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抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB和细胞因子表达的影响

南方医科大学学报 2011年第2期31卷 272-276页

作者：黄恩平姚君杨翠兰罗深秋南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 暨南大学第二临床医学院消化内科广东深圳518020

目的观察抗小鼠Toll样受体2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB(NF-κB)和细胞因子表达的影响。方法将雄性BALB/c小鼠随机分成4组:假手术组、模型组、TSP-2治疗组和正常兔IgG治疗组。采用盲肠结扎穿孔术制作... 详细信息

目的观察抗小鼠Toll样受体2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB(NF-κB)和细胞因子表达的影响。方法将雄性BALB/c小鼠随机分成4组:假手术组、模型组、TSP-2治疗组和正常兔IgG治疗组。采用盲肠结扎穿孔术制作脓毒症小鼠模型,分别于术后6、12和24 h取回肠组织,HE染色,免疫组织化学方法检测小鼠肠粘膜组织NF-κB的表达,实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α和IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测小鼠肠粘膜TNF-α和IL-6蛋白表达水平。结果模型组NF-κB表达水平较假手术组显著上升;TSP-2治疗组NF-κB表达水平较模型组显著下调;模型组各时间点TNF-α和IL-6水平均高于假手术组(P<0.05);TSP-2治疗组与模型组相比,TNF-α和IL-6水平明显降低(P<0.05),TNF-α和IL-6 mRNA水平也低于模型组(P<0.05)。正常兔IgG治疗组与模型组比较,结果无统计学意义(P>0.05)。结论抗体TSP-2能抑制脓毒症小鼠肠道NF-κB的活化,并下调致炎细胞因子TNF-α和IL-6水平,对脓毒血症引起的肠道炎症起到一定的控制作用,并延缓脓毒血症的病情发展。

关键词：脓毒症 Toll样受体2 TSP-2 核因子-κB 细胞因子肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-6

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莫特塞尼与EZH2抑制剂GSK126联合应用对肝癌Huh7细胞增殖和凋亡的影响及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2023年第4期49卷 896-904页

作者：梁媛媛赵颂胡静安妮魏验芦苏荣健锦州医科大学基础医学院细胞生物学教研室辽宁锦州121000 锦州医科大学附属第一医院风湿免疫科辽宁锦州121000

目的:探讨多激酶抑制剂莫特塞尼联合果蝇zeste基因增强子的人类同源物2 (EZH2)抑制剂GSK126对肝癌Huh7细胞体外增殖和凋亡的影响,初步阐明其相关机制。方法:不同浓度(0、1、5、10、20、40和60μmol·L^(-1))莫特塞尼处理Huh7细胞,采... 详细信息

