检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医科大学学报 2013年第2期42卷 149-151页

作者：邵阳光刘姣李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建人HDAC4蛋白与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达和纯化。方法用EcoRI单酶切pcDNA3.1-HDAC4质粒,得到hHDAC4全长编码序列,并将其克隆至原核表达载体pGEX-5X-1构建成新载体GST-HDAC4,经鉴定完全正确后转... 详细信息

目的构建人HDAC4蛋白与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达和纯化。方法用EcoRI单酶切pcDNA3.1-HDAC4质粒,得到hHDAC4全长编码序列,并将其克隆至原核表达载体pGEX-5X-1构建成新载体GST-HDAC4,经鉴定完全正确后转化大肠埃希菌BL21,通过异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并纯化获得目的蛋白。Western blot检测重组质粒的表达。结果酶切鉴定和测序结果显示,GST-HDAC4融合蛋白原核表达载体构建成功。考马斯亮蓝染色和Western blot结果显示,成功获得有生物活性的GST-HDAC4融合蛋白。结论成功构建了HDAC4原核表达载体,获得有生物活性的GST-HDAC4蛋白。

关键词： GST—HDAC4 原核表达融合蛋白

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乳腺干细胞培养基的建立及有效性验证

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中国组织工程研究 2014年第10期18卷 1585-1590页

作者：张军红杨晶豆晓伟王春华李青赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程中心细胞生物学系北京市100051 河北省邢台市眼科医院河北省眼病治疗中心河北省眼科研究所病理科河北省邢台市054000 河北医科大学生理学教研室河北省石家庄市050017 河北省邢台市眼科医院河北省眼病治疗中心河北省眼科研究所耳鼻喉科河北省邢台市054000 贵阳医学院附属医院骨科贵州省贵阳市550004

背景:干细胞培养基,尤其是乳腺干细胞培养基现阶段尚无有效的制备方法。目的:利用Sca-1+乳腺细胞验证自制乳腺干细胞培养基的有效性。方法:用BM培养基培养乳腺器官样小体,6 d后以免疫荧光方法监测成纤维细胞Sca-1和vimentin的表达。筛选... 详细信息

背景:干细胞培养基,尤其是乳腺干细胞培养基现阶段尚无有效的制备方法。目的:利用Sca-1+乳腺细胞验证自制乳腺干细胞培养基的有效性。方法:用BM培养基培养乳腺器官样小体,6 d后以免疫荧光方法监测成纤维细胞Sca-1和vimentin的表达。筛选出MaECM培养基,培养乳腺细胞6 d后,免疫磁珠筛选Sca-1+和Sca-1-细胞群,流式细胞术分析Sca-1阳性细胞的纯度,1×104 Sca-1+或Sca-1-细胞种植在4只鼠双侧乳腺脂肪垫上,6-8周后取出乳腺脂肪垫,以卡红整体染色和苏木精-伊红染色分析长出乳腺的结构数量。结果与结论:乳腺器官样小体用BM培养基培养6 d后,检测到大量Sca-1和vimentin阳性的成纤维细胞,说明BM培养基不适合分离Sca-1+乳腺干细胞。筛选出的MaECM培养基能够抑制成纤维的生长。磁珠筛选后,流式细胞术检测Sca-1+细胞在Sca-1+和Sca-1-细胞群的纯度分别是92%和5%。移植实验显示在8个种植Sca-1+细胞的脂肪垫生长出6个乳腺结构;而在8个种植Sca-1-细胞的脂肪垫中除1只鼠死亡,其余脂肪垫中均未长出乳腺结构。提示MaECM培养基适用于培养鼠乳腺干细胞。

关键词：干细胞培养乳腺干细胞成纤维细胞 Sca-1 乳腺干细胞培养基国家重大科学研究计划(973)资助项目 863项目

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维药罗勒提取物对小鼠巨噬细胞RAW264.7生长及其胞内5-脂氧酶活性的影响

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中成药 2013年第8期35卷 1599-1604页

作者：米娜瓦尔.哈帕尔阿孜古丽.吐尔逊周文婷程路峰依巴代提.吐乎提娜迪热.热依木艾尼瓦尔.吾买尔新疆医科大学基础医学院药理教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院细胞生物学室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第二附属医院内科新疆乌鲁木齐830063

