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中华皮肤科杂志 2014年第6期47卷 404-408页

作者：温斯健吴飞云林有坤方玲广西医科大学第一附属医院皮肤性病科南宁530021 广西医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室

目的探讨TLR9单核苷酸多态性与广西系统性红斑狼疮（sLE）患者发病的相关性，以及其在壮族、汉两个民族间的差异。方法聚合酶链反应-限制性酶切技术、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术（PCR—RFLP）对97例广西SLE患者和202例... 详细信息

目的探讨TLR9单核苷酸多态性与广西系统性红斑狼疮（sLE）患者发病的相关性，以及其在壮族、汉两个民族间的差异。方法聚合酶链反应-限制性酶切技术、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术（PCR—RFLP）对97例广西SLE患者和202例广西健康对照者的TLR9基因多态性进行检测，分析其基因型和等位基因频率与SLE部分临床实验室指标的关联性，并比较两民族间的差异。结果TLR9rs352140CC、CT、TT基因型频率在汉族SLE组与汉族对照组中分别为42．9％、41．1％、16．1％和38．3％、55．8％、5．8％，差异有统计学意义（P〈0．05），其C、T等位基因频率差异无统计学意义（P〉0．05）。TLR9rs352140C／T基因型频率和等位基因频率在壮族SLE组与壮族健康对照组间、壮族SLE组与汉族SLE组间差异无统计学意义（均P〉0．05）。TLR9rs352140Tr基因型频率在ds-DNA阳性组比阴性组高（P〈0．05），而T等位基因频率在两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。TLR9rs352140TT基因型频率和T等位基因的频率在SLEDAI≥9组比SLEDAI〈9组高，差异有统计学意义（均P〈0．05）。TLR9rs352140TT基因型频率和T等位基因的频率在ANA阳性组与阴性组间差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论TLR9rs352140基因多态性可能与广西汉族人SLE的易感性有关，TLR9基因多态性与部分SLE指标可能具有相关性。

关键词：红斑狼疮系统性 Toll样受体9 多态性单核苷酸壮族汉族

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p70/p85核糖体蛋白S6激酶1重组真核表达载体的构建及其在人乳腺癌MCF-7细胞内功能的初步鉴定

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中国肿瘤生物治疗杂志 2014年第4期21卷 459-463页

作者：赵莉侯敬申白晓春贾春宏广州医科大学药学院广州蛇毒研究所广东广州510182 南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 广州医科大学附属第二医院急诊外科广东广州510260

目的:构建p70核糖体蛋白S6激酶1(p70 ribosomal protein S6 kinase 1,p70 S6K1)及p85 S6K1基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,并鉴定其在人乳腺癌MCF-7细胞内的表达及功能。方法:以pRK7-HA-S6K1为模板,采用PCR扩增出目的基因片段p70 S6K1、p85 S6K1,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag构建重组表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,采用PCR、双酶切和DNA测序鉴定。将重组载体转染MCF-7细胞,24 h后采用Western blotting方法检测细胞内p70 S6K1、p85 S6K1蛋白的表达;同时向转染细胞内加入1 mmol/L H2O2处理36 h,观察p70 S6K1、p85 S6K1蛋白对H2O2诱导的细胞死亡的影响。结果:成功扩增得到p70 S6K1、p85 S6K1基因片段并构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,重组载体经PCR、双酶切鉴定均出现p70 S6K1和p85S6K1预期条带,DNA测序结果显示其全长基因阅读框完整、正确。重组载体在MCF-7细胞中高效表达flag-p70 S6K1和flag-p85S6K1,且p85 S6K1能增强H2O2诱导的细胞死亡。结论:成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-flag-p70 S6K1和pcDNA3.1(-)-flag-p85 S6K1,均能在MCF-7细胞中高效表达,且p85 S6K1能够增强H2O2诱导的细胞死亡。

关键词：核糖体蛋白S6激酶1 基因重组载体构建真核表达细胞死亡乳腺癌 MCF-7细胞

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沉默整合素连接激酶基因对TCA8113舌癌细胞移植瘤生长的影响

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第三军医大学学报 2014年第19期36卷 1996-2000页

作者：幸宇齐进邓世雄陈俊霞重庆医科大学基础医学院法医生物信息学研究室重庆400016 细胞生物学及遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆医科大学附属口腔医院牙体牙髓科重庆400015

目的研究沉默TCA8113舌癌细胞整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因的表达,对其下游底物Akt和GSK3β磷酸化状态及对移植瘤生长和自发性转移的影响。方法通过Lipofectamine 2000介导将特异性siILK表达载体和无同源性的对照载... 详细信息

