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中国现代医学杂志 2008年第16期18卷 2322-2326页

作者：潘洪明费洪新黄小义齐齐哈尔医学院黑龙江齐齐哈尔161042 哈尔滨医科大学遗传学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的研究紫杉醇(PA)联合白藜芦醇(RES)对人胃癌MGC803细胞株的影响。方法采用MTT法检测两种药物单用和联合应用对细胞的作用,光镜观察细胞结构的变化,联合应用判断两药合用效果,流式细胞仪检测MGC803细胞周期分布,并且检测端粒酶的活性... 详细信息

目的研究紫杉醇(PA)联合白藜芦醇(RES)对人胃癌MGC803细胞株的影响。方法采用MTT法检测两种药物单用和联合应用对细胞的作用,光镜观察细胞结构的变化,联合应用判断两药合用效果,流式细胞仪检测MGC803细胞周期分布,并且检测端粒酶的活性。结果PA可抑制MGC803细胞的生长,且呈剂量及时间依赖性(P<0.05);光学显微镜下可见经PA和RES培养的胃癌细胞质内存在异常物质;PA对人胚肺成纤维细胞(HPF)生长起促进作用,且呈剂量依赖性(P<0.05);PA与RES联合应用对MGC803细胞生长的抑制具有协同作用(P<0.05);PA对G0/G1期有阻滞作用,RES有明显的S期阻滞作用,两者可从不同环节抑制细胞增殖,同时端粒酶活性受到抑制。结论PA对胃癌MGC803细胞有抑制作用,相同剂量对正常细胞无抑制作用,PA与RES对胃癌细胞的抑制具有协同作用,与单用RES相比,PA与RES联合应用可减少RES的用药剂量。

关键词：紫杉醇白藜芦醇体外研究胃癌

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人CYP4F2转基因小鼠模型的建立及表达鉴定

人CYP4F2转基因小鼠模型的建立及表达鉴定

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：刘晓亮刘洪陈芳杰张媛媛赵彦艳中国医科大学医学遗传学教研室

细胞色素 P450 4F2(CYP4F2)是人类肾脏代谢花生四烯酸(arachidonic acid,AA) 产生20-羟二十碳四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE)最主要的酶,20-HETE 具有收缩血管和调节离子稳态的重要作用,CYP4F2因而是原发性高血压的重要候选基因之一。本课题组前期研究已证明 CYP4F2基因调控区 SNP 与高血压表型相关,为进一步探讨其在高血压发生发展中的作用,本研究首次建立了人 CYP4F2转基因小鼠模型。肾脏雄激素调节蛋白 (kidney androgen-regulated protein,KAP)是小鼠肾脏近端小管呈雄激素反应性表达的高丰度蛋白,选择 KAP 启动子异源性驱动 CYP4F2在转基因小鼠肾脏高表达,将为实现 CYP4F2 的可调节诱导表达提供条件。首先构建 KAP-LUC 报告基因表达载体,转染包括肾源性 HEK293 细胞在内的六种常见体外培养细胞,荧光素酶活性检测提示 KAP 启动子可驱动报告基因在多种细胞中表达,HEK293细胞的荧光强度升高尤其显著。其次以 CYP4F2 cDNA 替换 LUC 构建 KAP—CYP4F2表达载体,转染 HEK293细胞,Western blot 结果表明 CYP4F2表达量较对照明显升高。然后通过显微注射技术,将线性化的 KAP—CYP4F2导入 FVB/N 小鼠受精卵,PCR 及 Southern blot 双重鉴定了3只转基因阳性小鼠,建立了 CYP4F2转基因小鼠模型。最后,运用 Western blot 对转基因小鼠 CYP4F2的表达加以鉴定,CYP4F2在转基因小鼠体内呈现肾脏高表达,雄性肾脏表达明显高于雌性,此外性激素反应性器官(睾丸、附睾或子宫、卵巢)表达明显, 肺、心、肝、脾等其他多种肾外组织也有表达信号,脑、骨骼肌以及胃肠道呈阴性表达。免疫组化进一步将肾脏的 CYP4F2表达定位于肾单位的近端小管。本研究成功建立了人 CYP4F2 转基因小鼠模型,CYP4F2在转基因小鼠的肾脏近端小管高表达,并呈现雄激素反应性表达特点,雄激素诱导表达将成为进一步研究 CYP4F2功能的有力手段。

