检索结果-内蒙古大学图书馆

目的:采用RNA干扰技术选择性的沉默宫颈癌Ca Ski细胞株中HPV-16 E6基因的表达。为观察HPV-16 E6基因的小干扰片段能否在Ca Ski细胞特异性的抑制E6基因的表达,构建能在哺乳动物细胞中表达E6小干扰RNA的真核表达质粒,并观察其转染效率。方法:根据HPV-16 E6基因序列,设计特异性的小干扰片段,并将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1上,将其转染至Ca Ski细胞中,观察荧光表达,鉴定其转染效率。结果:通过酶切鉴定和序列测定,成功的构建二条表达小干扰RNA的质粒及其阴性对照质粒,并成功的转染到Ca Ski细胞株中,转染效率达到50%以上。结论:siRNA真核表达载体的构建及体外转染的成功为下一步研究奠定了良好的基础。

关键词： HPV16 E6基因 RNA干扰转染

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苛求芽孢杆菌基因组DNA提取方法的比较

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生物技术 2006年第2期16卷 41-42页

作者：赵运胜卜友泉张宏娟廖飞基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆医科大学重庆400016 检验系临床微生物学教研室重庆医科大学重庆400016

目的:比较不同方法提取苛求芽孢杆菌基因组DNA的差异。方法:用经典CTAB提取法、改进CTAB法(溶菌酶处理结合CTAB提取法)、UniQ柱吸附提取法制备苛求芽孢杆菌基因组DNA,比较产物完整性和用于PCR扩增的有效性。结果:三种方法制备基因组DNA... 详细信息

目的:比较不同方法提取苛求芽孢杆菌基因组DNA的差异。方法:用经典CTAB提取法、改进CTAB法(溶菌酶处理结合CTAB提取法)、UniQ柱吸附提取法制备苛求芽孢杆菌基因组DNA,比较产物完整性和用于PCR扩增的有效性。结果:三种方法制备基因组DNA纯度接近,但改进CTAB法产率最高,UniQ法产率最低。经典CTAB法和UniQ法提取基因组DNA易降解。三种方法所得基因组DNA用于PCR扩增效率接近。结论:溶菌酶裂解结合CTAB提取更适合制备苛求芽孢杆菌基因组DNA。

关键词：苛求芽孢杆菌基因组DNA提取改进CTAB法

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慢性应激大鼠抑郁模型的建立及其评价

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齐齐哈尔医学院学报 2006年第6期27卷 644-646页

作者：王建醒周丽徐华锋王淑英徐文弟哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 150086 齐齐哈尔医学院医药研究所与生物化学教研室黑龙江大学生命科学院

目的探讨建立慢性应激抑郁大鼠模型的实验方法及模型的有效性。方法利用慢性轻度不可预见性应激(CUMS)制作抑郁模型,观察动物的体重和摄食量的变化,用敞箱试验及液体消耗实验测定动物行为。结果大鼠抑郁模型在第27天建立成功。抑郁组大... 详细信息

目的探讨建立慢性应激抑郁大鼠模型的实验方法及模型的有效性。方法利用慢性轻度不可预见性应激(CUMS)制作抑郁模型,观察动物的体重和摄食量的变化,用敞箱试验及液体消耗实验测定动物行为。结果大鼠抑郁模型在第27天建立成功。抑郁组大鼠敞箱试验得分、液体消耗试验中糖水消耗和糖水偏爱百分比均明显下降。结论慢性轻度不可预见性应激可以成功建立大鼠抑郁模型。

关键词：抑郁症应激模型 CUMS

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TAT-凋亡素基因重组质粒的构建、蛋白的表达纯化及体内活性实验

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国际遗传学杂志 2006年第6期29卷 411-415页

作者：郑天虎陶站华刘兴汉哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地 150081 哈尔滨

目的构建TAT-凋亡素(TAT-Apoptin)质粒并提取融合蛋白,为进一步研究该蛋白功能奠定基础。方法PCR合成TAT-Apoptin基因,与pTYB2质粒连接后转入Rosetta菌,经IPTG诱导表达,几丁质亲和层析一步纯化目的蛋白,用昆明小鼠H22动物模型检测活性... 详细信息

目的构建TAT-凋亡素(TAT-Apoptin)质粒并提取融合蛋白,为进一步研究该蛋白功能奠定基础。方法PCR合成TAT-Apoptin基因,与pTYB2质粒连接后转入Rosetta菌,经IPTG诱导表达,几丁质亲和层析一步纯化目的蛋白,用昆明小鼠H22动物模型检测活性。结果克隆载体经过PCR筛选、测序鉴定,其核苷酸片段长度和序列与预期序列相符,诱导后融合蛋白出现在上清中,纯化出的TAT-Apoptin蛋白具有明显的抗肿瘤活性。结论该实验所构建的重组质粒pTYB2／TAT-Apoptin经诱导表达出了可溶性目的蛋白TAT-Apoptin,纯化后具有明显的生物活性,为TAT-Apoptin蛋白的进一步研究奠定了基础。

关键词： TAT-凋亡素基因重组纯化几丁质亲和层析

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改进生物化学教学的几点建议

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广西医科大学学报 2006年第S1期23卷 215-页

作者：林文珍广西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室南宁530021

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白眉蝮蛇降纤酶的纯化及特性分析

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中国生化药物杂志 2006年第2期27卷 101-103页