目的研究沉默TCA8113舌癌细胞整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因的表达,对其下游底物Akt和GSK3β磷酸化状态及对移植瘤生长和自发性转移的影响。方法通过Lipofectamine 2000介导将特异性siILK表达载体和无同源性的对照载体,稳定转染人舌鳞癌TCA8113细胞,分为TCA8113组、TCA8113 vector组和TCA8113 siILK组,将3组细胞分别注入裸鼠皮下构建移植瘤模型,5周后检测瘤质量,对裸鼠肺及瘤组织形态学行常规病理学检查,使用免疫荧光技术检测体外和体内癌细胞p-Akt和p-GSK3β等的表达,并观察瘤组织内血管生成情况。结果 TCA8113组、TCA8113 vector组肺组织均发生自发性转移瘤,TCA8113 siILK组肺组织未发现自发性转移瘤;TCA8113 siILK组移植瘤细胞形态较其他2组体积减小,核分裂象较少,核浆比例缩小;TCA8113 siILK组在体内和体外实验中的p-Akt和p-GSK3β表达较其他2组均明显下降(P<0.05);TCA8113 siILK组移植瘤质量较其他2组显著降低(P<0.05),抑瘤率分别为84%和92%;TCA8113 siILK组移植瘤血管生成较其他2组也明显减少(P<0.05)。结论沉默TCA8113舌癌细胞ILK表达可抑制其下游信号传导分子Akt和GSK3β的磷酸化,并抑制移植瘤血管生成,从而抑制移植瘤的生长。

关键词：整合素连接激酶人舌鳞癌细胞移植瘤生长微血管

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铅对原代培养星形胶质细胞谷氨酸转运体的影响

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环境与健康杂志 2014年第3期31卷 193-196,F0003页

作者：林琳廖英俊赵凤红王艳唐漫许亚婷王达金亚平中国医科大学基础医学院生理学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院染色质生物学研究室细胞生物学卫生部重点实验室中国医科大学公共卫生学院劳动卫生学教研室中国医科大学药学院临床药理学教研室

目的探讨铅暴露对星形胶质细胞（AS）中GLAST和GLT-1蛋白表达及转运体功能的影响。方法取出生1-3dWistar大鼠的仔鼠星形胶质细胞进行原代培养，以胶质纤维酸性蛋白（GFAP）染色鉴定细胞纯度后，进行0（对照组）、50、100、200及400μmol... 详细信息

目的探讨铅暴露对星形胶质细胞（AS）中GLAST和GLT-1蛋白表达及转运体功能的影响。方法取出生1-3dWistar大鼠的仔鼠星形胶质细胞进行原代培养，以胶质纤维酸性蛋白（GFAP）染色鉴定细胞纯度后，进行0（对照组）、50、100、200及400μmol／L乙酸铅染毒，染毒时间为72h。倒置显微镜下观察细胞形态并采集图像；以AlamarBlue法检测细胞活力；以Westernblot法检测GLAST和GLT-1蛋白的表达；以同位素标记法测定谷氨酸转运体功能。结果50和100μmol／L铅暴露组的细胞形态与对照组相比，未见明显改变；200μmol／L铅暴露72h后，少量细胞开始脱壁，细胞间隙增大；400μmol／L铅暴露组细胞变大，突起变短或消失，脱壁细胞数量明显增多。与对照组相比，各浓度铅暴露组的AS活力均降低（P〈0．05），100、200和400μmol／L铅暴露组的GLT-1蛋白含量下降（P〈0．05），但各浓度铅暴露组的GLAST蛋白含量无显著改变。100、200和400μmol／L铅暴露组的3FI—Glu放射性低于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论铅暴露可明显抑制AS中GLT-1蛋白的表达，并导致AS的Glu转运体功能下降。

关键词：星形胶质细胞铅谷氨酸谷氨酸转运体-1

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高脂饮食诱导的2型糖尿病模型小鼠的生化及病理分析

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南方医科大学学报 2014年第8期34卷 1115-1120页

作者：曾位森黄源坚邵聪文梁宝焕魏铖许万福苏亚茹南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 佛山市第二人民医院普外科广东佛山528000 深圳市人民医院消化内科广东深圳518020

目的分析高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素（STZ）注射方法制备的2型糖尿病（T2DM）模型小鼠的生化及病理改变。方法将C57BL/6J实验小鼠随机分成3组：正常饮食组（NC组）,高脂饮食组（HC组）和高脂饮食加STZ组（HC＋STZ组）。HC＋STZ组高... 详细信息