关键词： CYP4F2 转基因肾脏高血压

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P38MAPKc、aspase-8在Fas-放线菌素D诱导Bel-7402细胞凋亡中的作用

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哈尔滨医科大学学报 2008年第3期42卷 216-220页

作者：王玉孙黎光王璐中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨医科大学国际遗传学杂志编辑部黑龙江哈尔滨150081

目的确定P38MAPKc、aspase-8的关系,以探讨Fas-actinomycin D(Fas-AD)诱导Bel-7402细胞凋亡的信号转导机制。方法通过流式细胞仪检测Fas-AD、SB203580(P38MAPK特异性抑制剂)及Ac-IEFD-cho(caspase-8特异性抑制剂)对Bel-7402细胞凋亡的影响;通过Western-blot法检测Fas-AD、SB203580及Ac-IEFD-cho对培养的Bel-7402细胞的P38MAPK、caspase-8的激活及其表达的影响。结果Fas-AD能明显诱导Bel-7402细胞凋亡,SB203580和Ac-IEFD-cho能明显抑制Fas-AD诱导的细胞凋亡。Fas-AD能诱导P38MAPK、caspase-8激活并表达,而SB203580和Ac-IEFD-cho能分别抑制它们的激活及表达。结论在Bel-7402细胞凋亡中,P38MAPK与caspase-8参与Fas-AD凋亡途径,并且相互调节。

关键词： Fas caspase-8 P38MAPK 凋亡

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MLPA方法在假肥大性肌营养不良基因诊断中的应用

MLPA方法在假肥大性肌营养不良基因诊断中的应用

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：王谦林长坤任梅宏崔婉婷武盈玉麻宏伟金春莲中国医科大学医学遗传学教研室

假肥大性肌营养不良症是一种严重的神经肌肉疾病,分为 DMD(Duchenne muscular dystrophy)和 BMD(Becker muscular dystrophy),均是由于 dystrophin 基因突变所致。鉴于本病至今没有有效的治疗方法,因此高效、准确的 DMD 致病基因诊断,... 详细信息

假肥大性肌营养不良症是一种严重的神经肌肉疾病,分为 DMD(Duchenne muscular dystrophy)和 BMD(Becker muscular dystrophy),均是由于 dystrophin 基因突变所致。鉴于本病至今没有有效的治疗方法,因此高效、准确的 DMD 致病基因诊断,携带者检测,产前诊断及正确的遗传咨询是预防本病的关键。【目的】:用 MLPA 方法筛查59例 DMD 患者和26 例要求做产前诊断的孕妇羊水 dystrophin 基因突变,对缺失和重复突变的患者及胎儿做出诊断。【方法】:饱和氯化钠法提取基因组 DNA,煮沸法提取羊水细胞 DNA:多重 PCR 检测,设计3组包含 dystrophin 基因外显子突变热点的12对 PCR 引物来筛查 dystrophin 基因的缺失情况:MLPA 检测,80对探针被分成 SALSAP034和 P035两组。所有的反应在标准的盖温为105 ℃的 PCR 仪上进行,ABI3130测序仪电泳分析产物片断;连锁分析,当用 MLPA 方法进行产前筛查没有检测出突变时,选用 dystrophin 基因内及其近旁的7个 STR 位点进行单体型连锁分析。【结果】:应用 MLPA 在59例患者中共检出40例突变(40/59,67.8%)。发现了10例经多重 PCR 检测没有发现的突变,包括3例外显子缺失,1例单碱基缺失和6例外显子重复;在33例已知外显子缺失病例中,81.8%(27例)的缺失位于中央热区,15.2%(5例)的缺失位于5'端。其中有一个从外显子18到外显子47的大的缺失。如果把6例重复突变计算在内, 内含子44是最常见的断裂点(n=13,33.3%),内含子50和45是第二位(n=11,28.2%)和第三位(n=8,20.5%)。6例重复突变中的4例突变位点位于外显子1至20。本次用 MLPA 筛查的26例高危孕妇中,19例可以直接基因诊断,占73.1%(19/26),其余间接基因诊断。本研究发现了3例新突变,例1为 dystrophin 基因两个位点的重复突变(外显子3-7和外显子44):例2是 dystrophin 基因的点突变(5132del(A)),在 Leiden 数据库中未见相同报道:例3的 dystrophin 基因外显子22缺失,在中国人群中未见报道。【结论】:本实验分析的数据表明用 MLPA 方法在 DMD 患者及未经培养的羊水细胞中进行 dystrophy 基因筛查,直接诊断率可达到67.8～73.7%。我们认为 MLPA 可以作为筛查 DMD/BMD 患者的首选方法,同时检测缺失、重复,可明显提高直接诊断率。

