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第三届东北三省暨内蒙古自治区免疫学学术会议

作者：夏福灿裴春颖田琳璐姜鹏字程海荣傅嫣然徐红薇哈尔滨医科大学基础医学院免疫教研室

免疫相关GTP酶家族成员IRGM/IRGM1在巨噬细胞相关的抗感染免疫应答中发挥重要作用,但其在非感染免疫过程中的作用仍不清楚.我们的前期研究证实在小鼠动脉粥样硬化斑块中浸润的巨噬细胞内IRGM1高表达,提示IRGM1可能通过调节巨噬细胞对氧... 详细信息

免疫相关GTP酶家族成员IRGM/IRGM1在巨噬细胞相关的抗感染免疫应答中发挥重要作用,但其在非感染免疫过程中的作用仍不清楚.我们的前期研究证实在小鼠动脉粥样硬化斑块中浸润的巨噬细胞内IRGM1高表达,提示IRGM1可能通过调节巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)的吞噬和代谢进而参与动脉粥样硬化的发生发展.目的:研究IRGM/IRGMl在动脉粥样硬化发病过程中巨噬细胞来源泡沫细胞形成中的作用.方法:1)利用高脂饲料饲养ApoE-/-小鼠,诱导小鼠动脉粥样硬化模型并通过western blot和免疫荧光染色检测IRGM1在斑块内表达及细胞定位,通过免疫组化染色检测IRGM在人动脉粥样硬化斑块内的表达;2)收集/诱导原代巨噬细胞(小鼠腹腔巨噬细胞,小鼠骨髓诱导巨噬细胞,人外周血单核细胞诱导的巨噬细胞),利用PMA刺激活化人THP1细胞;体外利用oxLDL诱导巨噬细胞源性泡沫细胞的形成,通过western blot和免疫荧光染色检测1RG M/I RGM1的表达,通过real-time PCR检测miR196的表达;3)收集健康人的外周血单核细胞并用hGM-CSF诱导其分化为巨噬细胞,然后oxLDL处理24小时,再用miR196 mimic处理12小时后收集蛋白,通过western blot检测IRGM的表达;4)体外利用Dil-oxLDL处理来自Irgm1+/+小鼠和Irgm1-/-小鼠的原代巨噬细胞及经过IRGM siRNA处理的人原代巨噬细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测泡沫细胞的形成;5)通过抗体介导的受体交联内化实验和聚合型F-actin的Phalloidin特染实验,应用免疫荧光染色和流式细胞术检测巨噬细胞表面CD36受体的内化能力及细胞内F-actin的聚合能力;6)利用高脂饲料喂养ApoE基因缺失背景下的Irgm1 +/+小鼠和Irgm1+,-小鼠16周,对小鼠进行心脏灌注和胸腹主动脉取材,然后对动脉粥样硬化斑块进行油红染色和斑块面积定量分析.

关键词：免疫相关GTP酶1(IRGM/IRGM1) oxLDL 巨噬细胞泡沫细胞

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表皮生长因子诱导人脐静脉内皮细胞迁移过程中波形蛋白及基质金属蛋白酶2的表达变化

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解剖学报 2013年第6期44卷 789-794页

作者：卢诗军杨慧科马文平李晓冬张雅芳哈尔滨医科大学基础医学院解剖学教研室哈尔滨150081 黑龙江护理高等专科学校解剖学教研室哈尔滨150086 沈阳市第二中医院神经外科沈阳110101

目的观察人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移过程中表皮生长因子(EGF)对波形蛋白(vimentin)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响,分析波形蛋白与EGF促HUVECs迁移能力的关系。方法 EGF处理HUVECs细胞10h后,采用细胞划痕实验检测HUVECs细胞的... 详细信息

