊胚培养，用免疫外科方法去除滋养细胞，将得到的胚胎内细胞团接种于丝裂霉素C灭活的小鼠胚胎成纤维细胞上培养并传代。主要观察指标：取不同代次的培养细胞，分别进行生长特性、碱性磷酸酶染色、转录因子OCT-4、阶段特异性胚胎抗原SSEA-4、SSEA-1、肿瘤排斥抗原TRA-1-60、TAR-1-81、核型及体内分化全能性鉴定。结果：20个解冻卵裂期胚胎，获得9个囊胚，分离完整的内细胞团共7个，从7个内细胞团培养出2个人胚胎干细咆系，其中一个细胞系连续培养76代（20个月）。所培养的细胞具有人胚胎干细胞的共同生物学特性，即细胞呈扁平或圆形，可见1—3个核仁：碱性磷酸酶以及SSEA．3，SSEA．4，TRA-1．81，TRA-1-60，OCT-4均呈阳性表达，而SSEA-1呈阴性：核型正常，为46，XX核型；将细胞注射入SCID鼠皮下形成肿瘤，病理切片显示为成熟畸胎瘤：短串联重复分型结果显示所形成的畸胎瘤与人胚胎干细胞为相同的遗传背景。结论：实施体外受精-胚胎移植的夫妇怀孕后，多余的冷冻保存胚胎所分离培养的细胞具备人胚胎干细胞的所有特性，是建立人胚胎干细胞系很好的材料来源。

关键词：人胚胎干细胞冷冻胚胎建系

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VEGF、bFGF、TGFβ1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

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国际遗传学杂志 2009年第1期32卷 1-5页

作者：姜久仰孟祥宁王柏春李春香禹亮哈尔滨医科大学附属第一医院胸外科哈尔滨医科大学医学遗传学研究室

目的探讨VEGF、bFGF、TGFβ在非小细胞肺癌的表达及与其生物学行为特征的关系。方法应用链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶连结(streptavidin-perosidase,SP)免疫组化方法检测VEGF、bFGF、TGFβ及CD34在50例非小细胞肺癌的表达,并进行微血管... 详细信息

目的探讨VEGF、bFGF、TGFβ在非小细胞肺癌的表达及与其生物学行为特征的关系。方法应用链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶连结(streptavidin-perosidase,SP)免疫组化方法检测VEGF、bFGF、TGFβ及CD34在50例非小细胞肺癌的表达,并进行微血管密度计数,以18例癌旁组织为对照。结果VEGF、bFGF、TGFβ的阳性表达率分别为68%、58%、60%,VEGF、bFGF、TGFβ表达均与NSCLC的临床分期(x~2值分别为4.535、3.864、3.852,P<0.05)、淋巴结转移有关(x~2值分别为4.235、3.876、4.151,P<0.05),而TGFβ表达还与组织学类型有关(x~2=4.443,P<0.05),鳞癌比腺癌表达率高。MVD表达与NSCLC的临床分期、淋巴结转移有关(t值分别为2.312和2.865,P<0.05),与组织学类型、组织分化程度无关;且四者表达在癌组织与癌旁组织之间均有显著性统计学意义。VEGF、bFGF表达与MVD有关(t值分别为2.518和3.679,P<0.05);TGFβ表达与MVD无显著关系。结论VEGF、bFGF、TGFβ在NSCLC均有很好的表达,并且其表达与NSCLC的生长、进展、转移等生物学关系密切;VEGF、bFGF在肿瘤血管形成、转移中起重要作用,TGFβ可能与机体免疫功能降低及肿瘤细胞免疫逃逸有关。

关键词：非小细胞肺癌血管内皮生长因子碱性成纤维细胞生长因子转化生长因子微血管密度

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WNK4基因5′侧翼序列调控功能的研究

WNK4基因5′侧翼序列调控功能的研究

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第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)

作者：张媛媛赵彦艳中国医科大学医学遗传学教研室

WNK4[with no lysine(K)-4]是新近克隆的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶—WNK家族成员之一。该基因已被定位于血压控制热点区域17q21-22。研究表明WNK4基因可以作用于肾脏远曲小管和集合管的离子转运体和离子通道,减少钠、氯、钾等离子的潴留,... 详细信息

