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细胞与分子免疫学杂志 2015年第9期31卷 1162-1166页

作者：何岩郑倩倩朱亚勤教育部医学细胞生物学重点实验室细胞病理生物学研究室中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室辽宁沈阳110001

目的构建Ser176/180磷酸化位点突变的核因子κB抑制剂激酶α(IKKα)真核表达载体。方法通过PCR获得带有IKKαSer176/180突变位点和无义突变KpnⅠ位点的片段,以及带有无义突变KpnⅠ位点的片段,两片段分别经过HindⅢ/KpnⅠ以及KpnⅠ/EcoR... 详细信息

目的构建Ser176/180磷酸化位点突变的核因子κB抑制剂激酶α(IKKα)真核表达载体。方法通过PCR获得带有IKKαSer176/180突变位点和无义突变KpnⅠ位点的片段,以及带有无义突变KpnⅠ位点的片段,两片段分别经过HindⅢ/KpnⅠ以及KpnⅠ/EcoRⅠ双酶切,载体pEGFP经HindⅢ/EcoRⅠ双酶切后连接。共聚焦显微镜技术观察激活型/死型p EGFPIKKαKA/KD融合蛋白在真核细胞中的定位及其对P65核质易位的影响。Western blot法检测重组蛋白表达。结果测序显示载体构建成功。pEGFP-IKKαKA分布在细胞核和细胞质,并能使P65发生核穿梭。pEGFP-IKKαKD主要分布在细胞质,不能使P65发生核质易位。Western blot结果显示出融合蛋白的特异性条带。结论成功构建IKKα磷酸化位点激活型及死型的真核表达载体,在真核细胞中可有效表达。pEGFP-IKKαKA/KD在真核细胞中蛋白表达呈现不同定位,对下游P65的核质穿梭调控发挥不同效应。

关键词：核因子κB抑制剂激酶α 激酶突变型真核表达载体

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siIRE1α重组腺病毒对内质网应激介导凋亡的影响

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第三军医大学学报 2014年第11期36卷 1147-1152页

作者：韩晓凤李美玲张鹏夏飞郭风劲 400016重庆重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室

目的构建内质网跨膜蛋白肌醇酶1α(inositol-requiring enzyme 1 α,IRE1α)基因干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)重组腺病毒,并探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)状态下其对C2C12细胞增殖凋亡的影响.方法人工合成靶向IRE1α的siRNA序列,连接到穿梭载体pSES-HUS上,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183感受态中进行同源重组,得到pAdSES-HUS-IRE1αsiRNA重组质粒.通过脂质体介导在HEK293细胞中包装并扩增重组腺病毒Ad-IRE1α siRNA,在C2C12细胞中采用RT-PCR和Western blot检测其干扰效果,并通过FCM法和MTT检测Tm诱导ERS时病毒对C2C12细胞增殖凋亡的影响(分为4组:NC组、Tm单独处理组、Tm+ Ad-RFP组和Tm+ Ad-IRE1 α siRNA组),Western blot检测C2C12细胞中Cleaved Caspase-3和Chop蛋白的表达.结果成功获得了病毒滴度约为4.3×1011 PFU/mL的重组腺病毒Ad-IRE1α***-PCR和Western blot检测结果表明,该重组腺病毒有效地抑制了C2C12细胞中IRE1α的表达.FCM检测结果表明,ERS条件下,Tm+ Ad-IRE1α siRNA组S期的细胞比例分别比Tm单独处理组和Tm+ Ad-RFP组升高12.62％和14.80％ (P ＜0.05);凋亡率比Tm单独处理组和Tm+ Ad-RFP组降低16.64％和16.26％ (P ＜0.05).MTT实验结果与Cleaved Caspase-3和Chop蛋白的表达与FCM结果一致.结论重组腺病毒Ad-IRE1α siRNA在C2C12细胞中能有效抑制IRE1 α的表达;ERS状态下,RNA干扰IRE1α基因可促进C2C12细胞的增殖,抑制其凋亡.

