检索结果-内蒙古大学图书馆

化学学报 2011年第8期69卷 967-972页

作者：孙艳华扎拉嘎胡张金利关丛笑郑琳李韡乔建军天津大学化工学院天津300072 天津医科大学基础医学院天津300070 天津武警医学院细胞生物学与医学遗传学教研室天津300162

在微乳液体系中合成荧光二氧化硅纳米颗粒(FSNPs),然后对其表面进行氨基修饰,之后再连接抗体,应用高分辨透射电镜(HR-TEM),原子力显微镜(AFM),Zeta-电位分析仪,IR,荧光显微镜及激光共聚焦显微镜等多种表征工具对合成的颗粒和后续的修饰... 详细信息

在微乳液体系中合成荧光二氧化硅纳米颗粒(FSNPs),然后对其表面进行氨基修饰,之后再连接抗体,应用高分辨透射电镜(HR-TEM),原子力显微镜(AFM),Zeta-电位分析仪,IR,荧光显微镜及激光共聚焦显微镜等多种表征工具对合成的颗粒和后续的修饰进行了系统分析.研究表明,FSNPs在溶液中呈现单分散状态,但是在表面修饰了氨基之后(NH2-FSNPs),由于表面平均电位以及氨基间氢键的形成,致使颗粒严重聚集;适当的pH环境可以改善颗粒的分散状态;利用氨基修饰的荧光二氧化硅纳米颗粒(NH2-FSNPs)连接抗体识别脐血来源的间充质干细胞(MSCs)表面的蛋白CD44,从而实现对间充质干细胞荧光成像分析.结果表明,识别效果良好,为荧光二氧化硅纳米颗粒在干细胞领域的应用奠定了基础.

关键词：荧光二氧化硅纳米颗粒氨基修饰分散性 CD44

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阿尔茨海默病转基因鼠模型的建立

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中国老年学杂志 2011年第7期31卷 1163-1164页

作者：廖峥嵘雷宇华赵娟吕雨虹王忠海张凤云赵俊霞河北医科大学基础医学院细胞生物学教研室河北石家庄050017

目的建立阿尔茨海默病(AD)双转基因鼠,为进一步研究AD发病机制提供较为理想的实验动物。方法将人载脂蛋白E4转基因鼠和突变APP转基因鼠杂交。结果经PCR初筛,对阳性小鼠基因组DNA作进一步的Southern杂交鉴定,获得2只双转基因小鼠,之后传... 详细信息

目的建立阿尔茨海默病(AD)双转基因鼠,为进一步研究AD发病机制提供较为理想的实验动物。方法将人载脂蛋白E4转基因鼠和突变APP转基因鼠杂交。结果经PCR初筛,对阳性小鼠基因组DNA作进一步的Southern杂交鉴定,获得2只双转基因小鼠,之后传代建系。结论为进一步研究多个基因对AD的致病作用提供较为理想的实验动物。

关键词： APP基因 ApoE4基因转基因动物阿尔茨海默病

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载脂蛋白E基因异常表达对小鼠血脂代谢的影响

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中国老年学杂志 2011年第2期31卷 254-255页

作者：廖峥嵘吕品吕雨虹王忠海赵娟河北医科大学基础医学院细胞生物学教研室河北石家庄050017

目的探讨载脂蛋白E基因在转基因鼠体内的表达及其在血脂代谢中的作用。方法显微注射法建立H-ApoE转基因鼠,Southern杂交对阳性小鼠基因组鉴定。ELISA测定血清载脂蛋白E含量。酶法分别测定小鼠血清甘油三酯(TG)和血清胆固醇(TC)。结果转... 详细信息

目的探讨载脂蛋白E基因在转基因鼠体内的表达及其在血脂代谢中的作用。方法显微注射法建立H-ApoE转基因鼠,Southern杂交对阳性小鼠基因组鉴定。ELISA测定血清载脂蛋白E含量。酶法分别测定小鼠血清甘油三酯(TG)和血清胆固醇(TC)。结果转基因鼠血清载脂蛋白E含量分别为:tg4鼠(2.06±0.22)mg/L,tg7鼠(1.89±0.33)mg/L。血清TG水平转基因鼠〔12月龄:tg4(2.89±0.31)mmol/L,tg7(1.99±0.45)mmol/L〕与对照组鼠〔12月龄:(2.05±0.12)mmol/L〕比较有显著性差异(P<0.05),血清TC水平转基因鼠〔12月龄:tg4(3.02±0.14)mmol/L〕与对照组鼠〔12月龄:(2.11±0.01)mmol/L〕比较也表现出显著性差异(P<0.01)。结论 H-ApoE基因异常表达影响到了小鼠的血脂代谢。

关键词：转基因鼠 H-ApoE基因甘油三酯胆固醇

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hTFF3基因真核表达载体构建及表达鉴定

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中国医科大学学报 2011年第10期40卷 877-880页

作者：郑倩倩郭文东朱亚勤中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的克隆人肠三叶因子基因hTFF3,构建重组真核表达载体pEGFP-C1-TFF3,并在真核细胞中表达。方法应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从真核细胞中扩增得到人TFF3的全长序列,克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中,经酶切、PCR鉴定后测... 详细信息

