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解剖学报 2016年第2期47卷 209-215页

作者：郭洪宇赵玉娇高博李晓冬张雅芳杨慧科哈尔滨医科大学附属第一医院医疗责任管理办公室哈尔滨150006 哈尔滨医科大学基础医学院解剖学教研室哈尔滨150081

目的观察表皮生长因子(EGF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)离子通道中电导钙激活钾通道(KCa 3.1)表达的影响,以及KCa 3.1在EGF诱导HUVECs体外增殖过程中的作用。方法 MTT法筛选EGF最佳实验浓度;免疫荧光和Western blotting技术检测EGF对HUV... 详细信息

目的观察表皮生长因子(EGF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)离子通道中电导钙激活钾通道(KCa 3.1)表达的影响,以及KCa 3.1在EGF诱导HUVECs体外增殖过程中的作用。方法 MTT法筛选EGF最佳实验浓度;免疫荧光和Western blotting技术检测EGF对HUVECs细胞KCa 3.1的表达;经KCa 3.1阻断剂TRAM-34处理,MTT法分析EGF诱导的HUVECs增殖情况;流式细胞技术检测细胞周期,RT-PCR法分析细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及周期蛋白依赖性蛋白激酶4(CDK4)表达的水平。结果 EGF处理细胞48h后,MTT实验证实25μg/L浓度的EGF促细胞增殖效应最强。免疫荧光染色显示,EGF明显促进KCa 3.1蛋白表达,且Western blotting提示KCa 3.1的表达上调1.4倍。进一步研究显示,高选择性阻断剂TRAM-34阻断KCa 3.1通道48h后EGF的促细胞增殖作用显著下降,并呈时间和剂量依赖性;细胞周期G1期细胞百分比明显增加;CDK4的mRNA表达下调,而cyclin D1表达无明显变化。结论 KCa 3.1可能通过影响细胞周期进程调节EGF诱导的HUVECs增殖过程。

关键词：人脐静脉内皮细胞中电导钙激活钾通道表皮生长因子细胞周期免疫印迹法人

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不同方式治疗维持性血液透析患者难治性继发性甲状旁腺功能亢进的对比性研究

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中国血液净化 2017年第3期16卷 171-175页

作者：孔德阳黄智勇郝丽荣郝建兵唐杰高旭哈尔滨医科大学附属第一医院肾内科漳州363000 漳州175医院肾内科哈尔滨150081 哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150081

目的探讨帕立骨化醇联合盐酸西那卡塞治疗难治性继发性甲状旁腺功能亢进(secondary hyperparathyroidism,SHPT)的有效性及安全性;同时与甲状旁腺切除术(parathyroidectomy,PTX)进行疗效对比。方法回顾性分析2013年12月至2016年6月在哈... 详细信息

