铁蛋白具备独特的笼状结构、自组装特性、内在的肿瘤靶向性、良好的生物相容性以及易于规模化生产等优势,是一种具有良好转化前景的纳米药物载体.目前,关于铁蛋白装载抗肿瘤药物阿霉素(doxorubicin,Dox)的研究较多,装载策略包括被动装载和主动内化两类,其中,预先螯合金属离子形成"金属-阿霉素"复合物以促进其主动进入铁蛋白内腔的装载方法具有装载量高、杀伤效应强等特点,然而,此类方法仍存在铁蛋白回收率低、蛋白完整性受损等缺陷.为此,本文结合温度孵育法,利用人重组重链铁蛋白(human heavy chain ferritin,human HFn)发展了一种基于铁离子的"金属-阿霉素"装载新策略,成功构建了"铁蛋白-铁-阿霉素"(HFn(Fe-Dox),HFeD)药物递送系统,该系统具有高装载量(80-100个/HFn)、高包封率(50%-63%)和高蛋白回收率(80%-90%)的特点.同时,该策略很好地保留了铁蛋白的结构完整性、肿瘤靶向性和药物释放可控性,因而保证了HFeD对肿瘤细胞的特异靶向和杀伤.该方法的报道有望增加HFeD成药的可能性,推动铁蛋白药物载体的发展与应用.
目的探究针灸足三里穴(Stomach-36,ST36)通过调控外周免疫细胞及细胞因子对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)疾病的影响。方法对实验鼠随机分为两组,EAE组和针灸组,并且进行体重监测以及临床症状评估,苏木精伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)检测脊髓炎性细胞浸润以及免疫荧光检测脱髓鞘情况,流式细胞术检测T细胞亚群的比例,超敏多因子电化学发光技术(Meso scale discovery,MSD)检测外周血清中相关细胞因子的浓度。结果成功构建EAE小鼠模型并给予针灸治疗。临床评分显示,EAE组在第22天达到高峰期,发病分数为2.5分,针灸组在第24天达到高峰期,发病分数为2分。疾病起病时间统计结果显示,EAE组在第12天开始起病,针灸组在第17天开始起病,针灸组比EAE组的起病时间明显较晚。HE及免疫荧光检测结果显示,针灸组的脊髓炎性细胞浸润较少,髓鞘结构完整,边缘较光滑。流式细胞术实验结果显示,针灸组CD4^(+)IFN-γ^(+)T、CD4^(+)IL-17^(+)T细胞比例较EAE组显著下降,差异具有统计学意义[(0.49±0.10)%比(0.92±0.25)%,(0.21±0.05)%比(0.34±0.04)%,t值分别为2.91和3.70,P值均<0.05];针灸组CD4^(+)IL-4^(+)T、CD4^(+)Foxp3^(+)、CD8^(+)Foxp3^(+)细胞比例较EAE组明显上调,差异具有统计学意义[(0.78±0.22)%比(0.5±0.07)%,(1.38±0.23)%比(0.9±0.08)%,(0.38±0.12)%比(0.14±0.09)%,t值分别为2.55、3.35和4.16,P值均<0.05]。MSD检测外周血清细胞因子结果显示,针灸组抑炎性细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)-5和IL-16的浓度较EAE组明显上升,促炎性细胞因子干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的浓度较EAE组明显下降,差异均具有统计学意义[(4.53±0.95)pg/mL比(2.78±1.25)pg/mL,(2298.77±298.67)pg/mL比(1402.28±216.30)pg/mL,(6.6±0.548)pg/mL比(8.84±0.98)pg/mL,t值分别为9.00、4.84和3.57,P值均<0.05]。本研究实验结果显示,针灸治疗后抑制辅助性T细胞(helper T cell,Th)1/Th17并促进Th2的比例,同时上调调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的比例。针灸治疗后,促进抑炎因子IL-5,IL-16的表达,抑制促炎因子IFN-γ的表达。结论针灸ST36通过纠正T细胞亚群的失衡,调节细胞因子的表达,治疗缓解EAE疾病。
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