背景与目的:磷脂酶C-γ1(phospholipase C gamma1,PLC-γ1)是跨膜信号转导中关键和重要的一个信号中介,是细胞增殖与细胞凋亡调控的一个重要分子,最近研究发现它在大肠癌等许多肿瘤组织中呈过表达状态,与肿瘤的发生、发展有密切关系。...
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背景与目的:磷脂酶C-γ1(phospholipase C gamma1,PLC-γ1)是跨膜信号转导中关键和重要的一个信号中介,是细胞增殖与细胞凋亡调控的一个重要分子,最近研究发现它在大肠癌等许多肿瘤组织中呈过表达状态,与肿瘤的发生、发展有密切关系。本研究主要探讨阻断PLC-γ1信号通路后对大肠癌LoVo细胞增殖、凋亡的影响,及其上述影响的信号机制。方法:以人大肠癌LoVo细胞作为研究模型,利用PLC-γ1特异的化学阻断剂U73122处理以阻断LoVo细胞中PLC-γ1信号通路,通过绘制细胞生长曲线、PI单染的流式细胞仪检测细胞周期而评估对其细胞增殖的影响,通过细胞形态观察及DNA片段琼脂糖凝胶电泳评估是否启动细胞凋亡,同时检测阻断PLC-γ1信号通路后HSP70、Caspase-3表达水平的变化来探讨可能的信号机制。结果:阻断PLC-γ1信号通路明显减缓大肠癌LoVo细胞的生长,其细胞增殖抑制率随药物作用时间和浓度的增加逐渐增高,10μmol/LU73122作用24、48h后其抑制效果可分别达到35%和45%,使LoVo细胞G1期细胞比例增加,而S期细胞比例降低,延缓细胞从G1期向S期的过渡,即抑制细胞周期的进行,阻断PLC-γ1信号通路后LoVo细胞未能出现凋亡特征性的形态学改变,DNA琼脂糖凝胶电泳未能检测到凋亡特征的梯状带的出现,不能引起Caspase-3的激活,同时PLC-γ1信号通路的阻断可上调HSP70的表达水平,HSP70的分子伴侣作用可能是其抑制大肠癌细胞周期进行的机制。结论:阻断磷脂酶C-γ1信号通路能够抑制大肠癌LoVo细胞的过度增殖、抑制其细胞周期的进行,其机制可能是通过上调热休克蛋白70的表达水平而实现,但不能启动LoVo细胞凋亡,磷脂酶C-γ1不是调控LoVo细胞凋亡的关键信号分子。
目的:探讨扭转原肠胚形成同系物1基因(twisted gastrulation protein homolog 1,TWSG1)对胃癌MGC-803细胞增殖及凋亡的影响。方法:设计3条TWSG1基因相关的siRNA,将对数生长期MGC-803细胞分为空白对照组、阴性对照组、siRNA1干扰组、siR...
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目的:探讨扭转原肠胚形成同系物1基因(twisted gastrulation protein homolog 1,TWSG1)对胃癌MGC-803细胞增殖及凋亡的影响。方法:设计3条TWSG1基因相关的siRNA,将对数生长期MGC-803细胞分为空白对照组、阴性对照组、siRNA1干扰组、siRNA2干扰组和siRNA3干扰组,待细胞汇合率达70%～80%时分别转染空载体、连接siRNA1、siRNA2和siRNA3的载体。采用q PCR和Western blotting检测各组细胞TWSG1 m RNA和TWSG1蛋白的表达水平,筛选干扰效率最高的稳定细胞株。用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。结果:各转染组细胞中siRNA1干扰效率最高。与空白对照组和阴性对照组相比,siRNA干扰组细胞TWSG1表达下调(P<0.05),其细胞增殖显著增加(P<0.05),凋亡显著减少(P<0.05)。结论:siRNA干扰MGC-803细胞中TWSG1基因的表达后,可促进细胞增殖、抑制细胞凋亡。
目的:探讨颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)缺陷型小鼠与野生(wild type,WT)型小鼠在咪喹莫特(Imiquimod,IMQ)诱导皮肤炎症模型中炎症及自噬的差异性。方法:运用IMQ涂抹WT(44只)和PGRN-/-(16只)小鼠背部皮肤构建银屑样皮肤炎症模型,并通过蛋白质印迹(Western blot)、定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色等方法检测小鼠组织结构、炎性因子[白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、一氧化氮合酶2(nitric oxide synthase 2,NOS2)、环氧化酶2(cyclo-oxygen-ase 2,COX2)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)]、凋亡相关蛋白[半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase 3)]以及自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、泛素结合蛋白(ubiquitin binding protein,P62)、自噬相关蛋白5(autophagy related protein 5,ATG5)、自噬相关蛋白7(autophagy related protein 7,ATG7)、自噬相关蛋白5和12的复合物(complex of autophagy related protein 5 and 12,ATG5-ATG12)]的变化。结果:成功建立了小鼠皮肤炎症模型,在WT小鼠模型中观察到上皮组织明显增厚,炎性细胞浸润增多,血管生成增加,炎性因子IL-6、IL-10、TNF-α、NOS2、COX2在第6天表达最高(P<0.05),自噬随着时间的增加而增加;此外,第6天脾脏比重明显增加(P<0.05),炎性因子IL-6、IL-10、TNF-α、NOS2、COX2、IL-1β表达最高(P<0.05)。与WT模型小鼠相比,PGRN-/-模型小鼠背部皮肤加厚更加明显,炎性因子IL-6、NOS2表达更高(P<0.05),组织自噬与凋亡水平明显降低(P<0.05)。结论:WT小鼠和PGRN-/-小鼠都能够在第6天成功建立小鼠皮肤炎症模型;与WT小鼠皮肤炎症模型相比,PGRN-/-小鼠加重了皮肤炎症模型症状,这一过程可能与PGRN缺陷阻碍了自噬的产生有关。
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