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天津医药 2008年第5期36卷 357-359页

作者：李咏梅李晓眠天津医科大学基础医学院微生物学教研室 300070

目的:观察柠檬提取物对实验性小鼠急性柯萨奇B3m病毒性心肌炎的影响。方法:选取4～6周龄雄性Balb/C鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3m株(CVB3m)建立实验性小鼠急性病毒性心肌炎模型。小鼠随机分为正常对照组、模型对照组及3个实验组(实验Ⅰ～Ⅲ... 详细信息

目的:观察柠檬提取物对实验性小鼠急性柯萨奇B3m病毒性心肌炎的影响。方法:选取4～6周龄雄性Balb/C鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3m株(CVB3m)建立实验性小鼠急性病毒性心肌炎模型。小鼠随机分为正常对照组、模型对照组及3个实验组(实验Ⅰ～Ⅲ组),每组10只。模型对照组和各实验组小鼠腹腔注射病毒1h后灌胃给药,实验Ⅰ～Ⅲ组分别灌服20、60、180倍稀释的柠檬提取液,模型对照组灌服等体积生理盐水,连用7d,正常对照组自然喂养,于第14天处死小鼠。观察各组小鼠心脏质量与体质量比(HM/BM)及心肌HE染色切片病理变化,并测定血清心肌酶含量。结果:(1)各实验组HM/BM较模型对照组明显降低(P<0.05),实验Ⅰ组、Ⅱ组心肌病理积分较模型对照组明显降低(P<0.05)。(2)实验Ⅰ组、Ⅱ组血清心肌酶活性较模型对照组明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:柠檬提取物对实验性小鼠急性柯萨奇B3m病毒性心肌炎具有一定的治疗作用。

关键词：柠檬柯萨奇病毒感染心肌炎小鼠

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副黏病毒Tianjin株NP蛋白的稳定表达及其检测

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天津医药 2009年第4期37卷 286-288页

作者：王文秀李梅王卿天津医科大学基础医学院微生物学教研室 300070

目的:构建副黏病毒Tianjin株NP基因的真核表达载体,转染HEK293细胞,经G418筛选出稳定表达NP蛋白的细胞。方法:应用RT-PCR技术克隆副黏病毒Tianjin株NP基因,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)。经PCR、酶切和测序鉴定后,将构建的pcDNA3.1(+)-N... 详细信息

目的:构建副黏病毒Tianjin株NP基因的真核表达载体,转染HEK293细胞,经G418筛选出稳定表达NP蛋白的细胞。方法:应用RT-PCR技术克隆副黏病毒Tianjin株NP基因,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)。经PCR、酶切和测序鉴定后,将构建的pcDNA3.1(+)-NP用LipofectamineTM2000转染试剂转染HEK293细胞。应用免疫荧光法及Western Blot检测NP蛋白的瞬时和稳定表达。结果:RT-PCR扩增得到NP基因,重组质粒pcDNA3.1(+)-NP转染HEK293细胞后,经免疫荧光法检测到目的蛋白的瞬时和稳定表达。WesternBlot法可见NP蛋白瞬时和稳定表达的条带。结论:副黏病毒Tianjin株NP基因在HEK293细胞可以瞬时和稳定表达,为研究副黏病毒Tianjin株NP蛋白功能与病毒致病性、宿主亲嗜性奠定了基础。

关键词：仙台病毒核蛋白类遗传载体转染细胞系基因表达

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人缺血脑组织中TNF-α和IL-1β的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 349-350,363页

作者：钟照华李国忠李呼伦赵文然田野李殿俊谷鸿喜王海涛董秀芹哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学第一临床医学院神经科黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学克山病研究所黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学免疫学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的 :检测人缺血脑组织中TNF α和IL 1β的表达。方法 :将 13例脑梗死的死亡病例按发病时间分成 5d3个组 ,以非缺血侧半球作为对照 ,用免疫组化染色法检测缺血脑组织中TNF α和IL 1β的表达。结果 :人脑缺血后缺血病灶中TNF α和IL 1... 详细信息

