检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2021年第8期37卷 703-708页

作者：林家锋陶晓莉陆恒章于美玲李婷婷李藤菲程美慧李永刚锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室锦州121000

目的为制备NSP5多克隆抗体及进一步研究NSP5的功能和在轮状病毒复制中的作用奠定基础。方法利用分子克隆的技术构建出原核表达蛋白质粒NSP5-pGEX-6P-1和真核表达质粒NSP5-pFLAG-CMV-3,其中NSP5-pFLAG-CMV-3转染细胞后通过Western Blot... 详细信息

目的为制备NSP5多克隆抗体及进一步研究NSP5的功能和在轮状病毒复制中的作用奠定基础。方法利用分子克隆的技术构建出原核表达蛋白质粒NSP5-pGEX-6P-1和真核表达质粒NSP5-pFLAG-CMV-3,其中NSP5-pFLAG-CMV-3转染细胞后通过Western Blot和间接免疫荧光法观测NSP5在293T细胞里的表达和定位;NSP5-pGEX-6P-1经转化*** BL21(DE3)后从IPTG浓度、温度及历经时间3个方面摸索出最优化的诱导蛋白表达条件,并经GST琼脂糖树脂纯化蛋白且用SDS-PAGE和Western Blot进行鉴定。结果构建了真核表达载体NSP5-pFLAG-CMV-3和原核表达载体NSP5-pGEX-6P-1。经NSP5-pFLAG-CMV-3转染后的293T细胞通过Western Blot验证NSP5蛋白在细胞中成功表达,间接免疫荧光观察到重组蛋白在细胞质中富集。37℃、8 h、0.4 mmol/L IPTG诱导是NSP5-pGEX-6P-1蛋白表达的最适条件,且以包涵体形式汇聚在沉淀中进行表达。SDS-PAGE和Western Blot表明重组蛋白纯化成功。结论成功构建NSP5重组表达系统,成功优化了NSP5蛋白诱导表达的条件并纯化蛋白。

关键词：轮状病毒 NSP5 基因重组蛋白表达蛋白纯化

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bFGF促进肝癌Bel-7402细胞增殖的信号转导机制

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中国肿瘤临床 2006年第5期33卷 256-259页

作者：刘萍孙黎光唐玉海李新鸣中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室中国医科大学基础医学院病原生物学教研室沈阳市110001

目的:分析肝癌细胞系Bel-7402中Ras-Raf-ERK1/2途径介导的bFGF对细胞周期素E(cyclinE)表达及细胞增殖的影响,以探讨肝癌细胞增殖的信号转导机制。方法:bFGF处理后用流式细胞术检测细胞增殖情况;Western印迹检测ERK1/2激酶的活化;RT-RCR... 详细信息

目的:分析肝癌细胞系Bel-7402中Ras-Raf-ERK1/2途径介导的bFGF对细胞周期素E(cyclinE)表达及细胞增殖的影响,以探讨肝癌细胞增殖的信号转导机制。方法:bFGF处理后用流式细胞术检测细胞增殖情况;Western印迹检测ERK1/2激酶的活化;RT-RCR方法检测cyclinE的基因表达。结果:FCM结果表明bFGF诱导细胞进入S期(27.49%±0.72%→42.45%±1.06%);bFGF时、量效依赖性地诱导Bel-7402细胞ERK1/2活性增高和cy-clinEmRNA表达。25ng/mlbFGF作用Bel-7402细胞10minERK1/2活性达高峰为对照组的3.84倍,作用8h后cyclinEmRNA表达达高峰为对照组的5.15倍;MEK1抑制剂PD98059可抑制bFGF的这些作用。结论:Ras-Raf-ERK1/2途径介导bFGF对cyclinEmRNA表达的诱导进而促进Bel-7402细胞的细胞周期进程,在肝癌增殖过程中bFGF信号转导发挥了重要的作用。

关键词：肝癌碱性成纤维细胞生长因子细胞外信号调节蛋白澈酶细胞周期素E 信号转导

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基于16S rRNA测序分析两种呼肠孤病毒对小鼠肠道菌群的影响

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中国实验动物学报 2022年第1期30卷 100-106页

