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中国医科大学学报 2008年第4期37卷 534-536页

作者：李长有解克非葛瑞宋今丹中国医科大学附属第一医院骨科沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室沈阳110001

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在类风湿关节炎(RA)病人成骨细胞中的表达及作用机制。方法切取RA病人和外伤对照组病人股骨粗隆部松质骨块,采用免疫组织化学染色方法检测VEGF及其受体Flt-1和Flk-1在骨小梁成骨细胞中的蛋白表达。结果R... 详细信息

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在类风湿关节炎(RA)病人成骨细胞中的表达及作用机制。方法切取RA病人和外伤对照组病人股骨粗隆部松质骨块,采用免疫组织化学染色方法检测VEGF及其受体Flt-1和Flk-1在骨小梁成骨细胞中的蛋白表达。结果RA病人骨质疏松明显,骨小梁成骨细胞数目减少。RA组和对照组骨小梁成骨细胞同时表达VEGF及其受体Flt-1和Flk-1,但RA组表达明显减弱。结论血管源性因子VEGF以自分泌作用方式调节生理和病理状态下成人成骨细胞的表达,RA病人骨质疏松与VEGF作用减弱密切相关。

关键词：血管内皮生长因子类风湿关节炎骨小梁成骨细胞骨质疏松

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出生前后慢性铝暴露对年轻大鼠海马神经颗粒素的影响

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中华行为医学与脑科学杂志 2009年第3期18卷 226-228页

作者：南娟杜艳霞银杰赵永张占雀刘鹏邢伟蔡葵蔡原时利德中国医科大学基础医学院生理学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院毒理学教研室沈阳110001 哈尔滨医科大学人文社会科学学院法学教研室山西省芮城县人民医院

目的研究出生前后不同浓度慢性铝暴露对年轻大鼠海马神经颗粒素（Ng）的影响，进一步探讨铝损害学习与记忆的突触机制。方法对照组、0．2％-Al组和0．4％-Al组大鼠各15只从孕期始分别自由饮用蒸馏水、Al^3＋浓度为15mmol·L^-1和30m... 详细信息

目的研究出生前后不同浓度慢性铝暴露对年轻大鼠海马神经颗粒素（Ng）的影响，进一步探讨铝损害学习与记忆的突触机制。方法对照组、0．2％-Al组和0．4％-Al组大鼠各15只从孕期始分别自由饮用蒸馏水、Al^3＋浓度为15mmol·L^-1和30mmol·L^-1的A1Cl3水溶液制备出生前后慢性铝暴露模型；分别取学习和记忆的行为学测试后各组模型鼠9只，采用Western blot法检测海马细胞内Ng含量；组间资料统计用单因素方差分析，多重比较用LSD-t检验。结果对照组大鼠海马№目标条带的平均密度值为（96．99±6．52）；0．2％-Al暴露组为（83．59±7．17）；0．4％-Al暴露组为（62．44±14．26）。与对照组相比，0．2％-Al组海马Ng的表达明显降低（P=0．034），0．4％-Al组海马Ng表达显著性降低（P〈0．01），且铝暴露组间亦差异有显著性（P=0．002）。结论出生前后慢性铝暴露使№含量降低是其导致学习与记忆功能下降的突触机制之一。

关键词：铝暴露神经颗粒素出生前后

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S100A4在类风湿关节炎滑膜中的表达及其对成纤维样滑膜细胞分泌VEGF促进血管生成的影响

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中国病理生理杂志 2017年第6期33卷 1119-1124页

作者：查丁胜吴昊林宏生姚平查振刚贾春宏盛超暨南大学附属第一医院骨科广东广州510630 暨南大学基础医学院生理教研室广东广州510630 南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室南方医院妇产科广东广州510515

目的:研究S100钙结合蛋白A4(S100A4)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者和正常人膝关节滑膜中的表达水平,以及S100A4对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RAFLSs)促进血管生成的影响。方法:滑膜分别取自RA患者(RA组)及正常人(control组)膝关节,免疫组化法观察S100A4和VEGF蛋白在2组滑膜中的表达情况。RAFLSs分离自活动性RA滑膜;ELISA法检测S100A4刺激RAFLSs分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的作用;用rh S100A4孵育RAFLSs的条件培养基作用于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),检测S100A4体外血管生成能力。结果:S100A4及VEGF蛋白在RA组滑膜中高表达(P<0.05),rh S100A4显著刺激RAFLSs分泌VEGF,呈时间和剂量依赖性(P<0.05);rh S100A4孵育RAFLSs的条件培养基可促进HUVECs在体外形成管腔。结论:S100A4蛋白在RA患者膝关节滑膜中高表达,S100A4可通过促进RAFLSs分泌VEGF来刺激滑膜血管生成。这些结果提示S100A4可作为治疗RA的潜在靶点。