目的 :检测人缺血脑组织中TNF α和IL 1β的表达。方法 :将 13例脑梗死的死亡病例按发病时间分成 <2d、3～ 5d、 >5d3个组 ,以非缺血侧半球作为对照 ,用免疫组化染色法检测缺血脑组织中TNF α和IL 1β的表达。结果 :人脑缺血后缺血病灶中TNF α和IL 1β呈高表达 ,与正常侧脑组织相比较有极显著差异。TNF α和IL 1β表达细胞的分布与缺血灶相一致 ,呈局灶性分布。TNF α的表达高峰在病后 2d内。IL 1β表达高峰在病后 3～ 5d。在病后 5d ,缺血侧TNF α和IL 1β的表达与正常侧无显著差异。结论 :人类脑缺血组织中TNF α和IL 1β的表达与动物实验的结果相似 ,提示TNF α和IL 1β参与了脑缺血损伤。

关键词： TNF—α IL—1β 脑缺血

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乳双歧杆菌对旋毛虫感染小鼠炎性细胞因子及肠道菌群的影响

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医学动物防制 2023年第3期39卷 282-287,293页

作者：迟茜文解文利姚梦玮李玉迁魏洪贵州医科大学基础医学院感染与免疫学实验室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院微生物学教研室

目的探究不同剂量乳双歧杆菌对旋毛虫感染小鼠的虫荷量、炎症调节作用及肠道菌群组成的影响。方法取感染旋毛虫的小鼠(300条/只)随机分为模型组、乳双歧杆菌高剂量组、中剂量组、低剂量组,未感染旋毛虫小鼠作为空白对照组;高、中、低剂... 详细信息

目的探究不同剂量乳双歧杆菌对旋毛虫感染小鼠的虫荷量、炎症调节作用及肠道菌群组成的影响。方法取感染旋毛虫的小鼠(300条/只)随机分为模型组、乳双歧杆菌高剂量组、中剂量组、低剂量组,未感染旋毛虫小鼠作为空白对照组;高、中、低剂量组分别给予乳双歧杆菌灌胃,模型组和空白对照组每日给予等量磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline,PBS)连续灌胃30 d;胃蛋白酶消化法检测各组第7 d肠道成虫数量及第30 d肌肉幼虫数量。ELISA法检测各组模型小鼠血清中白细胞介素10(Interleukin-10,IL-10)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)水平,采集各组小鼠肠道感染期粪便样本,采用16S rDNA高通量测序进行微生物组生物信息学分析,评估样本多样性和分类学特征。结果虫荷量结果显示,高剂量乳双歧杆菌显著降低旋毛虫感染小鼠第7 d肠道成虫及第30 d肌肉幼虫数量(P<0.05);炎性因子水平检测发现高剂量乳双歧杆菌使旋毛虫感染小鼠血清抑炎因子(IL-10)水平升高(P<0.05),促炎因子(TNF-α)水平降低(P<0.05)。肠道微生物组成结果显示,乳双歧杆菌干预使感染小鼠厚壁菌门与拟杆菌门比值上升,降低普雷沃菌属丰度,高剂量组中异杆菌属、颤螺菌属丰度增加,中剂量组中布劳特菌属增加。结论乳双歧杆菌能改善旋毛虫感染小鼠炎症表现,促进旋毛虫清除,提高感染小鼠肠道内有益菌丰度。

关键词：乳双歧杆菌旋毛虫肠道菌群虫荷量炎性因子

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变异链球菌表面蛋白质抗原真核表达质粒的构建及免疫动物的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第4期21卷 404-405页

作者：刘天佳郭丽宏贾文祥刘莉华西医科大学口腔医学院成都610041 华西医科大学基础医学院微生物教研室成都610041

变异链球菌(Streptococcus mutans, ***)是龋病主要致病菌，***的表面蛋白质抗原PAc是其主要毒力因子之一，参与了唾液介导的***在牙面的粘附。*** PAc分子的氨基端不仅富集免疫显性T、B细胞表位，而且含有唾液糖蛋白结合区，因此氨基... 详细信息

变异链球菌(Streptococcus mutans, ***)是龋病主要致病菌，***的表面蛋白质抗原PAc是其主要毒力因子之一，参与了唾液介导的***在牙面的粘附。*** PAc分子的氨基端不仅富集免疫显性T、B细胞表位，而且含有唾液糖蛋白结合区，因此氨基端是理想的表位多肽防龋疫苗选择区。此外，Streptococcus sobrinus（***）的PAg分子与*** PAc分子的氨基端具有保守的B细胞表位，以PAc分子该区段制备的多肽疫苗可激发宿主对***的交叉保护性反应。因而，初次以变异链球菌表面蛋白质抗原PAc氨基端的编码基因构建真核表达质粒，免疫BALB/c小鼠，观察所诱导的体液免疫应答，为基因疫苗防龋的动物实验提供资料。

