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第二十五届长城国际心脏病学会议、亚太心脏大会2014暨国际心血管预防与康复会议

作者：王蕾赵雪辰任华亮王海桦杜杰李汇华首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学教研室大连医科大学附属第一医院心脏中心北京协和医院血管外科济宁医学院附属医院实验中心首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所

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Wnt3a过表达对小鼠胚胎肝干细胞凋亡的抑制作用

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第12期29卷 1277-1280页

作者：张锡峰胡代曦芦永良冯涛黄佳祎重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的研究Wnt3a对ELSC14.5小鼠胚胎肝干细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法采用表达绿色荧光蛋白的腺病毒载体系统(Ad-GFP-Wnt3a)转入小鼠ELSC14.5细胞,以Ad-GFP组为空白对照组,Ad-wnt3a组为实验组。实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blo... 详细信息

目的研究Wnt3a对ELSC14.5小鼠胚胎肝干细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法采用表达绿色荧光蛋白的腺病毒载体系统(Ad-GFP-Wnt3a)转入小鼠ELSC14.5细胞,以Ad-GFP组为空白对照组,Ad-wnt3a组为实验组。实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测Wnt3a及凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Mcl-1的mRNA和蛋白的表达;Hoechst33258染色法结合annexin-PE/7-ADD法检测细胞的凋亡情况。结果 qRT-PCR和Western blot结果显示,Wnt3a在ELSC14.5细胞中特异性表达,表明腺病毒系统Ad-Wnt3a能高效感染ELSC14.5细胞。与对照组相比,抗凋亡因子Bcl-2、mcl-1的mRNA和蛋白的表达显著升高(P<0.05),而促凋亡因子Bax的mRNA和蛋白的表达显著降低(P<0.05)。Hoechst33258染色结合annexin-PE/7-ADD法结果显示,Wnt3a高表达的ELSC14.5细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染的细胞数量很少,细胞凋亡率降低。结论 Wnt3a通过上调Bcl-2家族中抗凋亡因子和下调促凋亡因子来抑制小鼠胚胎肝干细胞的凋亡,延长其生存。

关键词：胚胎肝干细胞抗凋亡 Wnt3a

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HBx诱导小鼠肝前体细胞上皮-间质转化

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第2期29卷 146-149页

作者：芦永良申利红李红丽胡代曦张锡峰冯涛黄佳祎重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)能否诱导肝前体细胞(HPCs)发生上皮-间质转化(EMT)。方法将重组质粒pSEB-Flag-HBX与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)能否诱导肝前体细胞(HPCs)发生上皮-间质转化(EMT)。方法将重组质粒pSEB-Flag-HBX与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,经稻瘟菌素(blasticidin)筛选,获得稳定表达HBx的HP14.5细胞。观察其形态变化,通过实时定量PCR(real time-PCR)及Western blot法检测其间质细胞标志物和上皮标志物在mRNA和蛋白水平的表达量,并采用划痕实验检测其细胞迁移能力的变化。结果 HP14.5细胞稳定表达HBx蛋白后细胞由多角形变为长梭形;与对照组相比,神经钙黏素(N-cadherin)、Snail、vimentin的mRNA和蛋白水平表达均升高,具有统计学差异(P<0.05)而上皮性钙黏素(E-cadherin)、细胞角蛋白18(CK18)的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05;同时其迁移能力显著升高(P<0.05)。结论 HBx能诱导肝前体细胞发生EMT,并增强其迁移能力。

关键词：乙型肝炎病毒x蛋白肝前体细胞上皮-间质转化

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肺炎衣原体在血管平滑肌细胞中的生长状态及细胞超微结构的观察

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中国病原生物学杂志 2013年第1期8卷 5-8,34页

作者：魏俊燕王蓓蓓张利军张俊霞王海伟叶静张丽莙天津医科大学基础医学院病理生理学教研室天津300070

目的观察肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cpn)在血管平滑肌细胞(VSMC)中的生长发育情况和细胞超微结构的改变,了解青霉素对Cpn感染状态的影响。方法利用免疫荧光染色鉴定Cpn感染VSMC情况;用透射电镜观察感染24h、48h和72h后Cpn在VSMC... 详细信息