目的观察罗勒提取物对小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)生长及其胞内5-脂氧酶活性的影响。方法采用MTT比色法检测罗勒乙酸乙酯提取物或罗勒正丁醇提取物对正常RAW264.7细胞和经脂多糖刺激的RAW264.7细胞生长的影响,求出其IC50值;用罗勒乙酸... 详细信息

目的观察罗勒提取物对小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)生长及其胞内5-脂氧酶活性的影响。方法采用MTT比色法检测罗勒乙酸乙酯提取物或罗勒正丁醇提取物对正常RAW264.7细胞和经脂多糖刺激的RAW264.7细胞生长的影响,求出其IC50值;用罗勒乙酸乙酯提取物或罗勒正丁醇提取物分别干预经脂多糖处理的RAW264.7细胞,采用ELISA法测定并比较上清液中白三烯B4的质量浓度,求出其抑制率。结果罗勒乙酸乙酯提取物和罗勒正丁醇提取物对正常RAW264.7细胞的生长有不同程度的抑制作用,给药时间为24 h的IC50值分别为312.5μg/mL、350.9μg/mL,具有浓度依赖性;两种提取物对经脂多糖刺激的RAW264.7的生长有一定的增殖作用(P<0.05);罗勒乙酸乙酯提取物和罗勒正丁醇提取物对白三烯B4的最大抑制率分别为42.78%、38.63%,其中罗勒乙酸乙酯提取物的作用强于罗勒正丁醇提取物(P<0.05)。结论罗勒提取物体外对经脂多糖刺激的RAW264.7细胞生长的最大抑制质量浓度为100μg/mL,对细胞内5-脂氧酶活性具有抑制作用。

关键词：罗勒 RAW264 7细胞脂多糖 5-脂氧酶

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体外诱导外周血B淋巴细胞分化浆细胞方法的建立及评价

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国际免疫学杂志 2013年第2期36卷 149-153页

作者：梁媛芦凤亮宗卫娇刘晔高翔金艾顺哈尔滨医科大学基础医学院免疫教研室 150081

目的建立体外活化外周血单个核细胞（PBMCs）中B淋巴细胞扩增和分化浆细胞的方法，为高亲和力治疗性人源单克隆抗体的研发提供研究基础。方法从3名接种过流感疫苗健康志愿者（〉10个月）的末梢血中分离PBMCs，加入TLR9激动剂CpGDNA2006... 详细信息

目的建立体外活化外周血单个核细胞（PBMCs）中B淋巴细胞扩增和分化浆细胞的方法，为高亲和力治疗性人源单克隆抗体的研发提供研究基础。方法从3名接种过流感疫苗健康志愿者（〉10个月）的末梢血中分离PBMCs，加入TLR9激动剂CpGDNA2006和细胞因子等培养；流式细胞分析、酶联免疫吸附试验（ELISA）、酶联免疫斑点试验（ELISPOT）、细胞计数法评价B淋巴细胞体外活化效果。结果与对照组相比，刺激组中CD19阳性细胞和CD138阳性细胞的比率明显增高（t=2．625，3．571，P〈0．05）；培养上清中总IgG和抗原特异性IgG含量增加，且分泌IgG和抗原特异性IgG的浆细胞数量明显增加（t=2．942，3．196，P〈0．05），刺激组比未刺激组细胞生存率提高（t=2．182，P〈0．05）。通过体外活化方法，只需约10ml外周血即可检测到足量的抗原特异性抗体分泌细胞。结论本试验所建立的体外活化方法能够有效地诱导外周血B淋巴细胞扩增和分化!浆细胞。

关键词： B淋巴细胞浆细胞体外活化外周血单个核细胞

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蛋白激酶D1在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用

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南方医科大学学报 2013年第3期33卷 351-355页

作者：牛晓璐许万福李松玉柯志勇曾方银罗深秋邓凡南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 南方医科大学骨科研究所广东广州510515 南方医科大学南方医院检验科广东广州510515