关键词：类风湿关节炎 S100钙结合蛋白A4 成纤维样滑膜细胞血管生成

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微小RNA-146a在自身免疫性疾病中的研究进展

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国际免疫学杂志 2022年第1期45卷 40-45页

作者：白圆圆郝玥李呼伦哈尔滨医科大学基础医学院神经生物教研室哈尔滨150086

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类大小在21~25个核苷酸的单链内源性非编码RNA,通过转录后的抑制广泛参与不同细胞生物学过程。MiR-146a是miRNA家族中成员之一,参与细胞增殖、分化、凋亡等生物学过程,同时也在恶性肿瘤和炎症疾病的进展中... 详细信息

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类大小在21~25个核苷酸的单链内源性非编码RNA,通过转录后的抑制广泛参与不同细胞生物学过程。MiR-146a是miRNA家族中成员之一,参与细胞增殖、分化、凋亡等生物学过程,同时也在恶性肿瘤和炎症疾病的进展中发挥调节作用。进一步研究发现,miR-146a在不同类型的免疫细胞及自身免疫性疾病(autoimmune disease,AID)中存在显著的表达差异,上调或下调miR-146a的表达量对于免疫细胞功能有着极为重要的影响,提示miR-146a很可能成为AID治疗的潜在靶点。文章就miR-146a在免疫细胞中的表达、调控及相关机制进行总结和概述,以期为探索AID的相关诊治提供思路。

关键词：自身免疫性疾病微小RNA miR-146a

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miR-451对肺癌细胞的增殖抑制及其靶基因的初步鉴定

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第三军医大学学报 2015年第18期37卷 1823-1829页

作者：武天慧彭睿彭惠民罗勇军姚莉孙艳尹频文利张政重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物信息学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院实验教学中心重庆400016 第三军医大学高原军事医学系军事医学地理学教研室重庆400038

目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA)对非小细胞肺癌细胞增殖的作用及调控机制。方法 Lipofectamine 2000转染已构建成功的miR-451真核表达载体至非小细胞肺癌细胞A549,通过MTT检测肺癌细胞增殖状况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况... 详细信息

目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA)对非小细胞肺癌细胞增殖的作用及调控机制。方法 Lipofectamine 2000转染已构建成功的miR-451真核表达载体至非小细胞肺癌细胞A549,通过MTT检测肺癌细胞增殖状况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,运用生物信息学技术对miR-451预测靶基因进行GO分析和KEGG信号途径分析,对炎症相关的预测靶基因PSMB8进行进一步的验证。构建含有PSMB8 3'UTR野生型和突变型质粒,通过双荧光素酶检测A549细胞PSMB8表达水平,Western blot检测PSMB8和NOS2的表达情况。结果 MTT结果显示过表达miR-451能显著抑制A549细胞增殖。流式细胞术检测发现miR-451组细胞阻滞在G2期,而细胞凋亡未见明显差异。GO分析发现miR-451预测靶基因涉及PSMB8、CAB39、YWHAZ等17个基因,PSMB8主要参与细胞代谢调控,细胞周期与细胞增殖;KEGG信号途径分析结果显示靶基因主要涉及microRNA在细胞周期、PI3KAKT、m TOR等信号通路。17个miR-451预测靶基因进行生物信息学研究发现PSMB8含有miR-451的结合位点,且在多个物种中呈高度保守。荧光素酶活性检测发现,过表达miR-451可抑制PSMB8荧光素酶活性表达。Western blot结果发现过表达miR-451的A549细胞PSMB8呈下调,而低表达miR-451的正常支气管上皮16HEB细胞PSMB8呈上调。Western blot和细胞荧光免疫化学检测发现炎症因子NOS2在肺癌中表达也降低。结论 miR-451可能通过靶向炎症相关基因PSMB8/NOS2调控非小细胞肺癌细胞增殖,并参与肺癌的发生与发展。

关键词：肺癌微小RNA 细胞增殖

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葡萄糖调节蛋白78对肝癌细胞放射敏感性的调控作用及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2021年第4期47卷 888-895页

作者：杨洁贺武斌安妮孔雯聪苏荣健王学哲锦州医科大学附属第一医院检验科辽宁锦州121000 锦州医科大学附属第一医院外科学实验室辽宁锦州121000 锦州医科大学基础医学院细胞生物学教研室辽宁锦州121000 锦州医科大学基础医学院病理学教研室辽宁锦州121000

