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蛋白酶体20S亚基β8调控丝裂原活化蛋白激酶激酶/细胞外信号调节激酶通路对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

中国医学科学院学报 2024年第5期46卷 641-652页

作者：郝宇菲石宇郑锦秀赵雪婷刘盛露杨利军山西医科大学基础医学院药理学教研室太原030001 山西医科大学基础医学院肿瘤免疫与靶向药物研发山西省高校重点实验室太原030001 山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室太原030001

目的探究蛋白酶体20S亚基β8(PSMB8)对肾透明细胞癌(ccRCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及是否通过调控丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路发挥其作用。方法采用癌症基因组图谱数据库分析ccRCC与正常组织PS... 详细信息

目的探究蛋白酶体20S亚基β8(PSMB8)对肾透明细胞癌(ccRCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及是否通过调控丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路发挥其作用。方法采用癌症基因组图谱数据库分析ccRCC与正常组织PSMB8 mRNA的表达水平,并通过实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组织化学染色等方法进一步检测PSMB8在ccRCC组织和细胞中的表达情况。构建稳定过表达和敲减PSMB8的细胞株,分别采用CCK-8法和平板克隆实验检测细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭的能力。对PSMB8共表达基因进行京都基因与基因组百科全书通路富集分析,Western blot检测MEK/ERK通路相关蛋白的磷酸化水平,并加用ERK激动剂C16-PAF处理进行细胞功能学挽救实验。结果与正常组织比较,PSMB8 mRNA和蛋白在ccRCC组织中呈高表达(P均<0.001),且与临床患者的TNM分期显著相关(P<0.001);与阴性对照组比较,过表达PSMB8可以促进786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.021,P=0.039)、迁移和侵袭(P均<0.001),敲减PSMB8可以抑制786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.022,P=0.005)、迁移和侵袭(P均<0.001);PSMB8共表达基因通路富集分析提示其可能与丝裂原活化蛋白激酶通路相关(P<0.001);敲减PSMB8后786-O和ACHN细胞MEK1/2(P=0.017,P=0.016)、ERK1/2(P=0.010,P=0.040)蛋白磷酸化水平及ERK下游因子c-Myc(P=0.043,P=0.038)、c-Fos(P=0.025,P=0.008)和CyclinD1(P=0.006,P=0.047)转录水平均下调;与ERK激动剂C16-PAF处理组比较,敲减PSMB8+C16-PAF组明显抑制786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.003,P=0.002)、迁移和侵袭能力(P均<0.001)。结论PSMB8通过激活MEK/ERK信号通路从而促进ccRCC细胞的增殖、迁移及侵袭。

关键词：肾透明细胞癌蛋白酶体20S亚基β8 丝裂原活化蛋白激酶激酶/细胞外信号调节激酶信号通路

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非酒精性脂肪性肝病治疗药物resmetirom的研发及临床进展

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中国医院药学杂志 2025年

作者：李威吕梦竹莫大双齐鲁理工学院医学院贵州医科大学基础医学院免疫学教研室

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）及其更严重形式非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）已成为慢性肝病的主要诱因之一。NAFLD/NASH发病机制错综复杂且治疗手段有限，这类疾病导... 详细信息

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）及其更严重形式非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）已成为慢性肝病的主要诱因之一。NAFLD/NASH发病机制错综复杂且治疗手段有限，这类疾病导致近年来肝癌病例增加以及肝移植需求激增。目前多款治疗药物展现出一定的潜力，但均处于临床试验阶段，且未获得美国食品与药品监督管理局（FDA）的正式批准。2024年3月FDA首次批准治疗NASH的药物resmetirom，为NAFLD/NASH的治疗开启了一条全新路径。Resmetirom是一种口服给药且特异性靶向肝脏的甲状腺激素受体β激动剂，可以促进肝内脂肪酸的β-氧化，减少脂质毒性，同时促进低密度脂蛋白的摄取，最终对脂质代谢产生有利影响，已经在NAFLD/NASH患者中完成Ⅲ期临床试验并展现出良好的降脂能力，且不会引发严重的不良反应。该文对resmetirom的药物研发、其独特的作用机制以及最新临床试验进展进行全面综述，以期为非酒精性脂肪性肝炎的治疗提供有益参考。

