检索结果-内蒙古大学图书馆

生殖与避孕 2006年第4期26卷 250-253页

作者：李延笑韩晓曦孙炳奇于秉治中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室沈阳110001

目的:研究p70S6K在小鼠受精卵第一次有丝分裂周期中的表达。方法:采用Westernblot和RT-PCR方法,检测在小鼠受精卵第一次有丝分裂的G1、S、G2以及M期中p70S6K在mRNA水平以及蛋白水平的表达。结果:在mRNA水平,p70S6K的表达在各期无明显变... 详细信息

目的:研究p70S6K在小鼠受精卵第一次有丝分裂周期中的表达。方法:采用Westernblot和RT-PCR方法,检测在小鼠受精卵第一次有丝分裂的G1、S、G2以及M期中p70S6K在mRNA水平以及蛋白水平的表达。结果:在mRNA水平,p70S6K的表达在各期无明显变化,在蛋白水平,磷酸化状态的p70S6K在S期升高,表明从S期p70S6K的活性升高。结论:p70S6K在小鼠卵子受精后磷酸化程度增加,因而有可能参与了小鼠受精卵的早期发育。

关键词： p70S6K 受精卵有丝分裂周期

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14-3-3蛋白在小鼠受精卵及2-细胞期胚胎中的表达与定位

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生殖与避孕 2006年第11期26卷 643-646页

作者：崔城于萌张哲于秉治中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室沈阳110001

目的:研究小鼠受精卵及2-细胞期胚胎中14-3-3蛋白的表达及亚细胞定位。方法:采用Western blot方法鉴定小鼠受精卵和2-细胞期胚胎14-3-3蛋白的表达,利用间接免疫荧光技术观察其在细胞中的定位。结果:在小鼠受精卵和2-细胞期胚胎中,全部表... 详细信息

目的:研究小鼠受精卵及2-细胞期胚胎中14-3-3蛋白的表达及亚细胞定位。方法:采用Western blot方法鉴定小鼠受精卵和2-细胞期胚胎14-3-3蛋白的表达,利用间接免疫荧光技术观察其在细胞中的定位。结果:在小鼠受精卵和2-细胞期胚胎中,全部表达14-3-3蛋白,并且为同一亚型;14-3-3蛋白主要定位于受精卵的细胞质及2-细胞期胚胎中的细胞质和细胞核。结论:14-3-3蛋白正常表达于小鼠受精卵及2-细胞期胚胎中,其定位可能影响胚胎的早期发育。

关键词： 14-3-3蛋白受精卵二细胞期胚胎定位

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大鼠胚胎期心脏Na^+通道基因SCN5A的表达

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哈尔滨医科大学学报 2006年第4期40卷 286-289页

作者：金剑峰董钦李凤兰陈诗慧马宁李晖哈尔滨医科大学基础医学学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的研究大鼠胚胎发育过程中,编码心肌组织电压门控Na+通道α亚单位SCN5A基因mRNA的表达和蛋白定位。方法大鼠胚胎期分7个时间点(E12.5-P1),提取心脏总RNA,RT-PCR和免疫组化方法分别检测SCN5A基因mRNA表达和蛋白定位。结果大鼠胚胎发育... 详细信息

目的研究大鼠胚胎发育过程中,编码心肌组织电压门控Na+通道α亚单位SCN5A基因mRNA的表达和蛋白定位。方法大鼠胚胎期分7个时间点(E12.5-P1),提取心脏总RNA,RT-PCR和免疫组化方法分别检测SCN5A基因mRNA表达和蛋白定位。结果大鼠胚胎发育期SCN5A基因mRNA表达呈动态模式,E12.5d(0.425±0.012)表达最少,E13.5d(0.532±0.012)和E14.5d(0.665±0.119)相对增加,E15.5d达到高峰(1.08±0.01),E17.5d(0.870±0.035)与E19.5d(0.855±0.057)相比略有降低,无显著性差别,提示胚胎发育后期表达量趋于平衡。出生后一天(P1)表达量(0.751±0.041)较胚胎期表达显著降低。除E17.5d与E19.5d比较无统计学意义外(P>0.05),其余组间比较均有统计学意义(P<0.001)。免疫组化结果显示,SCN5A蛋白表达高峰及在左、右心室肌及室间隔中表达持续时间各不相同,胚胎早期SCN5A蛋白在不同心腔表达相对均匀,后期在心外膜和心室左、右束支位置表达增强。结论SCN5A基因与大鼠胚胎心脏传导系统发生及其功能相关,Na+电流是形成胚胎发育中期心肌动作电位的主要成分。

关键词：心肌胚胎 SCN5A 基因表达

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G2期和MⅡ期小鼠卵母细胞中p34^(cdc2)电泳迁移率的差异

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中国医科大学学报 2006年第4期35卷 343-344,347页

作者：师秀艳于秉治中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁沈阳110001

目的:探讨小鼠卵母细胞不同细胞周期时相中,由于p34cdc2不同磷酸化状态所引起的电泳迁移率变化。方法:用免疫印迹(W estern b lot)技术观察G2期和MⅡ期小鼠卵母细胞中p34cdc2电泳迁移率的变化。结果:p34cdc2在G2期只表现两条带即上、中... 详细信息