目的观察人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移过程中表皮生长因子(EGF)对波形蛋白(vimentin)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响,分析波形蛋白与EGF促HUVECs迁移能力的关系。方法 EGF处理HUVECs细胞10h后,采用细胞划痕实验检测HUVECs细胞的迁移水平,荧光显微镜下观察细胞的形态变化情况;免疫荧光染色观察划痕诱导HUVECs迁移时波形蛋白的表达变化;Western blotting和RT-PCR法分析MMP-2及波形蛋白表达。结果 EGF刺激后HUVECs的迁移能力上升1.8倍,迁移细胞的形态发生改变,由铺路石样变为长梭形,同时波形蛋白和MMP-2的表达上调(P<0.05)。结论 EGF促进HUVECs的迁移过程中可明显上调波形蛋白和MMP-2的表达,波形蛋白与HUVECs的迁移相关。

关键词：表皮生长因子细胞迁移波形蛋白基质金属蛋白酶2 免疫印迹法

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正交实验法优选蓝莓提取工艺

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中国医药 2013年第S1期8卷 73-74页

作者：解岩黄伟王鹏王晓艳 163319 哈尔滨医科大学大庆校区基础医学院生理教研室

目的研究影响蓝莓提取的各种因素,确定最佳提取的工艺条件.方法以乙醇浸膏收率、抗感染效果为指标,采用正交实验,考察乙醇提取次数、加醇量、醇浓度、提取时间四个因素的影响.结果在考察因素中,对乙醇浸膏收率、抗感染效果影响程度... 详细信息

目的研究影响蓝莓提取的各种因素,确定最佳提取的工艺条件.方法以乙醇浸膏收率、抗感染效果为指标,采用正交实验,考察乙醇提取次数、加醇量、醇浓度、提取时间四个因素的影响.结果在考察因素中,对乙醇浸膏收率、抗感染效果影响程度均为醇浓度C＞提取次数A＞提取时间D＞加醇量B.结论综合考虑两方面因素,其中以抗感染效果为主要指标,最后确定蓝莓的最佳提取工艺为A1B3C2D2,即用75％乙醇10倍量,每次4h,提取2次.

关键词：蓝莓正交实验法提取工艺

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全人源抗人TRAIL-R1单克隆抗体诱导肿瘤细胞凋亡的研究

全人源抗人TRAIL-R1单克隆抗体诱导肿瘤细胞凋亡的研究

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第三届东北三省暨内蒙古自治区免疫学学术会议

作者：杨复娇刘晔芦凤亮宗卫娇梁媛高翔金艾顺 150081 哈尔滨医科大学基础医学院免疫教研室

目的探讨本研究组制备的全人源抗人TRAIL-R1单克隆抗体TRAILR1-422 (TR1-422)诱导肿瘤细胞凋亡的作用.方法利用竞争ELISA法鉴定TR1-422与TRAIL-R1结合特异性;流式细胞分析检测与Jurkat细胞表面TRAIL-R1的结合能力;细胞计数法计算TR1-... 详细信息

目的探讨本研究组制备的全人源抗人TRAIL-R1单克隆抗体TRAILR1-422 (TR1-422)诱导肿瘤细胞凋亡的作用.方法利用竞争ELISA法鉴定TR1-422与TRAIL-R1结合特异性;流式细胞分析检测与Jurkat细胞表面TRAIL-R1的结合能力;细胞计数法计算TR1-422在不同时间点对Jurkat细胞生存和细胞增殖的影响;镜下观察TR1-422对肿瘤细胞的作用;Annexin V/PI双染色评价TR 1-422诱导Jurkat细胞凋亡的作用.结果 TR1-422与Jurkat细胞表面TRAIL-R1高度特异结合;与无相关IgG抗体组比较表达率变化72.3％. 1 μg/ml TR1-422与10μg/ml抗人IgG交联作用于Jurkat细胞在不同时间点(24h和48h)的生存率分别为72.57％,64.08％,对照组分别为96.14％,95.69％(t=2.534,P＜0.05;t=3.147,P＜0.05);镜下观察,1μg/ml TR 1-422与10μg/ml抗体交联作用72h后,Jurkat细胞出现大量死亡;1μg/ml TR1-422与10μg/ml抗体交联作用24h,Annexin V阳性率达30％,而1μg/ml TR1-422单独作用为12.8％(t=2.355,P＜0.05);各组未检测到PI阳性细胞.结论本研究证实我组制备的抗TRAIL-R1全人源单抗与抗体交联作用可促进肿瘤细胞凋亡,提高抗肿瘤治疗效果.

