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长链非编码RNA 1500026H17Rik对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖的影响

中国细胞生物学学报 2018年第4期40卷 560-567页

作者：张亚娟孙艳彭睿彭惠民张政重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

为了探讨长链非编码RNA 1500026H17Rik对小鼠肾小球系膜细胞增殖的影响,采用qRT-PCR(quantitative Real-time PCR)检测1500026H17Rik在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及在高糖和低糖条件下培养的肾小球系膜细胞中的表达水平;扩增小鼠1500026H17... 详细信息

为了探讨长链非编码RNA 1500026H17Rik对小鼠肾小球系膜细胞增殖的影响,采用qRT-PCR(quantitative Real-time PCR)检测1500026H17Rik在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及在高糖和低糖条件下培养的肾小球系膜细胞中的表达水平;扩增小鼠1500026H17Rik的全长序列,将其克隆到pcDNA3.1(+)载体上,构建pcDNA3.1(+)-1500026H17Rik过表达质粒,并设计合成si RNA;将1500026H17Rik-si RNA和pcDNA(+)-1500026H17Rik过表达质粒分别转染至高糖或低糖培养的肾小球系膜细胞中,通过5-乙基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(5-ethyny1-2′-doexyuridine,Ed U)检测肾小球系膜细胞的增殖能力。结果表明,在糖尿病肾病小鼠肾脏组织和高糖培养的系膜细胞中1500026H17Rik表达水平显著提高。在低糖培养的系膜细胞中转染pcDNA3.1(+)-1500026H17Rik过表达质粒后与低糖培养的系膜细胞或空质粒转染对照组相比,低糖1500026H17Rik过表达的肾小球系膜细胞的增殖能力明显提高。同时,将通过qRT-PCR筛选出的一条敲低效率最佳的1500026H17Rik-si RNA转染至高糖培养的系膜细胞后,与高糖培养的系膜细胞或si RNA转染对照组相比,1500026H17Rik敲低的肾小球系膜细胞的增殖能力明显减弱。lnc RNA-1500026H17Rik在糖尿病肾病小鼠肾脏组织中呈高表达,且影响高低糖培养的肾小球系膜增殖,提示1500026H17Rik可能参与了糖尿病肾病的发生。

关键词：糖尿病肾病长链非编码RNA 1500026H17Rik 肾小球系膜细胞增殖

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病原生物学实验教学改革实践

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基础医学教育 2019年第7期21卷 536-537页

作者：钱钧朱梅李爱梅哈尔滨医科大学基础医学院微生物学教研室哈尔滨150081 黑龙江省医院南岗院区重症医学科

病原生物学实验是医学微生物学理论与实践相结合的纽带,但传统的实验教学内容多为验证性实验,没有很好地调动学生学习的主动性,实验教学改革势在必行。文章初步探索在基础本硕连读学生中开展系统性实验中增加临床案例讨论分析及学生自... 详细信息

病原生物学实验是医学微生物学理论与实践相结合的纽带,但传统的实验教学内容多为验证性实验,没有很好地调动学生学习的主动性,实验教学改革势在必行。文章初步探索在基础本硕连读学生中开展系统性实验中增加临床案例讨论分析及学生自主设计性实验内容,提高了学生的学习兴趣及科学思维能力,锻炼了学生的实践能力,取得较好效果。

关键词：病原生物学教学改革实验教学

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Wnt/β-catenin信号通路对毛囊干细胞增殖和分化的调控作用

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安徽医科大学学报 2018年第12期53卷 1971-1975页

作者：夏肖雪吕正梅张守兵安徽医科大学基础医学院组织胚胎学教研室合肥230032 安徽医科大学基础医学院分子和细胞生物学中心实验室合肥230032

毛囊干细胞参与胚胎时期毛囊的形态发生、维持成体中毛囊的再生,受多种信号通路及信号分子调控。Wnt/β-catenin信号通路是目前研究较深入的一种保守的信号通路,研究其在毛囊形成、毛囊干细胞增殖、分化以及毛囊周期调控中的作用,有助... 详细信息

毛囊干细胞参与胚胎时期毛囊的形态发生、维持成体中毛囊的再生,受多种信号通路及信号分子调控。Wnt/β-catenin信号通路是目前研究较深入的一种保守的信号通路,研究其在毛囊形成、毛囊干细胞增殖、分化以及毛囊周期调控中的作用,有助于促进毛囊干细胞在皮肤损伤修复、治疗秃顶等方面的临床应用。本文概括了Wnt/β-catenin信号通路调控毛囊干细胞增殖和分化的研究结果和进展,并对后期研究方向提出了展望,以期为后继研究提供背景资料。

关键词：毛囊干细胞 Wnt/β-catenin信号通路增殖分化毛囊周期

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大鼠毛囊干细胞体外无血清培养体系的建立

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安徽医科大学学报 2018年第10期53卷 1631-1635页