目的探讨帕立骨化醇联合盐酸西那卡塞治疗难治性继发性甲状旁腺功能亢进(secondary hyperparathyroidism,SHPT)的有效性及安全性;同时与甲状旁腺切除术(parathyroidectomy,PTX)进行疗效对比。方法回顾性分析2013年12月至2016年6月在哈尔滨医科大学附属第一医院血液净化中心行维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)的难治性SHPT患者,PTX组11例,帕立骨化醇联合西那卡塞(药物)组13例,记录年龄、透析龄、治疗前1周、治疗后1周、1月、3月及6月血清钙(calcium,Ca)、磷(phosphorus P)、钙磷乘积(Ca×P)、全段甲状旁腺素(intact parathyroid hormone,i PTH)水平、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)及临床症状,根据复查结果调整药量。比较两组相同时间点及不同治疗方式上述指标。结果与治疗前相比,PTX组治疗后1周、1月、3月及6月血清Ca、Ca×P、i PTH及AKP水平降低,差异有统计学意义(血清Ca:F=18.908,P<0.001;Ca×P:F=21.884,P<0.001;血清i PTH:F=24.251,P<0.001;血清AKP:F=95.459,P=0.001);药物组治疗后1月、3月及6月血清Ca及i PTH水平显著降低,差异有统计学意义(血Ca:F=7.671,P<0.001;血清i PTH:F=4.037,P=0.006);血清P及AKP水平整个治疗期间差异不显著(血清P:F=0.378,P=0.824;血清AKP:F=0.718,P=0.583)。治疗6月后两组(PTX组比药物组)血清Ca[(2.40±0.15)mmol/L比(2.44±0.14)mmol/L、t=-0.797,P=0.434]、P[(1.98±0.25)mmol/L比(2.20±0.39)mmol/L,t=-1.616,P=0.120]及Ca×P[(4.74±0.27)mmol^2/L^2比(5.38±1.02)mmol^2/L^2,t=-1.740,P=0.096]及AKP[(85.50±38.43)比(113.33±36.83)U/L,t=-1.815,P=0.083]无差异;血清i PTH差异显著[(525.81±242.12)pg/ml比(809.22±372.87)pg/ml,t=-2.161,P=0.042]。结论帕立骨化醇联合盐酸西那卡塞与PTX均能不同程度治疗难治性SHPT,PTX能够更快的改善高Ca、P及骨代谢,远期疗效需扩大样本量及观察时间进一步评价。

关键词：维持性血液透析难治性继发性甲状旁腺功能亢进帕立骨化醇西那卡塞甲状旁腺切除术

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哺乳动物黄体生成素(LH)峰效应由颗粒细胞向卵母细胞传递的分子通路

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生殖与避孕 2016年第8期36卷 624-630页

作者：刘洋徐晋哈尔滨医科大学基础医学院细胞生物教研室哈尔滨150081

血液中黄体生成素(luteinizing hormone,LH)在排卵前形成一个极大的峰值,LH与壁层颗粒细胞中的LH受体(LHR)结合诱导类表皮生长因子(EGF)的表达,通过自分泌和旁分泌的作用激活颗粒细胞与卵丘细胞中的EGF受体(EGFR)、大鼠肉瘤病毒致癌基因... 详细信息

血液中黄体生成素(luteinizing hormone,LH)在排卵前形成一个极大的峰值,LH与壁层颗粒细胞中的LH受体(LHR)结合诱导类表皮生长因子(EGF)的表达,通过自分泌和旁分泌的作用激活颗粒细胞与卵丘细胞中的EGF受体(EGFR)、大鼠肉瘤病毒致癌基因(KRAS)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2),激活的ERK1/2诱导表达前列腺素合成酶2(PTGS2)、类固醇合成快速调节蛋白(STAR)、透明质酸合成酶2(HAS2)、肿瘤坏死因子α诱导蛋白6(TNFAIP6)产生的前列腺素又和卵丘细胞上的PTGER2结合,激活p38MAPK,这一LH作用的信号转导通路最终刺激卵丘扩展卵母细胞成熟并最终排卵。

关键词：排卵黄体生成素(LH) 分子机制细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)

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乙肝病毒蛋白和基因在肝内和肝外胆管癌组织中的检测及意义

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实用肿瘤学杂志 2017年第1期31卷 7-12页

作者：吴旖琦刘颖赵丽金晓明哈尔滨医科大学基础医学院病理教研室哈尔滨150081 黑龙江省医院烧伤科哈尔滨市儿童医院重症医学科

目的研究乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染与胆管癌(Cholangiocarcinoma,CC)的关系,并明确其与肝内胆管癌(Intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)和肝外胆管癌(Extrahepatic eholangiocarcinoma,ECC)发生的关系。方法采用免疫组化、巢式PCR对52例CC(21例肝内胆管癌和31例肝外胆管癌)石蜡包埋组织进行HBV相关蛋白及基因的检测。结果 21例ICC组织中HBsAg阳性表达率为23.8%(5/21),HBcAg阳性表达率为19.0%(4/21),HBV X基因检出率为33.3%(7/21)。在31例ECC组织中均未检出HBsAg、HBcAg及HBV X基因。结论 HBV感染与ICC发生关系密切,但可能非ECC发生的危险因素。HBV X基因的整合可能参与肝内胆管上皮细胞的癌变过程。