关键词： TRAIL TRAIL-R1 单抗细胞凋亡

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体外诱导外周血B淋巴细胞分化浆细胞方法的建立及评价

体外诱导外周血B淋巴细胞分化浆细胞方法的建立及评价

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第三届东北三省暨内蒙古自治区免疫学学术会议

作者：梁嫒芦凤亮宗卫娇刘晔高翔金艾顺 150081 哈尔滨医科大学基础医学院免疫教研室

目的建立体外活化外周血单个核细胞(PBMCs)中B淋巴细胞扩增和分化浆细胞的方法,为高亲和力治疗性人源单克隆抗体的研发提供研究基础.方法从3名接种过流感疫苗健康志愿者(＞10个月)的末梢血中分离PBMCs,加入TLR9激动剂CpG DNA 2006和... 详细信息

目的建立体外活化外周血单个核细胞(PBMCs)中B淋巴细胞扩增和分化浆细胞的方法,为高亲和力治疗性人源单克隆抗体的研发提供研究基础.方法从3名接种过流感疫苗健康志愿者(＞10个月)的末梢血中分离PBMCs,加入TLR9激动剂CpG DNA 2006和细胞因子等培养;流式细胞分析、酶联免疫吸附试验(ELISA)、酶联免疫斑点试验(ELISPOT)、细胞计数法评价B淋巴细胞体外活化效果.结果与对照组相比,刺激组中CD19阳性细胞和CD138阳性细胞的比率明显增高(t=2.625,P＜0.05;t=3.571,P＜0.05),培养上清中总IgG和抗原特异性IgG含量增加,且分泌IgG和抗原特异性IgG的浆细胞数量明显增加(t=2.942,P＜0.05;t=3.196,P＜0.05),刺激组比未刺激组细胞生存率提高(t=2.182,P＜0.05).通过体外活化方法,只需约10 ml外周血即可检测到足量的抗原特异性抗体分泌细胞.结论本试验所建立的体外活化方法能够有效地诱导外周血B淋巴细胞扩增和分化浆细胞.

关键词： B淋巴细胞浆细胞体外活化外周血单个核细胞

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小鼠胚胎第一次细胞命运决定的分子调控机制

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生命科学 2013年第7期25卷 730-734页

作者：吴稀白光宇孙瑞珍李彤雷蕾哈尔滨医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室

着床前小鼠的发育过程中,随着囊胚的形成,胚胎建立了两个不同的细胞系:滋养外胚层(TE)和内细胞团(ICM),且发生两次重要的命运选择。主要回顾了两个经典发育模式,即内外模式(inside-outsidemodel)和极性模式(polarity model),总结了TE和... 详细信息

着床前小鼠的发育过程中,随着囊胚的形成,胚胎建立了两个不同的细胞系:滋养外胚层(TE)和内细胞团(ICM),且发生两次重要的命运选择。主要回顾了两个经典发育模式,即内外模式(inside-outsidemodel)和极性模式(polarity model),总结了TE和ICM第一次谱系分离过程中起关键作用的分子调控机制,并探讨了存在于卵裂球间的分子差异,对细胞极性、细胞命运和分子调节之间存在的复杂联系也进行了讨论。

关键词：滋养外胚层内细胞团 Cdx2 Oct4 Hippo

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多巴胺受体(DR2)激活对乳鼠心肌细胞缺氧/再灌注损伤的保护作用及其机制

