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MAPK通路主要激酶抑制剂对亚洲带绦虫感染乳猪肝细胞生长抑制率和凋亡率的影响

中国人兽共患病学报 2019年第9期35卷 797-804页

作者：门万琪杨汉蕾张科杨林许士刚牟荣贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵阳550025 贵州医科大学现代病原生物学特色重点实验室贵阳550025

目的了解MAPK特异性抑制剂干预后亚洲带绦虫感染乳猪肝细胞MAPK信号通路相关基因表达、细胞活力和细胞凋亡的变化。方法采集亚洲带绦虫成虫标本并收集虫卵制作悬液。将乳猪随机分为感染组、三种抑制剂干预组和正常对照组,感染组和抑制... 详细信息

目的了解MAPK特异性抑制剂干预后亚洲带绦虫感染乳猪肝细胞MAPK信号通路相关基因表达、细胞活力和细胞凋亡的变化。方法采集亚洲带绦虫成虫标本并收集虫卵制作悬液。将乳猪随机分为感染组、三种抑制剂干预组和正常对照组,感染组和抑制剂干预组均以定量虫卵15万个/头灌胃感染,灌胃后将抑制剂干预组乳猪分别腹腔注射U0126、SB203580和SP600125 1 mg/kg,隔天1次,连续7次。感染后第15 d麻醉处死各组乳猪获取肝脏。采用cck-8法和流式细胞仪分别检测肝细胞生长抑制率和肝细胞凋亡率,并用RT-PCR技术检测肝细胞ERK1、p38和JNK1基因mRNA的相对表达量。结果感染组和U0126、SB203580、SP600125干预组肝细胞生长抑制率分别为(23.1±1.26)%、(12.59±1.2)%、(16.48±0.7)%、(18.3±0.75)%,U0126组与感染组相比(t=9.223,P<0.05)、SB203580组与感染组相比为(t=11.532,P<0.05)、SP600125组与感染组相比(t=6.775,P<0.05),各干预组均较感染组的生长抑制率明显降低。与感染组相比,U0126干预组的肝细胞凋亡率与感染组相比增高(t=-5.934,P<0.001),SB203580干预组与感染组相比则降低(t=3.821,P<0.01),SP600125干预组与感染组相比(t=-1.545,P>0.05)无显著性差异。与感染组相比,U0126干预组(t=3.462,P<0.05)ERK1 mRNA表达量下调;SB203580干预组(t=3.267,P<0.05)p38 mRNA表达量下调;SP600125干预组(t=3.363,P<0.001)JNK1 mRNA的表达量下调。结论亚洲带绦虫感染乳猪后,MAPK特异性抑制剂可以通过影响乳猪肝细胞MAPK相关基因的mRNA水平减轻肝细胞的生长抑制和凋亡。

关键词：亚洲带绦虫乳猪肝脏丝裂原活化蛋白激酶 MAPK抑制剂

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多房棘球绦虫severin基因过表达慢病毒载体的构建及对人正常肝细胞侵袭、迁移能力的影响

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中国病原生物学杂志 2019年第3期14卷 304-310页

作者：王芬赵明才胡容王洁王明霞黎昆李龙叶彬刘家瑞遂宁市中心医院检验科四川遂宁629000 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室

目的构建多房棘球绦虫肌切蛋白(Em severin)基因过表达慢病毒载体,并分析其对人正常肝细胞L02侵袭、迁移能力的影响。方法扩增Em severin基因片段,并将其插入慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP,构建重组慢病毒pCDH-Em severin。用pCDH-... 详细信息