目的观察肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cpn)在血管平滑肌细胞(VSMC)中的生长发育情况和细胞超微结构的改变,了解青霉素对Cpn感染状态的影响。方法利用免疫荧光染色鉴定Cpn感染VSMC情况;用透射电镜观察感染24h、48h和72h后Cpn在VSMC中的形态和细胞超微结构的变化,及经青霉素处理后Cpn生长状态的改变。结果免疫荧光染色观察到Cpn在VSMC内形成包涵体和点状感染灶。透射电镜观察到细胞内Cpn包涵体逐渐成熟的过程及典型的原体(EB)和网状体(RB)结构,其中在感染48h时部分包涵体或单个RB发育受限,72h时包涵体膜消失;细胞内线粒体和粗面内质网初期增多,后期扩张变形。此外,青霉素处理后Cpn不形成典型包涵体且RB结构异常。结论 Cpn感染VSMC的能力与易感细胞相比较弱,虽包涵体及其EB和RB形态结构与在易感细胞相似,但部分发育停滞;Cpn在VSMC的发育周期不足72h。青霉素干预能抑制Cpn在VSMC中的生长发育。感染后VSMC超微结构的变化为进一步研究细胞功能的改变提供了依据。

关键词：肺炎衣原体血管平滑肌细胞超微结构青霉素

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Salusins及其心血管效应

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生理科学进展 2013年第3期44卷 164-168页

作者：任安经林丽严晓红袁文俊第二军医大学病理生理学教研室上海200433 第二军医大学生理学教研室上海200433 武汉大学基础医学院生理学系武汉430071 宁夏医科大学基础医学院生理学系银川750004

Salusins是一类新发现的心血管活性肽,包括由28个氨基酸组成的salusin-α和20个氨基酸组成的salusin-β。Salusins广泛分布于人和大鼠的多种组织和器官,具有降低血压、减慢心率、抑制心肌收缩、减轻心脏缺血损伤、促进心肌细胞肥大和血... 详细信息

Salusins是一类新发现的心血管活性肽,包括由28个氨基酸组成的salusin-α和20个氨基酸组成的salusin-β。Salusins广泛分布于人和大鼠的多种组织和器官,具有降低血压、减慢心率、抑制心肌收缩、减轻心脏缺血损伤、促进心肌细胞肥大和血管平滑肌细胞增殖等一系列心血管效应。值得注意的是,作为由同一前体产生的两种多肽,salusin-α和salusin-β在动脉粥样硬化的发生发展中具有相反的作用。

关键词： salusins 心脏血管动脉粥样硬化

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Wnt3诱导小鼠肝前体细胞上皮-间质转化

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第二军医大学学报 2013年第11期34卷 1166-1170页

作者：胡代曦张锡峰张超钟沁冯涛黄佳祎重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的探讨wnt3对小鼠肝前体细胞(14-19)发生上皮-间质转化的影响。方法分别将空载体Ad-GFP和表达wnt3的腺病毒Ad-GFP-wnt3转入小鼠肝前体细胞中,显微镜下观察细胞形态变化。细胞划痕实验和细胞迁移实验观察14-19细胞迁移能力。实时荧光定... 详细信息

目的探讨wnt3对小鼠肝前体细胞(14-19)发生上皮-间质转化的影响。方法分别将空载体Ad-GFP和表达wnt3的腺病毒Ad-GFP-wnt3转入小鼠肝前体细胞中,显微镜下观察细胞形态变化。细胞划痕实验和细胞迁移实验观察14-19细胞迁移能力。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹分析分别检测14-19细胞中上皮标记物和间质标记物的表达改变。结果显微镜下可见高表达wnt3的14-19细胞由不规则多边形变为长梭形。细胞划痕实验和细胞迁移实验结果显示,高表达wnt3的14-19细胞迁移能力明显提高,与空载体转染细胞相比差异具有统计学意义(P<0.01)。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示,间质标记物N-cadherin、vimentin和twist1的mRNA和蛋白水平表达上调,相反上皮标记物E-cadherin的mRNA水平和蛋白水平表达下调,与空载体转染细胞相比差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 Wnt3能够促使小鼠肝前体细胞发生上皮-间质转化,提示其可能参与了肝纤维化的发展进程。