作者：魏金荣张玉魁张岐山中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学生物芯片中心辽宁沈阳110001 中国医科大学生物技术研究所辽宁沈阳110001

目的从白眉蝮蛇蛇毒中提取降纤酶,并对其进行特性分析。方法采用一步亲和色谱法分离纯化降纤酶,用高效液相色谱分析其纯度,SDS-PAGE测定其相对分子质量。结果分离得到的降纤酶纯度高(99%以上),SDS-PAGE分析为一条带,相对分子质量为36 0... 详细信息

目的从白眉蝮蛇蛇毒中提取降纤酶,并对其进行特性分析。方法采用一步亲和色谱法分离纯化降纤酶,用高效液相色谱分析其纯度,SDS-PAGE测定其相对分子质量。结果分离得到的降纤酶纯度高(99%以上),SDS-PAGE分析为一条带,相对分子质量为36 000,比活性为4 800 u/mg。结论用一步亲和色谱法从白眉蝮蛇蛇毒中纯化降纤酶的方法简单有效,所得产品纯度高、产量高。

关键词：白眉蝮蛇降纤酶纯化

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铅对小鼠学习记忆及脑海马细胞内钙库释放的影响

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卫生研究 2005年第4期34卷 400-403页

作者：高明奇孙黎光张天彪滕赞刘素媛中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院药理教研室

目的探讨铅对小鼠学习记忆和海马细胞内钙库Ca2+释放的影响。方法用水迷宫实验测定小鼠的空间学习记忆能力;采用低浓度胰蛋白酶消化法分离小鼠海马细胞,用IP3敏感钙库和IP3非敏感钙库的特异性拮抗剂肝素和普鲁卡因刺激海马细胞,以弗拉吐... 详细信息

目的探讨铅对小鼠学习记忆和海马细胞内钙库Ca2+释放的影响。方法用水迷宫实验测定小鼠的空间学习记忆能力;采用低浓度胰蛋白酶消化法分离小鼠海马细胞,用IP3敏感钙库和IP3非敏感钙库的特异性拮抗剂肝素和普鲁卡因刺激海马细胞,以弗拉吐(Fura2)作Ca2+荧光探针测定铅对海马细胞[Ca2+]i的影响。结果在水迷宫实验中,结果表明慢性铅暴露可明显损伤仔鼠的空间定位航行能力,损伤程度与饮用铅的浓度成正相关。与对照组比较,25μmol·L-1铅可致分离的小鼠海马细胞在胞外无钙静息状态下[Ca2+]i显著性增高(P<0.05);而30μg·ml-1的三磷酸肌醇(IP3)敏感钙库特异性拮抗剂Heparin和0.1mg·ml-1的非IP3敏感钙库的特异性拮抗剂procaine可拮抗铅引起的海马细胞[Ca2+]i增高。结论慢性铅暴露可致小鼠空间学习记忆能力下降;高水平的铅可促进小鼠海马细胞内IP3敏感和非IP3敏感的两种内质网钙库释放,致海马细胞在胞外无钙静息状态下[Ca2+]i升高。

关键词：海马细胞铅 IP3敏感钙库非IP3敏感钙库 [Ca^2+]i

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阳离子脂质体介导的基因转染真核细胞的研究

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上海第二医科大学学报 2005年第10期25卷 1025-1029页

作者：李劲松叶展赵涵芳陈诗书上海第二医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

目的研究高效的阳离子转染NIH3T3的方法.方法以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,利用流式细胞仪比较三种脂质体转染效果,用不同的细胞融合度、脂质体浓度、脂质体与质粒的比例、转染时间优化转染条件.结果转染效率 LipofectAMINE2000＞Gene... 详细信息

目的研究高效的阳离子转染NIH3T3的方法.方法以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,利用流式细胞仪比较三种脂质体转染效果,用不同的细胞融合度、脂质体浓度、脂质体与质粒的比例、转染时间优化转染条件.结果转染效率 LipofectAMINE2000＞GenePORTs＞LipofectAMINE.在细胞融合度为60% ～ 70%,脂质体/DNA为3 μL/μg,脂质体的量为3 μL,转染时间为5 h时,转染效率最高.转染结束后表达时间可以达一个月.结论 LipofectAMINE2000转染效率最佳,并优化了其最佳转染条件.

关键词：脂质体转染绿色荧光蛋白

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核骨架/核基质结合区及其功能研究的进展

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上海第二医科大学学报 2005年第5期25卷 525-527页

作者：李颖卢健上海第二医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

长期以来的研究只能用结合试验来证明核基质结合区(MARs)的存在,对其真正的功能了解甚少。直到最近,人们才发现了MARs的一些生物学活性,MARs参与襻环的形成和染色体的高级包装,在真核生物的转录调控和凋亡方面起到了重要作用。对MARs的... 详细信息

长期以来的研究只能用结合试验来证明核基质结合区(MARs)的存在,对其真正的功能了解甚少。直到最近,人们才发现了MARs的一些生物学活性,MARs参与襻环的形成和染色体的高级包装,在真核生物的转录调控和凋亡方面起到了重要作用。对MARs的生物学功能仍在进一步的研究中,本文主要就MARs的结构、在转录调控中的作用及其它一些研究进展作一综述。

关键词：核基质结合区功能研究核骨架 MARs 转录调控生物学活性生物学功能结合试验真核生物染色体

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