检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通讯 2018年第1期29卷 38-43页

作者：周晓涛周文涛夏开德刘化蝶彭震赵云娟迪丽娜尔.波拉提李家大新疆医科大学基础医学院免疫学教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第五附属医院新疆乌鲁木齐830011 贵州省妇幼保健医院贵州贵阳550000 中南大学医学遗传学国家重点实验室湖南长沙410000

目的:利用酵母双杂交技术从人c DNA文库中筛选人前动力蛋白受体2(hPROKR2)C端相互作用蛋白。方法:复苏酵母菌Y2HGold-hPROKR2-C,与人c DNA文库杂交,计算杂交效率;筛选相互作用克隆并测序,寻找hPROKR2蛋白C端相互作用蛋白;通过在DDO/X、Q... 详细信息

目的:利用酵母双杂交技术从人c DNA文库中筛选人前动力蛋白受体2(hPROKR2)C端相互作用蛋白。方法:复苏酵母菌Y2HGold-hPROKR2-C,与人c DNA文库杂交,计算杂交效率;筛选相互作用克隆并测序,寻找hPROKR2蛋白C端相互作用蛋白;通过在DDO/X、QDO/A/X平皿上划线,对筛选到的人c DNA文库质粒的自活性进行验证;采用GST pull down进一步验证两者之间的相互作用。结果:酵母双杂交实验的杂交融合效率为1.375×10~8;在人cDNA文库中筛选出hPROKR2蛋白C端相互作用蛋白SNAPIN,GST pull down实验证实两者之间存在相互作用。结论:SNAPIN可与hPROKR2蛋白C端结合。

关键词：人前动力蛋白受体2(hPROKR2) SNAPIN 相互作用蛋白酵母双杂交

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突变质粒CMV-3flag-hPROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353)的构建及表达

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生物技术 2018年第2期28卷 113-118,150页

作者：周晓涛周文涛彭震刘化蝶陈丹娜夏开德迪丽娜尔.波拉提赵云娟李家大新疆医科大学基础医学院免疫学教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第五附属医院新疆乌鲁木齐830011 中南大学医学遗传学国家重点实验室湖南长沙410000 贵州省妇幼保健医院贵州贵阳550000

[目的]构建CMV-3flag-h PROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353)真核表达质粒并观察其蛋白表达。[方法]将NotⅠ的酶切位点(GCGGCCGCC)引入第一次PCR的后引物,扩增并突变h PROKR2的1-1035 bp(343YFK/AAA345),再将NotⅠ的酶切位点和3个连续甘氨酸突变碱基GCCGCCGCA引入第二次PCR的前引物扩增并突变h PROKR2的1036-1152bp(351HWR/AAA353),通过NotⅠ酶切位点连接前后两个片段,即可构建pc DNA3.1-h PROKR2-myc-his(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353),最后通过测序鉴定突变是否成功。扩增h PROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353),连接入CMV-3flag。Western Blot检测相应蛋白的表达。[结果]成功构建CMV-3flag-h PROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353)质粒,并验证到相应蛋白表达。[结论]利用NotⅠ酶的碱基序列特性(GCGGCCGCC)进行3个连续氨基酸突变的方法简单有效。质粒CMV-3flag-h PROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353)的成功构建为后期进一步实验创造条件。

关键词： hPROKR2 连续多位点碱基突变限制性内切酶NotⅠ 质粒构建

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胚胎植入前非整倍体筛查

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国外医学（遗传学分册） 2003年第6期26卷 328-330页

作者：黄建民李志凌何韶衡张贵寅汕头大学医学院变态反应学和炎症学研究所广东汕头515031 汕头大学医学院第一附属医院生殖中心广东汕头515041 哈尔滨医科大学医学遗传学教研室黑龙江哈尔滨150086

染色体非整倍体改变在体外受精胚胎中十分多见 ,是导致人类辅助生殖失败的常见原因。胚胎细胞染色体的非整倍体筛查 ,已成为胚胎植入前遗传学诊断的主要内容。体外受精后胚胎活检 ,进行荧光原位杂交 ,避免非整倍体胚胎移入母体宫腔 ,能... 详细信息

染色体非整倍体改变在体外受精胚胎中十分多见 ,是导致人类辅助生殖失败的常见原因。胚胎细胞染色体的非整倍体筛查 ,已成为胚胎植入前遗传学诊断的主要内容。体外受精后胚胎活检 ,进行荧光原位杂交 ,避免非整倍体胚胎移入母体宫腔 ,能起到显著提高着床率和改善受孕率的效果。

