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解剖科学进展 2011年第5期17卷 461-463,467页

作者：刘彤李洋李丹妮李丰中国医科大学基础医学院细胞生物教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医科大学 94期临床医学辽宁沈阳110001

目的构建人hRNF6基因的原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法提取前列腺癌细胞CWR22Rv1的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hRNF6全长编码基因,并将其克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在*** BL21中诱导GST-hRNF6融合蛋白表达,并经免... 详细信息

目的构建人hRNF6基因的原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法提取前列腺癌细胞CWR22Rv1的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hRNF6全长编码基因,并将其克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在*** BL21中诱导GST-hRNF6融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果 hRNF6编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,双酶切及测序鉴定正确,并在*** BL21中获得了诱导表达,蛋白的分子量为104KD,免疫印迹检测到了融合蛋白表达。结论成功构建基因原核表达载体,诱导表达出GST-RNF6融合蛋白。

关键词：人hRNF6基因原核表达融合蛋白 E.coli BL21

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水溶性CdTe量子点的制备及对大肠癌细胞的免疫成像研究

水溶性CdTe量子点的制备及对大肠癌细胞的免疫成像研究

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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：王蒴刘畅方瑾中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室医学细胞生物学教育部重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳 110001

量子点(QD)是由半导体材料制成的直径为2～10 nm的纳米晶体，是一种新型的荧光染料。利用量子点的荧光特性，通过与生物大分子耦联，可以制备出灵敏度高、特异性强的生物探针。本研究采用水热合成法制备出巯基乙酸包被的CdTe量子点，采... 详细信息

量子点(QD)是由半导体材料制成的直径为2～10 nm的纳米晶体，是一种新型的荧光染料。利用量子点的荧光特性，通过与生物大分子耦联，可以制备出灵敏度高、特异性强的生物探针。本研究采用水热合成法制备出巯基乙酸包被的CdTe量子点，采用紫外可见光谱、荧光光谱技术和透射电子显微镜对该量子点的光学特性进行了研究。并以EDAC为交联剂，将该量子点与单克隆抗体ND-1进行耦联，制备出检测LEA(一种表达于大肠癌细胞膜表面的肿瘤相关抗原)的生物探针。

关键词：量子点大肠癌细胞外大抗原(LEA) ND-1

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应用凝集素芯片检测细胞膜表面糖链种属特异性

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中国医药生物技术 2011年第1期6卷 24-28页

作者：马汝海王天骄潘忠诚何群中国医科大学基础医学院化学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院生物芯片中心/教育部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的应用凝集素芯片检测小鼠和兔不同组织细胞膜表面的糖链类型,探求不同物种间相同组织细胞膜表面糖复合物在种群免疫和细胞功能中的作用。方法选择22种凝集素,利用生物芯片点样仪制备芯片,选用牛血清白蛋白(BSA)为阴性质控,马铃薯凝集... 详细信息

目的应用凝集素芯片检测小鼠和兔不同组织细胞膜表面的糖链类型,探求不同物种间相同组织细胞膜表面糖复合物在种群免疫和细胞功能中的作用。方法选择22种凝集素,利用生物芯片点样仪制备芯片,选用牛血清白蛋白(BSA)为阴性质控,马铃薯凝集素(STL)为阳性质控。分别用胶原酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ消化小鼠和兔的肾、脾、肝组织,制备细胞悬液,并加入吖啶橙荧光标记细胞。将细胞悬液分别滴加至凝集素芯片中,利用凝集素与糖链的特异亲和性捕获细胞,激光扫描仪检测芯片中各凝集素位点的荧光信号强度,行常规HE染色后于荧光显微镜下观察各凝集素位点所捕获的细胞形态,并分析不同胶原酶消化对检测结果的影响。结果小鼠和兔相同组织的细胞膜表面糖链类型基本相同,仅个别位点略有不同。在GNA、LTL、HHL、NPL位点,兔脾细胞均为阴性,小鼠脾细胞均为阳性。在BPL、WFA位点,兔肾细胞均为阴性,小鼠肾细胞均为阳性;在MAL-I位点,兔肾细胞为阳性,小鼠肾细胞为阴性。MPL、WBA、LTL、SBA、BPL、WFA、MAL-I、AAL、BCL位点,兔肝细胞均为阳性,小鼠肝细胞均为阴性;在NPL位点,小鼠肝细胞为阳性,兔肝细胞为阴性。DSL、STL位点,小鼠和兔各组织细胞检测结果均为阳性;在EEL、DBA位点,小鼠和兔各组织细胞检测结果均为阴性。在GNA位点,兔脾组织经胶原酶Ⅱ消化后可见极少量细胞,经其他2种胶原酶消化后则未见捕获细胞。兔肾组织以及小鼠的脾和肾组织经3种胶原酶消化后,检测结果无明显差异。在BCL位点,兔肝组织经胶原酶IV消化后捕获细胞最多,其次为胶原酶Ⅱ,胶原酶Ⅰ最少。结论通过制备的凝集素芯片成功检测了小鼠和兔不同组织细胞膜表面的糖链特异性。小鼠和兔相同组织的细胞膜表面具有相同类型糖链,但不同组织之间细胞膜糖链类型也存在其特异性,这可能与组织分化及其功能密切相关。

