检索结果-内蒙古大学图书馆

医学分子生物学杂志 2011年第1期8卷 36-39页

作者：王桂玲王孝会周颖陈薇姜佩佳中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳市110001

目的构建真核表达载体pEGFP—RIPX，并鉴定RIPX在胃癌细胞中的定位，并检测外源性RIPX的表达。方法以pBluescriptR—RIPX为模板，采用PCR法进行人RIPX编码序列（CDS）的扩增，并将其克隆至真核表达载体pEGFP—C1中。将pEGFP—RIPX质粒... 详细信息

目的构建真核表达载体pEGFP—RIPX，并鉴定RIPX在胃癌细胞中的定位，并检测外源性RIPX的表达。方法以pBluescriptR—RIPX为模板，采用PCR法进行人RIPX编码序列（CDS）的扩增，并将其克隆至真核表达载体pEGFP—C1中。将pEGFP—RIPX质粒瞬时转染到胃癌SGC-7901细胞中，用Western印迹方法检测GFP—RIPX融合蛋白的表达；用激光扫描共聚焦显微镜观察RIPX的定位。结果人的RIPX编码序列被成功克隆至真核表达载体pEGFP—C1中；证实了GFP—RIPX融合蛋白的表达；转染***后，在胃癌SGC-7901细胞胞质内可见明亮的绿色荧光。结论成功地构建了pEGFP-RIPX载体，鉴定了外源性RIPX的表达；同时证实在胃癌SGC-7901细胞中RIPX主要定位于细胞质，为进一步研究RIPX的生物学特性及其信号转导通路奠定了基础。

关键词： RIPX 绿色荧光蛋白蛋白表达及定位胃癌SGC-7901细胞

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原核表达载体GST-RUNX3的构建及其在大肠杆菌中的表达

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解剖科学进展 2011年第3期17卷 284-286页

作者：王桂玲王孝会都田赵陈薇姜佩家中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的构建GST/RUNX3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-RUNX3为模板,通过Kpn1和Xho1酶切位点将RUNX3定向插入pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-RUNX3,并转化***5α,筛选阳性重组子,限制性内切... 详细信息

目的构建GST/RUNX3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-RUNX3为模板,通过Kpn1和Xho1酶切位点将RUNX3定向插入pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-RUNX3,并转化***5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入***21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,鉴定。结果双酶切获得1300bp片段,证明RUNX3片段被成功导入pGEX-4T-2,并在测序后与GenBank进行同源性比对,比对进一步证实原核表达质粒pGEX-4T-2-RUNX3构建成功,并用IPTG诱导,SDS-PAGE方法证实了GST/RUNX3融合蛋白在大肠杆菌中的表达。结论成功构建了RUNX3原核表达载体,并证实了融合蛋白在大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化RUNX3蛋白和研究RUNX3的生物学功能奠定了基础。

关键词：质粒原核表达融合蛋白

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Tribble3与糖尿病大鼠心肌病变的相关性研究

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重庆医科大学学报 2011年第5期36卷 553-556页

作者：柴李殷肖谦马楼艳张颖彭琼乐重庆医科大学附属第一医院老年科重庆400016 重庆市渝北区人民医院公共卫生所重庆401120 重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016

目的:探讨TRB3(Tribble3)在糖尿病大鼠心肌组织中的表达及与心肌细胞凋亡和间质纤维化的相关性。方法:24只SD雄性大鼠随机分对照组12只,糖尿病组12只。建立糖尿病大鼠模型,成模8周后,检测空腹血糖和糖化血红蛋白,HE染色观察心肌组织病... 详细信息

目的:探讨TRB3(Tribble3)在糖尿病大鼠心肌组织中的表达及与心肌细胞凋亡和间质纤维化的相关性。方法:24只SD雄性大鼠随机分对照组12只,糖尿病组12只。建立糖尿病大鼠模型,成模8周后,检测空腹血糖和糖化血红蛋白,HE染色观察心肌组织病理改变,Masson染色观察心肌组织间质胶原含量,Tunel观察心肌细胞凋亡情况,荧光定量PCR、Western blot分别检测心肌组织TRB3 mRNA及蛋白水平的变化。结果:与对照组相比,糖尿病组大鼠空腹血糖及糖化血红蛋白水平明显升高(P<0.01);心肌细胞排列紊乱,肌纤维溶解、萎缩、断裂,炎症细胞浸润;间质胶原表达增加(P<0.01);心肌细胞凋亡明显增多(P<0.01);心肌组织TRB3 mRNA及蛋白水平表达升高(P<0.01)。相关性分析显示,TRB3蛋白表达与心肌细胞凋亡成正相关(r=0.668,P<0.05),与间质纤维化程度成正相关(r=0.595,P<0.05)。结论:糖尿病大鼠心肌组织中TRB3 mRNA及蛋白表达增多。TRB3可能通过促进心肌细胞凋亡,增加间质纤维含量参与糖尿病心肌病的发病机制。

