检索结果-内蒙古大学图书馆

中国免疫学杂志 2009年第4期25卷 340-345页

作者：韩飞杨致邦郭丽媛范贵荣重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室；神经科学研究中心；基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆400016

目的:构建高效表达Hp1188重组蛋白的基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,提纯重组蛋白,鉴定其抗原性和免疫原性。通过小鼠灌胃试验,验证Hp1188蛋白阻止幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)在胃内定植的作用。方法:构建重组质粒pQE30-hp1188,... 详细信息

目的:构建高效表达Hp1188重组蛋白的基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,提纯重组蛋白,鉴定其抗原性和免疫原性。通过小鼠灌胃试验,验证Hp1188蛋白阻止幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)在胃内定植的作用。方法:构建重组质粒pQE30-hp1188,DNA测序分析正确后,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。表达蛋白用Ni2+-NTA树脂纯化,SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定浓度,Western blot鉴定对相应抗原的特异性,双向琼脂扩散实验检测效价。纯化重组蛋白和粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin subunit B,CTB)的混合液灌胃免疫接种预防组BALB/c小鼠,同时设阴性对照组和阳性对照组,免疫4周后用*** NCTC 11637攻击3次,末次攻击4周后处死小鼠,进行胃组织***培养;***定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分,以评价重组蛋白对胃组织***感染的免疫保护作用。结果:构建的重组表达质粒pQE30-hp1188经DNA测序证实序列完整,插入的基因片段全长810bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%,并在大肠杆菌DH5α中表达出分子量约为30kD大小的可溶性目的蛋白,表达量占全菌总量的47%,表达蛋白纯化后纯度达90%,浓度为1.0mg/ml。Western blot证实有良好抗原结合特异性,双向琼脂扩散效价为1∶16。预防组***感染率、定植及炎症程度评分均明显低于阳性对照组(P<0.05)。预防组不仅可以降低***的定植,而且能减轻***造成的小鼠胃组织的局部慢性炎症反应。结论:成功构建了基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,并高效表达了Hp1188重组蛋白,表达蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,在小鼠体内能阻止***的定植。

关键词：幽门螺杆菌 hp1188基因表达免疫原性体内试验

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利用酵母双杂交系统筛选Pak4相互作用蛋白质

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中国医科大学学报 2009年第1期38卷 8-10,14页

作者：李彦姝李晓东吴怡李丹妮李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001 沈阳医学院病原生物学教研室沈阳110034 中国医科大学临床医学系沈阳110001

目的利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选信号转导分子Pak4相互作用蛋白。方法将Pak4激酶域序列克隆到酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒。质粒转化到酵母感受态AH109和Y187中验证蛋白表达。将人胎脑cDNA文库转化酵母Y187,与已转化... 详细信息

目的利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选信号转导分子Pak4相互作用蛋白。方法将Pak4激酶域序列克隆到酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒。质粒转化到酵母感受态AH109和Y187中验证蛋白表达。将人胎脑cDNA文库转化酵母Y187,与已转化诱饵质粒的AH109酵母进行交配实验。交配子在SD/-Leu/-Trp/-His和SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-α-gal平板上筛选,阳性克隆质粒酶切鉴定。结果成功构建了pGBKT7-Pak4 KD诱饵质粒,Western blot证实其在酵母菌AH109和Y187中表达,筛选了多个与Pak4相互作用的阳性转化子。结论利用酵母双杂交系统筛选出Pak4相互作用蛋白质。

关键词： Pak4 酵母双杂交信号转导

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重组耻垢分枝杆菌联合抗痨药物对鼠结核病治疗作用的探讨

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重庆医科大学学报 2009年第5期34卷 516-520页

作者：杨晓燕杨春何永林徐蕾重庆医科大学基础医学院免疫学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016

目的:探讨携带编码人天然颗粒溶素(Granulysin,GLS)和小鼠IL-12基因的重组耻垢分枝杆菌(***,MS)与抗痨药物对结核分枝杆菌感染的协同治疗效果。方法:将结核分枝杆菌H37Rv感染的Balb/c小鼠40只随机分成4组。感染4周后分别用生理盐水、重... 详细信息