目的:探讨多激酶抑制剂莫特塞尼联合果蝇zeste基因增强子的人类同源物2 (EZH2)抑制剂GSK126对肝癌Huh7细胞体外增殖和凋亡的影响,初步阐明其相关机制。方法:不同浓度(0、1、5、10、20、40和60μmol·L^(-1))莫特塞尼处理Huh7细胞,采用CCK-8法检测各组Huh7细胞增殖率,采用Western blotting法检测不同浓度(0、2.5、5.0、10.0和20.0μmol·L^(-1))莫特塞尼组Huh7细胞中EZH2和磷酸化EZH2 (p-EZH2)蛋白表达水平。莫特塞尼和GSK126联合作用于Huh7细胞,采用CCK-8法和克隆形成实验确定后续实验合适的药物浓度。Huh7细胞分为对照组、莫特塞尼(10μmol·L^(-1))组、GSK126 (5μmol·L^(-1))组和联合组(莫特塞尼+GSK126),采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)荧光染色法检测各组Huh7细胞增殖率,流式细胞术检测各组Huh7细胞凋亡率,Western blotting法检测各组Huh7细胞中细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化ERK (p-ERK)、蛋白激酶B (AKT)和磷酸化AKT (p-AKT)蛋白表达水平。结果:CCK-8法检测,不同浓度莫特塞尼组Huh7细胞存活率随着药物浓度升高逐渐降低,与0μmol·L^(-1)莫特塞尼组比较,20、 40和60μmol·L^(-1)莫特塞尼组Huh7细胞增殖率明显降低(P<0.05或P<0.01);Western blotting法检测,与0μmol·L^(-1)莫特塞尼组比较,5.0、10.0和20.0μmol·L^(-1)莫特塞尼组Huh7细胞中EZH2和p-EZH2蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。通过CCK-8法和克隆形成实验确定10μmol·L^(-1)莫特塞尼和5μmol·L^(-1) GSK126用于后续实验。与对照组比较,莫特塞尼组、GSK126组和联合组Huh7细胞增殖率明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01);与莫特塞尼组和GSK126组比较,联合组Huh7细胞增殖率明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。与对照组、莫特塞尼组和GSK126组比较,联合组Huh7细胞中p-AKT和p-ERK蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:单独应用莫特塞尼抑制肝癌Huh7细胞增殖和促进凋亡效果不明显,可能与EZH2升高导致细胞耐药有关。莫特塞尼与GSK126联合应用可通过抑制AKT和ERK信号通路,增强莫特塞尼对肝癌Huh7细胞的增殖抑制和促凋亡作用。

关键词：莫特塞尼肝肿瘤细胞增殖细胞凋亡果蝇zeste基因增强子的人类同源物2 GSK126

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血小板源性生长因子及其受体在类风湿性关节炎大鼠肺组织分布及对血气影响

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中国医科大学学报 2001年第6期30卷 414-417页

作者：杨宇陈立李舒帆刘倩康健中国医科大学第一临床学院风湿免疫科沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室中国医科大学基础医学院生物化学教研室中国医科大学第一临床学院呼吸内科

目的 :观察血小板源性生长因子 (platelet derivedgrowthfactor,PDGF)及其受体在类风湿性关节炎的大鼠模型肺组织分布及对血气影响。方法 :Wistar大鼠用福氏完全佐剂致类风湿关节炎后 ,选择 2 4只分别在不同时期取其肺脏进行免疫组化染... 详细信息

目的 :观察血小板源性生长因子 (platelet derivedgrowthfactor,PDGF)及其受体在类风湿性关节炎的大鼠模型肺组织分布及对血气影响。方法 :Wistar大鼠用福氏完全佐剂致类风湿关节炎后 ,选择 2 4只分别在不同时期取其肺脏进行免疫组化染色检测 ,观察PDGF配体及受体分布情况。同时采大鼠腹主动脉血用瑞士ALVOMINI5血气分析仪检测。结果 :免疫组化染色最强的细胞为增厚的肺间质细胞和肺血管周围成纤维细胞。PDGF配体及受体不仅在血管平滑肌细胞中有表达 ,而且在内皮细胞巨噬细胞中均有表达。PDGF阳性细胞数与血氧分压 pH值呈负相关 ,与二氧化碳分压呈正相关。结论 :PDGF通过自分泌和旁分泌方式刺激风湿肺内各种细胞的增殖变化。

关键词：血小板源性生长因子风湿病肺纤维化血气

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2类多巴胺受体对心肌缺血后处理保护作用的影响及机制

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中国应用生理学杂志 2014年第4期30卷 301-305页

作者：李鸿珠高君郝晓敏张丽敏陈俊亭哈尔滨医科大学基础医学院病理生理学教研室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨市第一医院骨三科黑龙江哈尔滨150010 哈尔滨医科大学基础医学院机能实验中心黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学附属第四医学院麻醉科黑龙江哈尔滨150001

目的:观察2类多巴胺受体(DR2)在心肌缺血后处理保护中的作用,并探讨其机制。方法:复制原代培养乳鼠心肌细胞缺血后处理模型,细胞随机分为正常组(Control)、缺血/再灌注组(I/R)、缺血后处理组(PC)、缺血后处理+DR2激动剂组(PC+Bro)、缺... 详细信息