关键词：胆管癌乙型肝炎病毒肝内胆管癌肝外胆管癌

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膈下逐瘀汤对大鼠纤维化肝脏组织硫氧还蛋白系统的影响

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世界科学技术-中医药现代化 2017年第4期19卷 701-705页

作者：杨婧贾彦王蔚戚基萍刘宏代巧妹黑龙江中医药大学基础医学院病理教研室哈尔滨150040 哈尔滨医科大学附属第一医院哈尔滨150001

目的:验证"膈下逐瘀汤抑制大鼠纤维化肝脏组织氧化应激的作用是通过增强硫氧还蛋白系统而实现"这一假说。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组,正常大鼠+膈下逐瘀汤组、模型大鼠+膈下逐瘀汤组。大鼠免疫性肝纤维化模型通... 详细信息

目的:验证"膈下逐瘀汤抑制大鼠纤维化肝脏组织氧化应激的作用是通过增强硫氧还蛋白系统而实现"这一假说。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组,正常大鼠+膈下逐瘀汤组、模型大鼠+膈下逐瘀汤组。大鼠免疫性肝纤维化模型通过每周2次每只大鼠腹腔注射猪血清0.5 m L的方法制备。同时按含生药每天7.37 g·kg-1的剂量给予膈下逐瘀汤灌胃给药干预。采用分光光度法检测肝脏组织中脂质过氧化物(LipidPeroxidation,LPO)含量、硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase,Trx R)活性、PCR检测编码核转录因子E2相关因子2(Nuclear Factor Erythroid 2-related Factor 2,Nrf2)基因Nfe2l2的表达,利用Western blot检测硫氧还蛋白-1(Thioredoxin-1,Trx1)蛋白表达和Akt磷酸化水平。结果:与模型对照组大鼠比较,膈下逐瘀汤组大鼠纤维化肝脏组织LPO含量显著降低,Trx1蛋白表达和Trx R活性显著提高,Akt磷酸化水平显著增加,Nfe2l2 m RNA表达显著上调(均P<0.05)。结论:膈下逐瘀汤增强机体肝脏硫氧还蛋白系统与其活化Akt-Nrf2信号通路有关,从而预防大鼠纤维化肝脏组织氧化应激状态,本实验结果为支持假说提供了实验依据。

关键词：肝纤维化膈下逐瘀汤氧化应激硫氧还蛋白系统核转录因子E2相关因子2

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视神经蛋白突变在肌萎缩侧索硬化症中的研究进展

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解剖学报 2016年第3期47卷 429-432页

作者：刘惠申景岭哈尔滨医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室哈尔滨150081

视神经蛋白(OPTN)目前被认为是原发性开角型青光眼(POAG),肌萎缩侧索硬化症(ALS)等神经退行性疾病的病理学标记蛋白。OPTN参与不同的细胞功能,例如调控后高尔基体膜运输、分泌、胞内病原体自噬、抗病毒先天免疫反应、有丝分裂、核因子-... 详细信息

视神经蛋白(OPTN)目前被认为是原发性开角型青光眼(POAG),肌萎缩侧索硬化症(ALS)等神经退行性疾病的病理学标记蛋白。OPTN参与不同的细胞功能,例如调控后高尔基体膜运输、分泌、胞内病原体自噬、抗病毒先天免疫反应、有丝分裂、核因子-κB(NF-κB)通路、基因表达等。在OPTN突变的ALS临床病例中,受损的运动神经元呈现出胞质内OPTN泛素化聚集改变,蛋白质包涵体形成以及与ALS相关病理蛋白铜锌超氧化物歧化酶1(SOD1)、反式激活-反应性DNA结合蛋白-43(TDP43)、肉瘤熔合基因(FUS)的共定位。本文着重阐述OPTN突变在肌萎缩侧索硬化症中的研究进展,探讨其致病机制、病理改变以及治疗方法。