目的:探讨携带编码人天然颗粒溶素(Granulysin,GLS)和小鼠IL-12基因的重组耻垢分枝杆菌(***,MS)与抗痨药物对结核分枝杆菌感染的协同治疗效果。方法:将结核分枝杆菌H37Rv感染的Balb/c小鼠40只随机分成4组。感染4周后分别用生理盐水、重组MS、INH+PZA和重组MS联合INH+PZA治疗,于第一次治疗后3个月,处死小鼠,检测器官荷菌量、脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的分泌水平、血清IL-12和IFN-γ和肺、脾组织中GLS表达,同时观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果:重组MS联合INH+PZA治疗组肺、脾组织荷菌量(lgCFU/g)比重组MS和INH+PZA治疗组显著降低;重组MS和INH+PZA治疗组肺、脾组织荷菌量比生理盐水组显著降低。重组MS组经PPD刺激后IFN-γ和TNF-α分泌水平明显高于其它组。重组MS联合INH+PZA治疗组和重组MS组血清IL-12和IFN-γ水平明显高于生理盐水组。重组MS和INH+PZA组病变轻且局限,生理盐水组肺组织病理改变以渗出为主,病变广泛。重组MS联合INH+PZA治疗组肺组织病变最轻。结论:GLS/IL-12重组MS对小鼠结核病有一定免疫治疗作用;重组MS联合临床常用的抗痨药可增强抗结核病的疗效。

关键词：颗粒溶素 IL-12 重组MS 结核病抗痨药

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小鼠单链白细胞介素-12重组卡介苗的构建与表达

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重庆医科大学学报 2009年第3期34卷 257-260页

作者：张黎王瑜伟何永林李娜王爽帖儒修重庆医科大学附属第一医院眼科重庆400016 重庆医科大学基础医学院免疫学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016

目的:构建携带小鼠白细胞介素-12基因的重组卡介苗(Bacille calmette-guerin,BCG),并鉴定该重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。方法:以分子生物学方法构建携带小鼠IL-12基因和分支杆菌复制子OriM的真核穿梭共表达质粒pBM12,以电转化的方... 详细信息

目的:构建携带小鼠白细胞介素-12基因的重组卡介苗(Bacille calmette-guerin,BCG),并鉴定该重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。方法:以分子生物学方法构建携带小鼠IL-12基因和分支杆菌复制子OriM的真核穿梭共表达质粒pBM12,以电转化的方式将pBM12质粒转入BCG构建重组BCG,抽提质粒进行PCR鉴定重组菌;将重组菌感染巨噬细胞,通过RT-PCR了解重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。结果:电转化方式可将pBM12导入BCG,抽提质粒鉴定出与mIL-12基因相符的目的条带。以该重组BCG感染小鼠巨噬细胞,96h后用RT-PCR法也扩增出1632bp左右的基因条带。结论:成功构建含pBM12的重组BCG。该重组BCG能向小鼠巨噬细胞递呈携带基因。

关键词：白细胞介素12 重组卡介苗真核表达

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鸦胆子油乳对宫颈癌SiHa细胞的抑制

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中国肿瘤生物治疗杂志 2009年第5期16卷 494-497页

作者：王晓娜马力安春丽肖纯凌王雪莲王冬冬中国医科大学基础医学院病原生物学教研室辽宁沈阳110001 沈阳市妇婴医院检验科辽宁沈阳110014 中国医科大学附属盛京医院妇产科辽宁沈阳110004 沈阳医学院病原生物学教研室辽宁沈阳110034

目的:探讨鸦胆子(Brucea javanica)油乳在体外对宫颈癌SiHa细胞的抑制作用及其作用机制。方法:以鸦胆子油乳(2.5、5.0、10、20、40、80μg/ml)作用于SiHa细胞24、48、72h,以MTT法检测鸦胆子油乳对SiHa细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察... 详细信息

目的:探讨鸦胆子(Brucea javanica)油乳在体外对宫颈癌SiHa细胞的抑制作用及其作用机制。方法:以鸦胆子油乳(2.5、5.0、10、20、40、80μg/ml)作用于SiHa细胞24、48、72h,以MTT法检测鸦胆子油乳对SiHa细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察细胞的超微结构;琼脂糖凝胶电泳观察SiHa细胞基因组DNA片段化改变;流式细胞术测定AnnexinV/PI双染色后SiHa细胞凋亡率。结果:MTT结果显示,鸦胆子油乳以剂量和时间依赖方式对SiHa细胞增殖有明显的抑制作用,其中80μg/ml药物作用72h时的抑制率可达92.43%;20μg/ml药物作用后,透射电镜下可观察到细胞出现凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳显示细胞凋亡特征性的DNA片段化"梯状"条带;流式细胞仪检测显示,10、20、40μg/ml药物组作用48h后凋亡率分别为(8.02±2.41)%、(51.60±7.67)%、(77.22±5.80)%。结论:鸦胆子油乳能够抑制SiHa细胞增殖,其作用机制可能为诱导SiHa细胞发生凋亡。

关键词：宫颈肿瘤 SiHa细胞鸦胆子油乳细胞凋亡

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红霉素体外诱导肺炎链球菌耐药的研究

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第三军医大学学报 2009年第12期31卷 1185-1188页

