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解剖学杂志 2007年第3期30卷 327-330页

作者：张正洪曲鹏刘玉丽张宝辉方秀斌郧阳医学院解剖学教研室十堰442000 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室沈阳110001

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响。方法:用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、W... 详细信息

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响。方法:用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western印迹法和图像分析方法检测大鼠手术侧顶叶皮质CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组手术侧顶叶皮质CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组;NGF组和CGRP组顶叶皮质CREB和p-CREB表达均高于缺血再灌注组;NGF组和CGRP联合应用时CREB与p-CREB的表达更高。结论:NGF与CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的,NGF和CGRP有协同作用。

关键词：神经生长因子降钙素基因相关肽环磷酸腺苷反应元件结合蛋白脑缺血再灌注

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七叶皂苷钠抗大鼠脑出血后脑水肿作用及其机制

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中国药理学通报 2007年第2期23卷 173-177页

作者：谢晓利刘云会薛一雪中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第二医院神经外科辽宁沈阳110003

目的探讨七叶皂苷钠(***-1.d-1)抗大鼠脑出血后脑水肿的作用及其机制。方法采用♂Wistar大鼠右侧基底核注入50μl自体全血的方法建立模型,并在模型建立后6,24,48或72h处死大鼠。应用干湿重法、酶学方法、免疫组化法和Western blot法,测... 详细信息

目的探讨七叶皂苷钠(***-1.d-1)抗大鼠脑出血后脑水肿的作用及其机制。方法采用♂Wistar大鼠右侧基底核注入50μl自体全血的方法建立模型,并在模型建立后6,24,48或72h处死大鼠。应用干湿重法、酶学方法、免疫组化法和Western blot法,测定各组大鼠脑组织含水量,Na+,K+含量,神经胶质原纤维蛋白(GFAP)阳性细胞和紧密连接相关蛋白occludin表达的变化。结果与假手术组比,模型组出血同侧脑组织含水量,Na+含量和GFAP阳性细胞均明显增加(P<0.05),K+含量和occludin的表达明显减少(P<0.05);与模型组比,治疗组出血同侧脑组织含水量,Na+含量和GFAP阳性细胞明显减少(P<0.05),K+含量和occludin的表达则明显增加(P<0.05)。结论七叶皂苷钠可减轻和(或)延缓脑出血后脑水肿的发生,进而改善脑出血的预后。

关键词：脑出血脑水肿 occludin 七叶皂苷钠

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Galectin-3在CCl_4致肝损伤及对GRP78调控的作用

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世界华人消化杂志 2007年第33期15卷 3468-3473页

作者：张鸿具英花刘晓湘平贺紘一方秀斌中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁省沈阳市110001 日本富山医科药科大学医学部

目的:探讨Galectin-3对CCl_4致急性肝损伤时GRP78的调控作用.方法:选择ICR系的♂Galectin-3基因敲除型[Gal-3(-/-)]和其野生型[Gal(+/+)1小鼠,一次灌胃给予CCl_4,观察给药后10,24,48和72 h的肝组织病理改变和检测其血清谷草转氨酶(AST)... 详细信息

目的:探讨Galectin-3对CCl_4致急性肝损伤时GRP78的调控作用.方法:选择ICR系的♂Galectin-3基因敲除型[Gal-3(-/-)]和其野生型[Gal(+/+)1小鼠,一次灌胃给予CCl_4,观察给药后10,24,48和72 h的肝组织病理改变和检测其血清谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性,并检测肝细胞不同细胞组分中的GRP78蛋白表达.结果:与Gal(+/+)型鼠比较,CCl_4对Gal-3(-/-)型鼠的肝组织病理损伤出现时间早、损伤程度重.Gal-3(-/-)型鼠在CCl_4灌胃后10和24 h的血清ALT活性(1 860±191 U/L vs 1356±177 U/L,t=6.12,P<0.01;2789±236 U/L vs 2468±221 U/L,f=3.14,P<0.01)及CCl_4灌胃后10 h的血清AST活性(946±89 vs 623±73 U/L,t=8.87,P<0.01)与Gal(+/+)型鼠比较显著升高.对照组中Gal-3(+/+)型鼠的微粒体组分(Mic)中的GRP78蛋白表达显著高于Gal-3(-/-)型鼠(140.9±21.1 vs 76.1±9.5,t=8.86,P<0.01).在CCl_4 ig后24 h,Gal-3(+/+)型鼠的肝细胞线粒体组分(Mt)和Mic中的GRP78蛋白表达明显升高,并显著高于Gal-3(-/-)型鼠(Mt:127.0±18.8 vs 49.1±6.3,P<0.01;Mic:166.5±23.4 vs 87.7±11.6,P<0.01).结论:Galectin-3蛋白在CCl_4致急性肝损伤中可能具有一定的保护作用.上调Mic和Mt中的GRP78蛋白表达可能是Galectin-3在CCl_4对肝细胞损伤中发挥保护作用的一个途径.