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对肝癌细胞放射敏感性的影响,初步阐明其分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测肝癌SMMC-7721、HepG2、PLC、Huh7和QGY-7703细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平,筛选GR... 详细信息

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对肝癌细胞放射敏感性的影响,初步阐明其分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测肝癌SMMC-7721、HepG2、PLC、Huh7和QGY-7703细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平,筛选GRP78高表达和低表达的肝癌细胞作为研究对象。采用RNA干扰技术在GRP78高表达的人肝癌SMMC-7721细胞中靶向沉默GRP78,命名为siGRP78-SMMC-7721(siGRP78组),以siNC-SMMC-7721为对照组(siNC组);采用基因重组技术在GRP78低表达的人肝癌HepG2细胞中过表达GRP78,命名为Flag-GRP78-HepG2(Flag-GRP78组),以空载体3×Flag-HepG2为对照组(3×Flag组)。各组细胞分别给予0、2、4、6、8和10 Gy剂量X射线照射后,采用MTT法检测肝癌细胞存活率,5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)荧光染色法检测肝癌细胞增殖率,Western blotting法检测肝癌细胞中磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路中磷酸化PI3K(p-PI3K)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平。结果:RT-qPCR法和Western blotting法检测,SMMC-7721细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平最高,HepG2细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平最低,选取SMMC-7721和HepG2细胞作为研究对象。MTT法检测,随着放射剂量的增加,肝癌细胞存活率逐渐降低;与siNC组比较,6 Gy以上剂量X射线照射后,siGRP78组细胞存活率明显降低(P<0.01);与3×Flag组比较,4 Gy以上剂量X射线照射后,Flag-GRP78组细胞存活率明显升高(P<0.05或P<0.01)。EdU荧光染色法检测,与siNC组比较,siGRP78组细胞增殖率明显降低(P<0.05);与3×Flag组比较,Flag-GRP78组细胞增殖率明显升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与siNC组比较,siGRP78组细胞中p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与3×Flag组比较,Flag-GRP78组细胞中p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:高表达水平的GRP78可降低肝癌细胞放射敏感性,其作用机制可能与GRP78激活PI3K/Akt信号通路有关。

关键词：葡萄糖调节蛋白78 肝肿瘤放射敏感性细胞凋亡磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B

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NF-κB信号与mTOR信号通路之间的信息交谈——串流

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生命的化学 2010年第1期30卷 81-85页

作者：谭颖李文静徐文婷白晓春南方医科大学第一临床医学院广州510515 南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广州510515

丝/苏氨酸蛋白质激酶哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是整合细胞内外各种信号、调节蛋白质翻译、细胞生长和增殖等重要生命活动的中心信号分子。核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是高度保守的、调节... 详细信息

丝/苏氨酸蛋白质激酶哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是整合细胞内外各种信号、调节蛋白质翻译、细胞生长和增殖等重要生命活动的中心信号分子。核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是高度保守的、调节细胞生长、凋亡、血管生成的关键转录因子。mTOR信号与NF-κB信号通路可通过多种途径进行信息交谈——串流(cross-talk),在细胞生长调控及肿瘤发生与进展中有重要意义。本文就近年来有关两条通路之间串流的研究进展作一综述。

关键词： mTOR NF—κB 信号转导串流(cross—talk)

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miR-451调控早期糖尿病肾病小鼠肾小球肥大的机制

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重庆医科大学学报 2014年第11期39卷 1584-1589页

作者：彭睿周吉李天驹孙艳尹频彭惠民张政重庆医科大学基础医学院生物信息学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学第一附属医院感染科重庆400016 重庆医科大学实验教学中心重庆400331

目的:观察mi R-451对早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)db/db小鼠肾脏形态学影响,探讨mi R-451在DN发病机制中的作用。方法:采用24只7周龄雄性db/db小鼠和8只正常对照db/m小鼠依次分为未处理组、空质粒组、mi R-451组及对照组。... 详细信息

