检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2015年第12期31卷 1753-1763页

作者：范芳芳孙慧莹徐晖刘佳玮张海员李亦兰宁雪莲孙悦白静傅松滨周春水哈尔滨医科大学医学遗传学教研室黑龙江哈尔滨150081

利用Gateway克隆技术构建重组抗瘤肽AIK的原核表达体系,建立表达及纯化重组AIK的最优条件,为深入研究和利用AIK奠定基础。首先,设计含AttB重组位点的引物,通过重叠PCR技术扩增出Att B-TEV-FLAG-AIK序列,利用BP重组反应将目的序列TEV-FLA... 详细信息

利用Gateway克隆技术构建重组抗瘤肽AIK的原核表达体系,建立表达及纯化重组AIK的最优条件,为深入研究和利用AIK奠定基础。首先,设计含AttB重组位点的引物,通过重叠PCR技术扩增出Att B-TEV-FLAG-AIK序列,利用BP重组反应将目的序列TEV-FLAG-AIK克隆到供体载体pDONR223中,构建入门载体,再通过LR重组反应,将目的序列转移到目的载体pDEST15中,构建GST-AIK融合蛋白原核表达质粒。随后,在BL21(DE3)工程菌中优化诱导融合蛋白表达的条件。以谷胱甘肽磁珠纯化GST-AIK融合蛋白,再以rTEV酶切除GST,获得FLAG-AIK重组蛋白。最后以MTS法检测FLAG-AIK对白血病细胞HL-60的细胞毒性。菌液PCR验证和测序分析表明成功构建了重组抗瘤肽AIK的入门质粒和原核表达质粒。在BL21(DE3)工程菌中实现了GST-AIK融合蛋白的高效可溶性表达。并测得在37℃下以0.1 mmol/L IPTG诱导工程菌(OD600=1.0)4 h,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的30%以上。经GST亲和层析、rTEV酶切除GST标签及二次GST亲和层析获得纯度高于95%的FLAG-AIK蛋白。MTS法测得所制备的FLAG-AIK蛋白抑瘤活性与化学合成的AIK相当。总之,本课题应用Gateway克隆系统成功构建了抗瘤肽AIK的原核表达质粒,实现了GST-AIK融合蛋白的高效可溶性表达,经亲和层析获得了有生物活性的重组AIK多肽,为后续深入研究和大规模制备奠定了基础。

关键词：阳离子多肽位点特异性重组 GST融合蛋白诱导表达亲和层析抑瘤活性

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三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞作用的体外观察

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中华医学杂志 2009年第2期89卷 133-137页

作者：栾天竹傅松滨周立君李为民黄永麟哈尔滨医科大学附属第一临床医学院心内科 150001 哈尔滨医科大学遗传教研室

目的探讨三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞（HCSMC）的促凋亡作用及其对损伤动脉再狭窄防治的意义。方法将人冠状动脉平滑肌细胞传代培养，将细胞分为正常对照组、三氧化二砷（浓度分别为1．0、2．0、3．0、4．0及5．0μmol／L）组，... 详细信息

目的探讨三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞（HCSMC）的促凋亡作用及其对损伤动脉再狭窄防治的意义。方法将人冠状动脉平滑肌细胞传代培养，将细胞分为正常对照组、三氧化二砷（浓度分别为1．0、2．0、3．0、4．0及5．0μmol／L）组，通过透射电镜、DNA电泳、原位细胞凋亡检测试剂盒（TUNEL）、四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞活性观察三氧化二砷促细胞凋亡作用，Western印迹检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达变化。结果随三氧化二砷浓度的增加能够抑制HCSMC的增殖并且该作用与时间及三氧化二砷浓度呈正相关，观察第7天、浓度为5．0μmol／L时细胞生存数为[（4.41±0．10）×10^5／ml，正常对照组（30．11±0．93）×10^5／ml差异有统计学意义，P〈0．05]，透射电镜下可见凋亡小体、DNA电泳可见典型凋亡后梯形条带、TUNEL可见凋亡细胞由（16．0±3．1）％增至（38．7±2．7）％（P〈0．05），三氧化二砷上调凋亡促进基因Bax的表达而下调凋亡抑制基因Bcl—2表达。正常对照组均不见典型上述变化。结论三氧化二砷可促进HCSMC的凋亡，抑制其过度增殖。