关键词： Galectin一3 四氯化碳肝损伤葡萄糖调节蛋白78

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大鼠局灶性脑缺血再灌注后早期生长反应基因—1mRNA的表达(英文)

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中国神经精神疾病杂志 2007年第11期33卷 644-647页

作者：毕国荣 ■剑飞白丽娟张贺敏张辉海虹周慧杰方秀斌中国医科大学第二临床学院神经内科沈阳110004 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室

目的探讨早期生长反应基因-1( early growth response gene-1,Egr-1)mRNA在大鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达情况。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200 ～250 g,应用原位杂交和RT-PCR方法检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后Egr-1 mRNA的表达情... 详细信息

目的探讨早期生长反应基因-1( early growth response gene-1,Egr-1)mRNA在大鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达情况。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200 ～250 g,应用原位杂交和RT-PCR方法检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后Egr-1 mRNA的表达情况。结果 (1)原位杂交结果:假手术组神经元及胶质细胞为轻度阳性表达。缺血2 h再灌注2 h后,缺血侧Egr-1 mRNA细胞阳性表达明显增强。再灌注4 h时Egr-1 mRNA细胞阳性表达最高,再灌注22 h Egr-1 mRNA细胞阳性表达下降,至166 h时下降更加明显,但仍显著高于假手术组。(2)RT-PCR结果:大鼠脑缺血再灌注后缺血侧Egr-1 mRNA的表达明显高于假手术组,P<0.01。动态观察发现,脑缺血2h再灌注2 h后,Egr-1 mRNA即高表达,缺血2 h再灌注4 h达高峰,再灌注46 h已明显下降,但仍高于假手术组,P<0.01,随缺血再灌注时间延长,Egr-1 mRNA表达又逐渐增多,至再灌注166 h其表达亦明显高于假手术组,P<0.01。结论缺血再灌注后Egr-1 mRNA有规律性表达。

关键词：脑缺血再灌注早期生长反应基因-1 原位杂交RT-PCR

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肾上腺髓质素对局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠神经元凋亡及早期生长反应基因-1的影响

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中国危重病急救医学 2007年第6期19卷 353-357,I0001页

作者：毕国荣张辉周慧杰白丽娟张贺敏海虹方秀斌中国医科大学第二临床学院神经内科辽宁沈阳110004 中国医科大学第二临床学院基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110004

目的探讨肾上腺髓质素（ADM）对局灶性脑缺血/再灌注（I/R）损伤大鼠神经元凋亡、梗死体积及早期生长反应基因-1（Egr-1） mRNA表达的影响,进一步研究ADM在局灶性脑I/R损伤中的作用。方法将54只SD大鼠随机分为假手术组、I/R损伤组以及AD... 详细信息