目的构建多房棘球绦虫肌切蛋白(Em severin)基因过表达慢病毒载体,并分析其对人正常肝细胞L02侵袭、迁移能力的影响。方法扩增Em severin基因片段,并将其插入慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP,构建重组慢病毒pCDH-Em severin。用pCDH-Em severin感染293T细胞,进行病毒包装并检测病毒滴度。以MOI=50的慢病毒感染人正常肝细胞L02,采用RT-qPCR和Western blot检测Em severin mRNA和蛋白表达水平,并通过Transwell和划痕试验检测过表达Em severin对L02细胞侵袭、迁移能力的影响。结果成功构建重组慢病毒pCDH-Em severin,感染293T细胞并进行包装后,获得滴度为1×10~8 TU/ml的pCDH-Em severin慢病毒。RT-qPCR和Western blot检测pCDH-Em severin感染组Em severin mRNA和蛋白表达水平显著高于空白组和空载病毒组(F值分别为98.731和86.074,P<0.05)。Transwell和划痕试验结果表明,过表达Em severin可增强人正常肝细胞L02的侵袭、迁移能力(F值分别为15.439和53.082,P<0.05)。结论成功构建重组慢病毒pCDH-Em severin,过表达Em severin可增强人正常肝细胞L02的侵袭、迁移能力,可为研究Em severin在泡球蚴的侵袭。

关键词：多房棘球绦虫泡球蚴病肌切蛋白慢病毒过表达

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细粒棘球绦虫Calpain蛋白的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2019年第10期14卷 1171-1177,1193页

作者：王芬陈林赵明才刘家瑞黎昆李龙胡容遂宁市中心医院检验科四川遂宁629000 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室

目的采用生物信息学软件分析细粒棘球绦虫Calpain蛋白(EgCalpain)的结构与抗原表位,为研制基于Calpain的棘球蚴病疫苗提供依据。方法从NCBI核苷酸和蛋白质数据库下载EgCalpain的核苷酸和氨基酸序列,采用ProtParam、SignalP、TMHMM、Cell... 详细信息

目的采用生物信息学软件分析细粒棘球绦虫Calpain蛋白(EgCalpain)的结构与抗原表位,为研制基于Calpain的棘球蚴病疫苗提供依据。方法从NCBI核苷酸和蛋白质数据库下载EgCalpain的核苷酸和氨基酸序列,采用ProtParam、SignalP、TMHMM、Cell-Ploc等在线分析程序,结合DNAStar、DNAMAN等生物信息学软件分析、预测EgCalpain蛋白的理化性质、信号肽序列、跨膜结构域、亚细胞定位及抗原表位;采用Clustal omega程序对不同物种来源的Calpain蛋白进行多序列比对,并通过MEGA 6.06程序构建邻接树。结果 EgCalpain基因全长7 734 bp,包含15个外显子和14个内含子;EgCalpain基因编码蛋白由707个氨基酸组成,是一种稳定蛋白,不含有信号肽序列和跨膜区域,可能定位于细胞质。EgCalpain蛋白含有5个T、B细胞联合表位,分别为267-299 aa、328-356 aa、486-507 aa、546-567 aa、648-662 aa。EgCalpain蛋白与曼氏血吸虫Calpain的亲缘关系较近,与人、牛、羊Calpain的亲缘关系较远。结论 EgCalpain蛋白含有5个T、B细胞联合表位且与人、牛、羊Calpain的亲缘关系较远,作为棘球蚴病疫苗进行免疫时,可能具有良好的免疫保护作用。

关键词：细粒棘球绦虫钙蛋白酶生物信息学抗原表位

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多房棘球绦虫SEVERIN蛋白基因的克隆及T、B细胞表位预测

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中国病原生物学杂志 2019年第2期14卷 171-177页

作者：王芬赵明才胡容王洁王明霞叶彬刘家瑞遂宁市中心医院检验科四川遂宁629000 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室

目的采用RT-PCR方法克隆多房棘球绦虫SEVERIN蛋白基因(EmSEVERIN),并进行T、B细胞表位等生物信息学分析。方法根据细粒棘球绦虫SEVERIN基因序列设计特异引物,以多房棘球绦虫原头蚴cDNA为模板扩增目的基因并测序。利用ProtParam、SMART、... 详细信息

