检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2010年第2期26卷 103-106页

作者：刘贵霞蓝佳明揣侠高志云金玉怀张永红谢立新殷长甫王永祥河北医科大学基础医学院病原生物学教研室河北石家庄050017

目的:比较巨噬细胞源趋化因子(MDC)、补体片段C3d3、志贺毒素B亚单位(STxB)和小鼠β-防御素2(mBD2)分别与柯萨奇病毒B3(CVB3)VP1构建的融合基因疫苗及VP1基因疫苗对小鼠的免疫效果。方法:将雄性BALB/c小鼠随机分为6组,每组22只,分别于... 详细信息

目的:比较巨噬细胞源趋化因子(MDC)、补体片段C3d3、志贺毒素B亚单位(STxB)和小鼠β-防御素2(mBD2)分别与柯萨奇病毒B3(CVB3)VP1构建的融合基因疫苗及VP1基因疫苗对小鼠的免疫效果。方法:将雄性BALB/c小鼠随机分为6组,每组22只,分别于股四头肌注射pcDNA3、pcDNA3/VP1、pcDNA3/MDC-VP1、pcDNA3/VP1-C3d3、pcD-NA3/STxB-VP1和pcDNA3/mBD2-VP1,接种剂量为每次100μg/只,3周免疫1次,共3次。每次免疫后第14天内眦静脉取血,用微量中和试验滴定血清中和抗体滴度。第3次免疫后第21天,每组随机取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,用CCK-8细胞计数法检测特异性CTL的杀伤活性;每组取3只小鼠以3LDLD50CVB3病毒攻击,第7天取血处死,检测血清病毒滴度;其余小鼠以5LDLD50的CVB3攻击,观察各组的生存情况。结果:除了pcDNA3对照组,其他各组的中和抗体滴度均随免疫次数的增加而提高(P<0.01),第3次免疫后,pcD-NA3/MDC-VP1、pcDNA3/VP1-C3d3和pcDNA3/mBD2-VP1组的抗体滴度明显高于pcDNA3/VP1组(P<0.01);pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/mBD2-VP1组CTL杀伤活性显著高于其他各组(P<0.01)。致死量病毒攻击后,pcDNA3/MDC-VP1、pcDNA3/VP1-C3d3和pcDNA3/mBD2-VP1组小鼠血中病毒滴度显著低于其他组(P<0.01);pcDNA3/MDC-VP1和pcD-NA3/VP1-C3d3组小鼠生存率显著高于其他各组(P<0.05)。结论:pcDNA3/MDC-VP1和pcDNA3/VP1-C3d3能诱导出较强的体液免疫和细胞免疫,能有效降低血中病毒滴度,获得较高的小鼠生存率;整体效果优于其他组。

关键词：巨噬细胞源趋化因子补体片段C3d 志贺毒素B亚单位小鼠β-防御素2 柯萨奇病毒B3型基因疫苗

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肺孢子虫(菌)的分子生物学研究进展——纪念发现百年历史

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2010年第4期28卷 297-300页

作者：刘秋颖司小北安春丽中国医科大学基础医学院病原生物学教研室沈阳110001 中国医科大学沈阳110001

2009年为发现肺孢子菌的100周年。起初认为它是一种原虫,1988年后将其归类为一种不典型真菌。在肺孢子菌发现后的最初50年里,并未引起注意,但随后发现它对免疫机能低下的人群具有致病性,特别是证明由其所致的肺炎(PCP)是艾滋病(AIDS)的&... 详细信息

2009年为发现肺孢子菌的100周年。起初认为它是一种原虫,1988年后将其归类为一种不典型真菌。在肺孢子菌发现后的最初50年里,并未引起注意,但随后发现它对免疫机能低下的人群具有致病性,特别是证明由其所致的肺炎(PCP)是艾滋病(AIDS)的"标志病"后,引起了国内外研究者的极大关注,相关研究领域取得了很大进展。为纪念该病原发现100周年,本文就其生活史和代谢相关的分子生物学研究的新发现进行综述。

关键词：肺孢子菌生活史代谢分子生物学

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ccr重组酶基因介导SCCmec基因岛的剪切功能研究

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中国医科大学学报 2010年第3期39卷 161-164页

作者：马笑雪黄惠颖孙丹丹罗恩杰中国医科大学基础医学院病原生物学教研室沈阳110001

目的构建携带ccrC和ccrAB重组酶基因的载体质粒,并导入耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中,验证ccrC重组酶具有把Ⅴ型SCCmec基因岛从细菌染色体上特异性剪切下来的功能。方法以携带Ⅴ型SCCmec基因岛的菌株81/0342的染色体DNA为模板,应用... 详细信息