目的:观察2类多巴胺受体(DR2)在心肌缺血后处理保护中的作用,并探讨其机制。方法:复制原代培养乳鼠心肌细胞缺血后处理模型,细胞随机分为正常组(Control)、缺血/再灌注组(I/R)、缺血后处理组(PC)、缺血后处理+DR2激动剂组(PC+Bro)、缺血后处理+DR2抑制剂组(PC+Hal)、缺血后处理+DR2抑制剂+激动剂组(PC+Hal+Bro)。比色法检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;透射电镜观察细胞超微结构改变;流式细胞仪检测细胞凋亡变化;Western blot方法检测DR2蛋白表达、p-p38和p-JNK的活性。结果:与正常组相比,I/R能够增加DR2蛋白的表达,升高LDH活性和MDA含量,降低SOD活性,加重细胞损伤和细胞凋亡,上调p-p38和p-JNK的活性;与I/R组比较,PC进一步增加DR2蛋白的表达,降低LDH活性和MDA含量,增加SOD活性,减轻细胞损伤和细胞凋亡,下调p-p38和p-JNK的活性,Bro增强了PC的心肌保护作用,Hal则可取消Bro的这种作用。结论:DR2激活通过下调p-p38和p-JNK的活性参与缺血后处理对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。

关键词： 2类多巴胺受体缺血后处理乳鼠心肌细胞细胞凋亡

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核糖核酸酶抑制因子与血管生成素的相互作用

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第三军医大学学报 2014年第14期36卷 1454-1459页

作者：李林舒静刘玉林陈俊霞重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室、分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探讨核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)与血管生成素(angiogenin,ANG)的相互作用。方法利用免疫荧光标记结合共聚焦显微镜技术来确立RI与ANG蛋白在细胞内的共定位。利用激光共聚焦显微镜的荧光共振能量转移(fluorescen... 详细信息

目的探讨核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)与血管生成素(angiogenin,ANG)的相互作用。方法利用免疫荧光标记结合共聚焦显微镜技术来确立RI与ANG蛋白在细胞内的共定位。利用激光共聚焦显微镜的荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术验证RI和ANG蛋白的相互作用。构建原核表达质粒pGEX-4T-RI,转化*** BL21大肠杆菌(DE3)表达,并经谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B(glutathione sepharose4B)纯化GST-RI蛋白,考马斯亮蓝染色和免疫印迹鉴定表达情况,利用GST蛋白沉降技术检测RI与ANG蛋白在体外的结合作用。应用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)实验检测两蛋白在真核细胞内的结合作用。结果细胞内免疫荧光标记的RI和ANG蛋白在激光共聚焦显微镜观察下存在共定位现象。FRET结果显示RI与ANG在细胞内存在相互作用。另外酶切和测序结果证明原核表达质粒pGEX-4T-RI构建成功,GST-RI蛋白诱导表达正确,GST蛋白沉降结果显示RI和ANG蛋白在原核细胞反应体系中存在相互作用。结论 RI和ANG蛋白在原核细胞反应体系和真核细胞中均存在相互结合作用。

关键词：核糖核酸酶抑制因子血管生成素相互作用

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肝脏疾病微RNA胞间传递研究的现状与思考

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中国生物化学与分子生物学报 2015年第7期31卷 679-683页

作者：甄灼高旭马宁哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨医科大学北方转化医学研究与合作中心黑龙江省医学科学院基础医学研究所哈尔滨150081

微RNA(microRNAs)是一类通过调控基因表达参与机体生理、病理过程的非编码RNA.近来,研究证实其可在肝脏不同类型细胞间进行传递,以调控靶细胞的功能,从而参与肝脏疾病的发生发展.但其在不同类型肝脏细胞间传递的直接实验证据——细胞共... 详细信息

微RNA(microRNAs)是一类通过调控基因表达参与机体生理、病理过程的非编码RNA.近来,研究证实其可在肝脏不同类型细胞间进行传递,以调控靶细胞的功能,从而参与肝脏疾病的发生发展.但其在不同类型肝脏细胞间传递的直接实验证据——细胞共培养实验仍需考虑:不同类型细胞在共培养时的数量比例及miRNAs在不同细胞间传递的方向.miRNAs的胞间传递作为肝脏疾病病理机制的重要理论创新,在研究过程中仍需要考虑临床实践.本文对近期关于微RNA胞间传递与肝脏疾病的研究进行综述,以期促进对相关研究的思考.