关键词：细胞膜凝集素类动物实验

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PLGF/VEGFR-1介导小细胞肺癌细胞穿过血脑屏障转移入脑的研究

PLGF/VEGFR-1介导小细胞肺癌细胞穿过血脑屏障转移入脑的研究

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：李波王淳张一赵晓云刘永烁曹立业方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

小细胞肺癌脑转移具有发生时间早,恶性度高的特点,目前无有效的治疗手段。因此,探讨小细胞肺癌脑转移的分子机制对其防治具有重要的意义。我们研究发现,胎盘生长因子(placental growthfactor,PLGF)在小细胞肺癌组织中的表达与患者的TNM... 详细信息

小细胞肺癌脑转移具有发生时间早,恶性度高的特点,目前无有效的治疗手段。因此,探讨小细胞肺癌脑转移的分子机制对其防治具有重要的意义。我们研究发现,胎盘生长因子(placental growthfactor,PLGF)在小细胞肺癌组织中的表达与患者的TNM分期、淋巴结转移及生存与否相关(P<0.05);发生脑转移患者的肺部癌组织中PLGF的表达高于未发生脑转移的患者(P<0.05);在发生脑转移的小细胞肺癌患者的血清及脑转移癌组织中PLGF的表达明显高于未发生脑转移的患者(P<0.01),这提示PLGF与小细胞肺癌脑转移有关。利用体外血脑屏障模型研究发现,PLGF通过结合脑微血管内皮细胞上VEGFR-1受体,激活细胞内Rho/ROCK及下游的MAPK/ERK1/2信号,使内皮细胞间紧密连接结构蛋白occludin和claudin-5的丝氨酸/苏氨酸磷酸化水平增加,改变紧密连接的完整性,促进小细胞肺癌细胞穿过体外血脑屏障模型。进一步利用RNAi、构建激酶表达缺陷的脑内皮细胞及激酶抑制剂抑制试验验证了上述实验结果。这表明,小细胞肺癌细胞表达的PLGF与人脑微血管内皮细胞上VEGFR-1相互作用,激活内皮细胞中RhoA/ROCK-MAPK/ERK1/2信号,影响了细胞间紧密连接的完整性,促进小细胞肺癌细胞穿过血脑屏障迁移入脑。

关键词： PLGF VEGFR-1 小细胞肺癌血脑屏障脑转移

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Aβ诱导脑微血管内皮细胞高表达MHC-I分子促进T淋巴细胞跨内皮迁移

Aβ诱导脑微血管内皮细胞高表达MHC-I分子促进T淋巴细胞跨内皮迁移

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：杨一鸣赵伟东方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

免疫炎性反应被认为阿尔茨海默病(AD)发病的重要环节。我们首次发现Aβ可以诱导脑微血管内皮细胞高表达MHC-I,促进T细胞跨内皮迁移。脑切片免疫荧光染色显示,AD模型大鼠脑微血管表达MHC-I高于对照组。收集经过Aβ作用后的小胶质细胞(BV2... 详细信息

免疫炎性反应被认为阿尔茨海默病(AD)发病的重要环节。我们首次发现Aβ可以诱导脑微血管内皮细胞高表达MHC-I,促进T细胞跨内皮迁移。脑切片免疫荧光染色显示,AD模型大鼠脑微血管表达MHC-I高于对照组。收集经过Aβ作用后的小胶质细胞(BV2)培养上清液,作用于血脑屏障的体外模型人脑微血管内皮细胞(HBMEC),可以使HBMEC的MHC-I表达明显升高。细胞迁移实验表明Aβ刺激BV2的培养上清液可以促进T细胞穿过HBMEC单层,而这种促进作用可以被MHC-I的中和抗体所阻断。细胞粘附实验显示上清液促进了T细胞对HBMEC的粘附,MHC-I中和抗体可以阻断这种粘附作用。RNA干扰HBMEC的MHC-I后得到相同的结论。为了进一步研究HBMEC中高表达MHC-I促进T细胞跨内皮迁移的机制,我们采用TNF-α中和抗体预处理经过Aβ作用的BV2上清液后,再使之作用于HBMEC,发现可以阻断MHC-I的表达上调。细胞迁移和粘附实验也表明TNF-α中和抗体抑制了T细胞迁移和粘附的增多。结论:AD脑内沉积的Aβ刺激小胶质细胞分泌TNF-α,诱导脑微血管内皮细胞高表达MHC-I分子,从而促进外周血T细胞粘附于脑微血管内皮并迁移进入脑实质。