关键词： wnt3 肝前体细胞上皮-间质转化肝硬化

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黑木耳提取物对脓毒血症大鼠肝功能的保护作用

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中国病理生理杂志 2013年第11期29卷 2072-2075页

作者：孙湛马小娟姚雪萍于文燕马琪新疆医科大学基础医学院机能中心实验室新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院病理生理学教研室新疆乌鲁木齐830054

目的:探讨黑木耳提取物对脓毒血症大鼠肝功能的保护作用及其机制。方法:40只健康雄性Wistar大鼠,随机抽取10只为假手术组,其余大鼠使用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒血症动物模型,分为CLP组、黑木耳粗提物组及黑木耳多糖组,术前3 d分别... 详细信息

目的:探讨黑木耳提取物对脓毒血症大鼠肝功能的保护作用及其机制。方法:40只健康雄性Wistar大鼠,随机抽取10只为假手术组,其余大鼠使用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒血症动物模型,分为CLP组、黑木耳粗提物组及黑木耳多糖组,术前3 d分别给予预防性灌胃,造模12 h后,下腔静脉采血检测肝功能指标(ALT和AST)、内毒素(ET)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6,取肝标本做病理分析,免疫组织化学法观察肝组织NF-κB的表达。结果:应用黑木耳粗提物及黑木耳多糖干预后,大鼠血清中ALT、AST、ET、TNF-α、IL-1β和IL-6水平均显著低于CLP组(P<0.05);肝组织病理改变减轻。CLP组肝细胞NF-κB强阳性表达,与对照组相比差异显著(P<0.05);黑木耳粗提物组和黑木耳多糖组肝细胞NF-κB弱阳性表达。结论:黑木耳粗提物及黑木耳多糖在有效降低脓毒血症大鼠血清ET的基础上,同时降低TNF-α、IL-1β和IL-6含量,抑制脓毒血症大鼠肝组织细胞NF-κB的表达,对脓毒血症大鼠肝脏功能有保护作用。

关键词：黑木耳提取物脓毒血症肝功能全身炎症反应综合征

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姜黄素对髓母细胞瘤PI3K/Akt信号通路的作用

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第三军医大学学报 2013年第6期35卷 518-522页

作者：毛蜀何密斯刘桂元张雄李昱唐俐重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016

目的探讨姜黄素对髓母细胞瘤PI3K/Akt信号通路的作用。方法细胞培养至对数生长期后设对照组(Ct组)和姜黄素处理组(Cur组)。Cur组用20、40、60、80、100μmol/L姜黄素处理24、48、72 h。采用MTT法检测姜黄素对髓母细胞瘤Daoy细胞的生长... 详细信息

目的探讨姜黄素对髓母细胞瘤PI3K/Akt信号通路的作用。方法细胞培养至对数生长期后设对照组(Ct组)和姜黄素处理组(Cur组)。Cur组用20、40、60、80、100μmol/L姜黄素处理24、48、72 h。采用MTT法检测姜黄素对髓母细胞瘤Daoy细胞的生长抑制作用。流式细胞术分析Daoy细胞凋亡率;免疫细胞化学染色检测PI3K、p-Akt和Akt在细胞中表达情况;Western blot和RT-PCR分别检测PI3K、p-Akt和Akt蛋白及mRNA的表达水平。结果不同浓度姜黄素作用不同时间后,细胞受到不同程度的抑制,呈时间-剂量依赖关系(P<0.05)。姜黄素作用48 h抑制作用显著,差异有统计学意义(F=131.829,P<0.05),且IC50为35μmol/L,细胞凋亡也最明显(29.7%)。PI3K、Akt和p-Akt蛋白在Ct组中的阳性表达率分别为80.7%、84.8%和87.5%;Cur组阳性表达率均明显下降,分别为25.3%、58.8%和26.7%。两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot显示Ct组PI3K、Akt和p-Akt蛋白灰度比值分别为(1.141±0.032)、(1.047±0.174)、(1.173±0.013);Cur组PI3K和p-Akt蛋白灰度比值降低,分别为(0.875±0.029)、(0.958±0.150)。两组比较,差异有统计学意义(t=15.530,33.482,P<0.05)。RT-PCR显示Ct组PI3K mRNA灰度比值显著高于Cur组[(1.166±0.031)vs(0.833±0.033),t=12.468,P<0.05]。结论姜黄素可能通过抑制PI3k/Akt信号通路,阻碍髓母细胞瘤Daoy细胞的增殖、诱导凋亡。