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中国应用生理学杂志 2013年第4期29卷 289-293页

作者：魏璨高君陈爱东白淑芝李宏霞柳磊邵洪江彭雪李梅秀徐长庆李鸿珠哈尔滨医科大学基础医学院病理生理学教研室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨市第一医院骨一科黑龙江哈尔滨150010 牡丹江医学院红旗医院黑龙江牡丹江157011

目的:观察多巴胺受体(DR2)激活对乳鼠心肌细胞缺氧/再灌注损伤的影响,并探讨其机制。方法:复制原代培养乳鼠心肌细胞缺氧/再灌注损伤模型,细胞随机分为正常组(Control)、缺氧/再灌注组(H/R)、DR2激动剂组(溴麦角环肽,Bro)、抑制剂组(氟... 详细信息

目的:观察多巴胺受体(DR2)激活对乳鼠心肌细胞缺氧/再灌注损伤的影响,并探讨其机制。方法:复制原代培养乳鼠心肌细胞缺氧/再灌注损伤模型,细胞随机分为正常组(Control)、缺氧/再灌注组(H/R)、DR2激动剂组(溴麦角环肽,Bro)、抑制剂组(氟哌啶醇,Hal)。倒置显微镜、透射电镜、流式细胞仪检测细胞凋亡情况;检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;RT-PCR和Western blot方法检测心肌细胞促凋亡因子(Cyt C、caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas及Fas-L)及抑凋亡因子(Bc-l 2)mRNA和蛋白表达。结果:与正常组相比,H/R组细胞凋亡率、LDH活性、MDA含量、促凋亡因子及抑凋亡因子表达均增加,唯有SOD活性降低;与H/R组比较,Bro组可减轻或逆转上述指标的变化;Hal组上述指标变化不明显。结论:DR2激活可抑制缺氧/再灌注所致的乳鼠心肌细胞损伤和凋亡,机制与减少氧自由基有关。

关键词：多巴胺受体(DR2) 乳鼠心肌细胞凋亡缺氧再灌注

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花色素苷功能饮料对正常及环磷酰胺处理大鼠免疫功能的调节作用

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温州医学院学报 2013年第9期43卷 587-590,594页

作者：陈秀芳吴冰冰胡云双金丽琴温州医科大学基础医学院生化教研室浙江温州325035

目的:探讨花色素苷(Anth)功能饮料对正常及环磷酰胺处理大鼠免疫功能的调节作用。方法:从黑米中提取Anth并将其调配成饮料,连续喂养大鼠6周后,测定脾脏和胸腺的重量及其系数;以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测由刀豆蛋白A、脂多糖诱导的脾T、... 详细信息

目的:探讨花色素苷(Anth)功能饮料对正常及环磷酰胺处理大鼠免疫功能的调节作用。方法:从黑米中提取Anth并将其调配成饮料,连续喂养大鼠6周后,测定脾脏和胸腺的重量及其系数;以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测由刀豆蛋白A、脂多糖诱导的脾T、B淋巴细胞的增殖活性;用生化方法测定腹腔巨噬细胞(PMΦ)、血清、肝、脾、肾、胸腺组织细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷酸酶(ACP)的活性;摄取中性红试验检测PMΦ的吞噬功能。结果:Anth饮料使正常大鼠脾湿重显著增加(P<0.01),并抑制环磷酰胺所致的脾萎缩(P<0.01);显著提高正常大鼠脾T、B淋巴细胞的增殖活性(均P<0.01),同时对环磷酰胺处理后大鼠脾T、B淋巴细胞降低的增殖活性具有明显改善作用(均P<0.05);显著提高正常大鼠PMΦ内LDH活性(P<0.01),而且能抵抗环磷酰胺所致的LDH活性(PMΦ、血清、肾、胸腺)和ACP活性(PMΦ、肝、脾、肾、胸腺)的降低(P<0.05或P<0.01);同时对环磷酰胺导致的大鼠PMΦ吞噬能力的降低具有明显上调作用(P<0.01)。结论:Anth饮料对大鼠的免疫功能具有增强作用,并能在一定程度上拮抗环磷酰胺的免疫抑制作用。