关键词：脂肪性肝炎 resmetirom 临床治疗研究进展

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登革病毒-2感染人脐静脉内皮细胞的磷酸化蛋白质组学分析

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南方医科大学学报 2023年第1期43卷 29-38页

作者：胡盼程瑶王远迎苟小琴刘华左丽吴宁贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院实验教学中心贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院免疫教研室贵州贵阳550004

目的对登革病毒-2(DENV-2)感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的差异磷酸化蛋白质进行分析以及初步探究DENV-2感染的可能致病机制。方法实验设置DENV-2感染HUVEC组和HUVEC空白对照组,每组3个重复。收集细胞沉淀后,利用SDT裂解法获取蛋白质,通... 详细信息

目的对登革病毒-2(DENV-2)感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的差异磷酸化蛋白质进行分析以及初步探究DENV-2感染的可能致病机制。方法实验设置DENV-2感染HUVEC组和HUVEC空白对照组,每组3个重复。收集细胞沉淀后,利用SDT裂解法获取蛋白质,通过串联质谱标签(TMT)法对磷酸化蛋白质进行定性与定量分析,对鉴定到的差异磷酸化蛋白质进行氨基酸保守基序分析、亚细胞定位分析、蛋白质结构域分析、GO富集分析、KEGG通路分析和蛋白质互作(PPI)等生物信息学分析。利用Western blot检测JUN、MAP2K2和AKT1磷酸化蛋白的表达。结果共检测到1385个差异蛋白质上的2918个修饰肽段,其中有1346个修饰肽段显著上调(FC>1.2,P<0.05),1572个修饰肽段显著下调(FC<0.83,P<0.05)。氨基酸保守基序分析共获得49个磷酸化保守基序。蛋白质结构域分析中富集到的差异磷酸化肽段最多是RNA识别基序、蛋白激酶结构域和PH结构域。通过亚细胞定位分析发现差异的修饰肽段主要定位在细胞核和细胞质中。GO富集和KEGG通路分析结果显示差异肽段主要在刺激反应的调节、含核碱基的小分子生物合成过程、吞噬体和白细胞跨内皮迁移处富集。对上调和下调的差异磷酸化蛋白分别进行蛋白质互作—KEGG联合分析,结果发现上调和下调的差异磷酸化蛋白质共富集到15条通路,且通过Western Blot检测与自噬途径相关的3个差异磷酸化蛋白质即JUN、MAP2K2和AKT1的表达,结果显示DENV-2组与空白组相比,p-JUN表达显著下调(1.48±0.01 vs 1.23±0.01,P<0.0001);p-AKT1表达显著上调(0.87±0.02 vs 1.01±0.01,P<0.001);p-MAP2K2表达显著上调(1.10±0.02 vs 1.29±0.05,P<0.01)。结论DENV-2感染HUVEC存在较多差异表达蛋白,p-JUN的下调、p-MAP2K2和pAKT1的上调提示3个能够调节自噬的磷酸化蛋白可能与DENV-2感染机制有关。

关键词：磷酸化组学登革病毒-2 人脐静脉内皮细胞

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检测可溶性晚期氧化蛋白产物的夹心ELISA的建立

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中国免疫学杂志 2025年第5期41卷 1208-1214页

作者：侯晓睿朱平郭勇晖富宁刘北一南方医科大学基础医学院免疫学教研室广州510515 南方医科大学珠江医院检验医学部广州510280

目的:建立检测可溶性晚期氧化蛋白产物(AOPPs)的双抗体夹心ELISA法。方法:以次氯酸钠氧化的小鼠白蛋白为免疫原,免疫BALB/c鼠,制备抗AOPPs单克隆抗体(单抗)。间接ELISA和Western blot检测单抗的特异性,竞争ELISA鉴定该单抗与前期工作获... 详细信息