关键词：胚胎植入非整倍体筛查遗传学诊断荧光原位杂交染色体数目异常

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奥沙利铂通过内质网应激PERK-eIF2α-ATF4通路诱导口腔鳞癌HSC-3细胞凋亡发生的研究

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遵义医科大学学报 2023年第1期46卷 30-35,43页

作者：李惠如杨治鑫高子媛郑翔耿娜娜遵义医科大学贵州省普通高等学校口腔疾病研究特色重点实验室暨遵义市口腔疾病研究重点实验室贵州遵义563099 遵义医科大学口腔医学院贵州遵义563099 遵义医科大学基础医学院医学遗传学教研室贵州遵义563099

目的研究奥沙利铂对口腔鳞癌HSC-3细胞的杀伤作用及ERS中PERK-eIF2α-ATF4通路的影响。方法CCK8检测不同浓度奥沙利铂对HSC-3细胞增殖的影响;DAPI染色和Annexin V/PI双染法检测奥沙利铂对HSC-3细胞凋亡诱导情况;RT-qPCR和Western blott... 详细信息

目的研究奥沙利铂对口腔鳞癌HSC-3细胞的杀伤作用及ERS中PERK-eIF2α-ATF4通路的影响。方法CCK8检测不同浓度奥沙利铂对HSC-3细胞增殖的影响;DAPI染色和Annexin V/PI双染法检测奥沙利铂对HSC-3细胞凋亡诱导情况;RT-qPCR和Western blotting分别检测奥沙利铂激活HSC-3细胞中内质网应激及PERK-eIF2α-ATF4通路相关基因和蛋白的表达。结果CCK-8结果显示,不同浓度的(10、20、30、40、50 mg/L)奥沙利铂对HSC-3细胞生长增殖具有抑制作用,且呈一定的剂量依赖性,其中半数有效浓度为40 mg/L。DAPI染色和Annexin V/PI双染法结果证明不同浓度(20、40、80 mg/L)奥沙利铂对HSC-3细胞具有促进凋亡的作用;与对照组相比,奥沙利铂组细胞核染色质固缩加重,形成更多的核碎裂片段和凋亡小体,表明凋亡进一步加重。RT-qPCR及Western blot结果显示奥沙利铂促进内质网应激标志性分子GRP78、CHOP及信号通路PERK-eIF2α-ATF4的标志性分子PERK、eIF2α、ATF4表达的上调,同时促进PERK磷酸化水平和Caspase 3发生剪切激活,最终诱导细胞凋亡的发生。结论本研究明确了奥沙利铂在体外具有杀伤口腔鳞癌HSC-3细胞的作用,其分子机制之一可能是通过内质网应激途径及其PERK-eIF2α-ATF4信号通路的激活实现药物对细胞的抑制作用,此研究结果为临床上治疗口腔鳞癌提供了一定的理论基础和依据。

关键词：奥沙利铂口腔鳞癌内质网应激 PERK-eIF2α-ATF4通路

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缺氧对围产儿肺组织内皮素、C-myc及p53表达的影响

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新疆医科大学学报 2003年第3期26卷 243-245页

作者：刘志英刘存谢菁王鸿独山子石化医院病理科新疆独山子833600 新疆医科大学基础医学院病理解剖学教研室新疆乌鲁木齐830054 石河子大学医学院医学遗传学教研室新疆石河子832000 独山子石化医院妇产科

目的：观察死于吸入性窒息与肺透明膜病的围产儿肺组织内皮素-1(ET-1)、C-myc与p53表达的变化，探讨其与肺组织缺氧性损伤的关系，从分子水平对缺氧围产儿肺组织的病变机制进行研究．方法：采用免疫组织化学方法，检测了死于吸入性窒息... 详细信息

目的：观察死于吸入性窒息与肺透明膜病的围产儿肺组织内皮素-1(ET-1)、C-myc与p53表达的变化，探讨其与肺组织缺氧性损伤的关系，从分子水平对缺氧围产儿肺组织的病变机制进行研究．方法：采用免疫组织化学方法，检测了死于吸入性窒息患儿30例，肺透明膜病患儿22例肺组织中ET-1、C-myc、p53这3项指标表达情况，并与其他非呼吸系统疾病死亡病例肺组织进行对照。结果：(1)在吸入性窒息和肺透明膜病肺组织中，ET-1分布在肺泡壁上皮细胞和肺泡壁毛细血管内皮细胞，C-myc、p53则主要分布于肺泡壁上皮细胞。ET-1、C-myc、p53阳性率吸入性窒息肺组织中分别为70．00％、56．67％、60．00％，肺透明膜病肺组织中分别为72．73％、59．10％、63．64％，分别与对照组肺组织相比，差异均有统计学意义(P＜0．05)．(2)吸人性窒息与肺透明膜病3项指标的阳性率差异无统计学意义(P＞0．05)。结论：ET-1、C-myc、p53与肺组织缺氧性损伤密切相关。