目的研究蛋白激酶D1(PKD1)在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用,为进一步探讨PKD1在烟曲霉感染引起的肺曲霉病中的作用及其机制奠定基础。方法首先将GFP、GFP-PKD1表达质粒分别转染人肺腺癌细胞A549和HEK293细胞中,分... 详细信息

目的研究蛋白激酶D1(PKD1)在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用,为进一步探讨PKD1在烟曲霉感染引起的肺曲霉病中的作用及其机制奠定基础。方法首先将GFP、GFP-PKD1表达质粒分别转染人肺腺癌细胞A549和HEK293细胞中,分别将灭活的烟曲霉分生孢子(1×105CFU/ml)于不同时间处理上述两组细胞,Western blotting证实PKD1的过表达,并检测PKD1的磷酸化活性;其次在A549细胞中分别转染GFP-PKD1、siRNA-PKD1并以灭活的烟曲霉分生孢子处理细胞30 min,分别检测下游NF-κB通路相关信号分子的磷酸化活性;最后,将NF-κB-luc荧光素酶报告基因及内参照报告质粒海肾荧光素酶(pRL-SV40)共转染入表达GFP、GFP-PKD1的A549细胞中,两组细胞在有无烟曲霉分生孢子的作用下处理24 h,收集细胞裂解液,进行双色荧光素酶活性检测。结果 Western blotting证实PKD1的过表达时间依赖性地增强烟曲霉刺激的A549细胞和HEK293细胞中PKD1的磷酸化活性及NF-κB通路中IКB和p65(pS276)的磷酸化活性,反之,敲低PKD1的表达则抑制烟曲霉介导的NF-κB通路中IКB和p65(pS276)的磷酸化活性。过表达PKD1明显增加NF-κB-luc荧光素酶的转录激活活性。结论 PKD1可能在烟曲霉刺激的NF-κB通路的激活及转录活性中起重要作用。

关键词：蛋白激酶D1 烟曲霉分生孢子 NF-κB 转录激活磷酸化

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阜阳市手足口病柯萨奇病毒A10型VP4区基因特征分析

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中华疾病控制杂志 2013年第6期17卷 480-483页

作者：赵蕾陈敬贤王明丽安徽医科大学基础医学院微生物学教研室安徽合肥230032 哥伦比亚大学病理与细胞生物学教研室美国纽约10032

目的分析2011-2012年阜阳市手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿咽拭子标本分离的柯萨奇病毒A10型(coxsackievirus A10,CoxA10)VP4区的基因特征,初步了解该病毒的变异情况。方法对49份HFMD患儿的咽拭子标本进行病毒分离,出... 详细信息

目的分析2011-2012年阜阳市手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿咽拭子标本分离的柯萨奇病毒A10型(coxsackievirus A10,CoxA10)VP4区的基因特征,初步了解该病毒的变异情况。方法对49份HFMD患儿的咽拭子标本进行病毒分离,出现人肠道病毒(human enterovirus,HEV)特征性病毒致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)后提取病毒RNA,用VP4区分型引物进行半巢式反转录-PCR,再通过测序和GenBank Blast比对确定病毒型别,并对其VP4区进行序列进化分析。结果 49份咽拭子标本有16份出现了特征性CPE,病毒分离阳性率32.7%。其中三株经鉴定为CoxA10,阳性率18.8%。它们的VP4区核苷酸序列同源性为95%～99%,与GenBank中参考毒株VP4区核苷酸序列同源性为77%～97%。其中与中国株HQOO5431同源性为96%～97%,与中国株JN639887同源性为96%～97%,与中国株FJ598089同源性为95%～96%,与日本株AB282808同源性为85%～86%,与日本株AB162743同源性为87%～89%,与CoxA10原型株Kowalik(AF081300)同源性为77%～78%。进化分析表明这三株分离株与Kowalik株聚成一簇,均属于CoxA10,与日本各地分离的CoxA10的病毒核苷酸差异较大,但与我国本土分离株自成一簇。结论 2011-2012年阜阳地区手足口病病原体CoxA10 VP4与中国地区分离株在进化上密切相关,其序列未发生明显变异。