关键词：糖尿病心肌病 Tribble3 凋亡间质纤维化

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Tet-on调控的基因表达载体的构建与体外表达研究

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徐州医学院学报 2011年第2期31卷 81-83页

作者：杨丽华周常文徐州医学院生物学教研室江苏徐州221002 福建医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学系福建福州350004

目的依据Tet-on系统的原理,构建2个真核表达载体pTRE-Cre-EGFP（P1）和Pcmv-rtTA-EGFP-Cre-Phcmv（P2）并转染293T细胞,通过观察报告基因EGFP表达的绿色荧光,检验载体中基因元件能否正常发挥作用.方法从pCre-IRES-EGFP载体上切下Cre-E... 详细信息

目的依据Tet-on系统的原理,构建2个真核表达载体pTRE-Cre-EGFP（P1）和Pcmv-rtTA-EGFP-Cre-Phcmv（P2）并转染293T细胞,通过观察报告基因EGFP表达的绿色荧光,检验载体中基因元件能否正常发挥作用.方法从pCre-IRES-EGFP载体上切下Cre-EGFP,与pTRE载体连接成P1载体,切下P1的部分片段Phcmv-Cre-EGFP 与pTet-On载体的部分片段Pcmv-rtTA连接成 P2载体,利用脂质体将pTet-on和P1共转染、将P2单转染入293T细胞,加入或者不加强力霉素（Doxcycline,Dox）诱导,观察绿色荧光.结果成功构建载体P1及P2;P1和pTet-on质粒的共转染及P2的单转染在Dox诱导下均有绿色荧光的表达,无Dox诱导时绿色荧光表达水平极低.结论构建的载体P1及P2中的基因元件在体外均能正常发挥作用,为进一步制备诱导性表达Cre的转基因小鼠奠定了基础.

关键词：真核表达载体 Tet-on 转染

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HECT类泛素连接酶Smurf1自身调控机制的研究

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军事医学 2011年第2期35卷 91-94,103页

作者：沈珊郭兴卢克峰张令强范礼斌安徽医科大学生命科学学院细胞生物学教研室合肥230032 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850 中国医学科学院北京协和医学院基础医学院北京100730

目的泛素连接酶Smurf1在胚胎发育、骨形成调控和细胞极性控制中具有重要的生理功能,但是其自身的泛素化降解机制尚不清楚。本论文拟研究Smurf1分子间自我调控的机制,以期揭示一种新的泛素连接酶调控方式。方法通过免疫共沉淀实验确证了S... 详细信息

目的泛素连接酶Smurf1在胚胎发育、骨形成调控和细胞极性控制中具有重要的生理功能,但是其自身的泛素化降解机制尚不清楚。本论文拟研究Smurf1分子间自我调控的机制,以期揭示一种新的泛素连接酶调控方式。方法通过免疫共沉淀实验确证了Smurf1分子间存在相互作用,体内泛素化、半衰期及降解实验研究了Smurf1的自身泛素化降解。结果 Smurf1存在分子间相互作用和泛素化降解,这种分子间的相互调控是由C2和WW结构域介导。结论 Smurf1分子间存在自我泛素化修饰及蛋白酶体依赖的降解,是一种新的HECT类泛素连接酶的调控机制。

关键词：泛素化泛素蛋白连接酶类 HECT Smurf1 活性调控分子间相互作用转染

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医学细胞生物学实验教学改革探索

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2011年第2期13卷 149-151页

作者：李明刘俊白晓春罗深秋南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广州510515 广州军区广州总医院泌尿外科

实验教学是细胞生物学课程教学的重要组成部分,从以下四个方面对医学细胞生物学实验教学改革进行了积极探索:理论教学内容与实验教学内容相结合;多种教学手段相结合;课堂教学与课外教学相结合;多种评价体系相结合。通过这些努力,激发了... 详细信息

实验教学是细胞生物学课程教学的重要组成部分,从以下四个方面对医学细胞生物学实验教学改革进行了积极探索:理论教学内容与实验教学内容相结合;多种教学手段相结合;课堂教学与课外教学相结合;多种评价体系相结合。通过这些努力,激发了学生的学习兴趣和欲望,提高了学生的综合能力和素质,从而更加有利于创新型人才的培养。

关键词：医学细胞生物学实验教学教学改革

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溶酶体组织蛋白酶A在小鼠脑海马发育过程中发生核转位

溶酶体组织蛋白酶A在小鼠脑海马发育过程中发生核转位

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：尚德淑姜静宜方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室

前期研究发现大肠杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞相关基因—ibeB可诱导小鼠ES细胞向神经前体细胞分化。利用酵母双杂交筛选AB2.1中IbeB靶蛋白,经验证表明组织蛋白酶A(CathepsinA)和IbeB蛋白在真核细胞发生相互作用。提示Cathepsin A也可能... 详细信息