关键词：三氧化二砷平滑肌细胞细胞凋亡

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9个DMD基因探针的多态频率检测

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中华医学遗传学杂志 1992年第5期9卷 310-311页

作者：魏建军郭亦寿陈丙玺杨亚萍蔡富强山东医科大学医学遗传教研室

假性肥大型肌营养不良(DMD/BMD)是男性活婴中最常见的X连锁隐性遗传病。自Murray等首次用RC8进行该病的RFLPs分析以来,已有近70个DNA多态探针可用于DMD的多态连锁分析。多种探针的应用,为不同家庭类型和检测对象提供充分的DMD缺陷基因检... 详细信息

假性肥大型肌营养不良(DMD/BMD)是男性活婴中最常见的X连锁隐性遗传病。自Murray等首次用RC8进行该病的RFLPs分析以来,已有近70个DNA多态探针可用于DMD的多态连锁分析。多种探针的应用,为不同家庭类型和检测对象提供充分的DMD缺陷基因检测,携带者检出和产前诊断。根据探针多态性和DMD基因的连锁程度,如何少用探针而又得到准确的RFLPs结果,是DMD/

关键词：肌营养不良基因探针多态频率

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精神发育迟滞群体中X连锁型的构成

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中华医学遗传学杂志 1994年第2期11卷 81-84页

作者：邵常顺魏建军龚瑶琴姜源陈丙玺郭亦寿山东医科大学医学遗传教研室

对群体调查收集到的３８１个非特异性精神发育迟滞（ＭＲ）家庭进行了性别构成分析和分离分析，结果表明男性患者远多于女性患者，尤以中度ＭＲ组明显，分离分析也揭示在中度ＭＲ组男性患者的分离比最高。假定超出的男性患者由Ｘ连锁基... 详细信息

对群体调查收集到的３８１个非特异性精神发育迟滞（ＭＲ）家庭进行了性别构成分析和分离分析，结果表明男性患者远多于女性患者，尤以中度ＭＲ组明显，分离分析也揭示在中度ＭＲ组男性患者的分离比最高。假定超出的男性患者由Ｘ连锁基因引起，估算出Ｘ连锁型ＭＲ在总体ＭＲ中占２５％，占中度ＭＲ的３０％。就Ｘ连锁基因在ＭＲ发病中的作用进行了讨论。

关键词：精神发育迟滞 X连锁遗传

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口腔颌面部肿瘤术后言语障碍的评估和康复管理专家共识

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实用口腔医学杂志 2025年第1期41卷 5-15页

作者：李小莹孙沫逸郭伟唐瞻贵李龙江任国欣孙志军尚伟张杰孟箭李吉辰杨凯何悦李春洁秦力铮李波吴炜梁秦龙倪前伟李建虎杨向明周小燕杨帆李家存高涛口颌系统重建与再生全国重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心陕西省口腔疾病临床医学研究中心空军军医大学第三附属医院医疗康复科口颌系统重建与再生全国重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心陕西省口腔疾病临床医学研究中心空军军医大学第三附属医院口腔颌面头颈肿瘤科上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔颌面-头颈肿瘤科中南大学湘雅口腔医院口腔疾病防治全国重点实验室国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心四川大学华西口腔医院头颈肿瘤外科武汉大学口腔医学院青岛大学附属医院口腔颌面外科北京大学口腔医学院口腔颌面外科徐州市中心医院哈尔滨医科大学附属第一医院重庆医科大学附属第一医院口腔颌面外科首都医科大学附属北京口腔医院口腔颌面头颈肿瘤科桂林医科大学附属口腔医院陕西省肿瘤医院头颈肿瘤外科新疆军区总医院颌面外科陕西省人民医院口腔科延安大学医学院公共卫生与预防医学教研室空军军医大学第三附属医院

外科手术的进步使许多口腔颌面部肿瘤患者能够得到有效的治疗，但术后由于发音器官的缺损和组织瓣修复的代偿功能不足可能出现咀嚼、吞咽和言语障碍等问题。尤其是言语障碍，它使患者与他人沟通困难而感到孤立，不但影响患者的生活质量... 详细信息