目的:探讨小鼠卵母细胞不同细胞周期时相中,由于p34cdc2不同磷酸化状态所引起的电泳迁移率变化。方法:用免疫印迹(W estern b lot)技术观察G2期和MⅡ期小鼠卵母细胞中p34cdc2电泳迁移率的变化。结果:p34cdc2在G2期只表现两条带即上、中带;而MⅡ期表现为中、下带。结论:可以用电泳迁移率的变化作为观察p34cdc2磷酸化状态的一种方法。

关键词： Western印迹 p34^cdc2 卵母细胞

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噬菌体展示技术构建重组人TNF-α单链抗体库

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上海交通大学学报（医学版） 2006年第2期26卷 155-158页

作者：柴蔚然杨涛胡晓年牛勃上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室中国协和医科大学基础研究所

目的应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库。方法利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库。由L in... 详细信息

目的应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库。方法利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库。由L inker-prim erm ix经重叠延伸反应将重链可变区基因与轻链可变区基因拼接成单链抗体。再用RS prim erm ix以单链抗体为模板进行第二次聚合酶链反应,从而获得全套抗rhTNF-α的单链抗体基因。以SfiⅠ/NotⅠ,位点定向插入pCANTAB-5E噬菌粒载体,转化大肠杆菌TG1后,经M13KO7辅助噬菌体拯救,构建成全套抗rhTNF-α单链抗体表面展示文库。结果成功构建了rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库。经M13KO7超感染后,噬斑计数滴度为2.1×1011pfu。结论rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建,为研究rhTNF-α抗体结合位点,了解其结构与功能的关系以及研究用于临床免疫治疗的新型抗体打下了基础。

关键词：肿瘤坏死因子-α 单链抗体噬菌体展示技术重组人TNF-α单链抗体库

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脑缺血再灌对小鼠脑细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ mRNA表达的影响及淫羊藿苷的作用

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第三军医大学学报 2006年第7期28卷 685-687页

作者：李梨周岐新石京山重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室遵义医学院药理学教研室遵义563003

目的观察脑缺血再灌对小鼠大脑细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ(cytochrome C oxidase subunitⅡ,COⅡ)mRNA表达的影响及淫羊藿苷的作用。方法采用双侧颈总动脉夹闭合并取血降压再灌注的方法建立小鼠脑缺血再灌损伤模型,随机分为正常对照组、模... 详细信息

目的观察脑缺血再灌对小鼠大脑细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ(cytochrome C oxidase subunitⅡ,COⅡ)mRNA表达的影响及淫羊藿苷的作用。方法采用双侧颈总动脉夹闭合并取血降压再灌注的方法建立小鼠脑缺血再灌损伤模型,随机分为正常对照组、模型组、淫羊藿苷防治组(100mg/kg i.g.),在不同时间点用半定量RT-PCR法检测各组小鼠大脑COⅡ的mRNA表达。结果在脑缺血再灌后1、24h时模型组COⅡmRNA的量与对照组相比无显著性意义。3h模型组COⅡmR-NA的量显著降低(P<0.01),淫羊藿苷组对COⅡmRNA表达量的降低略有所阻遏,但无显著性意义。72h模型组COⅡmRNA的量明显上升(P<0.01),淫羊藿苷组可以明显阻止其表达量的升高(P<0.05)。在脑缺血再灌后14d COⅡmRNA的量又有所降低(P<0.05),淫羊藿苷组可阻止COⅡmRNA表达量的降低。结论脑缺血再灌可影响COⅡmRNA表达。灌胃给予淫羊藿苷对于维持COⅡ的正常表达有一定的作用,提示可能是其发挥脑保护作用的机制之一。

关键词：脑缺血再灌细胞色素氧化酶基因表达淫羊藿苷

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p53-Mdm2模块和泛素化系统

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生命的化学 2006年第4期26卷 326-328页

作者：聂海祺孙黎光刘萍中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室沈阳110001

p53(肿瘤抑制基因)诱导鼠双微粒体蛋白2(Mdm2)的表达,Mdm2反之抑制p53的活性,Mdm2和p53形成了一个自动调整的模块。Mdm2的一个重要的结构标志是一个中心酸性区域,另外的结构标志是在酸结构域下游的一个锌指结构,和一个C端的环指区域。M... 详细信息

p53(肿瘤抑制基因)诱导鼠双微粒体蛋白2(Mdm2)的表达,Mdm2反之抑制p53的活性,Mdm2和p53形成了一个自动调整的模块。Mdm2的一个重要的结构标志是一个中心酸性区域,另外的结构标志是在酸结构域下游的一个锌指结构,和一个C端的环指区域。Mdm2的表达是由p53来调节,Mdm2作为E3连接酶使p53泛素化并且驱使p53降解,进而控制p53的功能。对于p53泛素化的结构要求是p53的寡聚化。p53泛素化作用的调整模式是通过蛋白质之间的相互作用。Mdm2中环指区域的作用是通过使p53泛素化来推进p53的降解。泛素化后的酸性结构在Mdm2的降解中起作用。