关键词：微RNAs 肝脏疾病胞间传递转化医学

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支配大鼠上下颌第一磨牙的感觉神经元在三叉神经节中的定位

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北京医科大学学报 1991年第6期23卷 441-444,I026,I027页

作者：王莉梅王满恩刘鼎新北京医科大学口腔医学院牙体牙髓科北京医科大学基础医学院细胞生物学教研室

本文用辣根过氧化物酶(四甲基联苯胺显色)法和~3H-2-脱氧葡萄糖放射自显影研究了支配大鼠上、下颌第一磨牙的感觉神经元在三叉神经节中的分布形式。结果表明,支配上、下颌第一磨牙的神经元在三叉神经节内的分布存在着明显的交错与重叠... 详细信息

本文用辣根过氧化物酶(四甲基联苯胺显色)法和~3H-2-脱氧葡萄糖放射自显影研究了支配大鼠上、下颌第一磨牙的感觉神经元在三叉神经节中的分布形式。结果表明,支配上、下颌第一磨牙的神经元在三叉神经节内的分布存在着明显的交错与重叠。这种分布形式为三叉神经节细胞具有整合不同牙齿感觉的功能提供了可能性。辣根过氧化物酶实验的结果还表明,大鼠磨牙不具有跨中线神经支配。

关键词：三叉神经节磨牙感觉神经元大鼠

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癌-睾丸抗原23诱导上皮-间充质转化和细胞骨架重塑促进肝细胞癌细胞迁移和侵袭

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基因组学与应用生物学 2023年第10期42卷 1127-1136页

作者：周振鲁徐鹏姚家丽吴圣明黄秒唐文杨哲胡启平广西医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室南宁530021

本研究旨在探讨过表达癌-睾丸抗原23(cancer-testis antigen 23,CT23)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。基于在线数据库(TCGA、 GEO、 HPA)分析CT23在HCC组织和正常肝组织中的表达;建立稳定过表达CT23的人肝癌细胞Huh7,通过划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力,并观察细胞形态;采用基因集富集分析(gene set enrichment analysis, GSEA)探究CT23影响的通路及机制;利用免疫荧光检测纤维状肌动蛋白(filamentous actin, F-actin)分布;利用Western blot检测EMT标记蛋白表达。结果显示,CT23在HCC组织中高表达,并且CT23高表达在EMT和细胞骨架重塑过程显著富集。过表达CT23能促进细胞迁移和侵袭,呈现EMT形态学改变,EMT标志蛋白表达改变,如E-cadherin表达下调、 N-cadherin和Vimentin表达上调,以及F-actin组装加强。上述结果表明过表达CT23促进HCC细胞的迁移和侵袭,其机制可能与EMT和细胞骨架重塑相关。

关键词：肝细胞癌癌-睾丸抗原23 迁移侵袭上皮-间充质转化细胞骨架

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人肺癌细胞中去甲长春新碱和泰索帝药物敏感性基因的比较分析

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中华肿瘤杂志 2006年第4期28卷 253-256页

作者：蔡莉李建华辛彦牛林琳臧家兰隋广杰哈尔滨医科大学附属肿瘤医院内科 150040 中国医科大学基础医学院病理教研室中国医科大学第一附属医院肿瘤研究所第四研究室

目的筛选人肺癌细胞株中与去甲长春新碱(NVB)、泰索帝(Doc)药物敏感性相关的基因。方法采用MTT比色分析法,测定4株小细胞肺癌(SCLC)细胞株和6株非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株对NVB、Doc的药物敏感性;应用cDNA macroarray技术检测10株肺癌... 详细信息