关键词： IRE1α RNA干扰重组腺病毒 C2C12细胞增殖和凋亡

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bFGF促进人大肠癌LoVo细胞增殖的信号转导机制

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世界华人消化杂志 2007年第1期15卷 34-38页

作者：周颖王桂玲中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室辽宁省沈阳市110001

目的:通过改变碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作用于LoVo细胞的时间,检测PKB活性和CyclinA的表达情况,进一步研究bFGF通过PI3-K/PKB通路调控大肠癌细胞生长的信号转导机制.方法:MTT法分析bFGF对LoVo细胞增殖程度的影响;(γ-32P)ATP掺入... 详细信息

目的:通过改变碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作用于LoVo细胞的时间,检测PKB活性和CyclinA的表达情况,进一步研究bFGF通过PI3-K/PKB通路调控大肠癌细胞生长的信号转导机制.方法:MTT法分析bFGF对LoVo细胞增殖程度的影响;(γ-32P)ATP掺入法检测大肠癌LoVo细胞株中PKB的活性;RT-PCR法检测大肠癌LoVo细胞株中CyclinA的表达;Westernblot法检测bFGF作用LoVo细胞后CyclinA的表达.结果:bFGF以不同时间作用于LoVo细胞时,通过(γ-32P)ATP掺入法检测发现其可提高细胞PKB活性,PI3-K的抑制剂LY294002预处理后再施加bFGF,可显著降低PKB的活性,两者相比差异显著[704.32±12.35pmol/(mg·min)vs1352.79±19.85pmol/(mg·min),P<0.05].bFGF刺激LoVo细胞时CyclinA蛋白和CyclinAmRNA表达均高于其他各施加因素组,而PI3-K的抑制剂LY294002组的CyclinA蛋白和CyclinAmRNA明显降低.结论:bFGF刺激大肠LoVo细胞后可通过依赖PI3-K/PKB途径调节CyclinA的转录活性,促进其表达,进而促进细胞增殖.

关键词：碱性成纤维细胞生长因子蛋白激酶B Cyclin A 大肠癌

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TRAP1在结肠癌组织中的表达与病理特征和患者预后的关系及其可能的机制

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中国肿瘤生物治疗杂志 2023年第1期30卷 42-49页

作者：畅靖嘉吴昊张文桃张昕彤胡艳芬刘铭李莉朱剑军山西医科大学基础医学院医学细胞生物与遗传学教研室山西太原030001

目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)在结肠癌组织和细胞中的表达及其与临床病理特征和患者预后的关系和相关分子机制。方法:通过TCGA和GEO数据全面分析TRAP1在结肠癌中的表达及其与临床病理特征和患者预后的关系,选取2020年10月... 详细信息

目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)在结肠癌组织和细胞中的表达及其与临床病理特征和患者预后的关系和相关分子机制。方法:通过TCGA和GEO数据全面分析TRAP1在结肠癌中的表达及其与临床病理特征和患者预后的关系,选取2020年10月至2021年03月间在山西医科大学第一医院手术切除的10例结肠癌组织及相应癌旁组织标本,用IHC染色法检测中国人结肠癌组织中TRAP1的表达进行验证,运行R包(survival和survminer)进行Kaplan-Meier生存分析;在线分析TRAP1蛋白的信号肽及穿膜结构域,通过基因富集分析软件进行GO分析和KEGG分析。培养结肠癌SW480和SW620细胞,将si-NC和si-TRAP1转染结肠癌细胞,实验分为空白对照组、si-NC组和si-TRAP1组,采用qPCR法检测转染后各组结肠癌细胞中TRAP1的表达,FCM检测转染后各组细胞的细胞周期和凋亡情况。结果:与癌旁组织比较,TRAP1在结肠癌组织中呈高表达(P<0.01),TRAP1表达水平与淋巴结转移有关联(P<0.05),TRAP1高表达组结肠癌患者5年OS率较低(P<0.05)。TRAP1蛋白属于细胞质蛋白,功能富集结果显示TRAP1及其相关分子与细胞周期、核糖体生物发生等信号通路有关(均P<0.01),TRAP1高表达组的结肠癌代谢重编程基因簇和线粒体蛋白输入基因簇水平升高(均P<0.01)。敲减TRAP1后,结肠癌细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡水平显著升高(均P<0.01)。结论:TRAP1在结肠癌组织中呈高表达,且与患者淋巴结转移和低OS率相关联,敲减TRAP1可阻滞结肠癌细胞周期并促进其凋亡。