目的采用RT-PCR方法克隆多房棘球绦虫SEVERIN蛋白基因(EmSEVERIN),并进行T、B细胞表位等生物信息学分析。方法根据细粒棘球绦虫SEVERIN基因序列设计特异引物,以多房棘球绦虫原头蚴cDNA为模板扩增目的基因并测序。利用ProtParam、SMART、MotifScan、SWISS-MODEL等在线分析程序,结合DNAStar、DNAMAN等生物信息学软件分析、预测Emseverin基因编码蛋白的理化性质、保守结构域、翻译后修饰位点、三维结构及T、B细胞表位。结果成功克隆了长度为1 002 bp的EmSEVERIN基因,该基因编码蛋白由333 aa组成,等电点为6.10,含有3个类凝溶胶蛋白结构域,属于凝溶胶蛋白超家族。多房棘球绦虫SEVERIN蛋白含有5个T、B细胞联合表位,分别为34-49 aa、78-97 aa、160-187 aa、251-272 aa、295-314 aa。结论通过生物信息学方法筛选出多房棘球绦虫SEVERIN蛋白的5个T、B细胞联合表位,为抗棘球蚴病短肽疫苗的研制提供了理论基础。

关键词：多房棘球绦虫肌切蛋白基因克隆生物信息学表位

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伊蚊唾液特异性rAlb-34k2蛋白促进DENV-2早期感染BHK-21细胞作用研究

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中国病原生物学杂志 2019年第5期14卷 530-533,538页

作者：徐倩田炎珅朱亚妮赵久刚李永念吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州医科大学现代病原生物学特色重点实验室贵州医科大学微生物与生化药学工程中心

目的探讨白纹伊蚊特异性rAlb-34k2蛋白与登革病毒(DENV)多种靶细胞粘附后促进DENV-2感染作用。方法1)采用间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白24 h内对DENV-2感染BHK-21细胞的作用。2)Western blot和间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白与BHK... 详细信息

目的探讨白纹伊蚊特异性rAlb-34k2蛋白与登革病毒(DENV)多种靶细胞粘附后促进DENV-2感染作用。方法1)采用间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白24 h内对DENV-2感染BHK-21细胞的作用。2)Western blot和间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白与BHK-21、HepG2、HaCat细胞的粘附作用以及兔抗rAlb-34k2抗体的阻断效应。结果1)免疫荧光法检测结果显示,热灭活rAlb-34k2蛋白处理组感染比值为0.40±0.023,未灭活组0.54±0.029,差异有统计学意义(P=0.001 1)。2)Western blot和免疫荧光法检测显示rAlb-34k2蛋白与BHK-21、HepG2、HaCat细胞均可发生粘附,且与BHK-21细胞的粘附具有剂量依赖性;特异性抗体不能阻断rAlb-34k2蛋白与BHK-21、HepG2细胞的粘附效应。结论rAlb-34k2蛋白可与BHK-21等DENV多种靶细胞发生粘附作用,具有介导DENV-2吸附细胞,促进病毒入侵宿主的潜能。

关键词：白纹伊蚊蚊唾液蛋白宿主细胞虫媒病毒粘附作用

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Akt/mTOR信号通路与自噬及寄生虫的关系

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中国病原生物学杂志 2019年第11期14卷 1358-1360页

作者：马志强李树德王文林昆明医科大学基础医学院昆明市第三人民医院检验科昆明医科大学基础医学院病原生物学教研室云南昆明650000

自噬是一种细胞内的自我吞噬现象,广泛存在于真核细胞。其在维持细胞稳态和细胞适应环境变化等过程中发挥着重要的作用。同时,作为一把双刃剑,自噬对病原微生物的发生发展既有促进作用,又有抑制作用。Akt/mTOR信号通路传导途径由蛋白激... 详细信息

自噬是一种细胞内的自我吞噬现象,广泛存在于真核细胞。其在维持细胞稳态和细胞适应环境变化等过程中发挥着重要的作用。同时,作为一把双刃剑,自噬对病原微生物的发生发展既有促进作用,又有抑制作用。Akt/mTOR信号通路传导途径由蛋白激酶B(PKB/Akt)和哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)组成。本文探讨该通路在对寄生虫感染引起的肺组织细胞发生自噬,综述自噬在Akt/mTOR信号通路中与寄生虫的发生发展关系。