目的:建立检测可溶性晚期氧化蛋白产物(AOPPs)的双抗体夹心ELISA法。方法:以次氯酸钠氧化的小鼠白蛋白为免疫原,免疫BALB/c鼠,制备抗AOPPs单克隆抗体(单抗)。间接ELISA和Western blot检测单抗的特异性,竞争ELISA鉴定该单抗与前期工作获得的另一株单抗3F2所识别表位是否相同。建立双抗体夹心ELISA方法,比较夹心ELISA与氯胺T法的特异度和敏感度,验证双单抗夹心ELISA的重复性。结果:获得一株特异性识别AOPPs的单抗AP-4C5,建立了两种可特异性检测可溶性AOPPs的夹心ELISA。双单抗夹心ELISA(单抗3F2为捕获抗体,AP-4C5为检测抗体)可检测0.25~2μg/mL AOPPs(R^(2)=0.99180);多单抗夹心ELISA(羊抗人白蛋白多抗为捕获抗体,AP-4C5为检测抗体)可检测1.5~25μg/ml AOPPs(R^(2)=0.96875)。与氯胺T法比较,双单抗夹心ELISA灵敏度更高、特异度更强。双单抗夹心ELISA重复性好(批内CV:3.23%~4.51%,批间CV:3.08%~5.29%)。结论:建立了两种检测可溶性AOPPs的夹心ELISA,有望用于临床标本检测及AOPPs致病机制研究。

关键词：晚期氧化蛋白产物(AOPPs) 单克隆抗体氧化应激酶联免疫吸附实验

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基于原发癌灶T2WI的影像组学特征预测局部进展期直肠癌新辅助治疗疗效及多种分类器效能比较

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磁共振成像 2023年第11期14卷 77-83页

作者：胡鸿博赵升姜昊姜慧杰蔺雪张莹哈尔滨医科大学附属第二医院放射科哈尔滨150086 哈尔滨医科大学基础医学院医学遗传学教研室哈尔滨150086

目的3.0 T MRI影像数据具有评估局部进展期直肠癌(locally advanced rectal cancer,LARC)术前新辅助放化疗(neoadjuvant chemoradiotherapy,nCRT)疗效临床价值,但是构建模型多种机器学习间的比较并没有被探究过。我们将比较4种常用的机... 详细信息

目的3.0 T MRI影像数据具有评估局部进展期直肠癌(locally advanced rectal cancer,LARC)术前新辅助放化疗(neoadjuvant chemoradiotherapy,nCRT)疗效临床价值,但是构建模型多种机器学习间的比较并没有被探究过。我们将比较4种常用的机器学习方法在评估直肠癌新辅助治疗疗效临床价值的效能。材料与方法回顾性分析2021年9月至2023年1月于哈尔滨医科大学附属第二医院就诊经病理检查证实的LARC并行nCRT的病例共160例,按8∶2比例分为训练集及验证集。分别建立支持向量机(support vector machines,SVM)、朴素贝叶斯(naive Bayes,NB)、神经网络(neural network,NN)、卷积神经网络(convolutional neural networks,CNN)四种分类器模型,采用DeLong检验比较受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线的差异,对4种分类器诊断效能进行评估比较。结果2组患者年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05)。通过最小绝对收缩和选择算子(least absolute shrinkage and selection operator,LASSO)算法得到9个与治疗效果分组相关的特征,9个特征在病理完全缓解(pathological complete response,pCR)/病理非完全缓解(non-pathological complete response,non-pCR)中有差异,但差异不具有统计学意义(P>0.05)。SVM模型在训练集的ROC曲线下面积为0.9150,评估nCRT效果最为显著。结论基于磁共振高分辨T2WI的纹理特征,通过SVM、NB、NN、CNN分类器模型可以对直肠癌nCRT疗效进行评估,其中SVM分类器模型诊断效能最佳。基于高分辨T2WI的影像组学可以评估LARC患者nCRT治疗效果。

关键词：直肠癌磁共振成像影像组学机器学习支持向量机

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免疫性血小板减少症患者外周血CD4^(+)CD28-T细胞数量及功能分析

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中国免疫学杂志 2024年第12期40卷 2623-2627页

作者：李伟平白自然田渝琴尹春来李霞大连医科大学基础医学院免疫教研室大连116044 大连医科大学附属第二医院大连116027

目的:研究免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血CD4^(+)CD28-T细胞比例及功能,深入了解ITP的发病机制。方法:选取2021年1月至2022年6月于大连医科大学附属第二医院就诊的ITP患者30例及30例性别、年龄匹配的健康人作为对照,收集外周抗凝血... 详细信息