作者：王诗雨林家锋蒋欣如孙淼王颖陶晓莉锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室辽宁锦州121000

目的探究T1L和NBV两种呼肠孤病毒对小鼠肠道菌群结构的影响。方法将25只小鼠随机分为5组(对照组、NBV滴鼻组、NBV灌胃组、T1L滴鼻组、T1L灌胃组),每组5只。对照组用PBS灌胃,其余组别均用2×10^(7) PFU/mL病毒滴度感染小鼠。7 d后采... 详细信息

目的探究T1L和NBV两种呼肠孤病毒对小鼠肠道菌群结构的影响。方法将25只小鼠随机分为5组(对照组、NBV滴鼻组、NBV灌胃组、T1L滴鼻组、T1L灌胃组),每组5只。对照组用PBS灌胃,其余组别均用2×10^(7) PFU/mL病毒滴度感染小鼠。7 d后采集小鼠粪便,从每组5个样本中选出粪便重量较重的3个样本,对粪便DNA进行V3+V4可变区特异性扩增,运用16S rRNA测序分析小鼠粪便中菌群的丰度、多样性及物种组成结构。结果T1L和NBV灌毒后的小鼠肠道菌群丰度和多样性与对照组相比有所下降,且T1L滴鼻组下降最为显著(P<0.05);与NBV灌胃组相比,NBV滴鼻组的菌群丰度和多样性增加显著(P<0.05)。在门的级别上,T1L和NBV灌胃组中厚壁菌(Firmicutes)丰度明显减少,T1L和NBV滴鼻组中拟杆菌(Bacteroidetes)丰度明显减少;在属的级别上,T1L滴鼻组、T1L灌胃组和NBV灌胃组中罗姆布茨菌(Romboutsia)丰度明显减少,T1L滴鼻组中别样杆菌(Alistipes)丰度明显增加(P<0.05)。结论T1L和NBV感染小鼠会降低菌群的丰度和多样性,可能通过有益菌减少或致病菌增多来破坏菌群平衡。此外,病毒的感染方式不同,对菌群的影响也有所不同。

关键词：呼肠孤病毒 16S rRNA 肠道菌群感染方式

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肺炎支原体重组P1蛋白多克隆抗体的制备及纯化

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中国生物制品学杂志 2011年第10期24卷 1208-1210页

作者：曾晶晶王舰赵芝娜刘忠顺董占双王桂珍中国医科大学基础医学院病原生物学教研室沈阳110001

目的制备肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)重组P1蛋白多克隆抗体,为Mp抗原诊断试剂的制备奠定基础。方法用Mp重组P1蛋白免疫家兔,ELISA法测定免疫血清抗体效价;硫酸铵沉淀及离子交换层析法纯化抗体;紫外分光光度法测定抗体的浓度;S... 详细信息

目的制备肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)重组P1蛋白多克隆抗体,为Mp抗原诊断试剂的制备奠定基础。方法用Mp重组P1蛋白免疫家兔,ELISA法测定免疫血清抗体效价;硫酸铵沉淀及离子交换层析法纯化抗体;紫外分光光度法测定抗体的浓度;SDS-PAGE分析抗体的纯度;量子点标记纯化抗体,分析抗体的免疫活性;直接免疫荧光法检测抗体的特异性。结果重组P1蛋白兔免疫血清抗体效价为1∶25 600;纯化的抗体浓度为3.689μg/μl;SDS-PAGE显示相对分子质量58 000的重链条带;用量子点标记纯化的抗体仍保持较高的免疫活性,与其他呼吸道常见病原菌均未发生特异性结合。结论获得的纯化Mp P1蛋白IgG抗体具有较高的免疫活性和特异性,可用于临床Mp感染的抗原诊断。

关键词：支原体,肺炎 P1蛋白多克隆抗体

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p62基因缺失对人脂肪间充质干细胞成脂的促进作用

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吉林大学学报（医学版） 2020年第5期46卷 979-984,I0003,I0004页

作者：曾瑞霞张轶博锦州医科大学基础医学院解剖学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室辽宁锦州121001

