检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2011年第6期27卷 502-505,510页

作者：古力帕丽.麦曼提依明马海梅吾拉木.马木提陈洁陈璐丁剑冰马秀敏温浩新疆医科大学第一附属医院包虫病重点实验室乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院病原生物学教研室乌鲁木齐830054

目的构建pET32a-AgB8/1-AgB8/2原核表达载体,并对其重组蛋白进行原核细胞表达。方法从细粒棘球绦虫原头蚴中提取总RNA,反转录生成cDNA,以此cDNA为模板,用基因特异性引物分别扩增EgAgB8/1和EgAgB8/2基因编码其分泌型多肽的片段,经测序后... 详细信息

目的构建pET32a-AgB8/1-AgB8/2原核表达载体,并对其重组蛋白进行原核细胞表达。方法从细粒棘球绦虫原头蚴中提取总RNA,反转录生成cDNA,以此cDNA为模板,用基因特异性引物分别扩增EgAgB8/1和EgAgB8/2基因编码其分泌型多肽的片段,经测序后,以此两条基因片段为依据,人工合成EgAgB8/1-EgAgB8/2嵌合抗原编码核酸序列,将其克隆至pUCm-T载体,测序鉴定其正确性。通过对pUCm-T/AgB8/1-AgB8/2重组质粒进行双酶切,将获得的AgB8/1-AgB8/2嵌合抗原编码核酸序列用定向克隆技术克隆至原核表达质粒pET32a上,测序鉴定插入片段正确后,转化至***21(DE3)Lys S,IPTG初步诱导表达pET32a-AgB8/1-AgB8/2重组嵌合蛋白。用SDS-PAGE电泳分析鉴定重组蛋白的表达水平。结果测序表明,AgB8/1-AgB8/2嵌合抗原编码核酸序列正方向插入至pET32a质粒。SDS-PAGE电泳分析显示,IPTG诱导后重组嵌合蛋白得到成功表达,在相对分子量约38 kD处有表达条带。结论成功构建了pET32a-AgB8/1-AgB8/2原核表达质粒,并初步诱导表达出AgB8/1-AgB8/2嵌合重组蛋白,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。

关键词：细粒棘球绦虫 AgB8/1-AgB8/2重组嵌合抗原原核表达质粒

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hsa-mir-520真核表达载体的构建及对E-钙粘蛋白表达的影响

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第三军医大学学报 2011年第9期33卷 967-969页

作者：张潞渝孔璟李春蕾高剑叶彬武卫华刘革力重庆医科大学分子医学与肿瘤中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院妇产科重庆400016

目的构建hsa-mir-520真核表达载体,并转染大肠癌细胞SW-480细胞,检测细胞中E-钙粘蛋白表达情况。方法依据miRBase数据库中hsa-mir-520序列,设计并合成寡核苷酸片段,构建hsa-mir-520表达载体和对照载体。采用脂质体转染方法分别将mir-52... 详细信息

目的构建hsa-mir-520真核表达载体,并转染大肠癌细胞SW-480细胞,检测细胞中E-钙粘蛋白表达情况。方法依据miRBase数据库中hsa-mir-520序列,设计并合成寡核苷酸片段,构建hsa-mir-520表达载体和对照载体。采用脂质体转染方法分别将mir-520表达载体、及对照质粒转染大肠癌细胞SW-480细胞株。采用酶切、测序检测载体构建;Western blot检测E-钙粘蛋白的表达。结果酶切和测序表明hsa-mir-520真核表达载体构建成功。Western blot结果显示与转染对照质粒和未转染的细胞相比,转染了hsa-mir-520重组质粒的细胞中E-cadherin蛋白的表达明显增加(P<0.01),密度扫描半定量分析显示E-cadherin蛋白的表达增加了大约40%。结论成功构建了hsa-mir-520和对照的真核表达载体,hsa-mir-520质粒转染大肠癌细胞SW-480后可增加E-钙粘蛋白的表达。

关键词： hsa-mir-520 E-钙粘蛋白 SW-480细胞

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进化树指导的腺病毒六邻体家族蛋白的快速建模

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高等学校化学学报 2011年第8期32卷 1838-1844页

作者：袁晓辉王迎晨曲章义任家毅王靖飞郭莹莹王雅贤华东吴晓敏杨志伟高虹中国医学科学院北京协和医学院病原生物学研究所北京100730 哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室哈尔滨150081 黑龙江中医药大学基础医学院微生物与免疫学研究室哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001 东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室哈尔滨150040