关键词：结肠癌 SW480细胞 SW620细胞肿瘤坏死因子受体相关蛋白1 细胞周期凋亡

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结肠癌中HRH3表达对细胞增殖的影响

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临床与实验病理学杂志 2020年第6期36卷 652-656页

作者：朱剑军吴昊山西医科大学基础医学院医学细胞生物与遗传学教研室太原030001

目的探讨组胺受体3(histamine receptor 3,HRH3)对结肠癌细胞恶性增殖的影响及其相关信号通路。方法以结肠癌Ls174T细胞和SW480为研究对象,研究HRH3对其生长增殖的影响。通过转染siRNA片段沉默HRH3基因表达。CCK-8检测细胞生长,EdU检测... 详细信息

目的探讨组胺受体3(histamine receptor 3,HRH3)对结肠癌细胞恶性增殖的影响及其相关信号通路。方法以结肠癌Ls174T细胞和SW480为研究对象,研究HRH3对其生长增殖的影响。通过转染siRNA片段沉默HRH3基因表达。CCK-8检测细胞生长,EdU检测细胞增殖活性,实时荧光定量PCR和Western blot检测相关信号通路分子改变。结果转染siRNA片段可有效沉默HRH3表达。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,转染si-HRH3后,HRH3 mRNA和蛋白表达均显著降低(P均<0.05)。CCK-8实验结果显示,沉默HRH3后,细胞生长明显减慢(P均<0.05)。EdU实验结果显示,沉默HRH3后,细胞增殖活性显著降低(P均<0.05)。机制研究表明,沉默HRH3后,c-Myc表达显著降低、CDKN1A表达显著升高(P均<0.05)。结论HRH3可能通过调控c-Myc和CDKN1A转录表达促进结肠癌细胞的恶性增殖。

关键词：结肠肿瘤组胺受体3 细胞生长 c-Myc

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骨化三醇对胆管结扎所致小鼠肝纤维化的保护作用及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2021年第2期47卷 257-264页

作者：贾荣军马丽曼李丽华锦州医科大学基础医学院细胞生物学教研室辽宁锦州121000 台州学院医学院实验中心浙江台州318000

目的:探讨骨化三醇对胆总管结扎(BDL)诱导的小鼠肝纤维化的保护作用,并阐述其可能的作用机制。方法:选用45只8~10周雄性C57BL/6小鼠,随机分为假手术组、肝纤维化模型组(模型组)和骨化三醇治疗组(治疗组),每组15只。假手术组小鼠绕胆总... 详细信息