关键词：变异链球菌表面蛋白质抗原真核表达质粒构建免疫动物

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基因编辑技术和细胞疗法在体外基因治疗中的应用

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第11期36卷 1265-1272页

作者：杨鑫宇王大勇高旭哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学北方转化医学研究合作中心哈尔滨150081 黑龙江省医学科学院哈尔滨150081

基因治疗作为一种新的疾病治疗手段,为传统医药无法治愈的疾病的治疗带来了新的希望。它主要通过使用载体等其他递送系统将外源基因导入体细胞内,或使用基因编辑技术直接实现基因的碱基替换、敲入或敲除,或将某一组织器官的细胞在体外... 详细信息

基因治疗作为一种新的疾病治疗手段,为传统医药无法治愈的疾病的治疗带来了新的希望。它主要通过使用载体等其他递送系统将外源基因导入体细胞内,或使用基因编辑技术直接实现基因的碱基替换、敲入或敲除,或将某一组织器官的细胞在体外经基因编辑技术修饰或改造后重新回输至体内,以修复受损基因,纠正基因功能,最终达到治疗疾病的目的。目前,基因编辑技术与细胞治疗相结合的基因治疗方法已在多种疾病中实现了临床实验,例如血友病、镰刀细胞贫血、免疫系统缺陷疾病等,且随着基因编辑技术以及干细胞技术的出现,基因治疗有了新的革新和突破,但两者相结合潜在的弊端也同样制约着基因治疗的发展,比如脱靶效率、载体的导入效率、PAM(protospacer adjacent motif)序列的制约和对P53基因的影响等。随着技术的进一步革新和发展,基因治疗的方法、技术以及理论逐渐完善,未来基因治疗将有可能为更多遗传性疾病甚至复杂性疾病的治疗提供新思路。本文就基因治疗的方法和发展前景进行了概述,以期为基因治疗未来研究工作的开展提供参考。

关键词：基因治疗 CRISPR/Cas9 细胞疗法基因编辑

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慢性炎性疼痛对小鼠肠道菌群的影响

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安徽医科大学学报 2022年第1期57卷 138-143页

作者：王小敏徐鹏王俣棋曾建业周思宸邢承志胡翔宇吴亚男张昳若范红结遵义医科大学基础医学院微生物学教研室遵义563000

目的探究慢性炎性疼痛对小鼠肠道菌群多样性和结构的影响。方法选取SPF级雌性C57BL/6J小鼠12只,随机分为CFA组和Mock组,每组6只;Mock组右后足底皮下注射50μl的0.9%氯化钠溶液,CFA组右后足底皮下注射50μl的CFA作为慢性炎性疼痛模型组。... 详细信息

目的探究慢性炎性疼痛对小鼠肠道菌群多样性和结构的影响。方法选取SPF级雌性C57BL/6J小鼠12只,随机分为CFA组和Mock组,每组6只;Mock组右后足底皮下注射50μl的0.9%氯化钠溶液,CFA组右后足底皮下注射50μl的CFA作为慢性炎性疼痛模型组。2周后,安乐死小鼠,解剖后取结肠内粪便,组内两只小鼠结肠内粪便进行混样,采用16S rRNA高通量基因测序技术检测分析肠道菌群多样性和结构。结果两组小鼠在肠道菌群构成上差异明显。与Mock组相比,CFA组肠道菌群丰富度及多样性降低;门水平上,厚壁菌门和TM7丰度升高;科、属水平上,气球菌属、乳酸杆菌属和脱硫弧菌属丰度显著升高,嗜冷杆菌属、普雷沃氏菌属、颤螺菌属和双歧杆菌属丰度明显降低;从门到属主要分类等级上,发现的生物标志物较多。结论慢性炎性疼痛的小鼠肠道菌群结构尤其是优势菌群结构发生了明显变化,这些数据可为慢性炎性疼痛导致的微生态失衡的治疗及通过“肠-脑轴”改善患者消极情绪提供依据。

关键词：高通量测序慢性炎性疼痛肠道菌群多样性

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m6A修饰对中枢神经系统功能及疾病的影响

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遗传 2020年第12期42卷 1156-1167页

作者：史佳宾王大勇夏晴高旭哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学北方转化医学研究合作中心哈尔滨150081 黑龙江省医学科学院哈尔滨150081

6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)是一种重要的RNA修饰,参与细胞内mRNA的整个代谢活动,调控基因的表达,调节多种生物过程,在大脑组织中丰度较高。稳定的m6A修饰有助于胚胎大脑发育、记忆力的形成,在维持中枢神经系统的功能中起到... 详细信息