关键词： p53 Mdm2 模块泛素化

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铅对大鼠C6细胞GRP78表达的影响

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毒理学杂志 2006年第5期20卷 294-296页

作者：张莹孙黎光侯伟健刘萍张尤新叶丽平曹师承朱艳凌中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁沈阳110001

目的观察不用时间点暴露于不同剂量醋酸铅后大鼠神经胶质瘤C6细胞葡萄糖调节蛋白78(glucoseregulated protein 78,GRP78)表达量的影响,探讨不同时间不同剂量铅暴露对内质网应激反应的影响。方法Wistar大鼠神经胶质瘤C6细胞培养于含醋酸... 详细信息

目的观察不用时间点暴露于不同剂量醋酸铅后大鼠神经胶质瘤C6细胞葡萄糖调节蛋白78(glucoseregulated protein 78,GRP78)表达量的影响,探讨不同时间不同剂量铅暴露对内质网应激反应的影响。方法Wistar大鼠神经胶质瘤C6细胞培养于含醋酸铅的培养液中,分别于不同时间终止染铅,用Western印迹法检测内质网GRP78表达量。结果(1)0.2μmol/L染铅组:7和30 d GRP78蛋白表达显著增高,其余各个时间点均无显著性变化;(2)1.0μmol/L染铅组:1 d后GRP78蛋白表达量开始显著增高,染铅30 d时已达到染铅前的6.3倍;(3)2.0μmol/L染铅组:0.5 h起GRP78表达量即显著增高,染铅7 d时达到高峰,是染铅前的4.3倍,到30 d时表达量又下降为染铅前的2.6倍。结论铅可以使Wistar大鼠神经胶质瘤细胞内质网上的GRP78蛋白应激性表达增加,内质网上的GRP78是铅的重要蓄积库。

关键词：铅 GRP78 内质网

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人牛精浆相关蛋白的亚细胞定位及生物活性

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细胞生物学杂志 2006年第2期28卷 243-247页

作者：张杰刘莹宗志红宿文辉于秉治中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室沈阳110001

利用红色荧光蛋白表达载体pDsRed1-N1与人睾丸中牛精浆相关蛋白基因(hbrp)重组为pDsRed1-N1/hbrp,真核表达载体pcDNA3.1-myc-his与hbrp重组为pcDNA3.1-myc-his/hbrp,分别转染HEK293细胞,建立稳定的真核表达细胞系。在荧光显微镜下观察H... 详细信息

利用红色荧光蛋白表达载体pDsRed1-N1与人睾丸中牛精浆相关蛋白基因(hbrp)重组为pDsRed1-N1/hbrp,真核表达载体pcDNA3.1-myc-his与hbrp重组为pcDNA3.1-myc-his/hbrp,分别转染HEK293细胞,建立稳定的真核表达细胞系。在荧光显微镜下观察HBRP的亚细胞定位,并用放射自显影检测该细胞系的蛋白激酶C(PKC)活性。HBRP定位在细胞膜及胞浆近膜处;HBRP对PKC活性有明显的抑制作用。从而确定了人新的精子结合蛋白HBRP在细胞内的定位,并认定了HBRP为有生物活性的功能蛋白。

关键词：人牛精浆相关蛋白牛精浆蛋白亚细胞定位蛋白激酶C活性

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急性染铅对大鼠海马细胞外信号调节激酶2的影响

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毒理学杂志 2006年第4期20卷 209-211页

作者：张尤新孙黎光侯伟健刘萍叶丽平张莹曹师承朱艳凌中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁沈阳110001

目的探讨急性染铅对大鼠海马总量及磷酸化的细胞外信号调节激酶2(ERK2)含量的影响。方法正常30 d大鼠,海马脑片稳定培养2 h后,分别用含20μmol/L醋酸铅及不含醋酸铅的人工脑脊液(ACSF)孵育,不同时间点收集,作为急性染铅样品,用Westem印... 详细信息

目的探讨急性染铅对大鼠海马总量及磷酸化的细胞外信号调节激酶2(ERK2)含量的影响。方法正常30 d大鼠,海马脑片稳定培养2 h后,分别用含20μmol/L醋酸铅及不含醋酸铅的人工脑脊液(ACSF)孵育,不同时间点收集,作为急性染铅样品,用Westem印迹法测定样品总量及磷酸化的ERK2含量。结果海马脑片培养中,对照组磷酸化的ERK2含量基本保持不变。染铅组在30和60 min时分别下降了59%和41%,120 min后恢复到接近正常水平。总量ERK2染铅组和对照组含量变化均无显著性。结论急性染铅可使磷酸化的ERK2含量在一定的时间内降低,经过一段时间后显示向正常恢复的趋势。急性染铅对总量ERK2含量无显著影响。铅通过降低ERK2的磷酸化水平影响其活力。

关键词：铅海马细胞外信号调节激酶2

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