关键词：手足口病柯萨奇病毒感染序列同源性

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HVEM基因多态性与中国女性乳腺癌发病风险研究

HVEM基因多态性与中国女性乳腺癌发病风险研究

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第三届东北三省暨内蒙古自治区免疫学学术会议

作者：傅振坤陈双李殿俊哈尔滨医科大学基础医学院免疫教研室

协同刺激分子疱疹病毒进入介导物(HVEM),又名肿瘤坏死因子受体超家族分子14(TNFRSF14),可以与多种协同刺激分子成员(如BTLA、LIGHT、CD 160等)结合调节T细胞免疫应答.HVEM与其配体结合后可以参与自身免疫病、肿瘤等多种疾病的发生及发展... 详细信息

协同刺激分子疱疹病毒进入介导物(HVEM),又名肿瘤坏死因子受体超家族分子14(TNFRSF14),可以与多种协同刺激分子成员(如BTLA、LIGHT、CD 160等)结合调节T细胞免疫应答.HVEM与其配体结合后可以参与自身免疫病、肿瘤等多种疾病的发生及发展.本研究通过对575例女性散发性乳腺癌患者和604位正常对照者的HVEM基因多态性的分析进行了病例对照分析.本研究涉及HVEM基因的6个SNPs(rs2281852,rs1886730,rs2234163,rs1 1573979,rs2234165和rs2234167)位点,通过PCR-RFLP及测序技术对6个SNPs位点进行基因分型.结果发现rs 1886730及rs2234167两个位点在基因型及等位基因频率具有统计学意义(P＜0.05);在单体型分析中,我们发现ACGCGG和CCGCGG具有统计学意义.我们还发现HVEM基因多态性与乳腺癌相关的病理指标淋巴结转移、雌激素受体、孕激素受体及P53的表达具有关联性.通过本研究我们发现HVEM基因多态性与中国女性乳腺癌的发病风险具有相关性.

关键词： HVEM 乳腺癌基因多态性单体型

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第三届东北三省暨内蒙古自治区免疫学学术会议

作者：夏福灿裴春颖田琳璐姜鹏字程海荣傅嫣然徐红薇哈尔滨医科大学基础医学院免疫教研室

免疫相关GTP酶家族成员IRGM/IRGM1在巨噬细胞相关的抗感染免疫应答中发挥重要作用,但其在非感染免疫过程中的作用仍不清楚.我们的前期研究证实在小鼠动脉粥样硬化斑块中浸润的巨噬细胞内IRGM1高表达,提示IRGM1可能通过调节巨噬细胞对氧... 详细信息

免疫相关GTP酶家族成员IRGM/IRGM1在巨噬细胞相关的抗感染免疫应答中发挥重要作用,但其在非感染免疫过程中的作用仍不清楚.我们的前期研究证实在小鼠动脉粥样硬化斑块中浸润的巨噬细胞内IRGM1高表达,提示IRGM1可能通过调节巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)的吞噬和代谢进而参与动脉粥样硬化的发生发展.目的:研究IRGM/IRGMl在动脉粥样硬化发病过程中巨噬细胞来源泡沫细胞形成中的作用.方法:1)利用高脂饲料饲养ApoE-/-小鼠,诱导小鼠动脉粥样硬化模型并通过western blot和免疫荧光染色检测IRGM1在斑块内表达及细胞定位,通过免疫组化染色检测IRGM在人动脉粥样硬化斑块内的表达;2)收集/诱导原代巨噬细胞(小鼠腹腔巨噬细胞,小鼠骨髓诱导巨噬细胞,人外周血单核细胞诱导的巨噬细胞),利用PMA刺激活化人THP1细胞;体外利用oxLDL诱导巨噬细胞源性泡沫细胞的形成,通过western blot和免疫荧光染色检测1RG M/I RGM1的表达,通过real-time PCR检测miR196的表达;3)收集健康人的外周血单核细胞并用hGM-CSF诱导其分化为巨噬细胞,然后oxLDL处理24小时,再用miR196 mimic处理12小时后收集蛋白,通过western blot检测IRGM的表达;4)体外利用Dil-oxLDL处理来自Irgm1+/+小鼠和Irgm1-/-小鼠的原代巨噬细胞及经过IRGM siRNA处理的人原代巨噬细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测泡沫细胞的形成;5)通过抗体介导的受体交联内化实验和聚合型F-actin的Phalloidin特染实验,应用免疫荧光染色和流式细胞术检测巨噬细胞表面CD36受体的内化能力及细胞内F-actin的聚合能力;6)利用高脂饲料喂养ApoE基因缺失背景下的Irgm1 +/+小鼠和Irgm1+,-小鼠16周,对小鼠进行心脏灌注和胸腹主动脉取材,然后对动脉粥样硬化斑块进行油红染色和斑块面积定量分析.

