检索结果-内蒙古大学图书馆

南方医科大学学报 2020年第2期40卷 219-224页

作者：古文清潘文斌朱茜肖潇赵岩岩刘雅琴刘俊李明基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 中山大学孙逸仙纪念医院生物样本库广东广州510120 南方医科大学药学院广东广州510515 南方医科大学珠江医院泌尿外科广东广州510028

目的通过研究KIF3A在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠和TGF-β1诱导的NRK-52E细胞中的表达情况,探讨KIF3A在肾间质纤维化中的作用。方法将36只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(Sham,n=18)和单侧输尿管梗阻组(UUO,n=18),分别于术后7、14、21 d处... 详细信息

目的通过研究KIF3A在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠和TGF-β1诱导的NRK-52E细胞中的表达情况,探讨KIF3A在肾间质纤维化中的作用。方法将36只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(Sham,n=18)和单侧输尿管梗阻组(UUO,n=18),分别于术后7、14、21 d处死小鼠。苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)三色法染色和天狼星红(Sirius Red)染色观察小鼠肾间质纤维化程度,RT-PCR、免疫组织化学(IHC)和免疫印迹(Western blot)检测小鼠肾组织KIF3A的表达和分布。免疫印迹检测小鼠肾组织KIF3A、E-cadherin和α-SMA蛋白的表达。TGF-β1诱导NRK-52E细胞转分化后,免疫印迹检测KIF3A、E-cadherin、α-SMA、Wnt4和β-catenin蛋白的表达。结果与Sham组相比,UUO小鼠肾间质纤维化程度随着梗阻时间延长而增加,表明造模成功。同时,KIF3A mRNA和蛋白表达均增高,于21 d达到高峰,α-SMA蛋白表达显著上调,E-cadherin蛋白表达明显降低。NRK-52E细胞发生转分化时,KIF3A蛋白的表达增多(P<0.001),同时wnt/β-catenin信号通路中Wnt4和β-catenin蛋白表达增加(P<0.05,P<0.0001)。结论KIF3A可能通过wnt/β-catenin信号通路介导的上皮细胞-间充质转化参与肾纤维化的发生发展过程。

关键词： KIF3A 肾间质纤维化 wnt/β-catenin信号通路 EMT

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雌二醇与ESR1靶向结合通过ERK信号通路调控软骨细胞的增殖

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南方医科大学学报 2019年第2期39卷 134-143页

作者：刘敏谢巍伟郑维尹丹旸罗瑞郭风劲重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室//发育生物学与模式动物平台重庆400016

目的探讨雌二醇(E2)/ESR1(ERα)对C28I2软骨细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法应用Ad-Easy腺病毒包装系统构建和包装过表达腺病毒Ad-ESR1,Western blot及QPCR检测该基因在细胞中蛋白及RNA表达情况。在E2处理下,设立不同病毒感染组处... 详细信息

目的探讨雌二醇(E2)/ESR1(ERα)对C28I2软骨细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法应用Ad-Easy腺病毒包装系统构建和包装过表达腺病毒Ad-ESR1,Western blot及QPCR检测该基因在细胞中蛋白及RNA表达情况。在E2处理下,设立不同病毒感染组处理C28I2细胞,Western blot检测各处理组C28I2细胞的自噬、凋亡相关蛋白的表达及ERK信号通路的磷酸化水平;免疫荧光实验观察细胞内自噬流的强弱;FCM检测各组细胞凋亡率及周期;QPCR检测mRNA水平增殖相关标志基因(PCNA)、细胞周期蛋白B1(CyclinB1)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达。ERK特异性抑制剂处理细胞,Western blot检测抑制ERK通路后自噬及凋亡相关蛋白表达,QPCR检测增殖相关标志基因表达。结果成功构建过表达腺病毒Ad-ESR1。过表达ESR1能够促进E2处理后LC3和ATG7的表达,促进LC3和LAMP1在细胞质中共定位,抑制cleaved caspase3、cleavedcaspase12的表达并且促进PCNA、cyclinB1和cyclinD1表达,且细胞内pERK明显减少;而干扰ESR1表达后,自噬相关蛋白表达减少,自噬流减弱,凋亡蛋白表达增加,增殖标志基因表达下调,细胞内pERK相对增加。特异性抑制剂阻断ERK活化,E2/ESR1诱导的自噬增加以及凋亡减少被抑制,增殖相关基因表达被抑制。结论 E2与ESR1的靶向结合可促进软骨细胞的增殖,其作用机制可能与抑制ERK信号通路活化从而促进自噬、抑制凋亡有关。