目的:探讨p62基因缺失对人脂肪间充质干细胞(hADSCs)自噬活性的影响,阐明脂肪分化的分子机制。方法:应用Ⅰ型胶原酶消化法从人大腿皮下脂肪抽吸液中分离培养hADSCs,使用80μmol·L-1油酸(OA)联合地塞米松和胰岛素对hADSCs进行成脂诱... 详细信息

目的:探讨p62基因缺失对人脂肪间充质干细胞(hADSCs)自噬活性的影响,阐明脂肪分化的分子机制。方法:应用Ⅰ型胶原酶消化法从人大腿皮下脂肪抽吸液中分离培养hADSCs,使用80μmol·L-1油酸(OA)联合地塞米松和胰岛素对hADSCs进行成脂诱导;将hADSCs分为对照组和p62基因缺失组,p62基因缺失组hADSCs转染p62 shRNA慢病毒载体,对照组hADSCs转染hADSCs空载体。采用CCK-8实验绘制2组细胞的生长曲线并观察细胞增殖活性变化;应用尼罗红染色观察脂滴的形成(尼罗红脂滴染色阳性细胞数),Western blotting法检测成脂标志转录因子C/EBPα和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型/微管相关蛋白1轻链3Ⅰ型(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)蛋白表达,磺酰成二胺(MDC)染色检测2组细胞成脂中的自噬活性(MDC染色阳性细胞数),采用LC3与Mitotracker Red荧光共定位检测2组细胞的线粒体自噬活性,使用环孢菌素A(CsA)分别抑制2组细胞线粒体自噬活性并进行成脂诱导,光镜下计数含脂滴细胞数。结果:分离培养的细胞呈多角形或梭形,传代后细胞呈漩涡状排列;OA诱导hADSCs成脂后,细胞内有大量脂滴形成。CCK-8实验,在培养6 d后p62基因缺失组细胞增殖活性较对照组明显降低(P<0.01)。2组细胞诱导成脂后,与对照组比较,p62基因缺失组hADSCs中尼罗红脂滴染色阳性细胞数增多,C/EBPα蛋白表达水平升高(P<0.01),MDC染色阳性细胞数明显升高(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平升高(P<0.01),细胞中LC3的点状化和颗粒化增多,与线粒体的共定位现象增加。使用CsA抑制线粒体自噬后,光镜下观察,p62基因缺失组含脂滴细胞数降低到与对照组接近的水平。结论:p62基因缺失可通过增强总自噬及线粒体自噬促进hADSCs的成脂。

关键词：脂肪间充质干细胞成脂油酸细胞自噬

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新布尼亚病毒真核表达载体的构建及表达

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中国人兽共患病学报 2020年第4期36卷 280-284页

作者：窦丽丽陶晓莉王晓芳李婷婷李永刚锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室锦州121000

目的探究SFTSV-NSs基因的结构和功能以及病毒在感染细胞过程中与宿主的相互作用,通过构建SFTSV-NSs真核表达载体SFTSV-NSs-FLAG,并将其转染进293细胞内,为进一步研究SFTSV-NSs基因的结构和功能奠定基础。方法利用RT-PCR扩增SFTSV-NSs基... 详细信息

目的探究SFTSV-NSs基因的结构和功能以及病毒在感染细胞过程中与宿主的相互作用,通过构建SFTSV-NSs真核表达载体SFTSV-NSs-FLAG,并将其转染进293细胞内,为进一步研究SFTSV-NSs基因的结构和功能奠定基础。方法利用RT-PCR扩增SFTSV-NSs基因序列并测序,并将纯化得到的SFTSV-NSs cDNA片段连接到pFLAG-CMV-3载体,通过EcoRI/BamHI双酶切鉴定重组质粒。将重组表达体pSFTSV-NSs-FLAG导入293细胞中,共聚焦显微镜下观察SFTSV-NSs在细胞中的定位、Western Blot检测SFTSV-NSs蛋白在293细胞中的表达情况。结果成功克隆测序SFTSV-NSs基因;成功构建SFTSV-NSs真核表达载体pSFTSV-NSs-FLAG,并将其转染到293细胞中。在293细胞中的表达检测结果显示共聚焦显微镜下观察重组体主要集中在细胞质中,并形成类包涵体样结构;且Western Blot检测结果显示SFTSV-NSs蛋白在293细胞中表达。结论为进一步研究SFTSV-NSs基因的结构和功能以及病毒在感染细胞过程中与宿主的相互作用提供新思路。