目的分析高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素（STZ）注射方法制备的2型糖尿病（T2DM）模型小鼠的生化及病理改变。方法将C57BL/6J实验小鼠随机分成3组：正常饮食组（NC组）,高脂饮食组（HC组）和高脂饮食加STZ组（HC＋STZ组）。HC＋STZ组高脂高糖饲料饲养1个月后,按40 mg/kg剂量腹腔注射STZ,24 h后再注射1次;HC组高脂高糖饲养,NC组一直用普通饲料饲养,两组注射等量的柠檬酸缓冲液作为对照。注射STZ后每周测定空腹血糖,持续4周;1个月后进行口服葡萄糖试验（OGTT）;然后处死小鼠,对血浆进行相关的生化检测,免疫组化检测胰岛形态结构,病理分析肝脏,肾脏的结构形态情况。结果（1）注射STZ 1周后,有75%的小鼠空腹血糖超过阈值（13.89 mmol/L）;2周后除1只小鼠死亡外,其余小鼠空腹血糖均超过阈值,造模成功率为91.3%;HC组空腹血糖比NC组略有升高,但尚在正常值范围内;（2）高脂饮食的HC＋STZ组和HC组小鼠体质量均显著高于NC组（P〈0.01）,STZ注射后体质量增加不明显;（3）OGTT结果显示,HC＋STZ组口服葡萄糖后0.5~2 h的血糖都显著高于NC组和HC组（P〈0.01）;HC组0.5~2 h的血糖也高于NC组,但只有1.5 h血糖有显著差异;HC＋STZ组AUC（曲线下面积）显著高于NC组或HC组（P〈0.01）;HC组AUC略高于NC组（P〈0.05）;（4）生化检测显示,HC＋STZ组血浆中的肌酐（CR）含量显著高于NC组（P〈0.01）和HC组（P〈0.05）;（5）胰岛的免疫组化染色显示,HC组胰岛结构完整,细胞排列规整,胰岛素的分泌较NC组减少;HC＋STZ组胰岛萎缩,细胞排列紊乱,可见许多空泡状和纤维化结构,胰岛素的分泌明显减少。病理检测显示肝脏有轻度的脂肪肝,肾脏的形态结构未见明显改变。结论高脂饮食结合低剂量STZ多次注射制备的T2DM模型小鼠与人类T2DM有非常相似的病理结构和生化改变,伴有脂肪肝等并发症。

关键词： 2型糖尿病链脲佐菌素动物模型病理分析

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缬沙坦对人冠脉内皮细胞氧化应激过程中gp91^(Phox)的影响

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安徽医科大学学报 2014年第6期49卷 739-742页

作者：王成韩卫星吴继军刘超刘晓颖安徽医科大学第一附属医院心血管内科合肥230022 安徽医科大学第一临床学院诊断学教研室合肥230032 安徽医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室合肥230032 安徽医科大学生命科学院细胞生物学教研室合肥230032

目的研究缬沙坦对人冠脉内皮细胞(HCAEC)氧化应激过程中gp91Phox的影响。方法对照组:体外贴壁培养HCAEC,不进行其他干预;实验组:相同培养条件下加入缬沙坦(10μmol/L)培养24 h。应用Western blot法和细胞免疫荧光法测定两组细胞中gp91P... 详细信息

目的研究缬沙坦对人冠脉内皮细胞(HCAEC)氧化应激过程中gp91Phox的影响。方法对照组:体外贴壁培养HCAEC,不进行其他干预;实验组:相同培养条件下加入缬沙坦(10μmol/L)培养24 h。应用Western blot法和细胞免疫荧光法测定两组细胞中gp91Phox的水平,对两组结果进行统计分析并比较。结果实验组HCAEC中gp91Phox的水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论缬沙坦可以显著减少HCAEC中尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚基gp91Phox的表达,从而降低氧化应激水平。

关键词：缬沙坦人冠脉内皮细胞氧化应激 gp91Phox

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人Elf5基因真核表达质粒的构建及其亚细胞定位

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现代肿瘤医学 2014年第6期22卷 1236-1238页

作者：张红艳张健李丹妮李彦姝刘芙蓉李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 中国医科大学

目的:构建人Elf5真核细胞表达质粒,并研究其在乳腺癌MCF7细胞中的亚细胞定位。方法:PCR扩增人Elf5基因,将其克隆入真核表达载体pEGFP-C1中,构建含人Elf5基因的真核表达质粒pEGFPhElf5。利用酶切鉴定,DNA测序,免疫印迹及免疫荧光方法鉴定... 详细信息

目的:构建人Elf5真核细胞表达质粒,并研究其在乳腺癌MCF7细胞中的亚细胞定位。方法:PCR扩增人Elf5基因,将其克隆入真核表达载体pEGFP-C1中,构建含人Elf5基因的真核表达质粒pEGFPhElf5。利用酶切鉴定,DNA测序,免疫印迹及免疫荧光方法鉴定Elf5真核表达质粒及Elf5蛋白的亚细胞定位。结果:经酶切鉴定、DNA测序、免疫印迹方法确认Elf5基因成功导入真核表达载体pEGFP-C1。瞬时转染MCF7细胞,Elf5蛋白表达在细胞核中。结论:pEGFP-Elf5真核表达质粒构建成功,Elf5定位在细胞核中。