关键词：髓母细胞瘤姜黄素 PI3K/Akt信号通路

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稳定表达HBx的肝前体细胞株的构建及其对增殖的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第3期29卷 256-260页

作者：芦永良申利红李红丽胡代曦张锡峰胡斌冯涛黄佳祎重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学细胞生物学遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前体细胞株,检测对肝前体细胞增殖,细胞周期及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法重组质粒pSEB-Flag-HBx与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组... 详细信息

目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前体细胞株,检测对肝前体细胞增殖,细胞周期及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法重组质粒pSEB-Flag-HBx与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,稻瘟菌素(blasticidin)筛选出稳定表达HBx基因的细胞克隆并扩大培养(HP14.5/HBx组),设HP14.5/Rv(空质粒pSEEB-Flag感染组)及空细胞组HP14.5组为对照组。MTS比色法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期中各时相所占的比例,荧光定量PCR检测cyclin D1和c-myc mRNA的表达量,Western blot法检测HBx、GSK3β、p-GSK3β(ser-9)、β-catenin、cyclin D1以及c-myc等蛋白的表达。结果 RT-PCR和Westernblot法检测到HBx基因和蛋白阳性表达,与对照组相比,HP14.5/HBx细胞增殖活力显著增加(P<0.05);G1细胞比例明显减少(P<0.05),S期和G2细胞比例显著升高(P<0.05);cyclin D1和c-myc mRNA的表达量显著升高(P<0.05);GSK3β蛋白水平表达无明显变化(P>0.05),p-GSK3β、β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平显著升高(P<0.05)。结论成功筛选出稳定表达HBx的肝前体细胞株,HBx通过活化Wnt/β-catenin信号途径促进肝前体细胞的增殖。

关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝前体细胞细胞增殖 wnt β-catenin信号途径

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CXCR2在血压调控中的作用及机制研究

CXCR2在血压调控中的作用及机制研究

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中国病理生理学会心血管专业委员会第十五届学术大会暨国际心脏研究会中国分会第十二届学术大会

作者：王蕾赵雪辰王红霞任华亮王海桦杜杰李汇华首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学教研室北京100069 大连医科大学附属第一医院心脏中心辽宁大连116011 北京协和医院血管外科北京100032 济宁医学院附属医院实验中心山东济宁272000 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所北京100029

目的:炎症免疫反应在血压调控中发挥重要作用,CXCR2是一种重要的炎症细胞趋化因子受体,在介导中性粒细胞、巨噬细胞等炎症细胞的趋化过程中发挥重要作用.本文拟探讨CXCR2受体在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和DOCA盐诱导的高血压中的作用及分子...

目的:炎症免疫反应在血压调控中发挥重要作用,CXCR2是一种重要的炎症细胞趋化因子受体,在介导中性粒细胞、巨噬细胞等炎症细胞的趋化过程中发挥重要作用.本文拟探讨CXCR2受体在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和DOCA盐诱导的高血压中的作用及分子机制.方法:利用实时定量PCR(qPCR)、免疫组化及流式细胞技术分别检测血管组织中的CXCR2表达水平和炎症细胞类型;在CXCR2基因敲除小鼠和CXCR2拮抗剂(SB265610)处理的小鼠中,明确CXCR2在Ang Ⅱ和DOCA盐诱导的血压升高、炎症细胞浸润、ROS产生、血管重构和功能损害中的作用;最后在骨髓移植小鼠中验证CXCR2的作用及分子机制.

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