关键词：自噬 Akt/mTOR信号通路寄生虫综述

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细胞焦亡发生机制及其与相关心脑血管疾病的研究进展

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2021年第10期 514-518页

作者：文洪勇吴咏芳王红燕刘启兵王锐宁夏医科大学药理学系·生育力保持教育部重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学病原生物学与免疫学系宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院宁夏人类精子库宁夏银川750004 海南医学院基础医学与生命科学学院药理学教研室海南海口571199

一种新的促炎程序性细胞死亡方式——细胞焦亡,是研究者们最有兴趣且最新的研究热点,细胞焦亡的形态学变化、产生体制、还有其他不同疾病的关联与细胞凋亡、细胞坏死明显不一样。细胞焦亡不但大面积参入感染性疾病、神经系统有关疾病的... 详细信息

一种新的促炎程序性细胞死亡方式——细胞焦亡,是研究者们最有兴趣且最新的研究热点,细胞焦亡的形态学变化、产生体制、还有其他不同疾病的关联与细胞凋亡、细胞坏死明显不一样。细胞焦亡不但大面积参入感染性疾病、神经系统有关疾病的进展,而且与动脉粥样硬化性疾病、血管痴呆病等心脑血管疾病的发生发展密切相关,并发挥重要作用。因此它的发生机制及其抑制剂的深入研究有助于认识其在相关疾病发生发展和缓解疾病的作用,为临床防治提供新思路,为病人提供更多的选择。

关键词：细胞焦亡炎症小体 NLRP3 caspase-1 神经系统动脉粥样硬化

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络氨酸激酶受体B在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

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四川医学 2021年第10期42卷 994-999页

作者：张静邹武君胡晓艳姜梁西南医科大学附属医院耳鼻咽喉头颈外科四川泸州646000 成都市第二人民医院耳鼻咽喉科四川成都610017 西南医科大学基础医学院病原生物学教研室四川泸州646000

目的探讨络氨酸激酶受体B(TrkB)在喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中的表达及临床意义。方法用RT-PCR、Western Blot和免疫组化法检测69例喉癌组织及32例癌旁正常组织中TrkB mRNA和蛋白的表达,并分析TrkB、无复发生存时间(RFS)、总生存时间(OS)... 详细信息

目的探讨络氨酸激酶受体B(TrkB)在喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中的表达及临床意义。方法用RT-PCR、Western Blot和免疫组化法检测69例喉癌组织及32例癌旁正常组织中TrkB mRNA和蛋白的表达,并分析TrkB、无复发生存时间(RFS)、总生存时间(OS)与临床病理参数的关系。运用Cox比例风险模型分析TrkB是否为喉癌的独立预后指标。结果RT-PCR及Western Blot检测结果表明TrkB mRNA和蛋白在LSCC组织明显高表达(P<0.01)。免疫组化检测结果表明LSCC组织中TrkB蛋白的表达例数明显较多(P<0.01)。TrkB表达与患者吸烟史、临床分期和淋巴结转移有关。LSCC患者的RFS与年龄、N分期、M分期及TrkB表达有关;OS与M分期和TrkB表达有关;TrkB高表达患者的RFS和OS存在明显差异。结论TrkB在LSCC组织中的呈高表达,且与患者的多个病理参数有关,可作为预测LSCC患者的独立预后指标。

关键词：喉鳞状细胞癌络氨酸激酶受体B 临床特征预后

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lncRNA NKILA靶向miR-1236-3p对脂多糖诱导的支气管上皮细胞损伤的影响

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第三军医大学学报 2020年第16期42卷 1648-1654页

作者：杨娟马莉郭亚楠朱孟沙河北省石家庄市第四医院儿保母乳门诊石家庄050000 河北省儿童医院新生儿科石家庄050000 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 河北省儿童医院重症监护二科石家庄050000