关键词： DMD 假肥大性肌营养不良外显子基因诊断

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树舌多糖对小鼠HepA瘤细胞的caspase-8、TNF-α及MAP-2的表达的影响

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哈尔滨医科大学学报 2008年第1期42卷 14-17页

作者：王璐王玉夏春辉谷鸿喜哈尔滨医科大学国际遗传学杂志编辑部黑龙江哈尔滨150081 齐齐哈尔医学院黑龙江齐齐哈尔161042 哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的研究树舌多糖抑制肿瘤的作用机制。方法通过随机分组实验,测定树舌多糖对小鼠HepA瘤的抑瘤率,经Western blot检测caspase-8与TNF-α的表达,免疫荧光法检测MAP-2的表达,并通过电镜观察树舌多糖作用后细胞结构的变化。结果树舌多糖的... 详细信息

目的研究树舌多糖抑制肿瘤的作用机制。方法通过随机分组实验,测定树舌多糖对小鼠HepA瘤的抑瘤率,经Western blot检测caspase-8与TNF-α的表达,免疫荧光法检测MAP-2的表达,并通过电镜观察树舌多糖作用后细胞结构的变化。结果树舌多糖的抑瘤率为51.82%,经其作用后,Western blot显示caspase-8、TNF-α表达均显著增加,免疫荧光法检测MAP-2的表达也显著增加。电镜下观察到树舌多糖作用后细胞结构发生改变并形成凋亡细胞。结论树舌多糖通过促进caspase-8的表达,刺激TNF-α表达增加,进一步影响细胞骨架的重排从而促进细胞凋亡抑制小鼠HepA瘤的生长。

关键词：树舌多糖 caspase-8 TNF-α MAP-2 凋亡

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白藜芦醇纳米微粒对体外人胃肿瘤MGC803细胞增殖和凋亡的影响

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齐齐哈尔医学院学报 2008年第21期29卷 2561-2563页

作者：李永涛费洪新沈雷姜杨谢立平黄小义齐齐哈尔医学院哈尔滨医科大学遗传学教研室

目的观察不同浓度白藜芦醇(RES)纳米微粒在不同时间段对人胃肿瘤MGC803细胞生长和凋亡的影响。方法应用MTT法测定不同浓度的RES纳米微粒、RES、5-FU对MGC803细胞分别在0、6、12、24、48、60 h的细胞生长抑制率。流式细胞仪分析MGC803细... 详细信息