关键词： ESR1 自噬凋亡增殖 ERK信号通路雌二醇

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基于CRISPR/Cas9技术的基因敲入/敲除策略

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中国生物化学与分子生物学报 2019年第1期35卷 1-6页

作者：张雪梅高旭马宁哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150081

成簇的规律间隔性短回文序列(CRISPR)基因编辑系统,因其设计简单操作方便和无种属限制,已成为一种广泛应用的基因组定点编辑工具,在复杂的基因组编辑,例如基因的人源化改造以及条件等位基因的构建中有所应用。在自然界中,CRISPR系统拥... 详细信息

成簇的规律间隔性短回文序列(CRISPR)基因编辑系统,因其设计简单操作方便和无种属限制,已成为一种广泛应用的基因组定点编辑工具,在复杂的基因组编辑,例如基因的人源化改造以及条件等位基因的构建中有所应用。在自然界中,CRISPR系统拥有多种类别。其中,CRISPR/Cas9系统是研究最深入、应用最成熟的一种。本文针对CRISPR/Cas9系统,分别从基因敲入/敲除片段的大小、同源臂长短、构型即递送方式等技术环节进行综述,阐述不同设计及操作条件下由CRISPR/Cas9系统介导的基因敲入/敲除的效率差异。

关键词：基因编辑成簇的规律间隔性短回文序列(CRISPR) 基因敲入同源模板

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氯硝柳胺的药理学作用及机制研究进展

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医学综述 2021年第15期27卷 3055-3060页

作者：轩秀晨黄卉吕桂香哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江省医学科学院北方转化医学研究与合作中心哈尔滨150081

氯硝柳胺是一种可杀灭钉螺的常用药物,也可作为肠道驱虫药,用于治疗肠道绦虫感染。氯硝柳胺口服耐受性较好,具有较强的抗增殖、促进凋亡、抗炎、抗细胞迁移、促进线粒体氧化磷酸化解偶联、诱导自噬、改变细胞物质能量代谢等药理学活性,... 详细信息

氯硝柳胺是一种可杀灭钉螺的常用药物,也可作为肠道驱虫药,用于治疗肠道绦虫感染。氯硝柳胺口服耐受性较好,具有较强的抗增殖、促进凋亡、抗炎、抗细胞迁移、促进线粒体氧化磷酸化解偶联、诱导自噬、改变细胞物质能量代谢等药理学活性,且对体内多种信号通路有调节作用。氯硝柳胺在治疗肿瘤、细菌病毒感染、糖尿病、心血管系统疾病等方面具有潜在的应用效果,但氯硝柳胺在体内作用的确切靶点目前尚不明确,其治疗多种疾病的临床疗效仍需进一步大规模随机对照研究验证。

关键词：氯硝柳胺药理学作用机制

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兔抗人精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B)多克隆抗体的制备及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第4期37卷 362-367页

作者：杨宏新杨勇曹贵方内蒙古农业大学兽医学院内蒙古自治区基础兽医学重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古医科大学基础医学院细胞生物学教研室内蒙古呼和浩特010110 内蒙古自治区人民医院肿瘤外科内蒙古呼和浩特010017

目的制备兔抗人精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B)多克隆抗体。方法构建pET-22b-SAS1B-His质粒,转化***21(DE3)细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导SAS1B重组蛋白表达。用层析纯化后的蛋白免疫日本大耳白兔制备SAS1B多... 详细信息