关键词：视神经蛋白神经退行性疾病肌萎缩侧所硬化症动物模型

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腹腔黏连病理生理机制及治疗研究现状

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中国现代应用药学 2017年第7期34卷 1057-1061页

作者：刘鑫李婧白雪张勇黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学药学院药理教研室哈尔滨医科大学中俄医学研究中心代谢疾病研究所哈尔滨150081 哈尔滨医科大学基础医学院哈尔滨150081

腹腔黏连是纤维结缔组织将腹膜与腹腔器官、腹膜之间、腹腔器官之间异常连接的一种病理现象,是腹部手术后常见并发症。然而腹腔黏连发生的病理生理机制尚不清楚,可能为多种机制共同作用的结果,主要包括:脉管壁受损和腹膜间皮层损害、炎... 详细信息

腹腔黏连是纤维结缔组织将腹膜与腹腔器官、腹膜之间、腹腔器官之间异常连接的一种病理现象,是腹部手术后常见并发症。然而腹腔黏连发生的病理生理机制尚不清楚,可能为多种机制共同作用的结果,主要包括:脉管壁受损和腹膜间皮层损害、炎症反应、缺血缺氧、免疫反应。目前临床采用的各种治疗方法如:手术方式的改进,放置生物膜屏障及治疗药物均效果不佳、局限性大。了解腹腔黏连发生的病理生理机制、分析现有研究治疗利弊对于发现新的药物靶点和有效的治疗措施有重要意义。

关键词：腹腔黏连间皮损伤炎症反应缺血缺氧免疫反应

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激活多巴胺Ⅰ类受体对氧化性低密度脂蛋白诱导的人单核细胞THP-1分泌NO/NOS的影响

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中国应用生理学杂志 2016年第3期32卷 274-277页

作者：柳磊时飒李鸿珠李弘徐长庆哈尔滨医科大学基础医学院病理生理学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的:探讨激活多巴胺Ⅰ类受体(DR1)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人单核细胞(THP-1)分泌一氧化氮/一氧化氮合酶(NO/NOS)的影响及可能机制。方法:THP-1细胞经佛波酯PMA诱导分化,分为正常对照组(control),氧化型低密度脂蛋白处理组(... 详细信息

目的:探讨激活多巴胺Ⅰ类受体(DR1)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人单核细胞(THP-1)分泌一氧化氮/一氧化氮合酶(NO/NOS)的影响及可能机制。方法:THP-1细胞经佛波酯PMA诱导分化,分为正常对照组(control),氧化型低密度脂蛋白处理组(ox-LDL),DR1激动剂干预组(SKF),DR1阻断剂干预组(SCH),ERK阻断剂干预组(PD98059);应用油红O染色法鉴定泡沫细胞;硝酸还原法检测NO、NOS的变化情况;免疫荧光和Western blot检测各组细胞蛋白表达情况。结果:ox-LDL刺激48 h可形成泡沫细胞;DR1在THP1细胞上表达,oxLDL刺激后,DR1蛋白表达降低(P<0.01);激活DR1受体能够明显抑制由ox-LDL引起的NO、i NOS增多(P<0.01);在MAPK阻断剂PD98059存在的情况下,SKF的作用部分丧失。结论:激活DR1受体可抑制ox-LDL引起的THP-1细胞NO的大量产生,此过程可能由ERK信号通路所介导。

关键词：多巴胺受体巨噬细胞一氧化氮单核细胞低密度脂蛋白

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Hedgehog信号通路蛋白在肝内胆管细胞癌中的表达

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国际免疫学杂志 2017年第3期40卷 252-256页

