检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物化学与分子生物学报 2019年第1期35卷 1-6页

作者：张雪梅高旭马宁哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150081

成簇的规律间隔性短回文序列(CRISPR)基因编辑系统,因其设计简单操作方便和无种属限制,已成为一种广泛应用的基因组定点编辑工具,在复杂的基因组编辑,例如基因的人源化改造以及条件等位基因的构建中有所应用。在自然界中,CRISPR系统拥... 详细信息

成簇的规律间隔性短回文序列(CRISPR)基因编辑系统,因其设计简单操作方便和无种属限制,已成为一种广泛应用的基因组定点编辑工具,在复杂的基因组编辑,例如基因的人源化改造以及条件等位基因的构建中有所应用。在自然界中,CRISPR系统拥有多种类别。其中,CRISPR/Cas9系统是研究最深入、应用最成熟的一种。本文针对CRISPR/Cas9系统,分别从基因敲入/敲除片段的大小、同源臂长短、构型即递送方式等技术环节进行综述,阐述不同设计及操作条件下由CRISPR/Cas9系统介导的基因敲入/敲除的效率差异。

关键词：基因编辑成簇的规律间隔性短回文序列(CRISPR) 基因敲入同源模板

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基于分子信标策略的CRISPR/Cas12a荧光传感器用于循环肿瘤DNA的放大检测

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分析化学 2023年第2期51卷 184-193页

作者：张函笑代晓春周亚楠吕旭珍弓韬赵旭华于保锋山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

构建了一种以分子信标（Molecular beacon, MB）为信号探针的CRISPR/Cas12a生物传感器，用于循环肿瘤DNA(Circular tumor DNA, ctDNA)的快速放大检测。MB具有良好的稳定性，其颈部末端分别标记有荧光素（FAM）和四甲基罗丹明（TAMRA）... 详细信息

构建了一种以分子信标（Molecular beacon, MB）为信号探针的CRISPR/Cas12a生物传感器，用于循环肿瘤DNA(Circular tumor DNA, ctDNA)的快速放大检测。MB具有良好的稳定性，其颈部末端分别标记有荧光素（FAM）和四甲基罗丹明（TAMRA）两种荧光基团。ctDNA不存在时，CRISPR/Cas12a体系无活性，无法切割MB，因此MB两端的荧光基团由于形成发夹结构的颈部相互靠近而发生荧光共振能量转移（Fluorescence resonance energy transfer, FRET），显示出TAMRA的荧光。当ctDNA存在时，ctDNA特异性识别Cas12a/crRNA二元复合物并激活Cas12a的反式切割活性。由于单链DNA是Cas12a最敏感的底物，因此MB的环部单链首先被切割，继而引起颈部双链的解离而导致两种荧光团彼此远离，无法发生FRET，最终显示出FAM的荧光信号。对MB环部的碱基数目、MB浓度以及crRNA与Cas12a的浓度比例等实验条件进行了优化。在最优条件下，1.7～500 pmol/L范围内，ctDNA浓度与传感器在518 nm处的荧光强度呈线性关系，检出限为0.6 pmol/L(3σ)。将此传感器用于血清样品中ctDNA的检测，回收率在93%～110%之间。

关键词： CRISPR 生物传感器荧光共振能量转移循环肿瘤DNA

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鼠肝癌淋巴道转移细胞模型的蛋白质组学研究

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高等学校化学学报 2009年第3期30卷 517-524页

作者：孙明忠刘淑清唐建武大连医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室病理学教研室大连116044

对2株来源于同一亲本细胞但淋巴道转移力显著不同的小鼠肝癌腹水型细胞株Hca-F(淋巴结转移率75%)和Hca-P(淋巴结转移率25%),采用荧光差异双向凝胶电泳(2D DIGE)和DeCyder定量分析软件及HPLC-nESI-MS/MS技术,定量分析和鉴定了小鼠肝癌细... 详细信息

对2株来源于同一亲本细胞但淋巴道转移力显著不同的小鼠肝癌腹水型细胞株Hca-F(淋巴结转移率75%)和Hca-P(淋巴结转移率25%),采用荧光差异双向凝胶电泳(2D DIGE)和DeCyder定量分析软件及HPLC-nESI-MS/MS技术,定量分析和鉴定了小鼠肝癌细胞Hca-F和Hca-P的差异表达蛋白.结果显示,有116个蛋白质点表达水平存在明显差异(p<0.05),在Hca-F中表达上调蛋白质点62个,下调蛋白质点54个.对所有116个蛋白质点进行了电喷雾串联质谱鉴定,共鉴定出109种单一(Unique)蛋白.其中部分蛋白已被报道与不同类型肿瘤的发生、浸润和转移相关,多数蛋白质被首次报道与肝癌的淋巴道转移过程直接相关.