目的制备兔抗人精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B)多克隆抗体。方法构建pET-22b-SAS1B-His质粒,转化***21(DE3)细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导SAS1B重组蛋白表达。用层析纯化后的蛋白免疫日本大耳白兔制备SAS1B多克隆抗体。ELISA检测SAS1B抗体效价,Western blot和免疫组织化学法鉴定SAS1B抗体特异性。结果在构建pET-22b-SAS1B-His原核表达载体的基础上,在BL21(DE3)细胞成功诱导表达SAS1B重组蛋白。制备的兔抗人SAS1B多克隆抗体效价为1∶51200。SAS1B多克隆抗体能与SAS1B重组蛋白特异结合且能识别乳腺癌组织中的SAS1B蛋白。结论成功制备具有较好特异性的兔抗人SAS1B多克隆抗体。

关键词：精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B) 原核表达蛋白纯化多克隆抗体

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巨噬细胞mTOR活化促进小鼠机体有氧糖酵解

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赣南医学院学报 2020年第3期40卷 274-278页

作者：刘小琳柯志勇宋千成梁康檐南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515

目的:探讨巨噬细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活性在有氧糖酵解中的调节作用。方法:对巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠(Lysm-Cre TSC1 flox/flox)和对照小鼠(TSC1 flox/flox)进行高脂饮食造模,通过葡萄糖糖耐量实验(IPGTT)和胰岛素耐受实... 详细信息

目的:探讨巨噬细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活性在有氧糖酵解中的调节作用。方法:对巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠(Lysm-Cre TSC1 flox/flox)和对照小鼠(TSC1 flox/flox)进行高脂饮食造模,通过葡萄糖糖耐量实验(IPGTT)和胰岛素耐受实验(ITT)分析巨噬细胞mTOR活化对小鼠机体血糖的调节作用。雷帕霉素处理KO小鼠和WT小鼠的原代巨噬细胞,利用生化分析仪检测葡萄糖消耗和乳酸生成。用雷帕霉素(2 mg·g^-1)对两组小鼠灌胃处理,2周后行IPGTT实验。利用免疫荧光染色实验观察小鼠肝组织中6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-磷酸酶-3(PFKFB3)的分布。结果:通过高脂饮食造模后,小鼠体重明显增加,并出现了胰岛素抵抗。与WT小鼠比较,KO小鼠出现更加严重的胰岛素抵抗,胰岛素分泌的量也增多。雷帕霉素处理后,与WT小鼠相比,KO小鼠的原代腹腔巨噬细胞葡萄糖消耗量和乳酸生成均明显降低(P<0.05);小鼠进行雷帕霉素灌胃后,相比于WT小鼠,KO小鼠血糖值明显升高(P<0.05)。葡萄糖负荷30 min时血糖值达到最高,为21.85 mmol·L^-1。免疫荧光染色显示KO小鼠的肝组织有大量的PFKFB3蛋白表达。结论:巨噬细胞mTOR活化通过调节PFKFB3促进有氧糖酵解。

关键词：巨噬细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-磷酸酶-3 有氧糖酵解

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巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠的构建

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宁夏医学杂志 2020年第5期42卷 385-387,I0001页

作者：刘小琳梁康檐南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515

目的为研究TSC1在巨噬细胞极化中的作用,拟建立巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠,提供稳定的动物模型。方法利用Cre-loxP系统构建巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠(LysM-Cre TSC1flox/flox),并通过PCR和Western-Blot鉴定模型建立是否成功。结果通... 详细信息

目的为研究TSC1在巨噬细胞极化中的作用,拟建立巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠,提供稳定的动物模型。方法利用Cre-loxP系统构建巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠(LysM-Cre TSC1flox/flox),并通过PCR和Western-Blot鉴定模型建立是否成功。结果通过PCR和Western-Blot鉴定LysM-Cre TSC1flox/flox模型建立成功,mTOR活性明显升高。结论成功构建巨噬细胞特异性敲除TSC1小鼠,为TSC1在巨噬细胞极化中的作用研究提供实验基础。

关键词：结节性硬化复合物1 巨噬细胞 mTOR 基因敲除

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神经元膜蛋白功能及鉴定技术研究进展

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国际免疫学杂志 2020年第5期43卷 525-529页

作者：姜岩王菁华哈尔滨医科大学基础医学院神经生物学教研室 150081

神经元膜蛋白在神经细胞的生长发育和神经相关疾病的发展中发挥着关键作用,同时也是一些疾病治疗的潜在靶点。进一步了解神经元膜蛋白有助于加深对神经元功能的理解和寻找相关疾病的新的解决方法。文章总结了近几年发现的几种神经元膜... 详细信息