目的:研究免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血CD4^(+)CD28-T细胞比例及功能,深入了解ITP的发病机制。方法:选取2021年1月至2022年6月于大连医科大学附属第二医院就诊的ITP患者30例及30例性别、年龄匹配的健康人作为对照,收集外周抗凝血提取单个核细胞(PBMC),流式细胞术分析PBMC中CD4^(+)CD28-T细胞比例及功能,ELISA检测ITP患者血浆中IL-18、IL-18BP含量,IL-18刺激PBMC,流式细胞术检测IL-18刺激前后CD4^(+)CD28-T细胞比例。结果:ITP患者外周血CD4^(+)CD28-T细胞比例明显高于健康对照组,且IFN-γ和TNF-α分泌能力更强;ITP患者血浆中IL-18含量上调;IL-18刺激可提高ITP患者PBMC中CD4^(+)CD28-T细胞比例。结论:ITP患者外周血中CD4^(+)CD28-T细胞比例升高,分泌炎症因子的能力更强。

关键词： ITP CD4^(+)CD28-T IL-18

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pET30a-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)重组质粒的构建及表达产物的纯化与鉴定

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中国病原生物学杂志 2023年第2期18卷 185-189,196页

作者：李艳敏赵商岐马西智郑佳龚巧巧丁剑冰周晓涛新疆医科大学基础医学院免疫学教研室新疆乌鲁木齐830011

目的构建pET30a-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)原核表达质粒,诱导表达后纯化,获得重组蛋白CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4),并对其免疫学特性进行初步鉴定,对其空间结构进行预测。方法利用DNA重组技术构建重组质粒pET30a-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4),将测序正确的质粒转化至*** BL21(DE)菌株中,分别采用不同浓度的IPTG在不同诱导时间及温度下诱导表达重组蛋白。取菌液超声破碎,SDS-PAGE分析上清及沉淀中蛋白的表达;通过镍柱亲和层析法纯化蛋白并进行Western blot鉴定。通过生物信息学技术,利用SOPMA、I-TASSER在线数据库预测重组蛋白CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)的空间结构。结果成功构建pET30a-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)重组质粒,转化至*** BL21(DE)后诱导表达相对分子质量为53×10^(3)的重组蛋白CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)。SDS-PAGE分析CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)重组蛋白在IPTG浓度为0.7 mmol/L,37℃、4 h条件下上清中表达量较高。镍柱层析纯化用20 mmol/L咪唑浓度洗脱的蛋白浓度及纯度较高。Western blot检测重组蛋白CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)能被相应抗体识别,反应条带位于53×10^(3)处,与预期相符。生物信息学在线软件分析CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)中各蛋白均能正常折叠,未对优势表位产生影响。结论利用原核表达成功获得CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)重组蛋白,并预测出该蛋白的三维结构模型,为细粒棘球蚴重组疫苗的研制提供了重要的实验依据。

关键词：细粒棘球蚴重组质粒 CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4) 原核表达

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华支睾吸虫感染大鼠肝脏miR-122表达及其与炎症细胞因子的相关性

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中华地方病学杂志 2023年第5期42卷 376-381页

作者：郑海洪丁健张晓丽李响左立娇段珊珊张雪丽姜旭韩甦哈尔滨医科大学附属第二医院动物实验中心哈尔滨150001 哈尔滨医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室哈尔滨150081

目的观察华支睾吸虫感染大鼠肝脏组织微小RNA(miR)-122的表达变化及其与血清炎症细胞因子表达水平的相关性。方法选择24只SPF级Wistar雄性大鼠,采用随机数字表法按体质量(100~120 g)分为对照组(100μl生理盐水灌胃)、感染4周组(100个华... 详细信息