关键词：荧光差异双向凝胶电泳高压液相色谱-电喷雾质谱联用肝癌淋巴结转移

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SCN5A基因单核苷酸多态性位点H558R与慢型克山病合并高血压及其心电图特征的相关性研究

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中国地方病学杂志 2012年第4期31卷 377-380页

作者：姜山方传丰刘汉文舒畅程禾何娟李凤兰李晖哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 150081

目的研究克山病地区人群SCN5A基因单核苷酸多态性（SNP）位点H558R与慢型克山病合并高血压以及慢型克山病合并高血压患者心律失常发生之间的关系。方法2006—2010年，在黑龙江省齐齐哈尔市富裕县，选取39例慢型克山病合并高血压患者作... 详细信息

目的研究克山病地区人群SCN5A基因单核苷酸多态性（SNP）位点H558R与慢型克山病合并高血压以及慢型克山病合并高血压患者心律失常发生之间的关系。方法2006—2010年，在黑龙江省齐齐哈尔市富裕县，选取39例慢型克山病合并高血压患者作为病例组，63例高血压患者作为对照组，应用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR—SSCP）分析以及PCR直接测序技术。检测病例组与对照组人群SCN5A基因的Exon12SNP位点H558R，并检查病例组与对照组的心电图特征，采用病例对照研究分析方法分析H558R与慢型克山病合并高血压以及慢型克山病合并高血压患者心电图特征之间的相关性。结果H558RTC基因型可能会降低慢型克山病合并高血压的发病风险[比值比（OR）=0．288，95％可信区间（a）：0．104～0．794，P=0．016]以及降低慢型克山病合并高血压患者发生QRS间期延长的风险（OR=0．061，95％CI：0．006～0．612，P=0．017）。结论SCN5A基因SNP位点H558R可能是慢型克山病合并高血压以及慢型克山病合并高血压患者发生QRS间期延长的易感因子。

关键词：克山病单核苷酸多态性 SCN5A基因心率失常

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硒代半胱氨酸合成蛋白基因表达对过氧化氢介导的内皮细胞EVC-304损伤的影响

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中华地方病学杂志 2014年第4期33卷 383-387页

作者：赵汉东孙美娜李凤兰李晖哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 150081

目的：观察硒代半胱氨酸合成蛋白（SEPSECS）基因表达对过氧化氢（H2O2）介导的氧化应激状态下内皮细胞EVC-304损伤的影响。方法体外培养人内皮细胞EVC-304，对细胞进行转染处理，分为对照组、SEPSECS低表达组、空载体转染组、SEPSECS... 详细信息

目的：观察硒代半胱氨酸合成蛋白（SEPSECS）基因表达对过氧化氢（H2O2）介导的氧化应激状态下内皮细胞EVC-304损伤的影响。方法体外培养人内皮细胞EVC-304，对细胞进行转染处理，分为对照组、SEPSECS低表达组、空载体转染组、SEPSECS高表达组，分别用0、200、400、600、800、1000μmol/L H2O2处理细胞6 h。转染后，用实时荧光定量PCR 法检测各组细胞SEPSECS基因表达，蛋白质免疫印迹试验（Western blot）检测各组细胞SEPSECS蛋白表达，流式细胞仪对各组细胞进行细胞周期检测。H2O2处理后，用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒检测各组细胞丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量。结果转染后对照组、SEPSECS 低表达组、空载体转染组、SEPSECS 高表达组 EVC-304细胞 SEPSECS mRNA 表达分别为1.03±0.24、0.43±0.11、0.98±0.27、1.61±0.13，SEPSECS 蛋白表达分别为1.00±0.26、0.51±0.10、1.12±0.38、1.51±0.20。其中SEPSECS低表达组SEPSECS mRNA、蛋白表达与对照组比较，差异有统计学意义（P均〈0.05）；SEPSECS高表达组SEPSECS mRNA、蛋白表达与空载体转染组比较，差异有统计学意义（P均〈0.05）。转染后，各组细胞周期未见明显改变（P 均〉0.05）。经H2O2处理的各组EVC-304细胞MDA含量均随H2O2浓度的升高而升高。其中H2O2为800、1000μmol/L时，SEPSECS低表达组MDA含量[（15.8±0.5）、（19.6±1.5）μmol/L]明显高于对照组[（12.4±0.1）、（17.1±0.5）μmol/L，P均〈0.05]，SEPSECS高表达组MDA含量[（10.8±0.4）、（14.2±1.1）μmol/L]明显低于空载体转染组[（12.7±0.7）、（16.2±1.1）μmol/L，P均〈0.05]。经H2O2处理的各组EVC-304细胞SOD含量均随 H2O2浓度升高而降低，且 H2O2为800、1000μmol/L 时，SEPSECS 低表达组SOD 含量[（7.7±0.4）、（2.4±0.3）μmol/L]明显低于对照组[（10.0±1.0）、（6.0±0.6）μmol/L，P均〈0.05]， SEPSECS高表达组SOD含量[（11.3±0.6）、（12.7±1.6）μmol/L]明显高于空载体转染组[（9.2±0.6）、（6.7±0.2）μmol/L，P均〈0.05]。结论 SEPSECS基因表达对H2O2介导的氧化应激状态下内皮细胞EVC-304具有保护作用，能够显著降低氧化应激所致的细胞损伤。