外科手术的进步使许多口腔颌面部肿瘤患者能够得到有效的治疗，但术后由于发音器官的缺损和组织瓣修复的代偿功能不足可能出现咀嚼、吞咽和言语障碍等问题。尤其是言语障碍，它使患者与他人沟通困难而感到孤立，不但影响患者的生活质量，还可能引发心理问题和社会交往障碍。尽管手术及放化疗引起言语功能障碍导致的生活质量下降等相关问题已得到大家广泛关注，但目前国内外针对口腔颌面部肿瘤术后合并言语障碍的问题尚未形成标准化通用的评估方法和规范的康复治疗管理指南或共识。在前期临床实践的基础上，结合口腔颌面肿瘤术后患者言语障碍的特点及总结颌面肿瘤外科和康复领域专家的临床经验，回顾和总结国内外相关文献，组织相关专家经共同讨论、修改，主要从言语障碍的评估和早期康复治疗管理的实施方案等核心内容方面达成共识，以期改善患者与言语相关的生活质量并提高口腔颌面肿瘤术后言语障碍的评估和康复治疗技术，为临床提供参考。

关键词：口腔颌面部肿瘤言语障碍评估和康复管理

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广东汉族人群St14(DXS52)VNTR与血友病A携带者的检测

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中华血液学杂志 2000年第7期21卷 362-365页

作者：马爱华曾瑞萍贺奇才中山医科大学医学遗传教研室广州510089 中山医科大学物理教研室

目的　研究广东正常人群St14(DXS5 2 )位点的遗传多态性 ,为血友病A的基因诊断提供依据。方法　采用扩增片段长度多态性 (Amp FLP)分析技术 ,检测了广东地区无血缘关系的正常汉族个体 12 5名 ,男 2 1名 ,女 10 4名 ,总计 2 2 9条X染色... 详细信息

目的　研究广东正常人群St14(DXS5 2 )位点的遗传多态性 ,为血友病A的基因诊断提供依据。方法　采用扩增片段长度多态性 (Amp FLP)分析技术 ,检测了广东地区无血缘关系的正常汉族个体 12 5名 ,男 2 1名 ,女 10 4名 ,总计 2 2 9条X染色体。利用此数目可变串联重复序列 (VNTR)多态作为遗传标记 ,对 4个血友病A家系进行连锁分析。结果　共检出 11种等位片段 ,其片段大小为 70 0～1810bp ,基因频率分布为 0 .0 0 44～ 0 .480 3。在该群体的男性个体中观察到 7种基因型 ,女性个体中观察到 17种基因型 ,观察杂合度为 0 .432 ,多态信息含量为 0 .7335。研究的 4个家系中 2个有诊断信息 ,在 1个家系中确定了 2名女性为正常人 ,而非携带者 ;在另 1个家系中检出 1名女性携带者。结论　St14(DXS5 2 )位点VNTR多态是对华南地区血友病A携带者检测有一定应用价值的遗传标记 ,并与欧洲白种人群间存在差异性。

关键词： St14(DXS52) 血友病A 汉族人群 VNTRe

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构建Neuregulin1克隆载体的实验

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中国临床康复 2005年第15期9卷 117-119页

作者：张际绯金连弘傅松滨史忠诚于旸哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室哈尔滨医科大学医学遗传学教研室

目的:Schwann细胞具有促进神经元再生的作用,Neuregulin1(NRG1)具有促进神经元再生和Schwann细胞增殖的效应,构建NRG1克隆载体,可为下一步建立NRG1转染的Schwann细胞系,对神经损伤模型进行Schwann细胞移植,观察其对神经损伤的修复作用... 详细信息

目的:Schwann细胞具有促进神经元再生的作用,Neuregulin1(NRG1)具有促进神经元再生和Schwann细胞增殖的效应,构建NRG1克隆载体,可为下一步建立NRG1转染的Schwann细胞系,对神经损伤模型进行Schwann细胞移植,观察其对神经损伤的修复作用提供重要实验方法。方法:实验于2003-09/2004-01在哈尔滨医科大学医学遗传学研究室完成。提取幼龄大鼠脑RNA,反转录聚合酶链反应,用XbaⅠ和EcoRⅠ对目的基因和载体质粒进行双酶切,T4连接酶连接Schwann后转化Top10感受态大肠杆菌,挑取LB(Amp+)平板生长克隆菌摇菌扩增,用菌液扩增聚合酶链反应检测目的基因,同时提取质粒与空载体并列电泳验证克隆质粒,进行克隆载体测序。结果:获得一株NRG1克隆质粒,测序结果显示为NRG1新的异构体,用基因组DNA和cDNA为模板扩增聚合酶链反应验证是NRG1新的剪切体。结论:构建的NRG1克隆异构体是大鼠NRG1基因克隆载体,可用于进一步的细胞转染、蛋白表达功能检测和细胞移植研究。