6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)是一种重要的RNA修饰,参与细胞内mRNA的整个代谢活动,调控基因的表达,调节多种生物过程,在大脑组织中丰度较高。稳定的m6A修饰有助于胚胎大脑发育、记忆力的形成,在维持中枢神经系统的功能中起到重要作用。当m6A修饰水平及相关蛋白表达水平发生改变时,将会引起神经系统功能异常,包括脑组织发育迟缓、轴突再生能力障碍、记忆力改变以及干细胞更新和分化紊乱等。近年来的研究还发现,m6A修饰及其相关蛋白在阿尔茨海默症、帕金森症、脆性X染色体综合征、抑郁症和胶质母细胞瘤等众多神经系统疾病的发展进程中扮演关键角色。本文主要综述了近年来在中枢神经系统中m6A修饰调控机制研究的相关进展,重点介绍了m6A修饰介导的基因表达调控对中枢神经系统生物学功能以及多种相关疾病的影响,以期为中枢神经系统疾病提供新的研究靶点和治疗方向。

关键词： 6-甲基腺嘌呤(m6A) 中枢神经系统干细胞突触记忆

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人巨细胞病毒感染与非特异性下腰痛的相关性研究

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中国康复医学杂志 2007年第1期22卷 37-40页

作者：李红吴建贤洪永锋王斌胡勇蔡亦红胡雪影王明丽安徽医科大学第一附属医院康复医学科合肥230022 安徽医科大学基础医学院微生物教研室

目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染与非特异性下腰痛(NLBP)的关系,HCMV活动性感染与NLBP临床症状和内皮素(ET)的相关性。方法:PCR、HE染色检测尿沉渣HCMV-DNA和包涵体;ELISA、放免法测定血浆HCMV抗体和内皮素水平。结果:①NLBP患者病毒... 详细信息

目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染与非特异性下腰痛(NLBP)的关系,HCMV活动性感染与NLBP临床症状和内皮素(ET)的相关性。方法:PCR、HE染色检测尿沉渣HCMV-DNA和包涵体;ELISA、放免法测定血浆HCMV抗体和内皮素水平。结果:①NLBP患者病毒包涵体、HCMV抗体阳性率明显高于正常对照组(P<0.05)。②NLBP患者HCMV-IgM抗体阳性组与阴性组,在疼痛加重病程、疼痛程度和内皮素水平方面差异均有显著性意义,t值分别为-4.74(P<0.01)、3.67(P<0.01)、4.32(P<0.01)。结论:NLBP患者腰痛症状可能与HCMV活动性感染相关。成年人HCMV活动性感染后导致的NLBP患者,尿沉渣涂片经HE染色后光镜下见不典型HCMV包涵体。

关键词：非特异性下腰痛人巨细胞病毒内皮素

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幽门螺杆菌napA-ctxB融合蛋白的基因克隆与表达

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免疫学杂志 2007年第2期23卷 172-175页

作者：邓颖杨致邦王勇黄进张绍兰叶翠莲重庆医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室重庆400016

目的克隆、表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白napA与霍乱毒素B亚单位ctxB融合基因napA-ctxB(nctB),为制备预防***感染的疫苗奠定基础。方法用PCR方法扩增ctxB目的基因片段,克隆至pQE30-napA质粒的napA基因上游,构建含双基因的表达质粒pQ... 详细信息

目的克隆、表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白napA与霍乱毒素B亚单位ctxB融合基因napA-ctxB(nctB),为制备预防***感染的疫苗奠定基础。方法用PCR方法扩增ctxB目的基因片段,克隆至pQE30-napA质粒的napA基因上游,构建含双基因的表达质粒pQE30-napA-ctxB(pQE30-nctB),经测序分析确认后转化***5α,经IPTG诱导表达融合蛋白NCTB,融合蛋白NCTB经镍离子柱纯化。结果PCR扩增出807bp的目的基因片段nctB。工程菌pQE30-nctB-DH5α经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,Mr为30000,与预期的一致,约占菌体总蛋白的27%,重组蛋白用Ni2+-NTA树脂提纯,纯化后的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带,图象软件分析表明纯度可达94%以上。Westernblot显示重组蛋白质有良好的抗原性。结论构建含双基因的表达质粒pQE30-nctB成功,并在大肠杆菌DH5α中高效的表达。

关键词：幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白霍乱毒素B亚单位融合基因

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