目的观察华支睾吸虫感染大鼠肝脏组织微小RNA(miR)-122的表达变化及其与血清炎症细胞因子表达水平的相关性。方法选择24只SPF级Wistar雄性大鼠,采用随机数字表法按体质量(100~120 g)分为对照组(100μl生理盐水灌胃)、感染4周组(100个华支睾吸虫囊蚴灌胃)、感染8周组(100个华支睾吸虫囊蚴灌胃),每组8只。感染第3周开始收集大鼠粪便,采用生理盐水直接涂片进行华支睾吸虫感染Wistar大鼠动物模型鉴定;感染4、8周组大鼠分别于感染4、8周后处死,对照组大鼠分别于感染4、8周后各处死4只,采集各组大鼠心脏血及左叶肝脏组织。采用苏木精-伊红(HE)染色光镜下观察肝脏病理损伤情况,实时荧光定量PCR检测肝脏miR-122表达水平,Luminex 200液相悬浮芯片检测血清炎症细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)]表达水平;利用Pearson相关分析miR-122与炎症细胞因子的相关性。结果光镜下,对照组大鼠肝细胞形态正常,未见炎症细胞浸润;感染4周组大鼠肝脏组织汇管区周围有淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等炎症细胞浸润;感染8周组大鼠肝细胞排列紊乱、出现不同程度肿胀,细胞质疏松浅染,部分肝细胞呈水样变性,肝脏组织内可见胆管扩张、胆管壁增厚。对照组和感染4、8周组大鼠肝脏miR-122(1.00±0.32、2.57±0.60、3.63±1.63),血清TNF-α[(0.14±0.06)、(0.43±0.09)、(0.61±0.10)ng/ml]、IL-6表达水平[(0.03±0.01)、(1.06±0.24)、(1.48±0.33)ng/ml]比较,差异均有统计学意义(F=13.36、69.99、82.23,均P<0.001);IL-1β表达水平比较差异无统计学意义(F=2.15,P=0.141)。Pearson相关分析结果显示,肝脏miR-122与血清TNF-α和IL-6表达水平均呈正相关(r=0.67、0.80,均P<0.001)。结论华支睾吸虫感染可引起宿主肝脏miR-122表达升高,且miR-122与血清炎症细胞因子TNF-α、IL-6表达水平密切相关。

关键词：华支睾吸虫微小RNA-122 肝损伤炎症细胞因子

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3型固有淋巴细胞在慢性炎症性疾病中的作用

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中国免疫学杂志 2024年第9期40卷 2006-2010,F0004页

作者：徐峥于明凯张峰波丁剑冰新疆医科大学基础医学院免疫学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院乌鲁木齐830054

3型固有淋巴细胞(ILC3)分化于淋巴祖细胞,在机体内分布广泛,是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁。既往研究认为ILC3主要参与肠道免疫调节,而最新研究表明除在肠道疾病中的作用外,ILC3还参与多种慢性炎症性疾病发生发展。本文就ILC3在慢... 详细信息

3型固有淋巴细胞(ILC3)分化于淋巴祖细胞,在机体内分布广泛,是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁。既往研究认为ILC3主要参与肠道免疫调节,而最新研究表明除在肠道疾病中的作用外,ILC3还参与多种慢性炎症性疾病发生发展。本文就ILC3在慢性炎症性疾病中的作用进行综述。

关键词： 3型固有淋巴细胞细胞因子免疫调节慢性炎症性疾病

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非酒精性脂肪性肝病治疗药物resmetirom的研发及临床进展

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中国医院药学杂志 2025年第9期 1075-1080+1088页

作者：李威吕梦竹莫大双齐鲁理工学院医学院贵州医科大学基础医学院免疫学教研室

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）及其更严重形式非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis,NASH）已成为慢性肝病的主要诱因之一。NAFLD/NASH发病机制错综复杂且治疗手段有限，这类疾病导致... 详细信息

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）及其更严重形式非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis,NASH）已成为慢性肝病的主要诱因之一。NAFLD/NASH发病机制错综复杂且治疗手段有限，这类疾病导致近年来肝癌病例增加以及肝移植需求激增。目前多款治疗药物展现出一定的潜力，但均处于临床试验阶段，且未获得美国食品与药品监督管理局（FDA）的正式批准。2024年3月FDA首次批准治疗NASH的药物resmetirom，为NAFLD/NASH的治疗开启了一条全新路径。Resmetirom是一种口服给药且特异性靶向肝脏的甲状腺激素受体β激动剂，可以促进肝内脂肪酸的β-氧化，减少脂质毒性，同时促进低密度脂蛋白的摄取，最终对脂质代谢产生有利影响，已经在NAFLD/NASH患者中完成Ⅲ期临床试验并展现出良好的降脂能力，且不会引发严重的不良反应。该文对resmetirom的药物研发、其独特的作用机制以及最新临床试验进展进行全面综述，以期为非酒精性脂肪性肝炎的治疗提供有益参考。

关键词：脂肪性肝炎 resmetirom 临床治疗研究进展

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