检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2011年第9期27卷 774-777,786页

作者：王雪莲栾和芝刘彤赵雨杰安春丽中国医科大学基础医学院病原生物学教研室沈阳110001 秦皇岛港口医院检验科秦皇岛066000 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院生物芯片中心沈阳110001

目的构建肺孢子虫(菌)p55蛋白嵌合基因的原核表达载体,分析、鉴定及纯化表达产物。方法自NCBI网站的蛋白数据库中获取p55抗原及4个变异体信息,运用生物信息学方法预测可能的抗原表位,设计包含多个可能抗原表位的多肽,根据遗传中心法则... 详细信息

目的构建肺孢子虫(菌)p55蛋白嵌合基因的原核表达载体,分析、鉴定及纯化表达产物。方法自NCBI网站的蛋白数据库中获取p55抗原及4个变异体信息,运用生物信息学方法预测可能的抗原表位,设计包含多个可能抗原表位的多肽,根据遗传中心法则及大肠杆菌密码子偏好性进行密码子优化,将氨基酸序列转化为核苷酸序列,将人工合成的嵌合基因(CAG)片段连接到质粒pGEX-6p-1(含GST标签)上,构建原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,酶切、测序鉴定。pGEX-6p-1/CAG转化大肠杆菌,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白CAG-GST。表达产物用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western-blotting分析鉴定。结果双酶切及测序结果显示重组质粒pGEX-6p-1/CAG构建成功。SDS-PAGE显示重组融合蛋白相对分子量约为69 000。Western-blotting结果显示,表达的融合蛋白为CAG-GST。结论成功构建表达p55蛋白嵌合基因的原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,建立表达重组蛋白的原核表达系统。

关键词：肺孢子菌 p55蛋白嵌合基因重组融合蛋白

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不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体的构建及重组蛋白的表达

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中国医科大学学报 2011年第12期40卷 1057-1059,1071页

作者：刘彤李洋朱戈李丰中国医科大学基础医学院细胞生物教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建不同激酶活性的hPAK6原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法野生型、激酶活型和激酶死型pcDNA3.1-PAK6经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在*** BL21中诱导不同型GST-hPAK6融合蛋白表达,并经免... 详细信息

目的构建不同激酶活性的hPAK6原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法野生型、激酶活型和激酶死型pcDNA3.1-PAK6经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在*** BL21中诱导不同型GST-hPAK6融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果野生型、激酶活型和激酶死型hPAK6编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,双酶切及测序鉴定正确,并在*** BL21中获得了诱导表达,蛋白的分子量均为101 kDa,免疫印迹检测到了融合蛋白表达。结论成功构建不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体,并分别诱导表达出GST-PAK6融合蛋白。

关键词： PAK6基因激酶活型激酶死型原核表达融合蛋白

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抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB和细胞因子表达的影响

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南方医科大学学报 2011年第2期31卷 272-276页

作者：黄恩平姚君杨翠兰罗深秋南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 暨南大学第二临床医学院消化内科广东深圳518020

目的观察抗小鼠Toll样受体2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB(NF-κB)和细胞因子表达的影响。方法将雄性BALB/c小鼠随机分成4组:假手术组、模型组、TSP-2治疗组和正常兔IgG治疗组。采用盲肠结扎穿孔术制作... 详细信息

目的观察抗小鼠Toll样受体2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对脓毒症小鼠肠粘膜核因子-κB(NF-κB)和细胞因子表达的影响。方法将雄性BALB/c小鼠随机分成4组:假手术组、模型组、TSP-2治疗组和正常兔IgG治疗组。采用盲肠结扎穿孔术制作脓毒症小鼠模型,分别于术后6、12和24 h取回肠组织,HE染色,免疫组织化学方法检测小鼠肠粘膜组织NF-κB的表达,实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α和IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测小鼠肠粘膜TNF-α和IL-6蛋白表达水平。结果模型组NF-κB表达水平较假手术组显著上升;TSP-2治疗组NF-κB表达水平较模型组显著下调;模型组各时间点TNF-α和IL-6水平均高于假手术组(P<0.05);TSP-2治疗组与模型组相比,TNF-α和IL-6水平明显降低(P<0.05),TNF-α和IL-6 mRNA水平也低于模型组(P<0.05)。正常兔IgG治疗组与模型组比较,结果无统计学意义(P>0.05)。结论抗体TSP-2能抑制脓毒症小鼠肠道NF-κB的活化,并下调致炎细胞因子TNF-α和IL-6水平,对脓毒血症引起的肠道炎症起到一定的控制作用,并延缓脓毒血症的病情发展。