目的探讨肾上腺髓质素（ADM）对局灶性脑缺血/再灌注（I/R）损伤大鼠神经元凋亡、梗死体积及早期生长反应基因-1（Egr-1） mRNA表达的影响,进一步研究ADM在局灶性脑I/R损伤中的作用。方法将54只SD大鼠随机分为假手术组、I/R损伤组以及ADM股静脉组、颈内动脉组和侧脑室组。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉（MCA）I/R损伤模型,于阻断血流2h后分别经股静脉、颈内动脉和侧脑室3条途径注射ADM进行干预后再灌注22h。应用氯化三苯四唑（TTC）染色法测定梗死体积,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测神经元凋亡,用原位杂交法检测Egr-1 mRNA阳性细胞表达。结果大鼠局灶性脑I/R损伤并经股静脉、颈内动脉、侧脑室注射ADM后,脑梗死体积显著小于I/R损伤组;且颈内动脉和侧脑室注射ADM在减少脑梗死体积方面明显优于股静脉注射ADM（P均〈0.05）。I/R损伤组大鼠缺血侧大脑皮质、海马CA1区凋亡阳性细胞数明显多于假手术组（P均〈0.01）,给予ADM后阳性细胞数显著少于I/R损伤组,以ADM颈内动脉组和侧脑室组更为明显（P均〈0.01）。假手术组大鼠大脑皮质有少量Egr-1 mRNA阳性细胞表达,I/R损伤后缺血侧大脑皮质、海马CA1区Egr-1 mRNA阳性细胞表达多于假手术组（P均〈0.01）,应用ADM的3组大鼠大脑皮质、海马CA1区Egr-1 mRNA阳性细胞的表达明显多于I/R损伤组（P均〈0.01）,但颈内动脉和侧脑室给予ADM组的Egr-1 mRNA阳性细胞表达增高最为明显（P均〈0.01）。结论股静脉、侧脑室和颈内动脉给予外源性ADM能减少神经元凋亡和梗死体积,激活Egr-1 mRNA,对局灶性脑I/R损伤可能有治疗作用。

关键词：缺血/再灌注损伤,脑,局灶性肾上腺髓质素早期生长反应基因-1 凋亡

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NGF对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马tau蛋白磷酸化作用的影响

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中国药理学通报 2007年第8期23卷 1084-1088页

作者：张正洪席刚明李文春曲鹏方秀斌郧阳医学院解剖学教研室郧阳医学院附属人民医院神经内科湖北十堰442000 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110001

目的探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响。方法用线栓法制作局灶性脑缺血/再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Westernblot和图像分析方法检测大鼠海马CA1区tau蛋白在Ser199/202... 详细信息

目的探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响。方法用线栓法制作局灶性脑缺血/再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Westernblot和图像分析方法检测大鼠海马CA1区tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化程度和总tau蛋白表达,以及NGF对tau蛋白过度磷酸化的影响。结果缺血/再灌注组海马CA1区tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平和总tau蛋白明显升高(P<0·05);NGF组大鼠海马tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平明显低于缺血/再灌注组,总tau也下降(P<0·05)。结论NGF明显减轻局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马tau蛋白磷酸化程度,降低tau蛋白磷酸化水平可能对缺血神经元起保护作用。

关键词：神经生长因子脑缺血 tau蛋白磷酸化大鼠

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骨髓基质干细胞治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的实验研究

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中国免疫学杂志 2007年第7期23卷 615-619,628页

作者：李呼伦孙博穆丽莉刘希君王丹丹赵凯金连弘华中科技大学同济医学院附属医院神经内科武汉430000 哈尔滨医科大学神经生物学教研室

目的:通过体内、外实验,研究骨髓基质干细胞(BMSCs)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用及其机制。方法:建立Lewis大鼠EAE动物模型,在免疫后第6天尾静脉回输PKH26标记的BMSCs,于发病高峰期处死大鼠,组织取材。通过临床评估、荧... 详细信息

目的:通过体内、外实验,研究骨髓基质干细胞(BMSCs)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用及其机制。方法:建立Lewis大鼠EAE动物模型,在免疫后第6天尾静脉回输PKH26标记的BMSCs,于发病高峰期处死大鼠,组织取材。通过临床评估、荧光示踪、免疫学病理学等方法检测,评估BMSCs对EAE的治疗作用及其机制。同时在体外用化学方法诱导BMSCs向少突胶质细胞分化,观察其分化的情况。结果:通过尾静脉回输,BMSCs能够聚集到病变部位,并发生分化。与对照组相比,回输组大鼠发病临床评分较低,中枢神经系统脱髓鞘的病理改变和炎性细胞浸润减轻,CD4+和CD8+T细胞表达明显减少(P<0.05),血清及淋巴细胞培养上清中IFN-γ和TNF-α的分泌水平显著降低(P<0.05),IL-4的分泌水平显著升高(P<0.05)。体外诱导72小时未见到BMSCs向少突胶质细胞分化;4天后45%的BMSCs发生分化。结论:在体外BMSCs通过化学诱导可以向少突胶质细胞分化;在体内BMSCs能向病变部位迁移,并部分分化成少突胶质细胞,同时BMSCs通过调节免疫系统的炎症细胞因子表达、CD4+和CD8+T细胞数和Th1和Th2细胞平衡,对EAE起治疗作用。