作者：夏肖雪吕正梅张守兵安徽医科大学基础医学院组织胚胎学教研室合肥230032 安徽医科大学基础医学院分子和细胞生物学中心实验室合肥230032

建立大鼠毛囊干细胞的体外无血清培养体系。使用化学成分确定的Knock Out血清替代物(KSR)代替现有毛囊干细胞生长培养基中的胎牛血清,比较两种培养基培养的毛囊干细胞的形态特点和生长情况;通过毛囊重建实验证明该无血清培养基能够在体... 详细信息

建立大鼠毛囊干细胞的体外无血清培养体系。使用化学成分确定的Knock Out血清替代物(KSR)代替现有毛囊干细胞生长培养基中的胎牛血清,比较两种培养基培养的毛囊干细胞的形态特点和生长情况;通过毛囊重建实验证明该无血清培养基能够在体外维持毛囊干细胞的"干性";检测无血清培养基培养的毛囊干细胞中α6-整合素、角蛋白K14和P63的表达情况。毛囊干细胞在该无血清培养基中可正常生长并表达上述蛋白,将其移植到裸鼠背部,能够重建含毛囊皮肤。建立了大鼠毛囊干细胞的体外无血清培养体系并重建有毛皮肤,为毛囊干细胞的临床研究和应用提供了理论基础和技术支持。

关键词：毛囊干细胞无血清培养基血清替代物毛囊重建

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c—fos在喉鳞状细胞癌耐药细胞株TU177／VCR中的表达及意义

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2018年第4期53卷 281-285页

作者：李国栋胡晓玲邢建峰师如意李欣李剑锋李同丽山西医科大学附属山西省人民医院耳鼻咽喉头颈外科太原030012 山西医科大学基础医学院药理教研室太原030001 山西医科大学基础医学院机能实验室太原030001 山西医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室太原030001

目的研究原癌基因c—fos在喉鳞状细胞癌细胞TU177多药耐药形成中的作用。方法采用药物浓度梯度递增法建立稳定的喉鳞状细胞癌耐药细胞系TU177／VCR；采用RT—PCR及蛋白质印迹法检测TU177与TU177／VCR中c—fos基因和蛋白表达差异；构建... 详细信息

目的研究原癌基因c—fos在喉鳞状细胞癌细胞TU177多药耐药形成中的作用。方法采用药物浓度梯度递增法建立稳定的喉鳞状细胞癌耐药细胞系TU177／VCR；采用RT—PCR及蛋白质印迹法检测TU177与TU177／VCR中c—fos基因和蛋白表达差异；构建靶向人c—fos基因的敲低和过表达质粒，分别转染TU177／VCR和TU177细胞；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测在TU177／VCR细胞敲低***和在TU177细胞过表达c-fos后对化疗药物的敏感性。组间比较采用t检验。结果TU177／VCR与TU177相比较，对于长春新碱（VCR）、紫杉醇（TAX）、顺铂（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-FU）的耐药倍数分别为26．25、7．33、2．41、5．50，表明TU177／VCR耐药株构建成功；与TU177细胞相比，c-fos在TU177／VCR细胞中表达明显多，二者差异有统计学意义（P〈0．05）；TU177／VCR细胞敲低c-fos后细胞耐药性降低，TU177／VCR空载组半抑制浓度（IC20）值为（306．2±6．3）μmol／L，敲低组IC50值为（81．3±3．9）μmol／L，敲低组IC50是空载组Ic50的27％（P〈0．05）；在TUl77细胞过表达c-fos后细胞耐药性增加，TU177细胞空载组IC50值为（55．3±9．4）μmol／L，过表达组IC50值为（288．1±7．3）izmol／L，过表达组IC50是空载组IC50的5．21倍（P〈0．05）。结论c—fos对喉鳞状细胞癌TU177／VCR细胞的多药耐药具有重要作用，有可能成为喉癌治疗新的分子靶点。

关键词：喉肿瘤癌鳞状细胞抗药性肿瘤 c—fos TU177

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阻断乳腺癌细胞PD-L1减弱对共培养树突状细胞成熟的抑制作用

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南方医科大学学报 2018年第5期38卷 561-566页

作者：于晓然温桥生肖漪唐芮李福喜邵文凤余焱林熊静波南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 国立癌症研究所肿瘤生物与遗传实验室国立卫生研究院美国马里兰州贝塞斯达市

目的探讨表达PD-L1的乳腺癌细胞是否通过激活树突状细胞的PD-L1/PD-1信号通路抑制树突状细胞成熟。方法人单核细胞用GM-CSF和IL-4诱导为不成熟树状突细胞,再用TNF-α诱导为成熟树状突细胞;表达PD-L1的乳腺癌细胞系MDAMB-231与树状突细... 详细信息