目的筛选人肺癌细胞株中与去甲长春新碱(NVB)、泰索帝(Doc)药物敏感性相关的基因。方法采用MTT比色分析法,测定4株小细胞肺癌(SCLC)细胞株和6株非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株对NVB、Doc的药物敏感性;应用cDNA macroarray技术检测10株肺癌细胞株中1291个药物敏感性关联基因的表达状态,聚类分析二者间的相关性。结果(1)NVB对10株肺癌细胞株的作用效果明显优于Doc。(2)10株肺癌细胞株中,与Doc呈正相关的药物敏感性关联基因多于NVB,而与NVB呈负相关的多于Doc;而在6株NSCLC中,与Doc和NVB呈正相关、负相关一致的基因较多。(3)10株肺癌细胞株中,有51个基因与Doc、NVB药物敏感性相关联,占全部候选基因的3.95%(51/1291)。与NVB药物敏感性呈显著相关的基因27个,其中负相关24个,正相关3个;与Doc药物敏感性关联的基因24个,其中负相关13个,正相关11个。6株NSCLC株中,有67个基因与药物敏感性相关,占全部实验基因的5.19%(67/1291)。与NVB药物敏感性呈显著相关的基因29个,其中负相关25个,正相关4个;与Doc药物敏感性关联的基因38个,其中负相关34个,正相关4个。(4)Rab1、Rab3、Rho B、Rho C、Rac1、Rac2、Gho GDIβ、CD44、Integrinα5、Integrinα6、Integrinβ5、Vinculin等细胞骨架关联基因在SCLC、NSCLC中的表达存在差异。结论SCLC和NSCLC细胞株中,NVB、Doc药物敏感性相关联基因表达存在明显差异。

关键词：人肺癌细胞去甲长春新碱泰索帝药物敏感性基因

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L-精氨酸对人肝细胞中内源凝血因子Ⅷ表达的激活作用

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中国生物制品学杂志 2012年第10期25卷 1303-1306页

作者：朱重阳李鑫温泉张军重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探讨L-精氨酸对人肝细胞LO2中内源凝血因子Ⅷ(Coagulation factorⅧ,FⅧ)表达的激活作用。方法将LO2细胞分为试验组和对照组,试验组加入L-精氨酸(终浓度为10 mmol/L)分别培养24、36、48和60 h,对照组用等体积的灭菌水取代L-精氨酸... 详细信息

目的探讨L-精氨酸对人肝细胞LO2中内源凝血因子Ⅷ(Coagulation factorⅧ,FⅧ)表达的激活作用。方法将LO2细胞分为试验组和对照组,试验组加入L-精氨酸(终浓度为10 mmol/L)分别培养24、36、48和60 h,对照组用等体积的灭菌水取代L-精氨酸培养。采用RT-PCR法检测LO2细胞中人FⅧ基因mRNA的转录水平并测序鉴定,一期法检测细胞培养上清液中人FⅧ的促凝活性(FⅧ∶C),Western blot检测24、48 h时相点LO2细胞中人FⅧ蛋白的表达,免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜观察L-精氨酸作用48 h后LO2细胞中人FⅧ的表达。结果加入L-精氨酸培养36、48、60 h后,LO2细胞中有人FⅧ基因mRNA的转录,而对照组未出现人FⅧ基因mRNA的转录;各时相点两组细胞培养上清液中人FⅧ∶C的水平差异均无统计学意义(P>0.05);Western blot及激光共聚焦均观察到加L-精氨酸培养48 h后LO2细胞中出现人FⅧ的表达,而对照组细胞中均无人FⅧ的表达。结论 L-精氨酸可激活人正常肝细胞中内源FⅧ的表达。

关键词： L-精氨酸肝细胞凝血因子Ⅷ 转录表达

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