神经元膜蛋白在神经细胞的生长发育和神经相关疾病的发展中发挥着关键作用,同时也是一些疾病治疗的潜在靶点。进一步了解神经元膜蛋白有助于加深对神经元功能的理解和寻找相关疾病的新的解决方法。文章总结了近几年发现的几种神经元膜蛋白及其功能,以及一些新兴的研究技术。

关键词：神经元膜蛋白蛋白质鉴定

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Box-Benhnken响应面法优化白及愈伤组织的增殖培养基配方

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生物资源 2020年第1期42卷 131-135页

作者：上官艳妮李林潘胤池赵梓岐刘厚伯徐德林遵义医科大学基础医学院细胞生物学教研室贵州遵义563099

为了提高白及组培过程中愈伤的增殖系数,以白及种子为外植体,利用响应面法对诱导愈伤的增殖培养基中的激素水平进行优化。在添加不同浓度的6-BA(6-苄氨基嘌呤)和2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)的正交试验诱导愈伤基础上,根据BoxBenhnken(BBD)... 详细信息

为了提高白及组培过程中愈伤的增殖系数,以白及种子为外植体,利用响应面法对诱导愈伤的增殖培养基中的激素水平进行优化。在添加不同浓度的6-BA(6-苄氨基嘌呤)和2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)的正交试验诱导愈伤基础上,根据BoxBenhnken(BBD)试验设计原理,采用三因素三水平的方法对3个激素的不同浓度水平进行组合实验。结果显示,通过回归模型分析获得增殖诱导的最佳培养基为MS+0.801 mg/L 6-BA(6-苄氨基嘌呤)+1.192 mg/L 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)+0.724 mg/L NAA(萘乙酸)。以优化后培养基进行愈伤组织继代发现其增殖系数为6.1542,为理论预测值的99.74%。利用响应面法对愈伤组织增殖培养基进行优化,为以愈伤组织为研究材料的细胞悬浮培养、遗传转化、种苗快繁等研究奠定了基础。

关键词：白及愈伤组织增殖培养基配方 Box-Benhnken(BBD)响应面法

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皮肤优势型慢性移植物抗宿主病小鼠模型的构建

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第三军医大学学报 2021年第21期43卷 2286-2293页

作者：王蔚浩杨世杰杜雨軒王筱淇洪涛何云地王瑞马超安慧慧王俊洁张云芳高强国张曦陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院血液病医学中心全军血液病中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400037 遵义医科大学第二附属医院检验科贵州遵义563099 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院细胞生物学教研室重庆400038

目的构建皮肤优势型慢性移植物抗宿主病(chronic graft-versus-host disease,cGVHD)小鼠模型。方法利用致死剂量辐照BALB/c小鼠,并接受来自B10.D2供鼠混合的骨髓细胞和脾脏细胞以构建皮肤优势型cGVHD小鼠模型,通过小鼠临床表现、病理特... 详细信息

目的构建皮肤优势型慢性移植物抗宿主病(chronic graft-versus-host disease,cGVHD)小鼠模型。方法利用致死剂量辐照BALB/c小鼠,并接受来自B10.D2供鼠混合的骨髓细胞和脾脏细胞以构建皮肤优势型cGVHD小鼠模型,通过小鼠临床表现、病理特征及靶器官细胞亚群评估模型构建情况。结果模型小鼠的临床表现以皮肤脱毛、硬化、皮屑、结痂和由皮肤皱缩硬化引起的弓背和关节僵直为主,临床病理评分随疾病进展升高,但无明显肠道cGVHD表现。病理改变中皮肤出现明显胶原沉积,毛囊减少甚至消失,而其他靶器官病理改变不明显。对以上靶器官行T细胞亚群分析,发现Th1细胞、CD4^(+)IL-13^(+)T细胞和Tc1细胞与疾病进展密切。结论成功构建可用于实验研究的皮肤优势型小鼠cGVHD模型,病理变化主要以皮肤纤维化表现为主。

关键词：慢性移植物抗宿主病皮肤肝脏肺脏 T细胞

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