目的观察不同浓度白藜芦醇(RES)纳米微粒在不同时间段对人胃肿瘤MGC803细胞生长和凋亡的影响。方法应用MTT法测定不同浓度的RES纳米微粒、RES、5-FU对MGC803细胞分别在0、6、12、24、48、60 h的细胞生长抑制率。流式细胞仪分析MGC803细胞周期的改变,细胞免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达,检测端粒酶活性。结果MTT法显示不同浓度的RES纳米微粒可抑制MGC803细胞增殖(60μg/ml作用60h的抑制率达64%),并且与浓度和时间均呈正相关,流式细胞仪细胞周期分析提示RES纳米微粒可将MGC803细胞阻滞于S期,细胞免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调,端粒酶活性水平下降。结论RES纳米微粒可诱导人胃肿瘤细胞MGC803发生凋亡,延长药物对胃肿瘤细胞的有效作用时间,载药纳米微球没有改变RES成分的生物学活性。

关键词：白藜芦醇胃肿瘤细胞凋亡生物学活性

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医学遗传学课堂教学中学生学习兴趣的激发与培养

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2008年第6期10卷 648-650页

作者：李莉艳李强南方医科大学医学遗传学教研室广州510515 南方医院检验科

针对医学遗传学教学内容枯燥、抽象难懂的特点,从提高学生的学习兴趣着手,在教学方法和教学形式等多方面进行了一系列的改革,有效地激发了学生学习医学遗传学的主动性和积极性,使学生将枯燥的被动接受转变为主动的探索学习过程,学习效... 详细信息

针对医学遗传学教学内容枯燥、抽象难懂的特点,从提高学生的学习兴趣着手,在教学方法和教学形式等多方面进行了一系列的改革,有效地激发了学生学习医学遗传学的主动性和积极性,使学生将枯燥的被动接受转变为主动的探索学习过程,学习效果得到很大提高。此系列的教学改革得到学生的广泛好评,收到了良好的教学效果。

关键词：医学遗传学教学方法学习兴趣

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喉癌中MicroRNA-24(miR-24)转录后下调炎症因子S100A8的表达并促进Hep2细胞侵袭

喉癌中MicroRNA-24(miR-24)转录后下调炎症因子S100A8的表达并促...

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：郭艳刘佳尚超孙开来富伟能中国医科大学医学遗传学教研室中国医科大学神经生物学教研室

炎症因子 S100A8具有抑制凋亡、促进肿瘤细胞侵袭和转移的重要功能,可能通过 P65/S100A8/BCL-2/Caspase-9(-3)途径参与喉鳞癌的发生与发展。目前,尚未有 miRNAs 通过靶向结合 S100A8基因3'-UTR 而调控该基因的表达及 miRNAs 参与喉... 详细信息

炎症因子 S100A8具有抑制凋亡、促进肿瘤细胞侵袭和转移的重要功能,可能通过 P65/S100A8/BCL-2/Caspase-9(-3)途径参与喉鳞癌的发生与发展。目前,尚未有 miRNAs 通过靶向结合 S100A8基因3'-UTR 而调控该基因的表达及 miRNAs 参与喉鳞癌侵袭的相关报道。我们应用生物信息学技术对 S100A8基因3'-UTR 进行预测;通过 RT—PCR、Western Blotting 对肝癌、喉癌等7个细胞系中 S100A8基因在 RNA 和蛋白水平上的表达进行检测;应用终点 PCR、实时荧光定量 PCR 技术对7个细胞系和10例喉鳞癌组织中 miR-24的表达进行检测:分别构建野生型和突变型 S100A8—3'-UTR 荧光报告素酶载体并同 pre-miR-24一起共转染于喉癌 Hep2 细胞系中,应用 Western Blotting 结合荧光素酶活性分析以检测 miR-24对 S100A8基因的靶向性调控,通过体外侵袭实验分析 miR-24对喉癌 Hep2细胞系侵袭能力的影响。结果表明, 在 S100A8基因3'-UTR 329 nt 预测到 miR-24特异性结合位点,且 miR-24在大鼠和人类当中同源性高达95%;7个细胞系中 miR-24均有表达且其表达与 S100A8基因在蛋白水平上的表达呈负相关:10例喉鳞癌组织中 miR-24的表达较癌旁正常组织中明显下调:共转染 pre-miR-24及野生型 S100A8-3'-UTR 荧光报告素酶载体能够明显抑制喉癌 Hep2细胞系的荧光素酶活性及体外侵袭能力、下调 S100A8基因的表达,而共转染 pre-miR-24及突变型 S100A8-3'-UTR 荧光报告素酶载体对喉癌 Hep2细胞系的影响不明显。由此可见,喉癌 miR-24 靶向结合于 S100A8基因3'-UTR 329 nt 位点并转录后下调 S100A8基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的侵袭。喉癌中 S100A8基因及 miR-24的深入研究,不仅有利于人们对炎症介导的肿瘤的认识,而且对以 microRNAs 为靶点的新药开发提供科学依据。