目的克隆人肠三叶因子基因hTFF3,构建重组真核表达载体pEGFP-C1-TFF3,并在真核细胞中表达。方法应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从真核细胞中扩增得到人TFF3的全长序列,克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中,经酶切、PCR鉴定后测序证实克隆成功。将重组载体转至真核细胞,荧光显微镜观察下转染效率,同时采用RT-PCR、Western blot技术检测外源基因TFF3的表达。结果成功将hTFF3基因克隆到真核表达载体中,酶切片段与预期大小一致(200 bp)。在荧光显微镜下观察转染后的细胞可见明显的绿色荧光,RT-PCR及Western blot结果表明:转染后的细胞中TFF3在转录和翻译水平的表达均有明显提高。结论成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-TFF3,并在真核细胞中显著表达,为进一步研究TFF3因子的生物学功能奠定了基础。

关键词：肠三叶因子克隆表达载体

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hFAK基因重组质粒的构建及蛋白表达

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中国医科大学学报 2011年第7期40卷 584-586,591页

作者：李晓东郭冰玉朱戈李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建hFAK原核、真核表达载体,证实融合蛋白在原核细胞的诱导表达以及在胃癌细胞内的表达、定位。方法提取人胃癌细胞SGC-7901的总mRNA并进行反转。以反转录的cDNA为模板PCR扩增hFAK全长编码基因,分别克隆至pCDNA3.1-Flag以及pGEX-4... 详细信息

目的构建hFAK原核、真核表达载体,证实融合蛋白在原核细胞的诱导表达以及在胃癌细胞内的表达、定位。方法提取人胃癌细胞SGC-7901的总mRNA并进行反转。以反转录的cDNA为模板PCR扩增hFAK全长编码基因,分别克隆至pCDNA3.1-Flag以及pGEX-4T-2表达载体中。原核重组质粒鉴定后转入BL21细胞中并经过诱导表达及纯化,真核表达质粒转入胃癌SGC-7901细胞中,分别利用Western blot和激光共焦扫描显微技术检测重组质粒的表达以及在胃癌细胞中的定位。结果 hFAK全长基因序列克隆到原核、真核表达载体中,酶切鉴定片段为3200bp。原核诱导出GST-hFAK并进行纯化;Western blot检测到真核转染的Flag-hFAK表达,条带为130kD,免疫荧光显示蛋白定位于细胞质,并在细胞膜上有定位。结论成功构建了hFAK原核、真核表达载体,并验证了其表达。

关键词： hFAK 蛋白质印迹融合蛋白免疫荧光胃癌

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C／EBPα不同截短功能域GST融合蛋白表达载体的构建及表达的研究

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中国医科大学学报 2011年第6期40卷 484-486页

作者：王桂玲陈薇姜佩佳王孝会中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建GST-C/EBPα融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-C/EBPα为模板,用PCR法扩增C/EBPα全长及各个截短片段,通过EcoRI和XhoI酶切位点将C/EBPα全长及各个截短突变体定向插入pGEX-5X-1中,构建原... 详细信息

目的构建GST-C/EBPα融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-C/EBPα为模板,用PCR法扩增C/EBPα全长及各个截短片段,通过EcoRI和XhoI酶切位点将C/EBPα全长及各个截短突变体定向插入pGEX-5X-1中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突变体,并转化*** DH5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入*** BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和SDS-PAGE鉴定。结果酶切及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突变体,并用SDS-PAGE方法证实了GST-C/EBPα全长及各个截短突变体融合蛋白的表达。结论成功构建了C/EBPα原核表达载体及其截短突变体,并证实了融合蛋白的表达,为进一步纯化C/EBPα蛋白和研究C/EBPα的生物学功能奠定了基础。

关键词： CCAAT增强子结合蛋白α 截短突变体质粒原核表达

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人源MAP3K7克隆及其GST融合蛋白的表达和鉴定

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中国医科大学学报 2011年第8期40卷 688-690页

作者：冯艳玲刘彩红朱亚勤中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室细胞病理生物学研究室沈阳110001

目的构建MAP3K7蛋白GST的融合表达载体,高效表达和纯化GST-MAP3K7融合蛋白,为GST Pulldown实验做准备。方法通过PCR扩增MAP3K7全长编码基因,经双酶切定向克隆至表达载体pGEX-5X-1,构建原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,通过酶切和测序... 详细信息

目的构建MAP3K7蛋白GST的融合表达载体,高效表达和纯化GST-MAP3K7融合蛋白,为GST Pulldown实验做准备。方法通过PCR扩增MAP3K7全长编码基因,经双酶切定向克隆至表达载体pGEX-5X-1,构建原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,通过酶切和测序鉴定后,导入*** BL21宿主菌中,IPTG诱导表达融合蛋白,经谷胱甘肽琼脂糖凝胶纯化表达产物,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定。结果经测序鉴定成功构建了原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,诱导后的GST融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot检测到分子量正确的特异性蛋白条带,经纯化后,得到了高纯度的融合蛋白。结论成功构建了MAP3K7全长的GST重组表达载体,确定了GST-MAP3K7融合蛋白表达的最佳条件,诱导成功并得到了高纯度的融合蛋白,为进一步研究MAP3K7蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词：人MAP3K7基因基因克隆融合蛋白原核表达