关键词：硒代半胱氨酸合成蛋白过氧化氢细胞培养技术

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饮食低硒对小鼠肝、肾、脑组织硒结合蛋白1与硒蛋白P表达的影响

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中华地方病学杂志 2013年第6期32卷 636-638页

作者：孙美娜赵汉东张一彤李晖哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 150081

目的探讨饮食低硒对小鼠肝、肾、脑组织硒结合蛋白1（SBP1）和硒蛋白P（SelP）表达的影响。方法将C57BL／6小鼠按体质量随机分为4组：对照组和低硒4、12、24周组，每组10只，雌雄各半。对照组饲以普通饲料（含硒量为0．300mg／kg），饮... 详细信息

目的探讨饮食低硒对小鼠肝、肾、脑组织硒结合蛋白1（SBP1）和硒蛋白P（SelP）表达的影响。方法将C57BL／6小鼠按体质量随机分为4组：对照组和低硒4、12、24周组，每组10只，雌雄各半。对照组饲以普通饲料（含硒量为0．300mg／kg），饮用蒸馏水，第12周断颈处死；低硒各组饲以低硒饲料（含硒量为0．015mg／kg），分别于第4、12、24周时断颈处死。采用蛋白印迹（Western blot）法检测小鼠肝、肾、脑组织SBPl与SelP蛋白表达。结果低硒4、12、24周组小鼠肝组织中SBP1和SelP蛋白表达分别为0．11±0．01、0．36±0．01、0．59±0．02和0．41±0．01、0．39±0．02、0．25±0．02；肾脏组织中分别为0．60±0．03、0．20±0．02、0．03±0．01和O．88±0．01、0．73±0．03、0．85±0．02；脑组织中分别为0．54±0．03、0．11±0．01、0．01±0．01和0．50±0．02、0．49±0．03、0．38±0．02。低硒各组小鼠肝脏、肾脏、脑组织SBP1、SelP蛋白表达与对照组（1．00±0．00、1．00±0．00）比较明显降低（P均〈0．05），其中各脏器中SBPI的表达量随低硒喂养时间的延长各有不同．肝脏先降低后回升，肾脏和脑组织则持续降低。结论低硒饮食对小鼠肝、肾、脑组织内SelP和SBP1的表达量有一定的影响．

关键词：硒硒结合蛋白1 硒蛋白P

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低硒对小鼠心肌钾离子通道基因mRNA表达的影响．

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中华地方病学杂志 2014年第1期33卷 46-48页

作者：孙美娜李凤兰赵汉东李晖哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 150081

目的研究钾离子通道基因mRNA在低硒小鼠心肌组织中的表达。方法C57BL／6小鼠40只，雌雄各半，体质量18～22g，按体质量随机分为4组，每组10只小鼠（雌雄各半），其中低硒4周组、12周组、24周组分别采用低硒饲料（硒含量为0．004mg／kg... 详细信息

目的研究钾离子通道基因mRNA在低硒小鼠心肌组织中的表达。方法C57BL／6小鼠40只，雌雄各半，体质量18～22g，按体质量随机分为4组，每组10只小鼠（雌雄各半），其中低硒4周组、12周组、24周组分别采用低硒饲料（硒含量为0．004mg／kg）喂养4周、12周、24周，对照组则给予正常饲料（硒含量为0．256mg／kg）。将各组小鼠断颈处死，取小鼠心脏，Trizol法提取RNA，采用实时荧光定量PCR（reM—timePCR）方法检测钾离子通道基因（KCNA4、KCND2、KCND3、KCNEl、KCNE2、KCNJ2、KCNJl2、KCNQl）mRNA的表达。结果低硒4周组钾离子通道基因KCNA4、KCND2mRNA[（25．3±0．09）、（4．85±0．05）]表达高于对照组（1．00±0．00、1．00±0．00，P均〈0．05）；低硒24周组钾离子通道基因KCNJl2mRNA（22．7±0．10）表达高于对照组（P〈0．05）；KCND3、KCNEl、KCNE2、KCNJ2、KCNQlmRNA表达与对照组比较差异无统计学意义（P均〉0．05）。结论低硒能够影响小鼠心肌钾离子通道基因的表达。