目的构建携带ccrC和ccrAB重组酶基因的载体质粒,并导入耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中,验证ccrC重组酶具有把Ⅴ型SCCmec基因岛从细菌染色体上特异性剪切下来的功能。方法以携带Ⅴ型SCCmec基因岛的菌株81/0342的染色体DNA为模板,应用PCR法扩增ccrC基因,再以携带Ⅱ型SCCmec基因岛的菌株N315的染色体DNA为模板,应用PCR法扩增ccrAB基因,分别克隆到温度敏感质粒pYT3上构建重组质粒pSR5C和pSR2AB,电穿孔技术交叉导入原野生菌株81/0342和N315中构建6株细菌转化株,在适宜温度培育下充分表达质粒,应用PCR法检测SCCmec基因岛从染色体上脱落,并连续10d传代培养细菌,应用影印实验检查细菌的药物敏感性变化。结果ccrC重组酶基因的PCR扩增产物为1.9kb,小于Ⅱ型SCCmec基因岛上携带的ccrAB重组酶基因。经鉴定证实成功构建了重组质粒pSR5C和pSR2AB,当菌株81/0342中导入重组质粒pSR5C和pSR2AB后,81/0342所携带的Ⅴ型SCCmec基因岛能从染色体上剪切下来,并以环状DNA结构存在于细菌中,而只有当N315中导入重组质粒pSR2AB时,N315所携带的Ⅱ型SCCmec基因岛才能脱落下来,SCCmec基因岛脱落的细菌成为对妥布霉素和头孢唑肟药物敏感的菌株。结论ccrC重组酶与ccrAB一样具有特异性剪切酶的功能,可单独介导Ⅴ型SCCmec基因岛的脱落,从而为社区MRSA所携带的Ⅴ型SCCmec基因岛在金黄色葡萄球菌之间的广泛传播提供了实验依据。

关键词：金黄色葡萄球菌 SCCmec基因岛 ccrC基因重组酶质粒

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rAAV2-BF增强两品系小鼠抗致死剂量细菌感染

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基础医学与临床 2010年第9期30卷 918-924页

作者：关翔宇刘振龙吕喆孔庆利王炜安云庆首都医科大学燕京医学院病原生物学与免疫学教研室首都医科大学基础医学院免疫学系北京100069

目的通过观测rAAV2-BPI1-199-Fcγ1重组病毒(rAAV-BF)感染对不同品系小鼠的抗细菌感染保护作用。方法采用dot blot、Western blot、免疫组化、改良ELISA方法和内毒素检测试剂盒,检测重组BPI1-199-Fcγ1(rBF)蛋白在CHO细胞和小鼠骨骼肌... 详细信息

目的通过观测rAAV2-BPI1-199-Fcγ1重组病毒(rAAV-BF)感染对不同品系小鼠的抗细菌感染保护作用。方法采用dot blot、Western blot、免疫组化、改良ELISA方法和内毒素检测试剂盒,检测重组BPI1-199-Fcγ1(rBF)蛋白在CHO细胞和小鼠骨骼肌细胞中的表达及血清中内毒素含量的变化;建立最小致死量(MLD)***致死模型,检测rBF基因转染小鼠对***感染的抵抗作用。结果(1)rBF蛋白在CHO细胞和两品系小鼠骨骼肌细胞中成功表达,血清中rBF蛋白具有中和内毒素和杀伤***的作用;(2)在***腹腔感染后,两品系小鼠rAAV-BF感染组存活率均显著高于空载体对照组小鼠;基因转染组小鼠血清内毒素含量明显低于空载体对照组;rAAV-BF感染与头孢呋辛钠联合应用具有协同抗菌作用,两品系小鼠存活率明显高于单纯rAAV-BF感染组。结论rAAV-BF感染组小鼠对致死性***感染具有抵抗作用。

关键词： AAV2-BPI1-199-Fcγ1重组病毒 BPI1-199-Fcγ1重组蛋白革兰阴性菌内毒素最小致死量

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免疫PCR技术检测肠出血型大肠埃希菌O157:H7

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临床检验杂志 2010年第5期28卷 332-333页

作者：赵春燕曹娜娜王海河梁松鹤吉林大学白求恩医学院病原生物学教研室长春130021 哈尔滨医科大学大庆校区病原生物学教研室黑龙江大庆163319 哈尔滨医科大学大庆校区临床检验教研室黑龙江大庆163319