关键词：免疫相关GTP酶1(IRGM/IRGM1) oxLDL 巨噬细胞泡沫细胞

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c-ski基因重组腺病毒质粒的构建及其对肿瘤相关成纤维细胞增殖的影响

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中国生物制品学杂志 2013年第12期26卷 1738-1742页

作者：王黎阳赵浏阳彭琼乐孙艳柳满然重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016

目的构建携带c-ski基因的重组腺病毒质粒,并检测其对肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)增殖活力的影响。方法以pcDNA3-c-ski质粒为模板,PCR扩增c-ski基因,与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,构建重组穿梭质粒pAdT... 详细信息

目的构建携带c-ski基因的重组腺病毒质粒,并检测其对肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)增殖活力的影响。方法以pcDNA3-c-ski质粒为模板,PCR扩增c-ski基因,与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,构建重组穿梭质粒pAdTrack-c-ski,经PmeⅠ线性化后,转化感受态大肠埃希菌BJ5183,获得重组腺病毒质粒,经PacⅠ线性化后,转染HEK-293细胞,获得重组腺病毒,经扩增及纯化后测定病毒滴度。将纯化的重组腺病毒感染乳腺癌CAFs,采用Western blot法检测感染细胞中c-Ski蛋白的表达水平;MTT法和细胞计数法检测重组腺病毒对CAFs细胞增殖活力的影响。结果重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切鉴定证明构建正确;转染HEK-293细胞48 h后可见大量绿色荧光蛋白的表达,纯化的重组腺病毒的滴度为3.11×1010IFU/ml;感染重组腺病毒的乳腺癌CAFs中c-Ski蛋白的表达水平明显高于空病毒组和空白对照组(P<0.001),且增殖活力明显高于空白对照组(P<0.05)。结论成功构建了表达c-ski基因的重组腺病毒质粒,其可明显促进CAFs的增殖,为进一步研究c-Ski对CAFs增殖分化等生物学功能的影响及作用机制提供了实验依据。

关键词： c-ski基因腺病毒成纤维细胞细胞增殖

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表皮生长因子诱导人脐静脉内皮细胞迁移过程中波形蛋白及基质金属蛋白酶2的表达变化

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解剖学报 2013年第6期44卷 789-794页

作者：卢诗军杨慧科马文平李晓冬张雅芳哈尔滨医科大学基础医学院解剖学教研室哈尔滨150081 黑龙江护理高等专科学校解剖学教研室哈尔滨150086 沈阳市第二中医院神经外科沈阳110101

目的观察人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移过程中表皮生长因子(EGF)对波形蛋白(vimentin)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响,分析波形蛋白与EGF促HUVECs迁移能力的关系。方法 EGF处理HUVECs细胞10h后,采用细胞划痕实验检测HUVECs细胞的... 详细信息

目的观察人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移过程中表皮生长因子(EGF)对波形蛋白(vimentin)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响,分析波形蛋白与EGF促HUVECs迁移能力的关系。方法 EGF处理HUVECs细胞10h后,采用细胞划痕实验检测HUVECs细胞的迁移水平,荧光显微镜下观察细胞的形态变化情况;免疫荧光染色观察划痕诱导HUVECs迁移时波形蛋白的表达变化;Western blotting和RT-PCR法分析MMP-2及波形蛋白表达。结果 EGF刺激后HUVECs的迁移能力上升1.8倍,迁移细胞的形态发生改变,由铺路石样变为长梭形,同时波形蛋白和MMP-2的表达上调(P<0.05)。结论 EGF促进HUVECs的迁移过程中可明显上调波形蛋白和MMP-2的表达,波形蛋白与HUVECs的迁移相关。

关键词：表皮生长因子细胞迁移波形蛋白基质金属蛋白酶2 免疫印迹法

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