关键词：阿尔茨海默病 Aβ TNF-α MHC-I T细胞

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褪黑素可能通过DNA甲基化修饰机制拮抗可卡因奖赏效应

褪黑素可能通过DNA甲基化修饰机制拮抗可卡因奖赏效应

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：韦佳祎张海波何威中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

褪黑素能减弱可卡因依赖大鼠的药物渴求行为和改善吗啡依赖大鼠的戒断症状,但是其作用机制尚不十分清楚。我们的前期工作发现,褪黑素对大鼠可卡因奖赏效应的形成有抑制作用;褪黑素抑制可卡因诱导的前额叶皮质和纹状体的CDK5、BDNF的三... 详细信息

褪黑素能减弱可卡因依赖大鼠的药物渴求行为和改善吗啡依赖大鼠的戒断症状,但是其作用机制尚不十分清楚。我们的前期工作发现,褪黑素对大鼠可卡因奖赏效应的形成有抑制作用;褪黑素抑制可卡因诱导的前额叶皮质和纹状体的CDK5、BDNF的三型组蛋白的高乙酰化表达,提示组蛋白乙酰化修饰途径可能是褪黑素对可卡因抑制作用的机制之一。本研究应用条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)和共聚焦激光扫描显微镜技术等检测了褪黑素对大鼠可卡因奖赏效应的作用并初步探索了其DNA甲基化修饰机制。结果显示:褪黑素的小剂量、慢性给药可抑制可卡因奖赏效应的表达强度;可卡因诱导海马神经元5-甲基胞嘧啶的高表达,而褪黑素抑制这种高表达。海马是中枢奖赏通路中的重要结构,其不但向前额叶皮层有直接或间接的纤维投射,还通过谷氨酸能神经元和伏核有直接联系,在药物成瘾记忆和突触可塑性变化中发挥重要作用。我们的实验结果提示,DNA甲基化修饰机制可能是精神活性药物引起精神和行为变化的一个重要的调节机制。

关键词：褪黑素可卡因条件性位置偏爱 DNA甲基化

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脑微血管内皮细胞膜蛋白P190是大肠杆菌侵袭因子IbeB的受体

脑微血管内皮细胞膜蛋白P190是大肠杆菌侵袭因子IbeB的受体

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：刘东鑫赵伟东方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

大肠杆菌K1株(*** K1)是引起新生儿细菌性脑膜炎最常见的病原体之一。*** K1的外膜蛋白IbeB参与了*** K1侵袭人脑微血管内皮细胞(HBMEC)、穿过血脑屏障。我们利用酵母双杂交技术从HBMEC的cDNA文库中筛选到与IbeB相互作用的P190膜蛋白,... 详细信息

大肠杆菌K1株(*** K1)是引起新生儿细菌性脑膜炎最常见的病原体之一。*** K1的外膜蛋白IbeB参与了*** K1侵袭人脑微血管内皮细胞(HBMEC)、穿过血脑屏障。我们利用酵母双杂交技术从HBMEC的cDNA文库中筛选到与IbeB相互作用的P190膜蛋白,并确认了IbeB蛋白胞外段229-342aa能够与P190蛋白胞外段203-355aa发生相互作用。细菌基因敲除试验显示,*** K1的IbeB(229-342aa)与*** K1侵袭HBMEC相关。我们发现,在*** K1侵袭HBMEC时,HBMEC细胞膜上的P190蛋白明显增多并向细菌侵袭部位聚集。RNA干扰P190后,能明显减少*** K1对HBMEC的侵袭,且可以被表达全长P190所恢复(rescue);P190胞内段缺失突变后,明显减少了*** K1对HBMEC的侵袭。重组的P190(203-355aa)短肽与*** K1预先孵育后,能够显著降低*** K1侵袭进入HBMEC。进一步研究发现P190能够与粘着斑激酶(FAK)形成复合物,促使FAK发生磷酸化,参与P190介导的*** K1侵袭HBMEC的过程,而cPLA2、Src、Cdc42以及Rac1都不参与该过程。结论:HBMEC上的P190作为细菌IbeB蛋白的受体参与*** K1侵袭HRMEC。

关键词： HBMEC E.coli K1 P190 FAK

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血管内皮细胞生长因子受体1参与*** K1侵袭人脑微血管内皮细胞

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：赵伟东刘东鑫刘巍方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

从细胞分子水平探讨病原体与宿主细胞相互作用的机理逐渐成为细胞生物学领域的新兴热点。研究表明,新生儿细菌性脑膜炎最常见的革兰氏阴性致病菌是带有K1抗原的大肠杆菌(即***1),*** K1导致脑膜炎的前提条件是播散入血的*** K1能够穿过... 详细信息