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人pEGFP-PKARIIβ重组质粒的构建及其在BGC-823胃癌细胞中的表达

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世界华人消化杂志 2011年第14期19卷 1446-1450页

作者：王桂玲姜佩佳王孝会陈薇中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁省沈阳市110001

目的:研究人的蛋白激酶A调节亚基RIIβ(PKARIIβ)基因的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体融合蛋白在胃癌细胞BGC-823内的表达和定位,初步探讨其在肿瘤细胞中的分子作用机制.方法:以pRSETB-PKARIIβ质粒为模板,PCR扩增出全长PKARIIβ编码序... 详细信息

目的:研究人的蛋白激酶A调节亚基RIIβ(PKARIIβ)基因的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体融合蛋白在胃癌细胞BGC-823内的表达和定位,初步探讨其在肿瘤细胞中的分子作用机制.方法:以pRSETB-PKARIIβ质粒为模板,PCR扩增出全长PKARIIβ编码序列,用XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后,亚克隆至含有GFP标签的融合表达载体pEGFP-C1中.测序正确后,将重组质粒转染到胃癌细胞BGC-823中,提取细胞蛋白进行Westernbolt检测.利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-PKARIIβ在人胃癌细胞BGC-823内的定位.结果:将人全长PKARIIβ编码序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1.2kb,在预期的位置产生条带.Western blot检测到了融合蛋白正确表达,分子量约为72000Da.并观察到GFP-PKARIIβ在HEK293和BGC-823细胞内都有表达,且定位以细胞质为主,在细胞核内少量表达.结论:成功构建了人全长PKARIIβ编码序列的pEGFP-PKARIIβ真核表达载体,证实GFP-PKARIIβ蛋白在BGC-823细胞质内特异表达,为进一步研究PKARIIβ的在胃癌中的功能提供了重要的实验材料.

关键词： PKARIIβ 真核表达绿色荧光蛋白基因转染胃癌细胞

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不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体的构建及重组蛋白的表达

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中国医科大学学报 2011年第12期40卷 1057-1059,1071页

作者：刘彤李洋朱戈李丰中国医科大学基础医学院细胞生物教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建不同激酶活性的hPAK6原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法野生型、激酶活型和激酶死型pcDNA3.1-PAK6经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在*** BL21中诱导不同型GST-hPAK6融合蛋白表达,并经免... 详细信息

目的构建不同激酶活性的hPAK6原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法野生型、激酶活型和激酶死型pcDNA3.1-PAK6经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在*** BL21中诱导不同型GST-hPAK6融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果野生型、激酶活型和激酶死型hPAK6编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,双酶切及测序鉴定正确,并在*** BL21中获得了诱导表达,蛋白的分子量均为101 kDa,免疫印迹检测到了融合蛋白表达。结论成功构建不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体,并分别诱导表达出GST-PAK6融合蛋白。

关键词： PAK6基因激酶活型激酶死型原核表达融合蛋白

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抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB和细胞因子表达的影响

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南方医科大学学报 2011年第2期31卷 272-276页

作者：黄恩平姚君杨翠兰罗深秋南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 暨南大学第二临床医学院消化内科广东深圳518020

目的观察抗小鼠Toll样受体2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB(NF-κB)和细胞因子表达的影响。方法将雄性BALB/c小鼠随机分成4组:假手术组、模型组、TSP-2治疗组和正常兔IgG治疗组。采用盲肠结扎穿孔术制作... 详细信息

目的观察抗小鼠Toll样受体2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB(NF-κB)和细胞因子表达的影响。方法将雄性BALB/c小鼠随机分成4组:假手术组、模型组、TSP-2治疗组和正常兔IgG治疗组。采用盲肠结扎穿孔术制作脓毒症小鼠模型,分别于术后6、12和24 h取回肠组织,HE染色,免疫组织化学方法检测小鼠肠粘膜组织NF-κB的表达,实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α和IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测小鼠肠粘膜TNF-α和IL-6蛋白表达水平。结果模型组NF-κB表达水平较假手术组显著上升;TSP-2治疗组NF-κB表达水平较模型组显著下调;模型组各时间点TNF-α和IL-6水平均高于假手术组(P<0.05);TSP-2治疗组与模型组相比,TNF-α和IL-6水平明显降低(P<0.05),TNF-α和IL-6 mRNA水平也低于模型组(P<0.05)。正常兔IgG治疗组与模型组比较,结果无统计学意义(P>0.05)。结论抗体TSP-2能抑制脓毒症小鼠肠道NF-κB的活化,并下调致炎细胞因子TNF-α和IL-6水平,对脓毒血症引起的肠道炎症起到一定的控制作用,并延缓脓毒血症的病情发展。

关键词：脓毒症 Toll样受体2 TSP-2 核因子-κB 细胞因子肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-6

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