作者：吴旖琦刘颖赵丽金晓明哈尔滨医科大学基础医学院病理教研室 150081 黑龙江省医院烧伤科 150030 哈尔滨市儿童医院重症医学科 150010

目的研究Hedgehog（Hh）信号通路相关蛋白（Gli 1,Ptch-1和Shh）在肝内胆管细胞癌（intrahepatic cholangio carcinoma,ICC）中的表达及意义.通过对ICC和癌旁组织中Hh通路相关蛋白（Gli 1、Ptch-1和Shh）的表达进行检测,探讨其与ICC临... 详细信息

目的研究Hedgehog（Hh）信号通路相关蛋白（Gli 1,Ptch-1和Shh）在肝内胆管细胞癌（intrahepatic cholangio carcinoma,ICC）中的表达及意义.通过对ICC和癌旁组织中Hh通路相关蛋白（Gli 1、Ptch-1和Shh）的表达进行检测,探讨其与ICC临床病理特征之间的关系及意义.方法免疫组化法对43例ICC组织及癌旁组织进行Gli 1、Ptch-1和Shh蛋白的检测;Real-time RT-PCR检测12例ICC组织和癌旁组织中mRNA的表达,并与患者临床病理特征进行相关性分析.结果 43例ICC组织中,Gli 1、Ptch-1和Shh阳性表达率分别为74.4%（32/43）、69.8% （30/43）,和62.8%（27/43）,与癌旁组织表达比较差异具有统计学意义（P值分别为0.003、0.006和0.008）;三者的表达与肿瘤的大小有关（P值分别为0.039、0.044和0.047）;三者的表达与肿瘤的分化程度相关（P值分别为0.026,0.039和0.049）;三者的表达与淋巴结转移具有相关性（P均〈0.05）.Real-time PCR结果显示,12例ICC组织中均有Gli 1、Ptch-1和Shh的表达,且基因表达水平均高于癌旁正常组织（P均=0.001）.结论 Hedgehog信号通路的相关蛋白在ICC组织中高表达,其异常激活可能与肝内胆管细胞癌发生密切相关.Gli 1、Ptch-1和Shh的表达可能与肿瘤的生长和转移密切相关.

关键词：肝内胆管细胞癌 Hh信号通路 Gli 1 Ptch-1 Shh

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限制性内切酶策略鉴定CRISPR/Cas9介导的Chrm3基因敲除小鼠

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第4期32卷 404-409页

作者：高旭马宁王大勇张赫张艳芬徐亚贺军徐书会霍亚丽杜智敏哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第二临床医学院实验诊断教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第二医院临床药学药物研究所哈尔滨150081

CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的快速基因编辑技术。通过该技术已对多种生物的基因组进行了编辑。由此产生的基因编辑动物的建系与鉴定是随之而来较为繁琐的工作。单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA)靶序列的设计和确定不仅影响后续靶... 详细信息

CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的快速基因编辑技术。通过该技术已对多种生物的基因组进行了编辑。由此产生的基因编辑动物的建系与鉴定是随之而来较为繁琐的工作。单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA)靶序列的设计和确定不仅影响后续靶向基因组的效率,还可作为优化鉴定、筛选方法的参考。本研究在选取sgRNA靶序列时,不仅依据软件的评分,还分析了sgRNA靶序列是否含有酶切位点,以便对后续纯合子/杂合子进行鉴定。结果显示,以特异引物扩增的野生型小鼠Chrm3基因片段可被限制性内切酶BanⅡ切为两个片段;而纯合子小鼠"丢失"该酶切位点,其PCR产物不能被切开;杂合子小鼠PCR产物被不完全切开,凝胶电泳结果可见三条带。本研究结果提示该策略可有效简化基因编辑动物建系鉴定工作,提高鉴定效率及改善阳性动物辨识效果。

关键词： CRISPR/Cas9 毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3亚型遗传改变小鼠纯合子

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