关键词：缺氧内皮素-1 C-myc p53 围产儿肺组织免疫组织化学

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利用靶向二代测序技术对一个Alport综合征家系进行基因突变分析

利用靶向二代测序技术对一个Alport综合征家系进行基因突变分析

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第十四次全国医学遗传学学术会议

作者：陈晨卢超霞王琼曹丽华罗阳张学中国医科大学医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学遗传学系

目的:Alport综合征(Alport syndrome,AS)是一种遗传性肾病,以血尿,进行性肾功能衰竭,感音神经性耳聋和眼部异常为主要特征,其致病基因是分别编码Ⅳ型胶原α3,α4和α5链的COL4A3,COL4A4和COL4A5基因。Ⅳ型胶原是肾小球基底膜的主要成分... 详细信息

目的:Alport综合征(Alport syndrome,AS)是一种遗传性肾病,以血尿,进行性肾功能衰竭,感音神经性耳聋和眼部异常为主要特征,其致病基因是分别编码Ⅳ型胶原α3,α4和α5链的COL4A3,COL4A4和COL4A5基因。Ⅳ型胶原是肾小球基底膜的主要成分,因此上述基因的突变,均可影响Ⅳ型胶原的折叠、分泌及基质形成等分子生物学功能,从而引起AS。方法:我们利用Ion AmpliseqTM Inherited Disease Panel,通过靶向二代测序技术进行包括COL4A3,COL4A4和COL4A5基因在内的328个基因的突变筛查,针对可疑突变进行Sanger测序验证及进一步的RNA水平分析。结果:靶向二代测序区域未直接检测到致病突变,但我们在分析原始数据中发现COL4A5基因外显子4,10,17,20,21,37和45未被Disease Panel的探针完全覆盖,Sanger测序验证以上区域,发现先证者COL4A5基因内含子9存在剪接突变c.547-3C>A,其母亲该位点为杂合突变。经RNA提取及cDNA测序分析显示先证者发生COL4A5基因外显子1 0跳跃,整码缺失21个氨基酸。结论:本研究首次发现COL4A5基因的一个新剪接突变,导致外显子10缺失,据此分析在蛋白水平Ⅳ型胶原α5链将丢失7个典型的Gly—X-Y结构,很可能影响胶原分子的构象、弹性及组装。综上,我们利用二代测序技术检测到X连锁Alport综合征家系的致病突变,并在RNA水平验证了该突变导致的外显子跳跃,帮助确定临床诊断,并为后续的遗传咨询和产前诊断提供可靠依据。

关键词：先证者靶向二代测序 Alport 综合征基因突变分析

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酵母表达质粒pGBKT7-hPROKR2-Ct的构建及hPROKR2C端蛋白的自激活鉴定

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生物技术通讯 2016年第4期27卷 479-482页

作者：周晓涛夏开德周文涛刘化蝶彭震汤勇李家大新疆医科大学基础医学院免疫学教研室新疆乌鲁木齐830011 贵州省妇幼保健医院贵州贵阳550000 新疆医科大学第五附属医院新疆乌鲁木齐830011 中南大学医学遗传学国家重点实验室湖南长沙410000

目的:检测Y2HGold酵母株中表达的h PROKR2 C端蛋白是否有毒性及自激活,为后期利用酵母双杂交技术研究h PROKR2 C端相互作用蛋白奠定基础。方法:构建酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct质粒,将其转入酵母感受态中验证其是否表达并计算转... 详细信息

目的:检测Y2HGold酵母株中表达的h PROKR2 C端蛋白是否有毒性及自激活,为后期利用酵母双杂交技术研究h PROKR2 C端相互作用蛋白奠定基础。方法:构建酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct质粒,将其转入酵母感受态中验证其是否表达并计算转化率;通过观察SD/-Trp平板上酵母菌落生长状态进行h PROKR2 C端蛋白的毒性检测;通过观察SD/-Trp、SDO/-Trp/X、SDO/-Trp/X/Aba平板上酵母菌落生长状态进行h PROKR2 C端蛋白自活性检测。结果:构建了酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct,将其转入酵母感受态中,转化率为8.5×104cfu/μg;毒性及自活性检测均显示h PROKR2 C端蛋白对酵母菌株无毒性、不具有自活性。结论:可以利用酵母双杂交系统研究hPROKR2 C端相互作用蛋白。

关键词：酵母双杂交 PROKR2 自激活实验

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Epigenetic regulation on the transcription of GABRB2:genotype-dependent hydroxymethylation/methylation alterations in schizophrenia

Epigenetic regulation on the transcription of GABRB2:genotyp...