关键词：喉鳞状细胞癌 S100A8 miR-24 转录后调控侵袭

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高钾饮食对大鼠肾脏WNK 1不同转录本表达的作用及其意义

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中华高血压杂志 2008年第11期16卷 999-1002页

作者：吕晶玉边霁由田邱广斌赵彦艳中国医科大学医学遗传学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学第一临床学院急诊科辽宁沈阳110001 解放军202医院检验科辽宁沈阳110003

背景 WNK1是新近发现的肾脏多个离子转运体及通道的调控蛋白,与醛固酮离子转运途径有关。目的探讨高钾饮食致体内醛固酮增高对大鼠肾脏 WNK1不同转录本表达的作用及其意义。方法采用高钾饮水饲养 Wistar 大鼠8只,检测血清、24 h 尿液离... 详细信息

背景 WNK1是新近发现的肾脏多个离子转运体及通道的调控蛋白,与醛固酮离子转运途径有关。目的探讨高钾饮食致体内醛固酮增高对大鼠肾脏 WNK1不同转录本表达的作用及其意义。方法采用高钾饮水饲养 Wistar 大鼠8只,检测血清、24 h 尿液离子质量浓度及血清醛固酮质量浓度。半定量 RT-PCR 方法检测大鼠肾脏 WNK1-L和 WNK1-KS 基因表达情况。结果与正常对照组(n=8)比较,高钾组(n=8)血清醛固酮水平显著升高[(1.86±0.66)比对照组:(0.25±0.04)μg/L,P<0.01],为对照的7.4倍。血清及尿液钾离子和尿液氯离子质量浓度升高(P<0.05),尿液钠离子质量浓度下降(P<0.05),血清钠离子和氯离子无差异(P>0.05)。高钾组WNK1-L 表达量无差异(0.27±0.07比0.26±0.07,P>0.05),WNK1-KS 表达量显著上升(1.60±0.22比0.38±0.08,P<0.01)。结论高钾饮食导致大鼠醛固酮质量浓度升高,醛固酮可通过调控 WNK1-KS 表达起到排钾保钠的生理作用。

关键词：醛固酮离子转运肾脏 WNK1

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中国东北人群遗传多样性研究

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国际遗传学杂志 2008年第4期31卷 284-290页

作者：张学龙孙海明傅松滨哈尔滨医科大学医学遗传学研究室黑龙江省生物医药工程重点实验室

作为中国人类基因组计划的参与者之一,我们研究室承担了我国东北地区少数民族遗传样品建库与保存的工作。基于东北地区丰富的人类遗传资源,我们进行了一些疾病相关以及民族亲缘关系的研究。本文综述了遗传多样性研究的基本内容,以及我... 详细信息

作为中国人类基因组计划的参与者之一,我们研究室承担了我国东北地区少数民族遗传样品建库与保存的工作。基于东北地区丰富的人类遗传资源,我们进行了一些疾病相关以及民族亲缘关系的研究。本文综述了遗传多样性研究的基本内容,以及我们近年来的一些研究成果。

关键词：遗传多样性东北人群关联研究人类起源中国人类遗传资源库

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