目的:观察mi R-451对早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)db/db小鼠肾脏形态学影响,探讨mi R-451在DN发病机制中的作用。方法:采用24只7周龄雄性db/db小鼠和8只正常对照db/m小鼠依次分为未处理组、空质粒组、mi R-451组及对照组。腹腔注射法进行质粒注射处理2周后,光镜下观察肾小球形态学变化,实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测肾脏组织mi R-451的表达水平,Western blot和激光共聚焦检测肾脏组织中mi R-451的靶基因酪氨酸-3单氧化酶/色氨酸单氧化酶活化蛋白(tyrosine3-monooxy-genase/tryptophan 5-monooxygenase activation protein,Ywhaz)及其相关的丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径中p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)及其上游激酶MKK3(MAPK kinase3)的表达水平。结果:7周龄db/db小鼠未处理组相比对照组出现高血糖且尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate,UAE)增加,提示进入早期DN阶段,给予30 mg/(kg·d)质粒注射实验2周。光镜观察和肾小球直径测量发现,mi R-451处理组肾小球形态减小(P=0.000)。Real-time PCR检测显示mi R-451组小鼠肾脏组织中mi R-451的表达水平增高1.79倍(P=0.002),Western blot和激光共聚焦结果显示,mi R-451组较未处理组和空质粒组肾脏组织Ywhaz的表达受到下调,同时p38MAPK及上游激酶MKK3蛋白表达水平减少(P均=0.000)。结论:mi R-451可能通过直接靶向Ywhaz基因,调控MAPK途径中关键蛋白p38MAPK、MKK3的表达,从而抑制肾小球肥大,在DN发病机制中可能起着重要的作用。

关键词：糖尿病肾病微小RNA 酪氨酸-3单氧化酶/色氨酸单氧化酶活化蛋白 p38丝裂原激活的蛋白激酶

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活性氧类与mTOR信号通路

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生命的化学 2010年第6期30卷 866-870页

作者：李文静徐文婷谭颖白晓春南方医科大学第一临床医学院广州510515 南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广州510515

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是整合细胞内外各种信号,调节蛋白质翻译与细胞生长增殖等多种生理活动的中心信号分子。活性氧类(reactive oxygen species,ROS)作为第二信使分子,可介导多种细胞信号通路... 详细信息

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是整合细胞内外各种信号,调节蛋白质翻译与细胞生长增殖等多种生理活动的中心信号分子。活性氧类(reactive oxygen species,ROS)作为第二信使分子,可介导多种细胞信号通路并发挥广泛的生理效应。近年的研究发现ROS可通过一定的途径激活或抑制mTOR通路。而作为反馈调节,mTOR通路活性的轻度上调可促进细胞抗氧化物质的生成,而过度激活则会促进ROS生成,并增加细胞对氧化应激的敏感性,形成正反馈。本文将ROS与mTOR之间相互调节与相互作用的特点及机制的研究进展作一综述。

关键词：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白活性氧类氧化应激

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hβ-arrestin1重组蛋白不同亚型筛选及互作鉴定

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中国医科大学学报 2012年第1期41卷 24-27页

作者：刘彩红王利利冯艳玲朱亚勤中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室细胞病理生物学研究室沈阳110001

目的构建GST/β-arrestin1融合蛋白表达载体,筛选其不同亚型重组子,并诱导表达、纯化蛋白,初步进行蛋白亚型互作比较,为进一步功能研究提供实验基础。方法提取人源细胞的mRNA,反转录为cDNA。用PCR法扩增hβ-arrestin1全长编码基因,通过S... 详细信息

目的构建GST/β-arrestin1融合蛋白表达载体,筛选其不同亚型重组子,并诱导表达、纯化蛋白,初步进行蛋白亚型互作比较,为进一步功能研究提供实验基础。方法提取人源细胞的mRNA,反转录为cDNA。用PCR法扩增hβ-arrestin1全长编码基因,通过SalI和NotI酶切位点将hβ-arrestin1全长定向插入pGEX-5X-1中,构建原核表达载体pGEX-5X-1-β-arrestin1,并通过BglⅡ单酶切筛选A、B亚型,然后将重组质粒转入*** BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,用谷胱甘肽-琼脂糖珠亲和纯化表达的GST/β-arrestin1A、B,SDS-PAGE鉴定,互作实验比较亚型的结合能力。结果酶切及测序结果证明,成功构建了β-arrestin1A、B原核表达载体,并通过SDS-PAGE证实:经IPTG诱导表达及亲和纯化,从转化重组质粒的BL21菌株中获得了融合蛋白GST/β-arrestin1A、B亚型,通过GST Pulldown初步比较了重组β-arrestin1A、B蛋白亚型的结合能力。结论成功构建pGEX-5X-1-β-arrestin1A、B原核表达载体并确定了融合蛋白的诱导表达及纯化方法,且互作实验显示β-arrestin1A有较强的结合能力,为进一步研究β-arrestin1的生物学功能奠定了基础。

关键词： hβ—arrestin1 克隆重组亚型表达蛋白互作

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