检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2015年第12期31卷 1753-1763页

作者：范芳芳孙慧莹徐晖刘佳玮张海员李亦兰宁雪莲孙悦白静傅松滨周春水哈尔滨医科大学医学遗传学教研室黑龙江哈尔滨150081

利用Gateway克隆技术构建重组抗瘤肽AIK的原核表达体系,建立表达及纯化重组AIK的最优条件,为深入研究和利用AIK奠定基础。首先,设计含AttB重组位点的引物,通过重叠PCR技术扩增出Att B-TEV-FLAG-AIK序列,利用BP重组反应将目的序列TEV-FLA... 详细信息

利用Gateway克隆技术构建重组抗瘤肽AIK的原核表达体系,建立表达及纯化重组AIK的最优条件,为深入研究和利用AIK奠定基础。首先,设计含AttB重组位点的引物,通过重叠PCR技术扩增出Att B-TEV-FLAG-AIK序列,利用BP重组反应将目的序列TEV-FLAG-AIK克隆到供体载体pDONR223中,构建入门载体,再通过LR重组反应,将目的序列转移到目的载体pDEST15中,构建GST-AIK融合蛋白原核表达质粒。随后,在BL21(DE3)工程菌中优化诱导融合蛋白表达的条件。以谷胱甘肽磁珠纯化GST-AIK融合蛋白,再以rTEV酶切除GST,获得FLAG-AIK重组蛋白。最后以MTS法检测FLAG-AIK对白血病细胞HL-60的细胞毒性。菌液PCR验证和测序分析表明成功构建了重组抗瘤肽AIK的入门质粒和原核表达质粒。在BL21(DE3)工程菌中实现了GST-AIK融合蛋白的高效可溶性表达。并测得在37℃下以0.1 mmol/L IPTG诱导工程菌(OD600=1.0)4 h,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的30%以上。经GST亲和层析、rTEV酶切除GST标签及二次GST亲和层析获得纯度高于95%的FLAG-AIK蛋白。MTS法测得所制备的FLAG-AIK蛋白抑瘤活性与化学合成的AIK相当。总之,本课题应用Gateway克隆系统成功构建了抗瘤肽AIK的原核表达质粒,实现了GST-AIK融合蛋白的高效可溶性表达,经亲和层析获得了有生物活性的重组AIK多肽,为后续深入研究和大规模制备奠定了基础。

关键词：阳离子多肽位点特异性重组 GST融合蛋白诱导表达亲和层析抑瘤活性

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5所三甲医院住院患者入院流程满意度分析

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中国医院统计 2016年第5期23卷 340-341,344页

作者：李瑞波张桥相静哈尔滨医科大学附属第二医院统计室 150001 哈尔滨医科大学医务处滨州医学院公共卫生与管理学院卫生统计学教研室

目的调查5所三甲医院住院患者对入院流程的满意度，并分析患者入院流程满意度影响因素，以期为进一步提高医院服务质量提供参考。方法对黑龙江省5所三甲医院住院患者进行入院流程满意度问卷调查，采用多元线性回归分析满意度影响因素。... 详细信息

目的调查5所三甲医院住院患者对入院流程的满意度，并分析患者入院流程满意度影响因素，以期为进一步提高医院服务质量提供参考。方法对黑龙江省5所三甲医院住院患者进行入院流程满意度问卷调查，采用多元线性回归分析满意度影响因素。结果住院患者入院流程总体满意度得分为4．43±0．60，乡镇患者入院流程满意度低于城市患者β=-0．1669）；再次住院患者入院流程满意度低于首次住院患者（β=-0．1019）。结论医院需加强院内指示标志的覆盖范围及导诊服务，提供一站式入住院办理服务，加强患者入院教育，注重持续改进医院入院流程。

关键词：入院流程患者满意度问卷调查多元线性回归

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不同收入人群城镇职工医保卫生服务利用及费用变化趋势分析

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中国卫生资源 2016年第3期19卷 176-179页

作者：杨世雅吴群红郝艳华韩丽媛李叶焦明丽宁宁康正梁立波崔宇丁玎宋磊迟垚覃肖潇樊华哈尔滨医科大学公共卫生学院黑龙江哈尔滨150081 复旦大学/国民健康社会风险预警协同创新中心上海200032 宁波大学医学院预防医学教研室浙江宁波315211