从细胞分子水平探讨病原体与宿主细胞相互作用的机理逐渐成为细胞生物学领域的新兴热点。研究表明,新生儿细菌性脑膜炎最常见的革兰氏阴性致病菌是带有K1抗原的大肠杆菌(即***1),*** K1导致脑膜炎的前提条件是播散入血的*** K1能够穿过血脑屏障进入脑内。我们利用分离培养的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)构建了体外血脑屏障模型,在此基础上探讨*** K1侵袭血脑屏障的分子机制。我们首次发现,HBMEC上的血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR1)参与了***1侵袭HBMEC。VEGFR受体抑制剂和针对VEGFR1的siRNA可以明显阻断***1侵袭所导致的HBMEC肌动蛋白微丝的重排,并可抑制*** K1侵袭HBMEC。在*** K1侵袭HBMEC时,VEGFR1和*** K1有明显的共定位。VEGFR1能够与PI3K的p85亚单位形成复合物,导致PI3K下游的Akt的活化。此外,Src激酶作为PI3K/Akt上游的信号分子也参与了Ecoli K1侵袭HBMEC。这些结果进一步揭示了大肠杆菌侵袭血脑屏障的分子机制。

关键词：大肠杆菌K1株人脑微血管内皮细胞信号转导

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EphA2受体参与维持脑微血管内皮细胞的紧密连接结构

EphA2受体参与维持脑微血管内皮细胞的紧密连接结构

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：赵伟东周娜梁悦方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

Eph受体与其配体ephrin参与调控多种生物学过程,如神经发育、血管发生和肿瘤生成等。目前,关于Eph受体与其配体ephrin在脑内皮细胞中的作用尚不清楚。我们利用分离培养的人脑微血管内皮细胞(HBMEC),检测了EphA受体和ephrin-A配体的表达... 详细信息

Eph受体与其配体ephrin参与调控多种生物学过程,如神经发育、血管发生和肿瘤生成等。目前,关于Eph受体与其配体ephrin在脑内皮细胞中的作用尚不清楚。我们利用分离培养的人脑微血管内皮细胞(HBMEC),检测了EphA受体和ephrin-A配体的表达谱,发现EphA1,2,3,4,6,7,10以及ephrin-A1,3,4,5在HBMEC中有表达。以重组ephrin-A1蛋白对HBMEC进行处理后,可以使HBMEC的EphA2受体发生明显的酪氨酸磷酸化,并使HBMEC单层的通透性升高,紧密连接蛋白ZO-1和occludin的分布发生改变(由连续、线状变为断续、紊乱)。RNA干扰HBMEC的EphA2后,可以改善HBMEC单层的通透性,并能促进紧密连接形成。将EphA2激酶缺失突变体转染至HBMEC后,也获得了与RNA干扰EphA2相似的结果。我们还发现,EphA2的功能失活后,可以削弱HBMEC的迁移能力,抑制HBMEC的血管生成能力。体内实验发现,EphA2特异性表达于脑微血管中。综上,我们认为EphA2受体是维持脑微血管内皮细胞紧密连接结构的重要分子。

关键词： EphA2受体脑微血管紧密连接血管生成

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细粒棘球蚴重组抗原mMDH用于囊型包虫病血清学诊断的初步研究

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宁夏医科大学学报 2011年第3期33卷 216-218页

作者：李宗吉赵巍王娅娜张焱王洁王淑静宁夏医科大学科学技术研究中心银川750004 宁夏医科大学基础医学院医学遗传学与细胞生物学教研室银川750004

目的探讨细粒棘球蚴重组抗原(rEgmMDH)对囊型包虫病的血清学诊断价值。方法将已构建的原核表达菌株mMDH/pET-28a/BL21■lysS,用IPTG诱导表达,经亲和层析纯化获得高纯度rEgmMDH,以rEgmMDH为抗原,应用ELISA和Western-blotting方法对40例... 详细信息

目的探讨细粒棘球蚴重组抗原(rEgmMDH)对囊型包虫病的血清学诊断价值。方法将已构建的原核表达菌株mMDH/pET-28a/BL21■lysS,用IPTG诱导表达,经亲和层析纯化获得高纯度rEgmMDH,以rEgmMDH为抗原,应用ELISA和Western-blotting方法对40例手术确诊的囊型包虫病病人血清进行了回顾性检测与分析。结果 ELISA和Western-blotting方法检测囊型包虫病病人血清阳性率为92.5%(37/40);Western-blotting方法显示囊型包虫病病人血清可特异性识别重组抗原,泡球蚴病人汇集血清不能识别重组抗原。结论 rEgmMDH具有较好的抗原性,可作为囊型包虫病血清学检测的候选诊断抗原。

关键词：细粒棘球蚴 rEgmMDH 囊型包虫病血清学诊断

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