为实现对人腺病毒六邻体家族蛋白进行快速准确的结构建模,发展了一种新的基于进化树的预测蛋白质家族中一系列分子三维空间结构的快速建模方法.首先利用邻接法对7株D亚属人腺病毒的六邻体序列构建了基于距离的进化树,并根据进化树所提... 详细信息

为实现对人腺病毒六邻体家族蛋白进行快速准确的结构建模,发展了一种新的基于进化树的预测蛋白质家族中一系列分子三维空间结构的快速建模方法.首先利用邻接法对7株D亚属人腺病毒的六邻体序列构建了基于距离的进化树,并根据进化树所提供的信息确定最佳六邻体家族蛋白渐进式建模路径,然后利用Modeler与Charmm程序实现六邻体家族蛋白的快速建模.新的建模方法与传统方法相比,需要的计算量大大减少,经过结构评估以及与传统方法建模所得到的结构进行比较,证实基于进化树的快速建模结果是可靠的.人腺病毒六邻体家族蛋白的快速建模对于实现快速高通量的表位预测及开发多价人腺病毒疫苗与腺病毒分型诊断试剂都具有重大的意义.

关键词：同源建模进化树人腺病毒六邻体家庭蛋白

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异源接种建立小鼠和兔包虫病动物模型的初步探讨

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第三军医大学学报 2011年第7期33卷 679-681页

作者：张静叶彬邹晓毅武卫华韩秀敏重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院分子与肿瘤研究中心重庆400016 青海省地方病预防控制所西宁811602

目的采用人工接种羊源细粒棘球绦虫原头蚴感染法建立小鼠与兔包虫病动物模型。方法 6周龄昆明小鼠经皮穿刺腹腔内接种羊源细粒棘球绦虫原头蚴悬液,新西兰大白兔于腹部手术后肝脏接种羊源细粒棘球绦虫原头蚴悬液。接种原头蚴6个月后剖检... 详细信息

目的采用人工接种羊源细粒棘球绦虫原头蚴感染法建立小鼠与兔包虫病动物模型。方法 6周龄昆明小鼠经皮穿刺腹腔内接种羊源细粒棘球绦虫原头蚴悬液,新西兰大白兔于腹部手术后肝脏接种羊源细粒棘球绦虫原头蚴悬液。接种原头蚴6个月后剖检动物,观察小鼠腹腔和新西兰大白兔肝脏内包虫囊生长情况。结果接种羊源细粒棘球绦虫原头蚴6个月后,小鼠腹腔内包囊生成率为95%,新西兰大白兔肝内包囊生成率为50%。光镜观察见在小鼠腹腔和兔肝脏形成的囊泡具有与羊肝脏棘球蚴囊壁类似的类上皮细胞层和板层状结构。3种动物体内棘球蚴均有原头蚴。结论以羊源细粒棘球绦虫原头蚴悬液接种昆明小鼠腹腔和新西兰大白兔肝脏,可以建立小鼠和兔包虫病动物模型。

关键词：异源接种包虫病动物模型

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夏氏疟原虫感染早期易感和抵抗小鼠树突状细胞亚群和表型的变化特点

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中国人兽共患病学报 2011年第1期27卷 45-48页

作者：武静静刘军郑伟潘艳艳李莹延娟武剑华曹雅明郑丽中国医科大学基础医学院免疫学教研室沈阳110001 徐州医学院病原生物学与免疫学教研室徐州221002 沈阳军区总医院检验科沈阳110016

目的探讨夏氏疟原虫（Plasmodium chabaudi chabaudi AS）感染早期,树突状细胞（Dendritic cells,DCs）亚群和表型的变化特点。方法感染易感的DBA/2和抵抗的BALB/c小鼠,制备感染前和感染后第3、5、8d小鼠脾细胞悬液,采用流式细胞分析技... 详细信息