作者：王强王跃刘明方重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016

目的通过体外诱导获得肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,***)耐药菌株,对比分析***诱导耐药前后红霉素结合域的变异。方法采用最低抑菌浓度(MIC)递增方法对***标准菌株tigr4、tigr2临床分离敏感株进行红霉素体外诱导耐药,PCR与RT-PC... 详细信息

目的通过体外诱导获得肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,***)耐药菌株,对比分析***诱导耐药前后红霉素结合域的变异。方法采用最低抑菌浓度(MIC)递增方法对***标准菌株tigr4、tigr2临床分离敏感株进行红霉素体外诱导耐药,PCR与RT-PCR对诱导前后rplD、rplV基因以及23SrRNA扩增并测序,CPHmodels-2.0蛋白质空间构象预测系统对诱导前后rplD、rplV基因编码的核糖体蛋白L4和L22进行空间构象预测分析。结果诱导后tigr4MIC由0.0312mg/L增加到256mg/L,而临床分离敏感株MIC均由0.0312mg/L增加到32mg/L。诱导前后测序结果对比显示标准菌株tigr4核糖体蛋白L4发生V32A变异,L22发生D35G变异,而临床分离敏感株核糖体蛋白L4发生Q67R、K68E变异。空间构象分析L22的D35G及L4的Q67R、K68E变异导致其相应的表面空间构象发生明显改变。结论***可通过红霉素体外诱导而导致耐药,其耐药机制与红霉素结合域发生新的变异有关。

关键词：肺炎链球菌红霉素诱导变异

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硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体的保护作用

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中国生物制品学杂志 2009年第5期22卷 457-460,467页

作者：郭丽媛杨致邦田一玲黄伟韩飞范贵荣向瑜重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室神经科学研究中心基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆400016 西南大学荣昌校区动物医学系重庆402460

目的观察硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组细胞空泡毒素抗原(VacA)卵黄抗体(IgY)的保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导重组菌DH5α-vacA-pQE30,大量表达并纯化VacA重组蛋白,免疫洛曼母鸡,制备VacAIgY,并进行纯化。... 详细信息

目的观察硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组细胞空泡毒素抗原(VacA)卵黄抗体(IgY)的保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导重组菌DH5α-vacA-pQE30,大量表达并纯化VacA重组蛋白,免疫洛曼母鸡,制备VacAIgY,并进行纯化。在不同pH值的IgY液中加入不同浓度的硫糖铝和不同浓度的胃蛋白酶,将含不同浓度硫糖铝的IgY反复冻融7次,将含30%硫糖铝的IgY室温放置1d～4周,ELISA法测定各实验组IgY的相对抗体活性(AT/AC)。结果在pH1.5、2.0和3.0的条件下,含30%～60%硫糖铝的IgY的相对抗体活性高于不加硫糖铝的IgY;在pH1.5条件下,60%硫糖铝可使IgY的相对抗体活性保持68.7%;在pH2.0和3.0条件下,50%和40%以上的硫糖铝几乎可完全保持IgY的相对抗体活性。在pH值为2.0和3.0时,正常胃蛋白酶浓度(0.02mg/ml)下,30%以上的硫糖铝均可有效保护IgY的相对抗体活性。30%以上的硫糖铝可增强IgY的抗冻融能力。室温放置4周后,含30%硫糖铝的IgY仍能保持80%以上的相对抗体活性。结论30%以上的硫糖铝可增强VacAIgY对低pH和胃蛋白酶的耐受能力及抗冻融能力,是较理想的IgY保护剂。

关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素抗原卵黄抗体硫糖铝抗体活性

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Egfr基因启动子区的DNaseⅠ高敏感位点定位

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首都医科大学学报 2009年第2期30卷 189-194页

作者：李珊珊李相辉李岩赵博张秀芳王泽生张玉祥首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系河北医科大学病原生物学教研室河北青河人民医院妇产科

目的用一种新方法研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因启动子区脱氧核糖核酸酶Ⅰ高敏感位点(DNaseⅠhypersensitive site,DHS),找出确切DNaseⅠ酶切位点,进而预测可能与DHS相结合的转录因子,探索egfr基因... 详细信息