目的 :分析职工医保制度对缩小不同收入人群卫生服务利用差距的影响。方法 :利用黑龙江省卫生服务调查中职工医保的数据进行分析。结果 :2013年城镇职工最低收入组的住院率是最高收入组的1.91倍;最低和较低收入组的应住院而未住院率分... 详细信息

目的 :分析职工医保制度对缩小不同收入人群卫生服务利用差距的影响。方法 :利用黑龙江省卫生服务调查中职工医保的数据进行分析。结果 :2013年城镇职工最低收入组的住院率是最高收入组的1.91倍;最低和较低收入组的应住院而未住院率分别是最高收入组的1.41倍和1.78倍;住院自付比是较高收入组的1.36倍和1.48倍。结论 :城镇职工医保制度覆盖面与补偿力度的增加,改善了低收入人群的卫生服务利用,但仍未能从根本上消除其服务利用的经济障碍,应强化消除低收入人群公平性差距的医保制度设计。

关键词：城镇职工基本医疗保险卫生服务利用医疗费用低收入人群

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5-羟色胺受体相关基因与自杀行为相关性

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中国公共卫生 2015年第9期31卷 1147-1150页

作者：邱晓惠马靖松宋珺瑶王琳杨秀贤乔正学杨艳杰哈尔滨医科大学医学心理教研室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨自杀行为与5-HT1BR基因rs6298,5-HT2AR基因rs6311、rs6313及5-HT2BR基因rs765458单核苷酸多态性的关联。方法提取中国北方地区281例伴有冲动性自杀行为的抑郁症患者(病例组)和300名健康对照者(对照组)基因组DNA,采用Tap Man探... 详细信息

目的探讨自杀行为与5-HT1BR基因rs6298,5-HT2AR基因rs6311、rs6313及5-HT2BR基因rs765458单核苷酸多态性的关联。方法提取中国北方地区281例伴有冲动性自杀行为的抑郁症患者(病例组)和300名健康对照者(对照组)基因组DNA,采用Tap Man探针单核苷酸多态性(SNP)基因分型技术检测病例组及对照组所选位点基因型;统计分析采用χ2检验比较病例组和对照组的基因型和等位基因的分布差异。结果病例组和对照组的5-HT2AR基因rs6311(χ2=20.736,P=0.000)、rs6313(χ2=7.645,P=0.022)基因型频率差异有统计学意义,5-HT1BR基因rs6298、5-HT2BR基因rs765458基因型组差异无统计学意义(P>0.05),5-HT1BR基因rs6298,5-HT2AR基因rs6311、rs6313及5-HT2BR基因rs765458组等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 5-HT2AR基因rs6311、rs6313位点SNP与自杀行为有明显关联,5-HT1BR基因rs6298、5-HT2BR基因rs765458位点SNP与自杀行为无明显关联。

关键词：自杀 5-羟色胺(5-HT) 基因型

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肺炎克雷伯菌毒力因子的分布特征及其对小鼠的致死性

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中国科技论文 2015年第6期10卷 659-662页

作者：陈洁邵鸿迎赵明陈小贝张文莉张凤民赵吉子哈尔滨医科大学微生物教研室哈尔滨150081 浙江大学医学院附属儿童医院杭州310003 哈尔滨医科大学附属第一医院哈尔滨150001 哈尔滨医科大学公卫学院哈尔滨150081

为分析肺炎克雷伯菌各种毒力因子的致病性,本文用PCR的方法检测高黏性厚荚膜形成相关因子-染色体和质粒介导的c-rmpA和p-rmpA/p-rmpA2,铁载体基因(iucA、iroN、ybtS,enterobactin),III型黏附因子(MrkD)及溶血毒素;用动物实验检测LD50值... 详细信息

为分析肺炎克雷伯菌各种毒力因子的致病性,本文用PCR的方法检测高黏性厚荚膜形成相关因子-染色体和质粒介导的c-rmpA和p-rmpA/p-rmpA2,铁载体基因(iucA、iroN、ybtS,enterobactin),III型黏附因子(MrkD)及溶血毒素;用动物实验检测LD50值。结果表明:57株肺炎克雷伯菌临床分离菌株分为高黏性菌(22.81%,13/57)和非黏性菌(77.19%,44/57)。不同于非黏性菌,100%的高黏性菌携带c-rmpA和p-rmpA/p-rmpA2,普遍携带iucA(100%,13/13),iroN(84.61%,11/13)及ybtS(76.92%,10/13)。动物感染实验结果显示,高黏性肺炎克雷伯菌的LD50值中位数值(9.10×105 cfu/mouse)明显低于非黏性菌值(3.24×108 cfu/mouse)。可见携带c-rmpA和p-rmpA/p-rmpA2并伴随携带铁载体基因是高黏性肺炎克雷伯菌共有的特征,其高黏性特性在一定程度上可作为筛选高致病性肺炎克雷伯菌的预测性指标。