WNK4[with no lysine(K)-4]是新近克隆的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶—WNK家族成员之一。该基因已被定位于血压控制热点区域17q21-22。研究表明WNK4基因可以作用于肾脏远曲小管和集合管的离子转运体和离子通道,减少钠、氯、钾等离子的潴留,从而对血压和离子平衡起调节作用。目前大量的研究集中在探索WNK4基因的功能上,但WNK4基因上游调控功能仍不清楚。本研究构建了系列截短的hWNK4基因启动子萤光光素酶报告基因表达载体pGL3-promotor,以pRL-TK为内参照质粒,瞬时转染HEK293细胞,检测萤光素酶相对表达活性。结果显示在hWNK4基因启动子区域有多个功能性调控区域,通过生物信息学软件分析预测该启动子区域可能存在一个启动基因最适表达活性的关键序列AP-1。随后我们通过凝胶迁移或电泳迁移率实验和染色质免疫共沉淀技术鉴定了hWNK4基因5'侧翼序列的AP-1反应元件。进一步我们将转录因子AP-1(c-jun、c-fos)的表达载体分别与不同启动子区域的萤光素酶报告基因表达载体瞬时共转染HEK293细胞,结果显示其中一个载体在转染了转录因子后萤光素酶表达活性明显升高。接着我们通过RT-PCR和Western Blotting方法检测转录因子AP-1对HEK293细胞WNK4基因表达的影响。该研究为探索WNK4基因表达调控机制以及鉴定WNK4基因启动子区域顺式反应元件奠定了基础。

关键词： WNK4 AP-1

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CYP4F2转基因小鼠模型的建立与研究

CYP4F2转基因小鼠模型的建立与研究

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东北三省及内蒙古地区遗传学研究进展学术研讨会

作者：武晶晶刘晓亮刘洪赵彦艳中国医科大学医学遗传学教研室

细胞色素P450 4F2(CYP4F2)编码一种ω-羟化酶,是人类肾脏代谢花生四烯酸(arachidonicacid, AA)为20-羟二十碳四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE)最主要的酶,20-HETE具有收缩血管和调节离子稳态的重要作用,CYP4F2因而是原发性高血压的重要候选基因之一。本课题组前期研究已证明CYP4F2基因调控区SNP与高血压表型相关,为进一步研究其在高血压发生发展中的作用,本研究建立了人CYP4F2转基因小鼠模型。为了实现CYP4F2在肾脏的优势表达,我们选择肾脏雄激素调节蛋白(kidney androgen -regulated protein,KAP)启动子构建CYP4F2转基因小鼠。KAP是小鼠肾脏近端小管呈雄激素反应性表达的高丰度蛋白,选择KAP启动子异源性驱动CYP4F2在转基因小鼠肾脏高表达,亦将为实现CYP4F2的可调节诱导表达提供条件。本研究通过显微注射技术产生转基因原代小鼠。PCR及Southern blot双重鉴定了阳性小鼠的基因型。Western blot结果表明KAP启动子能够驱动CYP4F2在转基因小鼠肾脏呈现高表达,雄性肾脏表达明显高于雌性,此外性激素反应性器官(睾丸、附睾或子宫、卵巢)表达明显。对转基因小鼠的血压测量证明CYP4F2转基因小鼠模型呈现高血压表型,并且转基因小鼠血浆和尿中氧化应激相关指标与对照鼠有显著差异。以KAP启动子构建的CYP4F2转基因小鼠模型成功的实现了CYP4F2在肾脏高表达,并呈现高血压表型,雄激素诱导将成为进一步研究CYP4F2功能的有力手段。

关键词： CYP4F2 转基因肾脏高血压

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GLI3、EN1基因与单纯性马蹄内翻足相关性研究

GLI3、EN1基因与单纯性马蹄内翻足相关性研究

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第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)

作者：曹东华王谦林长坤王正东张炫金春莲中国医科大学医学遗传学教研室

构建荧光素酶报告基因分析大鼠Gli3基因启动子区域的活性,并利用P-match软件预测大鼠Gli3基因启动子区域可能的调控元件,应用CHIP实验加以验证。并利用半定量RT-PCR、免疫组化和Western Blot的方法分析En1基因与ICTEV的相关性。我们利用... 详细信息

构建荧光素酶报告基因分析大鼠Gli3基因启动子区域的活性,并利用P-match软件预测大鼠Gli3基因启动子区域可能的调控元件,应用CHIP实验加以验证。并利用半定量RT-PCR、免疫组化和Western Blot的方法分析En1基因与ICTEV的相关性。我们利用P-match软件预测到Gli3基因启动子区域有三个转录因子En1的结合位点,经CHIP试验证实位点1是真正结合位点。半定量RT-PCR、免疫组化和Western Blot方法都证实En1基因在马蹄内翻足模型鼠中表达下降。说明转录因子EN1可能是GLI3基因的上游负调控元件,可能是由于EN1基因表达水平的下降导致了GLI3基因表达水平的上升,最终导致ICTEV的发生。