目的探讨表达PD-L1的乳腺癌细胞是否通过激活树突状细胞的PD-L1/PD-1信号通路抑制树突状细胞成熟。方法人单核细胞用GM-CSF和IL-4诱导为不成熟树状突细胞,再用TNF-α诱导为成熟树状突细胞;表达PD-L1的乳腺癌细胞系MDAMB-231与树状突细胞接触共培养;PD-L1阻断抗体处理共培的的乳腺癌细胞和树状突细胞;重组人PD-L1蛋白处理TNF-α诱导的树突状细胞;流式细胞仪检测乳腺癌细胞膜PD-L1的表达和树突状细胞的成熟分化标志HLA-DR和CD83。结果乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞系中,细胞膜表面PD-L1阳性细胞高达(99.7±0.15)%;HLA-DR和CD83阳性细胞在成熟树状突细胞对照组分别为(88.8±6.96)%和(18.36±3.07)%,在MDA-MB-231共培养实验组树状突细胞群分别降至(42.76±10.52)%和(9.93±2.74)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05);HLA-DR和CD83阳性细胞在PD-L1抗体同型对照组分别为(45.17±10.19)%和(10.15±2.54)%,在PD-L1抗体处理组分别升至(63.46±1.72)%和(16.46±2.58)%,两组相比差异均有统计学意义(P<0.05);和成熟树状突细胞对照组相比,人重组PD-L1蛋白处理组HLA-DR和CD83阳性细胞率较低,组间统计学差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PD-L1抗体对三阴性乳腺癌患者的治疗的效果,可能部分基于抗体阻断乳腺癌细胞表面的PD-L1,从而减弱其对肿瘤微环境中的树突状细胞成熟的抑制作用。

关键词：乳腺癌 PD-L1 PD-1 树突状细胞成熟肿瘤治疗肿瘤微环境

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E-钙黏蛋白在人非小细胞肺癌细胞多西他赛耐药中的作用

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现代肿瘤医学 2019年第10期27卷 1683-1689页

作者：卢小妹付杰军广西医科大学基础医学院细胞生物学和遗传教研室长寿与老年相关疾病教育部重点实验室转化医学研究中心广西南宁530021

目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549、H1299、H358、H441多西他赛(docetaxel,DTX)耐药细胞株与上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系,并初步研究逆转E-cadherin的表达对NSCLC细胞多西他赛耐药性的影响。方法:应用Real-time PCR和Western blot方法检测上皮间质转化相关标志物E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Snail在亲本细胞和多西他赛耐药细胞之间的表达差异;应用慢病毒载体介导构建稳定表达E-cadherin的NSCLC多西他赛耐药细胞;MTS法检测NSCLC细胞多西他赛耐药特性。结果:与A549、H1299、H358、H441四株亲本细胞相比,多西他赛耐药细胞(A549DTX,H1299DTX,H358DTX,H441DTX)形态呈长梭形,呈上皮间质转化(EMT)样改变。多西他赛耐药细胞中E-cadherin表达下调,Vimentin、N-cadherin、Snail表达上调。成功构建了过表达E-cadherin的NSCLC多西他赛耐药细胞。过表达E-cadherin细胞株细胞形态与空载对照细胞株以及亲本耐药细胞株相比呈间质上皮转化(MET)样改变。MTS结果显示四种不同E-cadherin过表达的NSCLC多西他赛耐药细胞对多西他赛的敏感性均强于其亲本耐药细胞和空载对照细胞。结论:NSCLC多西他赛耐药细胞发生EMT样改变,上调E-cadherin能增加NSCLC多西他赛耐药细胞对多西他赛的敏感性。

关键词： E-钙黏蛋白非小细胞肺癌多西他赛耐药

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葡萄糖调节蛋白78对L858R突变的非小细胞肺癌erlotinib敏感性的影响

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中国医科大学学报 2018年第8期47卷 701-704页

作者：王倩文徐振华王志静苏荣健陈学军谷艳娇锦州医科大学基础医学院病理学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学基础医学院细胞生物学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学生命科学研究院辽宁锦州121001

目的观察葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对L858R突变非小细胞肺癌对erlotinib敏感性的影响。方法应用基因转染技术干预H3255细胞中GRP78及其突变体的表达,应用MTT方法检测erlotinib对细胞增殖的抑制情况,应用流式细胞术和FITCTUNEL分析凋亡情... 详细信息