关键词：花色素苷环磷酰胺巨噬细胞增殖反应免疫调节

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辛伐他汀对胶质瘤U251细胞侵袭及其MMP2表达的影响

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现代肿瘤医学 2013年第8期21卷 1677-1679页

作者：徐超徐善才郑天虎史怀璋哈尔滨医科大学附属第一医院神经外科黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学基础医学院生化教研室黑龙江哈尔滨150081

目的:研究辛伐他汀(simvastatin,SMV)在体外对胶质瘤U251细胞侵袭迁移及其金属基质蛋白酶2(MMP2)的表达影响。方法:采用MTT法观察辛伐他汀对U251细胞黏附能力的影响;Transwell侵袭小室测定法检测辛伐他汀对U251细胞侵袭能力的影响;明胶... 详细信息

目的:研究辛伐他汀(simvastatin,SMV)在体外对胶质瘤U251细胞侵袭迁移及其金属基质蛋白酶2(MMP2)的表达影响。方法:采用MTT法观察辛伐他汀对U251细胞黏附能力的影响;Transwell侵袭小室测定法检测辛伐他汀对U251细胞侵袭能力的影响;明胶酶谱实验和RT-PCR方法观察辛伐他汀对金属基质蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP2)在U251细胞中表达的影响。结果:辛伐他汀能够降低U251细胞黏附,Transwell实验表明药物处理组穿膜细胞数明显低于对照组(P<0.01),明胶酶谱与RT-PCR结果表明辛伐他汀不但降低MMP2前体蛋白的表达,而且影响其mRNA的表达。结论:辛伐他汀能够有效抑制胶质瘤U251细胞的侵袭迁移,其作用机制可能与辛伐他汀下调胶质瘤U251细胞中MMP2的表达有关。

关键词：胶质瘤辛伐他汀肿瘤侵袭金属基质蛋白酶2

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专题讨论在民考民医学本科生生物化学教学中的尝试

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中华医学教育探索杂志 2013年第8期12卷 773-776页

作者：许晨波孙玉萍斯坎德尔·白克力库热西·玉努斯新疆医科大学基础医学院生化教研室乌鲁木齐830011 微生物教研室

目的探讨专题讨论在生物化学教学中的作用。方法在生物化学教学中利用课余时间开展专题讨论。选择新疆医科大学民考民临床医学本科专业2011级1班86名学生为研究对象，教学结束后采用问卷形式进行满意度调查，用Excel按选择项的百分比进... 详细信息

目的探讨专题讨论在生物化学教学中的作用。方法在生物化学教学中利用课余时间开展专题讨论。选择新疆医科大学民考民临床医学本科专业2011级1班86名学生为研究对象，教学结束后采用问卷形式进行满意度调查，用Excel按选择项的百分比进行数据的描述分析。结果86．9％的学生认为专题讨论教学形式好；100．0％的学生认为对学以致用、知识融会贯通很有或较有帮助；100．O％的学生认为课余时间讨论对知识增长很有或较有必要性；97．8％的学生认为课余时间查阅资料很有或较有收获，100．0％的学生对专题讨论的内容很有或较有兴趣，并认为讨论内容新颖、实用；100．0％的学生认为对拓宽学习思路很有或较有帮助；43．5％的学生认为超出大纲内容可考试，39．1％的学生认为不考试；准备时间亦在5～7d。结论生物化学教学中应用专题讨论有助于调动学生的积极性和各种能力的培养，有利于学生对所学专业知识的巩固和理解。

关键词：专题讨论民考民医学本科生生化教学

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