目的:探讨骨化三醇对胆总管结扎(BDL)诱导的小鼠肝纤维化的保护作用,并阐述其可能的作用机制。方法:选用45只8~10周雄性C57BL/6小鼠,随机分为假手术组、肝纤维化模型组(模型组)和骨化三醇治疗组(治疗组),每组15只。假手术组小鼠绕胆总管穿过手术线,不结扎。模型组小鼠双重结扎胆总管并离断。治疗组小鼠术后2.5μg·kg~(-1)腹腔注射骨化三醇,每周3次。假手术组和模型组小鼠注射等体积生理盐水。术后继续给药4周,第28天眼眶取血,取小鼠肝脏。术后第2天检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)和羟脯氨酸(Hyp)水平。苏木精-伊红(HE)染色和天狼猩红染色观察各组小鼠肝组织病理形态学和肝组织纤维化程度。Western blotting法检测各组小鼠肝组织中维生素D受体(VDR)细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK)、α-平滑肌蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1 (TGF-β1)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和结蛋白(Desmin)表达水平。免疫组织化学法检测各组小鼠肝组织中α-SMA和TGF-β1蛋白表达情况。结结果果:与假手术组比较,模型组小鼠血清中ALT和AST活性及TBA、TBIL和Hyp水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,治疗组小鼠血清中ALT和AST活性及TBA、TBIL和Hyp水平明显降低(P<0.05)。HE染色,假手术组小鼠肝小叶正常,组织结构较为完整,未见炎性细胞浸润;模型组小鼠肝组织出现炎性细胞浸润,坏死灶和胶原沉积较为明显;与模型组比较,治疗组小鼠肝组织坏死灶区域明显减少,炎性浸润有所改善。天狼猩红染色,假手术组小鼠肝组织仅有少量胶原沉积出现在中央静脉周围;模型组小鼠肝组织中央静脉及汇管区出现明显胶原沉积;与模型组比较,治疗组胶原沉积明显减少。Western blotting法检测,与假手术组比较,模型组小鼠肝组织中ERK、p-ERK、α-SMA、TGF-β1、 ColⅠ和Desmin蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,治疗组小鼠肝组织中ERK、 pERK、α-SMA、TGF-β1、ColⅠ和Desmin蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。免疫组织化学,模型组小鼠肝组织中α-SMA和TGF-β1蛋白表达量高于假手术组;治疗组小鼠肝组织中α-SMA和TGF-β1蛋白表达量明显低于模型组。结论:骨化三醇通过激活维VDR,下调ERK蛋白表达,降低TGF-β1表达,减少肝星状细胞(HSCs)激活,抑制胶原在组织间沉积,从而缓解BDL诱导的小鼠肝纤维化。

关键词：肝纤维化骨化三醇维生素D受体肝星状细胞

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血小板源性生长因子及其受体在类风湿性关节炎大鼠肺组织的表达及与风湿肺关系的探讨

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中国医科大学学报 2002年第1期31卷 11-14页

作者：刘倩杨宇陈立李舒帆杨娉婷中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学第一临床学院风湿免疫科中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室

目的 :观察类风湿关节炎大鼠模型肺脏不同时间的病理变化、血小板源性生长因子 (PDGF)及其受体的表达 ,探讨风湿肺发病机制。方法 :Wistar大鼠用福氏完全佐剂致类风湿关节炎 (RA)后 ,选择 36只分别在不同时期和应用氢化考的松及低分子... 详细信息

目的 :观察类风湿关节炎大鼠模型肺脏不同时间的病理变化、血小板源性生长因子 (PDGF)及其受体的表达 ,探讨风湿肺发病机制。方法 :Wistar大鼠用福氏完全佐剂致类风湿关节炎 (RA)后 ,选择 36只分别在不同时期和应用氢化考的松及低分子量肝素进行治疗后 ,取其肺脏观察HE染色病理变化及免疫组化染色检测PDGF配体及受体表达情况。结果 :致炎模型 15d时肺泡炎最严重 ,30d时肺纤维化最严重。PDGF配体及受体在正常肺组织中表达较少 ,RA 15d时表达高峰 ,RA 30d时有所回落。氢考和低分子量肝素治疗后明显下降。结论 :风湿肺的变化经历了从肺泡炎至肺纤维化的过程。PDGF配体及受体表达增高与风湿肺病理改变加重一致。低分子量肝素治疗风湿肺与氢化考的松具有同样作用。

关键词：血小板源性生长因子风湿性关节炎肺组织大鼠纤维化风湿肺

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上皮-间质转化在前列腺癌中的研究进展

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中华男科学杂志 2013年第4期19卷 360-364页