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中国神经科学学会精神病学基础与临床分会第十四届学术年会

作者：赵存友宗璐周林侯豫南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室广州510515

Introduction:To improve our understanding of the abnormalities and non-Mendelian inheritance characteristics of schizophrenia,this study examined DNA methylation(5mC)and hydroxymethylation(5hmC)in the schizophrenia-as...

关键词：

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精神分裂症中GABRB2的调控异常

精神分裂症中GABRB2的调控异常

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中华医学会2012年医学遗传学年会暨全国第十一次医学遗传学学术会议

作者：周林潘颖许志雯薛红赵存友南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室中国广州510515 香港科技大学生命科学部和应用基因组中心中国香港

精神分裂症是发病率约为1％的多基因遗传精神疾病.目前研究已发现了多个精神分裂症候选基因.位于抑制性神经递质伽玛氨基丁酸传输通道中的A型伽玛氨基丁酸受体beta2亚基,其基因(GABRB2)的DNA变异已发现与精神分裂症相关联,并在全世界不... 详细信息

精神分裂症是发病率约为1％的多基因遗传精神疾病.目前研究已发现了多个精神分裂症候选基因.位于抑制性神经递质伽玛氨基丁酸传输通道中的A型伽玛氨基丁酸受体beta2亚基,其基因(GABRB2)的DNA变异已发现与精神分裂症相关联,并在全世界不同人群的研究中得到证实.GABRB2的基因变异是如何导致精神分裂症,目前仍不清楚.与精神分裂症相关的单核苷酸多态性(SNPs)均位于GABRB2基因的内含子非编码区,这提示SNPs的变异可能影响GABRB2基因的表达.据此,我们依中心法则遗传信息的流向,对GABRB2基因的DNA变异、RNA表达、受体蛋白功能以及表观遗传修饰异常与精神分裂症的相关性进行了研究,并得到如下结果：(1)DNA变异与RNA表达异常的相关性：尸检精神分裂症脑背外侧前额叶皮层(DLPFC)中GABRB2基因的长型和短型异构体RNA表达水平比对照组显著降低,且长型异构体比短型异构体降低的更明显;此外,这种RNA表达的降低呈基因型依赖性：即杂合子个体(疾病相关的SNPsrs2546620,rs1816072或rs1816071为杂合子基因型个体)在对照组相对应RNA高表达而在疾病组相对应RNA低表达的"杂合子表达摇摆"现象.(2)异构体受体蛋白电生理功能的差异与DNA变异的相关性：瞬时表达不同异构体重组蛋白受体的细胞在GABA诱导下,表达长型异构体细胞的电生理功能比短型异构体细胞更容易出现衰竭(run-down),并且这种衰退与位于长型异构体第十号外显子(为选择性剪接外显子且含有一个磷酸化位点)的磷酸化和ATP能量供给相关,当把这个磷酸化位点变异后,这种差异就消失了.(3)表观遗传失调与疾病的相关性：家系不平衡传递(TDT)检测发现了在DNA水平疾病相关SNPs等位基因存在父源不平衡传递现象;等位基因的RNA表达也呈不平衡现象,即两个等位基因的RNA表达之比在对照组大于1,而在疾病组却小于1的翻转现象(Flipping);对DNA基因型与RNA表达关系的特点分析发现,对照组中存在基因印迹(imprinting),但在疾病组却弱化了是之前发现的"杂合子表达摇摆"现象的表观遗传调控机制.而最近对基因组总水平甲基化(包括全基因组CCGG位点的甲基化、全基因组水平的Alu-Y家族和LINE1元件的甲基化)和GABRB2基因的启动子区以及疾病易感区甲基化的分析结果均显示精神分裂症样本DNA呈现不同程度的甲基化修饰异常,从而进一步支持上述发现的异常基因印迹现象.上述研究结果揭示了易感基因GABRB2的异常调控在精神分裂症发病机理方面所起的重要作用,进一步支持了该基因对精神分裂症的易感性,为开发精神分裂症的治疗性药物提供了新靶点.

关键词： DNA变异和RNA表达表观遗传调控异常基因印迹 DNA甲基化

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GABRB2调控异常与精神分裂症

GABRB2调控异常与精神分裂症

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中国神经科学学会精神病学基础与临床分会第十届学术会议

作者：周林潘颖许志雯薛红赵存友南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室中国广州 510515 香港科技大学生命科学部和应用基因组中心中国香港

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