目的通过检测肠出血型大肠埃希菌O157:H7菌株,确定免疫PCR技术的检测灵敏度和特异性,探讨该方法用于检测食品和临床标本的可行性。方法免疫PCR技术检测O157:H7标准菌株和自食品、临床标本分离的菌株。结果免疫PCR最少可检测101/mlO157:H... 详细信息

目的通过检测肠出血型大肠埃希菌O157:H7菌株,确定免疫PCR技术的检测灵敏度和特异性,探讨该方法用于检测食品和临床标本的可行性。方法免疫PCR技术检测O157:H7标准菌株和自食品、临床标本分离的菌株。结果免疫PCR最少可检测101/mlO157:H7细菌,临床和食品分离的O157:H7菌株检测结果均为阳性,而非O157:H7菌株检测结果均为阴性。结论免疫PCR技术具有较高的检测灵敏度、特异性及操作简便等特点,可作为食品和临床标本检测O157:H7方法。

关键词：大肠埃希菌检测 O157:H7 免疫PCR

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pCAGGs-miR-483重组质粒构建及miR-483转基因小鼠模型的建立

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中国生物化学与分子生物学报 2010年第5期26卷 478-483页

作者：马宁王曦迪乔瑜李福源杨宝峰吕延杰单宏丽郑晓飞高旭哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150086 哈尔滨医科大学药学院药理学教研室哈尔滨150086 北京放射与辐射医学研究所北京100850

miR-483是近年发现的一种编码于胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor2,Igf2)基因第2内含子的microRNA.研究表明,高脂饮食诱导的肥胖动物的心脏、肝脏及肝、肾肿瘤组织中miR-483表达异常,但其生物学功能尚待研究.建立稳定表达m... 详细信息

miR-483是近年发现的一种编码于胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor2,Igf2)基因第2内含子的microRNA.研究表明,高脂饮食诱导的肥胖动物的心脏、肝脏及肝、肾肿瘤组织中miR-483表达异常,但其生物学功能尚待研究.建立稳定表达miR-483并能够传代的miR-483转基因小鼠是研究其功能的重要环节.利用特异miR-483克隆引物,以小鼠基因组为模版,经PCR获得pre-miR-483片段,通过重组构建pCAGG-miR-483重组质粒.该质粒可在真核细胞中稳定表达成熟miR-483.再利用原核显微注射法建立miR-483过表达转基因小鼠.利用实时PCR检测各组织miR-483含量.结果显示,miR-483转基因小鼠心肌、骨骼肌、肝脏等组织可过表达成熟miR-483.此外,miR-483转基因过表达小鼠较野生型小鼠体重降低,提示miR-483可能在发育、代谢等方面具有调节作用.miR-483转基因小鼠模型的建立为microRNA功能研究提供了在体研究的平台.

关键词：内含子microRNA 转基因小鼠宿主基因

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日本血吸虫双表膜抗原融合基因原核表达质粒的构建及表达

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中国生物制品学杂志 2010年第2期23卷 146-149页

作者：刘淼朱海玉彭强徐广文王盈沈际佳安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032 安徽医科大学七年制临床医学专业合肥230032

目的构建编码日本血吸虫表膜蛋白SjTsp2与Sj29融合基因的原核表达质粒,并表达重组蛋白。方法利用基因SOEing PCR技术得到SjTsp2与Sj29融合基因,将其克隆入原核表达载体pET32a中,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot... 详细信息

目的构建编码日本血吸虫表膜蛋白SjTsp2与Sj29融合基因的原核表达质粒,并表达重组蛋白。方法利用基因SOEing PCR技术得到SjTsp2与Sj29融合基因,将其克隆入原核表达载体pET32a中,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果序列分析显示,融合基因与两个目的基因的同源性达100%;SDS-PAGE显示表达的重组蛋白相对分子质量为43000,表达量占菌体总蛋白的20%以上;Western blot显示其分别能与SjTsp2和Sj29蛋白的单克隆抗体结合。结论已成功构建了SjTsp2与Sj29融合基因原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了重组蛋白,为研制血吸虫病疫苗提供了材料。

关键词：日本血吸虫 SjTsp2 Sj29 融合基因原核表达

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汉坦病毒双启动子双价核酸疫苗载体的构建及表达

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中国医科大学学报 2010年第8期39卷 673-674页

