目的:化学遗传学方法筛选并初步鉴定获得不同造血缺陷表型的斑马鱼突变体。方法:乙基亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱导雄性斑马鱼突变(founder),将其与AB野生型雌性斑马鱼交配产生F1代,源自不同founder的F1杂交产生F2家族,F2代同家族内自交所产生的F3代胚胎分别以βe7为探针的整体原位杂交实验(WISH)标记胚胎期珠蛋白基因进行红系造血缺陷突变体筛选、以中性红(neutral red,NR)活体标注巨噬细胞和苏丹黑B(Sudan black B,SB)活体标注中性粒细胞进行髓系造血缺陷突变体筛选,并根据所筛选到的突变体的不同造血过程缺陷表型分原始造血、造血干细胞和定向造血三个不同时间段进行初步分类研究。其中,22hpfβe7检测原始红系、36hpfc-myb检测造血干细胞、3.0dpf时用O-dianisidine对原始造血阶段的血红蛋白进行检测、3.5dpf时的NR和SB分别对原始造血阶段的巨噬细胞和中性粒细胞进行检测、5.0dpf rag7检测定向淋系、5.0dpfβe7验证定向红系、5.0dpf/yc检测定向造血的髓系。结果:在350个F2家系中配种筛选了1424对鱼,共获得23个突变体。经过初步鉴定,其中12个为红系特异性造血缺陷,2个为红系和淋系造血缺陷,2个为头部巨噬细胞(小胶质细胞)缺陷,1个为头部小胶质细胞和VDA区巨噬细胞同时缺陷,5个为中性粒细胞缺陷,1个为红系和髓系造血同时缺陷。
目的探讨基因疫苗干预对柯萨奇病毒B组3型(coxsackie virus group B type 3,CVB3)感染后,小鼠心肌组织病理及细胞超微结构的变化及意义。方法将BALB/C小鼠随机分为3组,每组11只,用空质粒pcDNA3、基因疫苗pcDNA3/VP1和融合基因疫苗pcDNA3...
详细信息
目的探讨基因疫苗干预对柯萨奇病毒B组3型(coxsackie virus group B type 3,CVB3)感染后,小鼠心肌组织病理及细胞超微结构的变化及意义。方法将BALB/C小鼠随机分为3组,每组11只,用空质粒pcDNA3、基因疫苗pcDNA3/VP1和融合基因疫苗pcDNA3/MDC-L19-VP1分别免疫,共3次,每次间隔4周。末次免疫后第3周,每组随机取3只小鼠,腹腔注射含3倍半数致死量(3 half lethal dose,3LD50)的CVB3病毒液,感染后第7天将小鼠处死,用于检测血中病毒滴度,并取心脏组织进行病理观察和细胞超微结构观察。每组剩余8只小鼠,腹腔注射致死量病毒液,观察并记录动物存活情况。结果预防性接种重组基因疫苗后,CVB3感染的小鼠生存率pcDNA3/MDC-L19-VP1组为37.5%,pcDNA3/VP1组12.5%,pcDNA3组11 d内全部死亡,3组生存率比较差异有统计学意义(P<0.01);3组小鼠血中的病毒滴度依次降低,且差异有统计学意义(P<0.01);光镜观察显示pcDNA3/MDC-L19-VP1组小鼠心肌组织细胞未出现严重的水肿和炎细胞浸润,电镜显示心肌细胞未出现核周水肿,肌原纤维未见断裂溶解,线粒体、肌浆网等细胞器未见明显异常,仅有少量炎性细胞浸润。结论融合基因重组疫苗可以有效的预防CVB3感染对心肌的损伤。
暂无评论