关键词： GLI3基因 EN1基因 ICTEV

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染色体领域研究进展及意义

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国际遗传学杂志 2009年第6期32卷 416-420页

作者：李春香张丽秋关荣伟白静傅松滨哈尔滨医科大学医学遗传学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室

染色体在间期细胞核中高度有序地组织形成特定区域,称为染色体领域。间期核中染色体领域的排布特征不仅与细胞核功能相关而且与许多细胞学过程相关。本文综述了染色体领域的研究进展,尤其是染色体动力学,同时本文也涉及染色体领域的表... 详细信息

染色体在间期细胞核中高度有序地组织形成特定区域,称为染色体领域。间期核中染色体领域的排布特征不仅与细胞核功能相关而且与许多细胞学过程相关。本文综述了染色体领域的研究进展,尤其是染色体动力学,同时本文也涉及染色体领域的表遗传学研究。

关键词：染色体领域基因组地理学表观遗传学

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喉癌Hep2细胞系APAF-1表达及对5-Aza-CdR诱导凋亡敏感性的研究

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中华肿瘤防治杂志 2009年第6期16卷 401-405页

作者：郭艳梁德勇付志民孙开来富伟能中国医科大学医学遗传学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一临床学院骨科辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一临床学院病理科辽宁沈阳110001

目的:探讨喉癌中APAF-1基因的表达及其对5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-az-a-2′-deoxycitydine,5-Aza-CdR)诱导的Hep2细胞系凋亡的影响。方法:不同浓度5-Aza-CdR(5×10-8、10-7、2×10-7和3×10-7mol/L)处理体外培养的Hep2细胞后... 详细信息

目的:探讨喉癌中APAF-1基因的表达及其对5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-az-a-2′-deoxycitydine,5-Aza-CdR)诱导的Hep2细胞系凋亡的影响。方法:不同浓度5-Aza-CdR(5×10-8、10-7、2×10-7和3×10-7mol/L)处理体外培养的Hep2细胞后,用流式细胞仪检测处理72h的细胞周期分布和细胞凋亡率变化;通过RT-PCR及免疫组织化学技术检测APAF-1基因在喉癌中的表达情况,并建立APAF-1瞬时过度表达系统,观察在APAF-1过度表达情况下,5-Aza-CdR对Hep2细胞凋亡的影响。结果:10-7mol/L5-Aza-CdR处理Hep2细胞72h后,凋亡率由对照组的1·07%增加到13·96%,且发生G1期细胞周期阻滞;喉鳞癌组织中APAF-1mRNA和蛋白表达都明显下调,分别为16/42、14/31,且未发现APAF-1表达与肿瘤的分化程度具有相关性,P=0·093;在10-7mol/L浓度5-Aza-CdR诱导下,APAF-1过度表达组Hep2细胞系凋亡率由空白对照组的12·46%及空载体转染组的14·74%增高到28·64%,且发生S期细胞周期阻滞。结论:过度表达APAF-1基因可以明显增加Hep2细胞系对去甲基化药物5-Aza-CdR诱导的凋亡敏感性。

关键词：喉肿瘤喉,鳞状细胞基因表达细胞凋亡

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P38MAPK、Caspase-8在Fas—AD诱导Bel-7402细胞凋亡中的作用

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国际免疫学杂志 2009年第6期32卷 426-429页

作者：王璐王玉孙黎光哈尔滨医科大学国际遗传学杂志编辑部 180001 齐齐哈尔医学院基础医学研究室中国医科大学生物化学与分子生物学教研室

目的通过P38MAPK抑制剂SB203580及caspase-8抑制剂Ac-IEFD-cho的作用，确定P38MAPK、caspase-8的相互作用关系，进一步揭示Fas—AD诱导Bel-7402细胞凋亡的信号转导机制。方法通过RT—PCR法检测培养的Bel-7402细胞中P38MAPK mRNA、caspase．8 mRNA在***、SB203580及Ac—IEFD—cho作用下的表达情况。结果在Fas-AD诱导Bel-7402细胞凋亡中，SB203580和Ac—IEFD—cho能分别抑制p38MAPK mRNA、caspase-8 mRNA的表达。结论在Bel-7402细胞凋亡中，P38MAPK与easpase-8参与Fas—AD凋亡途径，并且在mRNA水平进行相互调节。

关键词： P38MAPK Caspase-8 Fas-AD 诱导Bel-7402 细胞凋亡医学免疫学

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一中国佩-梅病家系的致病基因突变分析

一中国佩-梅病家系的致病基因突变分析

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第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)