关键词：肺炎克雷伯菌 LD50值 rmpA 铁载体

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圣经中的鼠疫及纪年

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黑龙江科学 2015年第6期6卷 146-147,153页

作者：马学博哈尔滨医科大学医史学教研室哈尔滨150081

圣经记载了最早一次鼠疫流行,西方学者为此长期争论不休,主要集中在临床症状的译名、宿主动物黑鼠是否存在等,而发生鼠疫流行的年代则语焉不详。现据文献研究及考古发掘证据,试图阐释"非利士人鼠疫"的可信性,提出相对准确的... 详细信息

圣经记载了最早一次鼠疫流行,西方学者为此长期争论不休,主要集中在临床症状的译名、宿主动物黑鼠是否存在等,而发生鼠疫流行的年代则语焉不详。现据文献研究及考古发掘证据,试图阐释"非利士人鼠疫"的可信性,提出相对准确的纪年约为公元前1050年,并且涉及了旧约时代中东鼠疫自然疫源地及鼠疫流行史研究与鼠疫实验科学研究关系问题。

关键词：鼠疫流行史圣经非利士人鼠疫

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流逝的辉煌——滨江医院百年回顾

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中华医史杂志 2015年第1期45卷 53-54页

作者：纪焱马学博李志平哈尔滨医科大学医史学教研室 100191

近代中国第一所公立防疫医院——滨江医院（1912-1932）,旧址位于哈尔滨道外区保障街140号,它的创建标志着近代中国公共卫生事业的开端,同时也昭示医疗卫生事业从此纳入了国家体制.

关键词：滨江医院公共卫生事业医疗卫生事业哈尔滨中国近代

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人类免疫缺陷病毒-1包膜糖蛋白gp41的表达及优化

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国际免疫学杂志 2016年第2期39卷 101-106页

作者：包丽娜白杨姚岚庄敏凌虹哈尔滨医科大学医学微生物学教研室伍连德研究所黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室150081

目的优化HIV．1本地流行株06044sp4t蛋白表达设计，为gp41免疫原的制备提供实验基础。方法以含HIV．106044gp41基因的质粒为模板，采用聚合酶链反应（PCR）扩增gp41目的基因，分别构建原核表达载体pET26b：gp41T（含546—683f1．a片段... 详细信息

目的优化HIV．1本地流行株06044sp4t蛋白表达设计，为gp41免疫原的制备提供实验基础。方法以含HIV．106044gp41基因的质粒为模板，采用聚合酶链反应（PCR）扩增gp41目的基因，分别构建原核表达载体pET26b：gp41T（含546—683f1．a片段）及去掉N一端（NHR）和C一端（CHR）七价重复序列中间部分loop区（582～627aa）的pET26b—Sr41T（AL），经测序确认后，转化至大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）中，IPTG诱导表达。用聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）及Westernblot检测并鉴定重组表达蛋白。优化了重组蛋白的诱导表达条件。结果pET26b-gp41T和pET26b—gp41T（AL）重组表达质粒均能表达gp41蛋白，glMlT（△L）蛋白表达量高于gp41T；不同IPTG浓度诱导的蛋白表达量没有区别；用1mmol／LIPTG诱导后，37℃条件下表达量最高。Westernblot结果显示，gp41T（△L）与His抗体结合性能好。结论实验获得了稳定表达HIV-106044gp41的原核表达载体以及表达条件，为大量制备gp41蛋白免疫原奠定了基础。

关键词：人类免疫缺陷病毒-1 Gp41 原核表达优化

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Ⅰ型人类免疫缺陷病毒包膜gp120与乙型肝炎病毒表面抗原免疫原性比较

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国际免疫学杂志 2016年第4期39卷 313-318页

作者：王明霞王甲业李妍陈文江田丹袁丽庄敏凌虹哈尔滨医科大学医学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省感染与免疫创新团队黑龙江省普通高校病原学重点实验室150081