关键词： Elf5 pEGFP-C1 亚细胞定位

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p57^(kip2)蛋白在乳腺癌组织和细胞系中的表达和定位

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现代肿瘤医学 2014年第3期22卷 506-509页

作者：李彦姝刘芙蓉张红艳李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的:研究p57kip2在人乳腺癌组织和细胞系中的表达和定位。方法:免疫印迹法检测人乳腺肿瘤细胞系中p57kip2的表达。人乳腺肿瘤组织进行免疫组化染色,检测p57kip2在组织中的表达。激光共聚焦扫描显微镜检测内源p57kip2在MCF-7细胞中的定... 详细信息

目的:研究p57kip2在人乳腺癌组织和细胞系中的表达和定位。方法:免疫印迹法检测人乳腺肿瘤细胞系中p57kip2的表达。人乳腺肿瘤组织进行免疫组化染色,检测p57kip2在组织中的表达。激光共聚焦扫描显微镜检测内源p57kip2在MCF-7细胞中的定位。结果:p57kip2在乳腺癌细胞系内表达,免疫组化染色分析和激光共聚焦扫描显微镜证实p57kip2主要定位于细胞核内。结论:p57kip2在乳腺癌细胞内表达,p57kip2主要定位于乳腺癌组织细胞核内,可能是参与肿瘤细胞基因转录调控和蛋白表达的重要蛋白之一。

关键词： p57kip2 免疫组织化学激光共聚焦扫描显微镜定位

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苦苣菜下胚轴愈伤组织分化及试管苗培养研究

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湖南文理学院学报（自然科学版） 2014年第4期26卷 28-31页

作者：王晓炜孙媛张成鸿赵薇大连医科大学基础医学院形态实验室辽宁大连116044 大连医科大学基础医学院细胞生物学教研室辽宁大连116044

为保护苦苣菜野生资源,以苦苣菜下胚轴为材料,进行了愈伤组织诱导培养、分化培养、生根培养和试管苗移栽及定植的研究,结果表明:MS+琼脂4.8 g·L-1+蔗糖42 g·L-1+KT 0.4 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+2,4-D2.0 mg·L-... 详细信息

为保护苦苣菜野生资源,以苦苣菜下胚轴为材料,进行了愈伤组织诱导培养、分化培养、生根培养和试管苗移栽及定植的研究,结果表明:MS+琼脂4.8 g·L-1+蔗糖42 g·L-1+KT 0.4 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+2,4-D2.0 mg·L-1是愈伤组织诱导生长的适宜培养基;1/2 MS+琼脂4.5 g·L-1+蔗糖35 g·L-1+ZT 0.8 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1是愈伤组织块分化培养的适宜培养基;1/4 MS+IAA 0.6 mg·L-1+琼脂4.3 g·L-1+蔗糖15g·L-1是生长芽试管苗培养的适宜培养基;温室内试管苗移栽成活率为91.7%;试管苗在山林旁定植成活率为97.1%,定植试管苗的植物学性状与实生苗基本一致.

关键词：苦苣菜下胚轴组织培养试管苗

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细叶柴胡试管苗培养的研究

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黑龙江医药科学 2014年第1期37卷 7-9,12页

作者：王晓炜孙媛大连医科大学基础医学院形态实验室辽宁大连116044 大连医科大学基础医学院细胞生物学教研室辽宁大连116044

目的:为满足药用和保护资源的需求。方法:以细叶柴胡嫩茎为材料,采用组织培养方法,进行了嫩茎段愈伤组织诱导培养、分化培养,试管苗培养和试管苗移栽与定植的研究。结果:MS+NAA0.2mg·L-1+ZT0.8mg·L-1+2,4-D1.2mgL-1是嫩茎段... 详细信息

目的:为满足药用和保护资源的需求。方法:以细叶柴胡嫩茎为材料,采用组织培养方法,进行了嫩茎段愈伤组织诱导培养、分化培养,试管苗培养和试管苗移栽与定植的研究。结果:MS+NAA0.2mg·L-1+ZT0.8mg·L-1+2,4-D1.2mgL-1是嫩茎段切口愈伤组织诱导生长培养的适宜培养基;MS+ZT1.0mg·L-1+2,4-D1.5 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1的液态培养基是嫩茎愈伤组织扩增培养的适宜培养基;MS+ZT0.6mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1是愈伤组织分化培养和不定芽繁殖培养的适宜培养基;1/2MS+IAA0.4 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1是生根培养和试管苗繁殖培养的适宜培养基。试管苗移栽成活率为97.5%;定植成活率为97.3%。结论:本研究建立起试管苗培养技术,定植的试管苗完全保持了细叶柴胡的植物学性状。

关键词：细叶柴胡愈伤组织试管苗

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