作者：刘莉王丽玲于晓光林锋哈尔滨医科大学药学院有机化学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

前列腺癌(PCa)是老年男性常见疾病,其发病率居西方国家男性恶性肿瘤第2位。近年来,我国的发病率呈上升趋势。肿瘤的转移是导致前列腺癌患者死亡的主要原因。在肿瘤的发生发展过程中,浸润区肿瘤细胞与其微环境相互作用,经历上皮-间质转化... 详细信息

前列腺癌(PCa)是老年男性常见疾病,其发病率居西方国家男性恶性肿瘤第2位。近年来,我国的发病率呈上升趋势。肿瘤的转移是导致前列腺癌患者死亡的主要原因。在肿瘤的发生发展过程中,浸润区肿瘤细胞与其微环境相互作用,经历上皮-间质转化(EMT),最终出现远处转移。因此研究EMT在前列腺癌发生发展中的作用,对前列腺癌治疗有重要意义。本文主要参考近3年相关的文献,以治疗靶点为方向,对促进前列腺癌EMT的因素,作一综述。

关键词：上皮-间质转化前列腺癌治疗靶点

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不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体的构建及重组蛋白的表达

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中国医科大学学报 2011年第12期40卷 1057-1059,1071页

作者：刘彤李洋朱戈李丰中国医科大学基础医学院细胞生物教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建不同激酶活性的hPAK6原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法野生型、激酶活型和激酶死型pcDNA3.1-PAK6经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在*** BL21中诱导不同型GST-hPAK6融合蛋白表达,并经免... 详细信息

目的构建不同激酶活性的hPAK6原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法野生型、激酶活型和激酶死型pcDNA3.1-PAK6经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在*** BL21中诱导不同型GST-hPAK6融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果野生型、激酶活型和激酶死型hPAK6编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,双酶切及测序鉴定正确,并在*** BL21中获得了诱导表达,蛋白的分子量均为101 kDa,免疫印迹检测到了融合蛋白表达。结论成功构建不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体,并分别诱导表达出GST-PAK6融合蛋白。

关键词： PAK6基因激酶活型激酶死型原核表达融合蛋白

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降钙素基因相关肽衍生物克隆表达与活性鉴定

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中国老年学杂志 2008年第18期28卷 1790-1792页

作者：林平邹海峰于靖边淑玲刘紫君于晓光哈尔滨医科大学基础医学学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的利用基因工程方法获得降钙素基因相关肽(CGRP)的衍生物(CGRP-VY),并初步鉴定其生物学活性。方法以pETC-GRP重组质粒为模板,用PCR方法扩增编码CGRP-VY的基因片段,将该基因片段定向克隆到pET-32 a(+)载体上,构建pETC-GRP-VY重组质粒,... 详细信息

目的利用基因工程方法获得降钙素基因相关肽(CGRP)的衍生物(CGRP-VY),并初步鉴定其生物学活性。方法以pETC-GRP重组质粒为模板,用PCR方法扩增编码CGRP-VY的基因片段,将该基因片段定向克隆到pET-32 a(+)载体上,构建pETC-GRP-VY重组质粒,转化E-.coli JM109菌株,经扩增提取重组质粒,酶切和测序鉴定;将鉴定正确的重组质粒pETC-GRP-VY转化*** BL21 trxB(DE3)pLysS菌株,经IPTG诱导后,收集并裂解菌体,SDS-PAGE电泳检测蛋白的表达;通过粗提物扩张蟾蜍肠系膜微循环血管实验,初步鉴定CGRP-VY扩张血管的活性,并与重组CGRP进行活性比较。结果获得了含有CGRP成熟肽编码基因序列(111 bp)及缬氨酸和亮氨酸的密码子序列(6 bp)的重组质粒pETC-GRP-VY,符合预期结果;经诱导后在***中表达出21.2kD的融合蛋白,初步证明其粗提物具有扩张血管的功能。结论成功获得具有生物学活性的融合蛋白CGRP衍生物(CGRP-VY),为进一步进行其降血压功能研究奠定了实验基础。

关键词： CGRP CGRP-VY 克隆表达

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