目的观察葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对L858R突变非小细胞肺癌对erlotinib敏感性的影响。方法应用基因转染技术干预H3255细胞中GRP78及其突变体的表达,应用MTT方法检测erlotinib对细胞增殖的抑制情况,应用流式细胞术和FITCTUNEL分析凋亡情况,应用免疫印迹技术检测表皮生长因子受体(EGFR)、细胞外信号调节激酶(ERK)的表达及磷酸化水平。结果过表达GRP78及其多肽结合结构域删除的突变体降低H3255细胞对erlotinib的敏感性,抑制erlotinib诱导的细胞凋亡,促进EGFR、ERK的磷酸化。结论 GRP78通过其ATPase结构域促进非小细胞肺癌细胞对erlotinib耐药。

关键词：葡萄糖调节蛋白78 非小细胞肺癌表皮生长因子受体 L858R突变 erlotinib

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自噬相关基因Atg12和LC3-Ⅱ在脑缺血再灌注大脑表达的实验研究

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重庆医科大学学报 2018年第2期43卷 162-166页

作者：杜晓薇韩瑞祎闵鹤鸣李丹丹肖学进包翠芬包翠芳锦州医科大学基础医学院锦州121000 锦州医科大学细胞生物学教研室锦州121000 锦州医科大学基础医学实验教学中心锦州121000 锦州医科大学锦州市中心医院神经内科锦州121000

目的:探讨局灶性脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIR)时大脑皮质自噬相关蛋白-12(autophagy related protein-12,Atg12)和自噬微管相关蛋白轻链3抗体Ⅱ(autophagy microtubule-associated protein light chain 3 antibodyⅡ,LC3-Ⅱ)的激活规律,在此基础上探讨其对脑组织自噬的影响。方法:实验分为假手术组(sham组)和缺血再灌注组(CIR组),且CIR组下设CIR 0、6、12、24、48、72h共6个亚组。除sham组和CIR 24h组为每组20只外(其中10只用于模型鉴定),其余为每组10只。采用大脑中动脉栓塞术制备局灶性脑缺血再灌注模型,再灌注24 h后采用神经功能评分、2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色、脑组织含水量来鉴定脑缺血模型是否成功。采用免疫组化和免疫印迹方法检测大脑皮质Atg12和LC3-Ⅱ的表达规律。结果:与sham组比较,CIR 24h组可见明显的神经功能缺损、脑梗死和明显的脑水肿。免疫组化结果显示,Atg12和LC3-Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注6 h开始表达[阳性率分别为(15.49±4.18)%、(18.54±3.62)%],在24~48 h达高峰[(33.63±3.26)%、(29.62±1.73)%],72 h之后逐渐减弱[(24.90±3.96)%、(20.36±3.51)%]。免疫印迹结果显示,Atg12和LC3-Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注6 h开始表达[表达量为(0.372 3±0.076 5)、(0.148 4±0.011 5)],在24~48 h达高峰[(0.741 7±0.071 8)、(0.451 3±0.019 0)],72 h之后逐渐减弱[(0.365 0±0.042 0)、(0.245 1±0.030 3)]。结论:脑缺血时Atg12和LC3-Ⅱ在调节脑缺血的脑组织自噬方式中具有重要的作用。

关键词：自噬脑缺血再灌注自噬相关蛋白-12 自噬微管相关蛋白轻链3抗体Ⅱ

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美国临床遗传实验员认证规范介绍

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中华医学遗传学杂志 2019年第1期36卷 44-53页

作者：胡其昌张吉才戴红政沈珺胡启平魏赛男德克萨斯州立大学安德森癌症中心医学专业学院美国休斯敦TX77498 湖北医药学院附属太和医院检验科十堰442000 贝勒医学院分子和人类遗传系美国休斯敦TX77030 哈佛医学院布莱根和妇女医院病理系美国波士顿MA02115 广西医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室南宁530021 肯塔基大学医学院病理学与检验医学系美国列克星顿KY40536

临床遗传学检测一直在快速地发展,而医生们均依赖于准确的实验室检测来进行疾病的诊断、预后和治疗。美国遗传检测行业强烈推荐由认证的技术人员在临床遗传实验室中进行复杂的实验操作,以达到符合行业规范的标准。这些技术员在参加权威... 详细信息

临床遗传学检测一直在快速地发展,而医生们均依赖于准确的实验室检测来进行疾病的诊断、预后和治疗。美国遗传检测行业强烈推荐由认证的技术人员在临床遗传实验室中进行复杂的实验操作,以达到符合行业规范的标准。这些技术员在参加权威机构如国家临床实验室科学认证局(The National Accrediting Agency for Clinical Laboratory Sciences,NAACLS)认可的培训项目后,将通过认证考试获得资质。美洲华人遗传学会组织特别工作组撰写本文,介绍美国认证遗传实验技术员培训项目的机构、培训项目获准的过程以及遗传实验技术员的培训和认证的过程,希望对中国建立一个能够确保培养合格的遗传实验检测技术人员的体系有所帮助。

关键词：临床细胞遗传学临床分子遗传学遗传技术人员临床遗传学实验室美国

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