关键词：新布尼亚病毒载体构建 293细胞表达

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呼肠孤病毒空斑检测方法建立

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中国人兽共患病学报 2020年第9期36卷 735-739页

作者：窦丽丽陶晓莉李婷婷李藤菲林家锋李永刚锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室锦州121000

目的建立呼肠孤病毒空斑检测方法,为进一步研究该病毒奠定基础。方法通过Western Blot、免疫荧光检测纳尔逊海湾正呼肠孤病毒Miyazaki病毒株感染L929细胞和BSR细胞情况,病毒RNA水平凝胶电泳验证Miyazaki病毒株核酸成分。建立呼肠孤病毒... 详细信息

目的建立呼肠孤病毒空斑检测方法,为进一步研究该病毒奠定基础。方法通过Western Blot、免疫荧光检测纳尔逊海湾正呼肠孤病毒Miyazaki病毒株感染L929细胞和BSR细胞情况,病毒RNA水平凝胶电泳验证Miyazaki病毒株核酸成分。建立呼肠孤病毒空斑检测方法,计算病毒滴度。结果Miyazaki病毒株能成功感染L929细胞和BSR细胞,水平凝胶电泳验证病毒株核酸成分正确,病毒株感染的L929细胞出现空斑,计算得出病毒滴度结果为2.2×108 PFU/mL。结论呼肠孤病毒空斑检测方法成功建立,该方法可以形成清晰可见的空斑,能稳定地对病毒滴度进行定量测定,为进一步研究呼肠孤病毒提供帮助。

关键词：纳尔逊海湾正呼肠孤病毒 L929细胞 BSR细胞空斑试验病毒滴度检测

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酪酸梭菌诱导结肠癌SW-480细胞凋亡及作用机制

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第三军医大学学报 2013年第22期35卷 2448-2451页

作者：杨金梅张德纯李科刘胜男朱辉重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016

目的探讨酪酸梭菌(Clostridium butyricum,CB)诱导人结肠癌SW-480细胞凋亡的作用及机制。方法采用不同浓度的酪酸梭菌(1.5×103、1.5×104、1.5×105、1.5×106、1.5×107、1.5×108CFU/mL)在不同作用时间(24... 详细信息

目的探讨酪酸梭菌(Clostridium butyricum,CB)诱导人结肠癌SW-480细胞凋亡的作用及机制。方法采用不同浓度的酪酸梭菌(1.5×103、1.5×104、1.5×105、1.5×106、1.5×107、1.5×108CFU/mL)在不同作用时间(24、48、72、96 h)处理结肠癌SW-480细胞后,CCK8法检测CB对SW-480细胞的增殖抑制。电镜观察CB对SW-480细胞形态的影响。Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡。Caspase试剂盒检测SW-480细胞中Caspase-3和Caspase-9的活性。Western blot法检测SW-480细胞Bax和Bcl-2凋亡蛋白表达的变化。结果酪酸梭菌对SW-480细胞的生长抑制作用呈明显的时间-剂量依赖性;菌液浓度为1.5×107CFU/mL和1.5×108CFU/mL的酪酸梭菌处理后的SW-480细胞形成典型的凋亡小体;酪酸梭菌(1.5×107CFU/mL和1.5×108CFU/mL)处理能显著增强SW-480细胞Caspase-3和Caspase-9的活性,促进SW-480细胞凋亡(P<0.01);随着菌液浓度的增加,凋亡蛋白Bax的表达增强,而抑凋亡蛋白Bcl-2的表达减弱。结论酪酸梭菌可诱导SW-480细胞凋亡,其作用机制与凋亡相关基因Bax、Bcl-2和caspase-3、caspase-9的表达有关。

关键词：酪酸梭菌结肠癌 SW-480细胞凋亡

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饮食低硒对小鼠肝、肾、脑组织硒结合蛋白1与硒蛋白P表达的影响

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中华地方病学杂志 2013年第6期32卷 636-638页