目的探讨夏氏疟原虫（Plasmodium chabaudi chabaudi AS）感染早期,树突状细胞（Dendritic cells,DCs）亚群和表型的变化特点。方法感染易感的DBA/2和抵抗的BALB/c小鼠,制备感染前和感染后第3、5、8d小鼠脾细胞悬液,采用流式细胞分析技术检测2种小鼠脾细胞悬液中髓样DCs和浆样DCs的数量以及表面表达MHC Ⅱ类分子和CD80分子的DCs的百分含量。结果 DBA/2小鼠和BALB/c小鼠分别呈现以髓样DCs和浆样DCs为主的增殖模式。2种小鼠表达MHCⅡ类分子和CD80分子的DCs数量在感染后3~5d明显升高,并于感染后第8d达到最高水平,然而感染后第8d,BALB/c小鼠表达MHCⅡ类分子和CD80分子的DCs的数量明显低于DBA/2小鼠。结论感染早期,DBA/2和BALB/c小鼠在DCs亚群的增殖模式、成熟表型特征性分子的表达水平上存在显著差异。

关键词：夏氏疟原虫树突状细胞免疫应答

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幽门螺杆菌重组1188蛋白的表达

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重庆医学 2011年第3期40卷 218-220,223页

作者：韩飞杨致邦重庆三峡中心医院微生物免疫科万州404000 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室 400016

目的表达幽门螺杆菌(***)重组1188蛋白,为研究幽门螺杆菌的黏附机制奠定基础。方法用聚合酶链反应(PCR)技术从***标准株NCTC 11637的基因组DNA中扩增hp1188基因片段,插入原核表达载体pQE-30,构建重组载体pQE30-hp1188,经DNA测序分析确认... 详细信息

目的表达幽门螺杆菌(***)重组1188蛋白,为研究幽门螺杆菌的黏附机制奠定基础。方法用聚合酶链反应(PCR)技术从***标准株NCTC 11637的基因组DNA中扩增hp1188基因片段,插入原核表达载体pQE-30,构建重组载体pQE30-hp1188,经DNA测序分析确认后,转化大肠杆菌DH5α,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。Ni2+-NTA树脂纯化表达蛋白,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达形式和表达量。结果重组表达质粒pQE30-hp1188构建成功,所得序列完整,插入的基因片段全长810 bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%。SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约为30.6 kD,与预期一致,蛋白表达量占全菌总蛋白的47%,上清液和沉淀中均有表达,重组蛋白纯化后纯度达90%以上。结论成功克隆hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达。

关键词：螺杆菌,幽门 hp1188基因克隆表达

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灵芝多糖对顺铂诱导卵巢癌细胞耐药株的逆转

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中国老年学杂志 2011年第5期31卷 831-833页

作者：曲红光高磊贺丹刘聪燕巍高嵩王丽长春市妇产医院生殖中心吉林大学白求恩医学院病原生物学教研室吉林大学真菌研究中心吉林长春130021 大连医科大学基础医学院

目的探讨灵芝多糖对卵巢癌耐药细胞SKOV-3/DDP耐药逆转的作用及机制。方法 (1)采用浓度递增法建立人卵巢癌DDP耐药细胞系SKOV-3/DDP,用MTT法、光学显微镜和透射电子显微镜验证实验结果。(2)采用MTT比色法检测灵芝多糖和顺铂连续用药(灵... 详细信息

目的探讨灵芝多糖对卵巢癌耐药细胞SKOV-3/DDP耐药逆转的作用及机制。方法 (1)采用浓度递增法建立人卵巢癌DDP耐药细胞系SKOV-3/DDP,用MTT法、光学显微镜和透射电子显微镜验证实验结果。(2)采用MTT比色法检测灵芝多糖和顺铂连续用药(灵芝多糖作用12 h后,加入顺铂作用12 h)及灵芝多糖和顺铂联合用药对SKOV-3/DDP细胞的生长抑制作用。结果成功建立了SKOV-3/DDP耐药株,其耐药指数为6.02。灵芝多糖和顺铂连续用药对SKOV-3/DDP细胞的抑制率为32.3%,灵芝多糖和顺铂联合用药对SKOV-3/DDP细胞的抑制率为23.1%。结论灵芝多糖不仅均有抗肿瘤的作用,还能改善肿瘤细胞的耐药性,增强其对化疗药物的敏感性。

关键词： SKOV-3/DDP 顺铂灵芝多糖耐药基因

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血小板分布宽度作为新型血小板活化特异性标志物的评价

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重庆医科大学学报 2011年第2期36卷 200-202页

作者：李月代震宇张德纯重庆医科大学附属第二医院检验科重庆医科大学附属第一医院骨科重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016

目的：探讨血小板分布宽度（Platelet distribution width,PDW）作为血小板活化指标的可行性研究。方法：应用Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪测定100份本院体检的25~40周岁正常人群和100名已确诊的血小板活化患者的血常规标本的平均... 详细信息