前期研究发现大肠杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞相关基因—ibeB可诱导小鼠ES细胞向神经前体细胞分化。利用酵母双杂交筛选AB2.1中IbeB靶蛋白,经验证表明组织蛋白酶A(CathepsinA)和IbeB蛋白在真核细胞发生相互作用。提示Cathepsin A也可能定位在细胞核,并在神经前体细胞分化过程中发挥作用。为确定Cathepsin A的功能,选择发育期小鼠脑探讨是否Cathepsin A在发育的脑中表达。Western Blot结果表明,CathepsinA随发育成熟表达降低。进一步,细胞组分抽提实验表明胚胎期小鼠脑中,有一部分CathepsinA在细胞核表达。由于IbeB与CathepsinA可以相互作用,IbeB具有诱导神经前体细胞分化的作用,因此我们选取神经前体细胞丰富的海马进行研究,以初步确定Cathepsin A在神经前体细胞分化和海马发育过程中的表达定位。免疫组化结果表明,在海马发育过程中,CathepsinA的表达发生了核转位。CathepsinA是一种溶酶体蛋白水解酶,主要在细胞内环境稳定方面发挥作用。我们发现在小鼠脑发育过程中部分CathepsinA也在细胞核表达,提示它可能具有基因表达调控的功能。对Cathepsin A功能的深入研究可为揭示Cathepsin A的新功能积累资料。

关键词： ibeB 神经分化 Cathepsin A

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末梢肺组织分化调控中p22功能的初步分析

末梢肺组织分化调控中p22功能的初步分析

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：陈澄宋春阳潘逼然陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室

肺是重要的呼吸器官,新生儿只有具有发育成熟的肺才能健康存活。Ⅱ型肺泡上皮细胞是维持末梢肺组织功能的重要细胞,其分化状态受到严格调控。其中p22是一种染色质结合蛋白,人类同一蛋白家族的成员为核基质蛋白,分裂期为染色体支架蛋白,... 详细信息

肺是重要的呼吸器官,新生儿只有具有发育成熟的肺才能健康存活。Ⅱ型肺泡上皮细胞是维持末梢肺组织功能的重要细胞,其分化状态受到严格调控。其中p22是一种染色质结合蛋白,人类同一蛋白家族的成员为核基质蛋白,分裂期为染色体支架蛋白,但也存在于细胞质中,具有参与多泡体形成调控等多种功能,其在末梢肺组织分化成熟中的作用尚未见报道。我们的研究发现p22可能与末梢肺组织分化成熟相关,在末梢肺组织分化成熟的高峰时期p22表达水平明显升高,MLE12细胞过表达p22能促进SPC基因的表达升高。我们还发现p22的C末端93AA-199AA与TGFβ/BMP信号通路的细胞内信号分子Smad1互作,免疫荧光实验显示二者可在胞质与胞核中共定位,免疫共沉淀试验和Pull-down试验均证实了二者的互作。Smad1作为TGFβ/BMP信号通路的细胞内信号分子在肺分枝化形态发生及末梢肺组织分化两个过程中都发挥重要的调控作用,敲除发育过程中小鼠胚胎肺上皮组织中的Smad1导致末梢肺组织中Ⅱ型肺泡上皮细胞分化不良,末梢肺组织结构发生改变,新生鼠死于呼吸障碍。p22与smad1互作可能在Ⅱ型肺泡上皮细胞分化状态调控中起重要作用。

关键词：肺发育 Ⅱ型肺泡上皮细胞 BMP4

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硕士研究生细胞培养教学改革探讨

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中华医学教育探索杂志 2011年第7期10卷 800-802页

作者：李明刘俊柯志勇白晓春罗深秋南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广州510515 广州军区广州总医院泌尿外科 510010

细胞培养技术是医学研究生从事课题研究必备的知识和技能。本校细胞生物学教研室对硕士研究生细胞培养教学进行了改革，通过编写优秀教材，录制配套多媒体教学光盘，合理安排教学内容和设置灵活的课程考核体系，提高了教学效果。

关键词：细胞培养技术硕士研究生教学改革

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构建具有学科特点的细胞生物学PBL教学模式

构建具有学科特点的细胞生物学PBL教学模式

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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：方瑾李丰张惠丹于敏王桂玲李想李晓东刘彤李妍邵阳光中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室医学细胞生物学教育部重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳 110001

以问题为基础学习(problem-based learning,PBL)的教学方法是目前发达国家普遍采用并被广泛认同的一种医学课程模式,它是将问题作为基本因素,将课程的内容相互联系起来,使学生在不断的提出问题和解决问题中完成教学内容的学习,并实现教... 详细信息

以问题为基础学习(problem-based learning,PBL)的教学方法是目前发达国家普遍采用并被广泛认同的一种医学课程模式,它是将问题作为基本因素,将课程的内容相互联系起来,使学生在不断的提出问题和解决问题中完成教学内容的学习,并实现教学思想和教学目标,这种方法在培养学生分析问题和解决问题的能力,培养学生自主学习能力,并养成终生学习习惯方面具有极大的促进作用。近20年,该方法得到了迅速的发展,并被广泛采用,已逐步形成了较为规范的基本教学过程并成为医学教学模式改革的大趋势。

关键词： PBL 细胞生物学教学模式

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