目的用一种新方法研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因启动子区脱氧核糖核酸酶Ⅰ高敏感位点(DNaseⅠhypersensitive site,DHS),找出确切DNaseⅠ酶切位点,进而预测可能与DHS相结合的转录因子,探索egfr基因表达调控机制。方法本研究以宫颈癌细胞系HeLa(EGFR+)、乳腺癌细胞系MDA-MB-231(EGFR+)和阴性对照白血病细胞系K562(EGFR-)为模型,在用浓度为5kU/L、10kU/L DNaseⅠ消化细胞核中染色质后,采用连接介导PCR(ligation-mediatedPCR,LM-PCR)的方法,检测出egfr基因启动子区DHS,并进行测序。通过对测序结果进行分析,确定egfr基因启动子区DHS的具体位置。用生物信息学方法对所得DHS进行分析,预测与之结合的转录因子。结果对测序结果进行分析得到确切DNaseⅠ酶切位点。在egfr基因表达阳性的宫颈癌细胞系HeLa、乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,DHS位于转录起始点上游300bp至500bp的启动子区内;而在egfr基因表达阴性的白血病细胞系K562中未发现DHS。运用生物信息学方法,用转录元件搜索软件(transcription element search software,TESS)对DHS进行分析,找到16个可能与egfr基因启动子区DHS序列相结合的转录因子。结论在egfr基因表达阳性的细胞系中,egfr基因启动子区存在DHS,可能是转录因子的结合区。这些实验结果为研究egfr基因启动子区空间构象、预测转录因子结合位点提供了部分实验依据。

关键词：连接介导PCR DNaseⅠ高敏感位点 egfr基因启动子

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巨噬细胞内表达的人颗粒溶素对胞内结核分枝杆菌的杀菌活性

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中华传染病杂志 2009年第2期27卷 69-73页

作者：伊正君付玉荣李俊明杨春何永林李娜朱道银潍坊医学院临床学院检验专业山东省潍坊市261031 潍坊医学院基础医学教学部病原生物学教研室重庆医科大学微生物学与免疫学教研室

目的构建携带人颗粒溶素（GLS）的真核表达质粒并探讨其表达后对巨噬细胞RAW264．7内结核分枝杆菌的杀菌能力。方法利用套式PCR从同种异型抗原激活的人CTL中扩增出GLS基因，并克隆入pBudCE4．1载体，构建重组质粒。将其转染至感染结核... 详细信息

目的构建携带人颗粒溶素（GLS）的真核表达质粒并探讨其表达后对巨噬细胞RAW264．7内结核分枝杆菌的杀菌能力。方法利用套式PCR从同种异型抗原激活的人CTL中扩增出GLS基因，并克隆入pBudCE4．1载体，构建重组质粒。将其转染至感染结核分枝杆菌H37Rv的巨噬细胞株RAW264．7中，套式PCR、免疫荧光检测GLS表达；转染96h后裂解细胞作抗酸染色及菌落计数，检测GLS细胞内直接杀菌活性。数据行t或t＇检验。结果成功构建携带GLS的真核表达质粒pBudCE4．1／GLS；在转染的已感染H37Rv巨噬细胞株RAW264．7中，从转录和翻译水平都检测到目标基因GLS的表达产物；转染96h，佛波酯＋pBudCE4．1／GLS组、佛波酯＋pBudCE4．1组与未激活初始巨噬细胞荷菌量分别为（1．44±1．25）、（3．16±0．20）和（3．59±0．21）个，两两比较，差异均有统计学意义（t=2．403，t=2．854，均P〈0．05）。结论携带人GLS的真核表达质粒在巨噬细胞表达后具有明显的杀菌活性，为进一步作为结核基因治疗疫苗的应用提供了实验依据。

关键词：蛋白质类杀伤细胞,天然巨噬细胞分枝杆菌,结核基因疗法

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FZS中药合剂对细胞凋亡的保护作用研究

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哈尔滨医科大学学报 2009年第4期43卷 320-324页

作者：王建秀王德生段淑荣赵敬堃郭彩玲张凤民哈尔滨医科大学第一临床医学院神经内科黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学基础医学院微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨FZS中药合剂对Aβ25-35、Aβ42、Aβ42寡聚体诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法应用正常细胞进行对照研究,通过测定MTT、LDH和原位末端标记(TUNEL)方法检测细胞凋亡。原子力显微镜观察PC12细胞表面突起的变化。结果MTT在FZS... 详细信息

目的探讨FZS中药合剂对Aβ25-35、Aβ42、Aβ42寡聚体诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法应用正常细胞进行对照研究,通过测定MTT、LDH和原位末端标记(TUNEL)方法检测细胞凋亡。原子力显微镜观察PC12细胞表面突起的变化。结果MTT在FZS组明显增高(P<0.05);LDH、TUNEL凋亡率在FZS组表达明显降低(P<0.05);原子力显微镜观察Aβ致细胞表面突起缩短的现象在FZS组明显改善,差异有显著意义(P<0.05)。结论FZS可以通过降低Aβ的细胞凋亡作用而减少其细胞毒性,FZS中药合剂可能成为Alzheimer病的治疗手段之一。

关键词： β-淀粉样蛋白寡聚体凋亡中药合剂原子力显微镜

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