关键词： EAE BMSCs 分化细胞因子

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NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB表达的上调作用

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神经解剖学杂志 2007年第4期23卷 419-422页

作者：张正洪曲鹏方秀斌郧阳医学院解剖学教研室十堰442000 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室沈阳110001

为探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响,用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学、WesternBlotting和图像分析方法检测大鼠缺血侧顶... 详细信息

为探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响,用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学、WesternBlotting和图像分析方法检测大鼠缺血侧顶叶皮质CREB和p-CREB的表达。结果显示:缺血再灌注组CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组(P<0.05);NGF组CREB和p-CREB表达高于缺血再灌注组(P<0.05)。以上结果表明NGF明显上调局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和p-CREB的表达,NGF对缺血神经元的保护作用可能通过上调CREB和p-CREB的表达来实现。

关键词：神经生长因子脑缺血 cAMP反应元件结合蛋白顶叶皮质

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PKCδ抑制剂减轻6-OHDA诱导的多巴胺能神经细胞凋亡

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哈尔滨医科大学学报 2007年第2期41卷 132-135页

作者：李志伟张艳桥范鹰李呼伦张一娜哈尔滨医科大学第三临床医学院内科哈尔滨医科大学第二临床医学院老年病科哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的观察蛋白激酶Cδ抑制剂在6-OHDA诱导多巴胺能神经细胞系SH-SY5Y细胞凋亡过程中所起的作用,探讨帕金森病可能的分子发病机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,观察PKC抑制剂对6-OHDA毒性作用的影响,分别用台盼蓝染色、流式细胞仪和透射电... 详细信息

目的观察蛋白激酶Cδ抑制剂在6-OHDA诱导多巴胺能神经细胞系SH-SY5Y细胞凋亡过程中所起的作用,探讨帕金森病可能的分子发病机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,观察PKC抑制剂对6-OHDA毒性作用的影响,分别用台盼蓝染色、流式细胞仪和透射电镜法观察细胞凋亡。结果PKCδ抑制剂Rottlerin可减轻6-OHDA引起的细胞凋亡。而总PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I(Bis)和钙依赖性PKC(α和β)抑制剂G 6976不能减轻6-OHDA引起的细胞凋亡。结论PKCδ抑制剂对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞凋亡产生保护作用,PKCδ可能直接参与了帕金森病人的神经元凋亡过程。

关键词： 6-羟基多巴胺蛋白激酶Cδ 蛋白激酶C抑制剂帕金森病

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曲古菌素A在胃腺癌细胞系SGC-7901中的作用

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中华胃肠外科杂志 2007年第4期10卷 376-379页

作者：李云龙邹小明郭宝良李晓林闫朝岐尤立光傅松滨哈尔滨医科大学附属第二医院普通外科 150086 哈尔滨医科大学附属第五医院普通外科哈尔滨医科大学附属第二医院基础医学院医学遗传学与生物学教研室 150086

目的研究曲古菌素A（TSA）在胃腺癌细胞系SGC-7901中的作用。方法四甲基偶氮唑蓝法测定TSA对SGC-7901的细胞毒性，荧光显微镜观察细胞核DNA的变化，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率，Western印迹检测组蛋白H3的乙酰化状态。结果SGC-790... 详细信息

目的研究曲古菌素A（TSA）在胃腺癌细胞系SGC-7901中的作用。方法四甲基偶氮唑蓝法测定TSA对SGC-7901的细胞毒性，荧光显微镜观察细胞核DNA的变化，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率，Western印迹检测组蛋白H3的乙酰化状态。结果SGC-7901细胞生长曲线表明，TSA浓度增高，细胞生长率下降。细胞凋亡率在75ng／mlTSA作用72h时与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。凋亡细胞DNA变化主要表现为核染色质固缩及断裂，荧光染色增强。流式细胞仪分析出现明显的亚G1期峰，G1期细胞减少，细胞凋亡率达29．54％。TSA作用后，乙酰化的组蛋白如明显增多。结论TSA可以诱导SGC-7901细胞发生凋亡，组蛋白H3的乙酰化状态可能与细胞凋亡有关。

关键词：胃肿瘤曲古菌素A 细胞凋亡乙酰化组蛋白H3 细胞系SGC-7901

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