作者：孙美娜赵汉东张一彤李晖哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 150081

目的探讨饮食低硒对小鼠肝、肾、脑组织硒结合蛋白1（SBP1）和硒蛋白P（SelP）表达的影响。方法将C57BL／6小鼠按体质量随机分为4组：对照组和低硒4、12、24周组，每组10只，雌雄各半。对照组饲以普通饲料（含硒量为0．300mg／kg），饮... 详细信息

目的探讨饮食低硒对小鼠肝、肾、脑组织硒结合蛋白1（SBP1）和硒蛋白P（SelP）表达的影响。方法将C57BL／6小鼠按体质量随机分为4组：对照组和低硒4、12、24周组，每组10只，雌雄各半。对照组饲以普通饲料（含硒量为0．300mg／kg），饮用蒸馏水，第12周断颈处死；低硒各组饲以低硒饲料（含硒量为0．015mg／kg），分别于第4、12、24周时断颈处死。采用蛋白印迹（Western blot）法检测小鼠肝、肾、脑组织SBPl与SelP蛋白表达。结果低硒4、12、24周组小鼠肝组织中SBP1和SelP蛋白表达分别为0．11±0．01、0．36±0．01、0．59±0．02和0．41±0．01、0．39±0．02、0．25±0．02；肾脏组织中分别为0．60±0．03、0．20±0．02、0．03±0．01和O．88±0．01、0．73±0．03、0．85±0．02；脑组织中分别为0．54±0．03、0．11±0．01、0．01±0．01和0．50±0．02、0．49±0．03、0．38±0．02。低硒各组小鼠肝脏、肾脏、脑组织SBP1、SelP蛋白表达与对照组（1．00±0．00、1．00±0．00）比较明显降低（P均〈0．05），其中各脏器中SBPI的表达量随低硒喂养时间的延长各有不同．肝脏先降低后回升，肾脏和脑组织则持续降低。结论低硒饮食对小鼠肝、肾、脑组织内SelP和SBP1的表达量有一定的影响．

关键词：硒硒结合蛋白1 硒蛋白P

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日本血吸虫Mago nashi蛋白编码基因功能的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第2期29卷 87-92页

作者：张薇娜张鹏刘淼任翠平黄大可沈际佳安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽医科大学基础医学院综合实验室合肥230032

目的研究日本血吸虫Mago nashi蛋白编码基因在虫体生殖器官发育方面的功能。方法体外PCR法合成Mago nashi双链RNA(dsRNA),将SjMago nashi基因dsRNA产物和阴性对照lacZ基因dsRNA产物分别电击转染至机械脱尾的日本血吸虫童虫体内,将部分... 详细信息

目的研究日本血吸虫Mago nashi蛋白编码基因在虫体生殖器官发育方面的功能。方法体外PCR法合成Mago nashi双链RNA(dsRNA),将SjMago nashi基因dsRNA产物和阴性对照lacZ基因dsRNA产物分别电击转染至机械脱尾的日本血吸虫童虫体内,将部分电击转染的童虫作体外培养,在培养后第1、3和5天以TRIzol法同时提取其总RNA和总蛋白。实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分别检测Mago nashi基因和蛋白表达产物。电击转染的童虫注射入6只BALB/c小鼠体内,每鼠约1 000条,6周后取出虫体,盐酸卡红染色,在激光共聚焦显微镜下观察虫体内部各器官形态特征,测量虫体相关指标。结果在电击转染后的第1、3和5天,SjMago nashi dsRNA组目的基因的转录水平较阴性对照组分别下降了22%、69%和80%,蛋白质水平较阴性对照组分别下降了12%、39%和56%。激光共聚焦显微镜观察发现,SjMago nashi dsRNA组中的雄虫睾丸内有较多精子,呈泛雄性化表现,而雌虫的卵巢和卵黄腺无明显特征变化。与阴性对照组相比,SjMago nashi dsRNA组的雄虫的体宽、睾丸长和睾丸宽,雌虫的体宽、卵巢长和卵巢宽均明显缩小(P<0.05)。结论 SjMago nashi dsRNA可特异性抑制日本血吸虫靶基因及其编码蛋白的表达,SjMago nashi基因为日本血吸虫生殖相关基因,在生殖系统器官的正常发育中起一定作用。

关键词：日本血吸虫生殖双链RNA RNA干扰 Magonashi基因

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