关键词：硒小鼠钾离子通道

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免疫检查点程序性细胞死亡蛋白配体-1翻译后修饰及其在免疫治疗中的应用前景

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中国生物化学与分子生物学报 2021年第2期37卷 182-188页

作者：崔宇琦邹朝霞高旭哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150081

免疫检查点程序性细胞死亡蛋白配体-1(programmed cell death 1 ligand 1,PD-L1)是一种主要表达于肿瘤细胞表面的免疫抑制性分子,其可与T淋巴细胞表面的程序性细胞死亡蛋白-1(programmed cell death protein 1,PD-1)结合,抑制T淋巴细胞... 详细信息

免疫检查点程序性细胞死亡蛋白配体-1(programmed cell death 1 ligand 1,PD-L1)是一种主要表达于肿瘤细胞表面的免疫抑制性分子,其可与T淋巴细胞表面的程序性细胞死亡蛋白-1(programmed cell death protein 1,PD-1)结合,抑制T淋巴细胞的激活,发挥免疫抑制性功能。基于这一原理所开发的PD-1/PD-L1免疫阻断疗法,已在临床广泛应用于多种实体瘤的治疗,使诸多病人受益。与此同时,随着对PD-L1调控机制研究的深入,PD-L1的多种翻译后修饰形式陆续得到了鉴定,包括糖基化、磷酸化、泛素化和棕榈酰化等。研究表明,这些翻译后修饰过程可影响PD-L1的蛋白质稳定性与生理功能。因此,翻译后修饰成了PD-L1研究新的切入点。目前,PD-L1翻译后修饰靶向药物已在免疫治疗中展现出良好的应用前景。通过靶向PD-L1翻译后修饰过程,进而调控由PD-L1介导的肿瘤免疫逃逸,成了提高免疫治疗应答率的新思路和新策略。本文将对PD-L1翻译后修饰的研究进行系统总结,并陈述其在免疫治疗领域中的应用前景,希望为未来针对PD-L1翻译后修饰的研究提供理论支持。

关键词：程序性细胞死亡蛋白配体-1 翻译后修饰免疫治疗

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酶和核酶的词源学研究及现实意义

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第4期36卷 475-480页

作者：卜友泉重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016

酶学是生物化学与分子生物学的一个重要领域。酶绝大多数是蛋白质,少数是RNA,特称为核酶。本文结合酶学研究历史及最新进展,对酶和核酶的词源学进行研究。从术语内涵来讲,酶是细胞内催化特定化学反应的生物分子。作为一个重大发现,核酶... 详细信息

酶学是生物化学与分子生物学的一个重要领域。酶绝大多数是蛋白质,少数是RNA,特称为核酶。本文结合酶学研究历史及最新进展,对酶和核酶的词源学进行研究。从术语内涵来讲,酶是细胞内催化特定化学反应的生物分子。作为一个重大发现,核酶不仅对于探索生命演化具有重要理论意义,也是酶学理论的进一步拓展补充。核酶具有许多普通酶的一般特性,具有与蛋白质类酶类似的催化机制,遵守米氏动力学。国内生物化学与分子生物学学界对酶和核酶的含义长期存在分歧,词源学研究有助于厘清两者的联系与区别,有助于解决分歧、统一认识,在教学和学术交流中规范、正确地使用这两个术语。

关键词：酶核酶

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重组人成骨生长肽的表达、纯化和活性的研究

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中国生物化学与分子生物学报 2004年第4期20卷 467-472页

作者：余琼周凌云林雪松徐建永王淑静刘兴汉哈尔滨医科大学基础医学学院生物化学与分子生物学教研室

将人工合成的人成骨生长肽基因 (hOGPgene) ,与质粒pTYB2 重组 ,转化大肠杆菌E .coliBL2 1 (DE3) .经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,融合蛋白在E .coli中得到表达 .菌体经超声破碎 ,一步亲和层析纯化得到重组人成骨生长肽 (rec... 详细信息

将人工合成的人成骨生长肽基因 (hOGPgene) ,与质粒pTYB2 重组 ,转化大肠杆菌E .coliBL2 1 (DE3) .经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,融合蛋白在E .coli中得到表达 .菌体经超声破碎 ,一步亲和层析纯化得到重组人成骨生长肽 (recombinanthumanosteogenicgrowthpeptide ,rhOGP) .体外实验证明 :rhOGP对成纤维细胞 (NIH3T3)的增殖有促进作用 .体内实验证明 :rhOGP加速兔移植骨成活 ,使血清中碱性磷酸酶活性增高 ,骨钙素增高 .重组人成骨生长肽促进成骨。

关键词：成骨生长肽融合蛋白亲和层析活性成骨

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