关键词：克隆载体 Schwann细胞反转录聚合酶链反应聚合酶链反应检测哈尔滨医科大学神经元再生基因组DNA 细胞移植目的基因医学遗传学细胞增殖实验方法修复作用神经损伤损伤模型脑RNA 幼龄大鼠载体质粒大肠杆菌 cDNA

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云南省汉族中所见的一例G6PD基因nt1004C→A突变

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中华血液学杂志 1997年第10期18卷 535-537页

作者：杜传书何永蜀中山医科大学医学遗传教研室昆明医学院

目的：检测云南人群中是否存在新的葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）基因突变型。方法：在排除中国人中的常见突变后，作２～１２逐个外显子多聚酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析，对电泳异常者测序证实。结果：在... 详细信息

目的：检测云南人群中是否存在新的葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）基因突变型。方法：在排除中国人中的常见突变后，作２～１２逐个外显子多聚酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析，对电泳异常者测序证实。结果：在筛查云南人群８２３人Ｇ６ＰＤ缺乏症时，发现Ｇ６ＰＤ缺乏者５４例。对其中２９例作了突变型鉴定，除发现１３８８Ｇ→Ａ突变１９例、１３８１Ｇ→Ａ突变１例外，其余９例中，查出１例为第９外显子ＳＳＣＰ有异常泳带。直接测序证实在第９外显子ｎｔ１００４位有Ｃ→Ａ的碱基置换，导致丙氨酸→天冬氨酸。结论：该例为罕见突变，为中国人中的第二例，云南汉族中的首例。

关键词： G6PD缺乏基因突变聚合酶链反应云南

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应用聚合酶链单链构象多态技术检测葡萄糖6磷酸脱氢酶基因突变

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中华医学杂志 1994年第1期74卷 35-37页

作者：许卫明王菁华小云陈路明杜传书中山医科大学医学遗传教研室

为了探索一种快速、灵敏及准确的检测红细胞葡萄糖６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）基因点突变方法，我们采用单链构象多态技术（ＳＳＣＰ），对２０例Ｇ６ＰＤ变异型基因外显子２进行分析。发现有４例患者双链ＤＮＡ中有一条链出现泳动变位... 详细信息

为了探索一种快速、灵敏及准确的检测红细胞葡萄糖６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）基因点突变方法，我们采用单链构象多态技术（ＳＳＣＰ），对２０例Ｇ６ＰＤ变异型基因外显子２进行分析。发现有４例患者双链ＤＮＡ中有一条链出现泳动变位，明显慢于正常人及其他患者，用ＰＣＲ直接侧序表明在ｃＤＮＡ第９５位核苷酸发生碱基置换（Ｔ→Ｃ）。结果说明ＳＳＣＰ技术检测点突变具有广泛的应用前景，比现行的点突变检测方法简便易行。作者还对ＰＣＲ－ＳＳＣＰ的优点和所检测突变的特点进行了探讨。

关键词： G6PD缺乏基因突变聚合酶链反应

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Becker型肌营养不良症的限制性片段长度多态连锁分析

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中国神经精神疾病杂志 1993年第6期19卷 341-344页

作者：魏建军郭亦寿陈丙玺杨亚平山东医科大学医学遗传教研室 250012

本文收集确诊的9个BMD家系,检出25例患者,平均发病年龄6.25岁,瘫痪年龄23.43岁,最年长者51岁。有4个家系接受RFLPs分析。在4个有多态信息的BMD基因内部探针检测中,共排除和确定携带者19人,确定2个家系基因突变的起源。并根据基因缺失和... 详细信息

本文收集确诊的9个BMD家系,检出25例患者,平均发病年龄6.25岁,瘫痪年龄23.43岁,最年长者51岁。有4个家系接受RFLPs分析。在4个有多态信息的BMD基因内部探针检测中,共排除和确定携带者19人,确定2个家系基因突变的起源。并根据基因缺失和重组关系,将突变位点进行了区域定位,结论是BMD突变位点有多样性。

关键词： Becker型肌营养障碍携带者

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