目的研究lncRNA NKILA对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,16HBE)损伤的影响及潜在机制。方法用50μg/mL LPS诱导支气管上皮细胞16HBE细胞24 h,qRT-PCR检测细胞中lncRNA NKILA和miR-1236-3p的表达。在16HBE细胞中转染pcDNA-NKILA和anti-miR-1236-3p,检测过表达lncRNA NKILA和干扰miR-1236-3p对LPS诱导的16HBE细胞损伤的影响,流式细胞术和Western blot分别检测凋亡率及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达,ELISA法检测LPS诱导后细胞上清中白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素13(interleukin 13,IL-13)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平;双荧光素酶报告系统验证lncRNA NKILA与miR-1236-3p的靶向关系。结果与对照组相比,LPS诱导的支气管上皮细胞16HBE中lncRNA NKILA和抗凋亡蛋白Bcl-2含量降低,miR-1236-3p和凋亡蛋白Bax的含量升高,细胞凋亡率和炎症因子IL-6、IL-13和TNF-α含量均显著升高,均具有统计学意义(P<0.05);过表达lncRNA NKILA和干扰miR-1236-3p均可减轻LPS诱导的16HBE细胞炎症损伤,抑制细胞凋亡;lncRNA NKILA靶向负调控miR-1236-3p的表达;过表达miR-1236-3p可逆转过表达lncRNA NKILA对LPS诱导的16HBE细胞炎症和凋亡的作用。结论lncRNA NKILA通过靶向负调控miR-1236-3p的表达,减轻LPS诱导的支气管上皮细胞16HBE的炎症因子释放和凋亡。

关键词：支气管上皮细胞 16HBE 脂多糖 lncRNA NKILA miR-1236-3p 损伤凋亡

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乳酸脱氢酶抑制剂Galloflavin对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

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安徽医科大学学报 2019年第8期54卷 1247-1251,1257页

作者：朱宁束军张梅沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽重点实验室(安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室) 合肥230022

目的探讨不同浓度乳酸脱氢酶抑制剂Galloflavin(GF)对肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法体外培养肺腺癌A549细胞,实验分为对照组(无GF处理组)和实验组(GF处理组,浓度分别为12.5、25、50、100μmol/L),分别使用CCK-8、... 详细信息

目的探讨不同浓度乳酸脱氢酶抑制剂Galloflavin(GF)对肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法体外培养肺腺癌A549细胞,实验分为对照组(无GF处理组)和实验组(GF处理组,浓度分别为12.5、25、50、100μmol/L),分别使用CCK-8、划痕实验、Transwell法检测不同浓度GF在不同作用时间条件下对A549细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响;分别使用乳酸脱氢酶活性检测试剂盒、乳酸定量试剂盒检测不同浓度GF对乳酸脱氢酶活性、乳酸生成量的影响。结果 CCK-8结果表明,GF对A549细胞具有增殖抑制作用,并且在一定浓度和时间范围内呈现出依赖性(P<0.05)。划痕实验结果表明,实验组细胞迁移率小于对照组(P<0.05),随着GF浓度的增加,迁移率逐渐降低(P<0.05)。Transwell结果表明,实验组细胞侵袭细胞数小于对照组(P<0.05),随着GF浓度的增加,侵袭细胞数逐渐减少(P<0.05)。乳酸脱氢酶活性检测结果表明,实验组乳酸脱氢酶活性较对照组显著降低(P<0.05),随着GF浓度的增加,乳酸脱氢酶活性逐渐降低(P<0.05)。乳酸检测结果表明,实验组乳酸生成量较对照组显著减少(P<0.05),随着GF浓度的增加,乳酸生成量逐渐减少(P<0.05)。结论 GF在体外能够抑制A549细胞的增殖、迁移及侵袭,其机制可能是通过抑制乳酸脱氢酶活性从而抑制肺癌细胞糖酵解。

关键词： Galloflavin 肺腺癌增殖迁移侵袭

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