目的比较Ⅰ型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）及乙型肝炎病毒（HBV）包膜蛋白初次免疫及加强免疫后诱导产生抗体的规律,为提高HIV-1包膜蛋白诱导保护性抗体产生能力提供创新思路.方法以10周龄雌性C57BL/6小鼠为动物模型,分别用HIV-1 06044... 详细信息

目的比较Ⅰ型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）及乙型肝炎病毒（HBV）包膜蛋白初次免疫及加强免疫后诱导产生抗体的规律,为提高HIV-1包膜蛋白诱导保护性抗体产生能力提供创新思路.方法以10周龄雌性C57BL/6小鼠为动物模型,分别用HIV-1 06044毒株gp120三聚体（gp120T）、HBV表面抗原（HBsAg）蛋白与AddaVax佐剂免疫小鼠,背部皮下注射,共免疫3次,每次免疫间隔3周,第一、第二次免疫后7d和第三次免疫后3d、7d取血;第一次免疫后7d、第三次免疫后3d、7d取脾组织.用酶联免疫吸附实验（ELISA）及酶联免疫斑点实验（ELISpot）方法检测免疫小鼠血浆特异性结合抗体滴度及抗体分泌细胞（ASC）数量.结果 gp120T和HBsAg两种蛋白初次免疫后,动物均未产生明显的特异性抗体.两种蛋白加强免疫后特异性抗体水平明显升高,gp120T一次加强免疫及两次加强特异性抗体滴度逐渐升高,而HBsAg一次加强抗体滴度已经接近两次加强的水平.二次加强免疫后,gp120T和HBsAg免疫鼠脾脏特异性ASC数量差异不显著.结论 HIV-1包膜gp120T加强免疫诱导抗体水平达到高峰慢于HBsAg加强免疫,即加强免疫后gp120T诱导的回忆反应慢于HBsAg.

关键词： Ⅰ型人类免疫缺陷病毒 gp120 乙型肝炎病毒表面抗原

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融合肽抑制剂T20抵抗株包膜蛋白热变异位点547对人类免疫缺陷病毒-1生物学功能的影响

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国际免疫学杂志 2016年第3期39卷 210-217页

作者：赵海娇原晨张雪莹凌虹庄敏哈尔滨医科大学医学微生物学教研室伍连德研究所黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室150081

目的分析人类免疫缺陷病毒（HIV）的融合肽抑制剂T20抵抗突变株热变异位点547对病毒生物学功能的影响。方法采用PCR和定点突变方法构建HIV包膜蛋白（Env）突变体pSM-HXB2-DIV／DIM／SIM和PSM—LAI-DIV四种表达质粒，并构建了含有547D突... 详细信息

目的分析人类免疫缺陷病毒（HIV）的融合肽抑制剂T20抵抗突变株热变异位点547对病毒生物学功能的影响。方法采用PCR和定点突变方法构建HIV包膜蛋白（Env）突变体pSM-HXB2-DIV／DIM／SIM和PSM—LAI-DIV四种表达质粒，并构建了含有547D突变并置换HXB2或LAI株gp120部分的Env质粒，pSM-LAIgp120／HXB2gp41-DIV（L／H-DIV）和pSM-HXB2gp120／LAIsp4t—DIV（H／L-DIV）。假病毒感染实验和细胞融合实验分析Env的功能；Westernblot检测Env表达。圆二色谱（CD）分析6螺旋束（6HB）的稳定性；PyMOL软件分析含有547D的6HB结构。结果HXB2为骨架的547DIV、DIM及SIM和LAI为骨架的DIV假病毒的感染性低于其野生型（wt），前者的各变异Env的融合活性也明显降低；L／H—DIV假病毒感染性与HXB2wt相似，但融合活性明显低于wt；H／L—DIV假病毒的感染性低于两种野生型，融合活性与LAI叭相似，但低于HXB2wt。CD结果证明547D突变降低6HB的稳定性；结构分析显示，547D突变没有改变NHR中该位点与CHR中Q652位点之间的氢键，但可能通过增加NHR的负电荷从而减少病毒与T20的结合。结论547D突变降低LAI与HXB2株的感染性和HXB2株的融合活性；该突变通过降低6HB稳定性和增加gp41所带负电荷来减少病毒与T20的结合。

关键词：人类免疫缺陷病毒融合肽抑制剂 T20 抵抗突变

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