目的：探讨血小板分布宽度（Platelet distribution width,PDW）作为血小板活化指标的可行性研究。方法：应用Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪测定100份本院体检的25~40周岁正常人群和100名已确诊的血小板活化患者的血常规标本的平均血小板体积（Mean platelet volume,MPV）与PDW值。随机选取本院患者血常规标本100份,在采血后的1、2、3、4 h检测MPV与PDW值。结果：已确诊的血小板活化患者的MPV与PDW值均显著高于正常人群MPV与PDW值（P〈0.001）。血样本采集后的12、、3、4h时的MPV值升高,但PDW值均值逐渐降低。采血后4h的MPV值明显高于采血后1h的MPV检测值（P〈0.05）,但4 h时的PDW值明显低于1 h时的PDW检测值（P〈0.01）。结论：MPV与PDW检测简单,在血小板活化时显著增高。血小板发生储存损伤时,PDW值却降低,故PDW是比较特异的血小板活化指标。

关键词：血小板分布宽度血小板活化

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肉桂醛抗腺病毒作用研究

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中国病理生理杂志 2011年第8期27卷 1467-1471页

作者：刘蕾曲章义王淑秋魏凤香高虹哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081 佳木斯大学基础医学院黑龙江佳木斯154007 广东药学院生物学教研室广东广州510006

目的:研究肉桂醛抗腺病毒(ADV)作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法和病毒增殖抑制实验观测肉桂醛抗ADV作用;免疫荧光法检测肉桂醛对ADV六邻体(hexon)蛋白表达的影响。结果:(1)MTT和病毒增殖抑制实验结果表明肉桂醛在3种作用方式(除细胞... 详细信息

目的:研究肉桂醛抗腺病毒(ADV)作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法和病毒增殖抑制实验观测肉桂醛抗ADV作用;免疫荧光法检测肉桂醛对ADV六邻体(hexon)蛋白表达的影响。结果:(1)MTT和病毒增殖抑制实验结果表明肉桂醛在3种作用方式(除细胞保护作用方式)下能够增强宿主细胞存活率,降低病毒滴度,且细胞存活率与药物浓度呈正相关,肉桂醛对宿主细胞无保护作用,不能阻断病毒进入细胞。(2)肉桂醛(除细胞保护作用方式)组与病毒组比较hexon蛋白的表达明显降低(P<0.05)。结论:肉桂醛有抗ADV作用,但却对宿主细胞无保护作用,肉桂醛抗ADV作用可能与调节hexon蛋白的表达有关。

关键词：腺病毒肉桂醛 Hexon蛋白质

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申克孢子丝菌双相转换差异表达基因的生物信息学分析

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中国生物制品学杂志 2011年第9期24卷 1022-1027页

作者：周汛杨致邦肖异珠重庆医科大学附属第一医院皮肤科重庆400016 重庆医科大学基础医学院基础医学实验教学中心病原生物学教研室重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学附属儿童医院皮肤科重庆400014

目的探讨申克孢子丝菌菌丝相(Mycelium,M)和酵母相(Yeast,Y)双相转换的分子机制,筛选与其双相转换相关的差异表达基因。方法应用抑制性消减杂交技术,构建申克孢子丝菌菌丝相和酵母相的正反cDNA消减文库,并对其差异表达的基因进行生物信... 详细信息

目的探讨申克孢子丝菌菌丝相(Mycelium,M)和酵母相(Yeast,Y)双相转换的分子机制,筛选与其双相转换相关的差异表达基因。方法应用抑制性消减杂交技术,构建申克孢子丝菌菌丝相和酵母相的正反cDNA消减文库,并对其差异表达的基因进行生物信息学分析。结果 M+Y文库获得751条表达序列标签(Expressed sequence tags,ESTs),经拼接后获得101条非冗余序列(Unigenes);Y+M文库获得875条ESTs,拼接获得249条Unigenes。申克孢子丝菌酵母相和菌丝相的转换伴随着不同菌相细胞差异基因的高表达,这些高表达的差异基因可分为结构基因类、代谢酶类、细胞表面分子类及功能不明的细胞分子。结论已成功构建申克孢子丝菌双相转换相关的cDNA消减文库,并筛选出部分差异表达基因,为进一步研究申克孢子丝菌致病相关基因奠定了基础。

关键词：申克孢子丝菌抑制性消减杂交基因文库生物信息学分析

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