作者：郭咏娟孙允伟王传合杜红梅于彤彤罗恩杰中国医科大学 2006级临床口腔专业沈阳110001 中国医科大学基础医学院病原生物学教研室沈阳110001

构建单质粒双启动增强子共表达汉坦病毒的汉滩型(HTNV)和汉城型(SEOV)双价M2基因的表达载体,并在真核细胞Vero-E6中瞬时表达。

关键词：汉坦病毒核酸疫苗双价M2基因

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IL-1β-31、IL-10-819和TNF-α-1031基因多态性与幽门螺杆菌感染相关性胃溃疡及胃癌易感性的关系

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中国生物制品学杂志 2010年第5期23卷 517-520页

作者：苏善平杨致邦田一玲向瑜吴敏马小京重庆医科大学基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室基础医学院病原生物学教研室神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016

目的分析人群中IL-1β-31、IL-10-819和TNF-α-1031基因多态性与幽门螺杆菌(***)感染相关性胃溃疡及胃癌易感性之间的关系,为临床诊断及预防该病提供新的思路和方法。方法选取***阳性的51例胃溃疡患者、43例胃癌患者和100例健康对照者,... 详细信息

目的分析人群中IL-1β-31、IL-10-819和TNF-α-1031基因多态性与幽门螺杆菌(***)感染相关性胃溃疡及胃癌易感性之间的关系,为临床诊断及预防该病提供新的思路和方法。方法选取***阳性的51例胃溃疡患者、43例胃癌患者和100例健康对照者,采用PCR-限制性长度片段多态法和多重引物特异PCR法,检测其IL-1β-31、IL-10-819和TNF-α-1031位点,分析其多态性。结果在胃溃疡组中TNF-α-1031各基因型的频率分布与健康对照组比较,差异有统计学意义。在胃癌组中TNF-α-1031各基因型的频率分布与健康对照组比较,差异有统计学意义;Logistic回归分析表明,与携带TNF-α-1031T/T者相比,携带TNF-α-1031C/C者发生胃溃疡的危险性为OR=5.84(95%CI:1.00～33.84),发生胃癌的危险性为OR=6.95(95%CI:1.19～40.63)。在疾病组和健康对照组中,IL-10-819和IL-1β-31各基因型频率的分布差异无统计学意义。结论 TNF-α-1031基因多态性与胃溃疡、胃癌的易感性相关。

关键词： IL-1β IL-10 肿瘤坏死因子-α 基因多态性幽门螺杆菌胃溃疡胃癌

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刚地弓形虫RH株对小鼠胎盘滋养细胞凋亡的影响

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第三军医大学学报 2010年第23期32卷 2524-2526页

作者：葛璞车艺林玲黄开顺彭净叶彬重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院肿瘤与分子医学中心重庆400016 重庆医科大学生命科学院重庆400016 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016

目的通过研究刚地弓形虫强毒株RH株对体外培养的孕期小鼠胎盘滋养层细胞凋亡的影响,初步探讨不同毒力虫株引起病理妊娠的机制。方法将小鼠胎盘滋养层细胞分别接种于不同细胞培养瓶,对照组加入DMEM培养基孵育,实验组加入相同体积不同数量... 详细信息

目的通过研究刚地弓形虫强毒株RH株对体外培养的孕期小鼠胎盘滋养层细胞凋亡的影响,初步探讨不同毒力虫株引起病理妊娠的机制。方法将小鼠胎盘滋养层细胞分别接种于不同细胞培养瓶,对照组加入DMEM培养基孵育,实验组加入相同体积不同数量(2×106/ml、4×106/ml、8×106/ml)弓形虫速殖子培养2、4、8h,Annexin-V-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率变化;荧光显微镜观察细胞形态改变情况;Western blot分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达或活性。结果流式细胞仪检测弓形虫感染后的滋养层细胞凋亡率较对照组有下降趋势(P<0.05),呈量效依赖性,弓形虫数量8×106/ml实验组8h凋亡率最低,为(15.81±0.19)%;荧光显微镜观察到8h不同数量实验组滋养细胞凋亡形态改变情况,各组均有典型的早期凋亡细胞:细胞膜着绿色,细胞核拒染。随着弓形虫感染数量增加,凋亡细胞数目有所减少。Western blot检测刚地弓形虫RH株作用于滋养层细胞8h后实验组的Bax、Bcl-2蛋白表达较对照组分别有明显的降低与升高(P<0.05)。结论刚地弓形虫RH株可抵抗体外培养的孕期小鼠滋养细胞正常凋亡,其机制可能与滋养细胞Bax表达下调和Bcl-2表达上调有关。

关键词：刚地弓形虫RH株滋养细胞凋亡 Bax Bcl-2

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