作者：罗阳曹丽华李岭鹿蕾娜吕远中国医科大学医学基因组学教研室中国医科大学医学遗传学教研室

目的佩-梅病(Pelizaeus-Merzbacher disease,PMD)是一种遗传性脑白质营养不良病,又名皮层外型中轴发育不良或先天性皮质外轴索再生障碍症,是X连锁隐性遗传病,发病率为1/500,000-1/300,000。致病基因为PLP1,定位于染色体Xql3-q22。本研... 详细信息

目的佩-梅病(Pelizaeus-Merzbacher disease,PMD)是一种遗传性脑白质营养不良病,又名皮层外型中轴发育不良或先天性皮质外轴索再生障碍症,是X连锁隐性遗传病,发病率为1/500,000-1/300,000。致病基因为PLP1,定位于染色体Xql3-q22。本研究旨在鉴定一中国佩-梅病家系致病基因改变,并对该家系高危胎儿进行产前诊断。方法佩-梅病家系来自辽宁,3代共19人,受累者5人,经家系成员知情同意后采集5名家系成员外周血(男性受累者2名,女性疑似携带者2名,男性正常人1名)和1例高危胎儿脐带血,提取基因组DNA。在PLP1基因内部及附近选择微卫星多态标记,通过PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测基因型,分析2名受累者及胎儿与受累者是否有单体型共享,同时利用SRY基因进行性别鉴定,并利用定量PCR确定家系成员PLP1基因拷贝数。结果STR单体型分析显示2名男性受累者存在单体型共享,而受检胎儿与两名男性受累者不存在单体型共享,且受检胎儿STR标记为杂合;PCR扩增SRY基因,家系中的3名男性成员PCR皆扩出特异的条带,而2名女性和胎儿都未扩出任何条带;定量PCR结果表明2名男性受累者和2名女性疑似携带者PLP1基因拷贝数增加,分别为2个拷贝和3个拷贝,受检胎儿PLP1基因拷贝数为2,男性正常人PLP1基因拷贝数为1。结论PLP1基因拷贝数增加为此中国佩-梅病家系受累者的致病基因突变,鉴定了两名女性携带者,受检胎儿为女性,PLP1基因拷贝数正常,排除了受检胎儿发生佩-梅病的高风险性。

关键词：关键词:佩-梅病 PLP1基因单体型 STR,定量PCR

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iNOS基因调控区-1026C/A多态的功能研究

iNOS基因调控区-1026C/A多态的功能研究

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第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)

作者：李伟赵彦艳中国医科大学医学基础医学院医学遗传学教研室

目的和方法iNOS基因启动子是目前发现的最复杂的基因启动子之一,该基因启动子在生理条件下处于沉默状态,当细菌脂多糖和细胞因子等因素刺激才启动调节iNOS的表达。目前,iNOS基因启动子中有许多调控元件已经被发现,但由于其启动子的复杂... 详细信息

目的和方法iNOS基因启动子是目前发现的最复杂的基因启动子之一,该基因启动子在生理条件下处于沉默状态,当细菌脂多糖和细胞因子等因素刺激才启动调节iNOS的表达。目前,iNOS基因启动子中有许多调控元件已经被发现,但由于其启动子的复杂性仍有待不断发掘和鉴定新的启动子元件。在前期工作中发现该基因启动子区中-1026C/A位点与原发性高血压发生存在关联性,通过软件预测到-1026C位点存在转录因子YY1的结合位点,并发现转录因子YY1通过与iNOS- 1026C的结合,使iNOS基因启动子转录活性下降。为了进一步研究YY1转录因子对于iNOS基因启动子转录活性的影响,本实验运用了含有-1026C/A位点的不同等位基因萤光素酶报告基因重组体和含有YY1编码序列的真核表达载体,通过瞬时共转染细胞,检测外源转入YY1后对于含有-1026C/A位点的不同等位基因的启动子的转录活性,以进一步明确YY1转录因子在iNOS基因转录调控中的作用。由于YY1的转录调节活性主要受到乙酰化和去乙酰化的调节,YY1乙酰化后其转录抑制活性可能增强,因此本研究在上述实验过程中添加去乙酰化酶抑制剂为影响因素,进一步观察启动子活性的变化。结果实验结果显示,外源转入YY1能明显抑制含有-1026C/A位点的iNOS启动子片段的转录活性。去乙酰化酶的抑制剂可抑制去乙酰化酶活性,增加YY1的乙酰化水平,从而使YY1进一步抑制iNOS启动子片段的转录活性。

关键词： iNOS YY1

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