关键词：脓毒症 Toll样受体2 TSP-2 核因子-κB 细胞因子肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-6

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α-2，3-唾液酸糖基转移酶ST3家族分子序列生物信息学分析

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中国医科大学学报 2011年第6期40卷 497-500,511页

作者：马汝海钟连生潘忠诚王天骄何群中国医科大学基础医学院化学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院教育部细胞生物学重点实验室生物芯片中心沈阳110001

目的比较探讨人类α-2,3-唾液酸糖基转移酶家族成员间的同源性,探讨其进化规律及其与功能相关性。方法利用网上数据库和生物信息学软件对核酸及蛋白质序列进行同源比较、结构域分析和进化树绘制。结果人类α-2,3-唾液酸糖基转移酶家族... 详细信息

目的比较探讨人类α-2,3-唾液酸糖基转移酶家族成员间的同源性,探讨其进化规律及其与功能相关性。方法利用网上数据库和生物信息学软件对核酸及蛋白质序列进行同源比较、结构域分析和进化树绘制。结果人类α-2,3-唾液酸糖基转移酶家族一级结构、二级结构均有较高的同源性,系统进化分析显示其各成员来源于同一祖先并在不同时期分野。结论各成员来自于同一祖先的同一家族,其进化方式属于趋异性进化,家族中各亚型底物特异性可能与其糖基化位点相关。

关键词： α-2,3-唾液酸糖基转移酶同源性分析结构域系统进化树

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hTFF3基因真核表达载体构建及表达鉴定

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中国医科大学学报 2011年第10期40卷 877-880页

作者：郑倩倩郭文东朱亚勤中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的克隆人肠三叶因子基因hTFF3,构建重组真核表达载体pEGFP-C1-TFF3,并在真核细胞中表达。方法应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从真核细胞中扩增得到人TFF3的全长序列,克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中,经酶切、PCR鉴定后测... 详细信息

目的克隆人肠三叶因子基因hTFF3,构建重组真核表达载体pEGFP-C1-TFF3,并在真核细胞中表达。方法应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从真核细胞中扩增得到人TFF3的全长序列,克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中,经酶切、PCR鉴定后测序证实克隆成功。将重组载体转至真核细胞,荧光显微镜观察下转染效率,同时采用RT-PCR、Western blot技术检测外源基因TFF3的表达。结果成功将hTFF3基因克隆到真核表达载体中,酶切片段与预期大小一致(200 bp)。在荧光显微镜下观察转染后的细胞可见明显的绿色荧光,RT-PCR及Western blot结果表明:转染后的细胞中TFF3在转录和翻译水平的表达均有明显提高。结论成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-TFF3,并在真核细胞中显著表达,为进一步研究TFF3因子的生物学功能奠定了基础。

关键词：肠三叶因子克隆表达载体

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丙烯酰胺对雄性小鼠生殖毒性的研究

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毒理学杂志 2011年第2期25卷 90-92页

作者：张娟杨媛媛王文娟马红莲李涛涛张秀峰杨建一山西医科大学基础医学院细胞生物与遗传学教研室山西太原030001

目的评价丙烯酰胺(acrylamide,AA)对睾丸细胞DNA损伤及精子核成熟率的影响,为研究AA生殖系统损伤机制提供实验室数据。方法以20、40和60 mg/kg AA经口灌胃染毒雄性小鼠,并设对照组,连续给药5 d,首次给药后14 d时,用彗星实验和吖啶橙荧... 详细信息

目的评价丙烯酰胺(acrylamide,AA)对睾丸细胞DNA损伤及精子核成熟率的影响,为研究AA生殖系统损伤机制提供实验室数据。方法以20、40和60 mg/kg AA经口灌胃染毒雄性小鼠,并设对照组,连续给药5 d,首次给药后14 d时,用彗星实验和吖啶橙荧光染色法检测睾丸细胞DNA损伤和小鼠精子核成熟率。结果彗星实验结果显示:60 mg/kg AA组中各监测指标与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),且随AA剂量的增加,各指标均明显增高,有显著的剂量-效应关系。吖啶橙荧光染色法结果显示:40和60 mg/kg剂量组小鼠精子核成熟率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),且随着染毒剂量的增加,精子核成熟率逐渐下降。结论 AA对小鼠睾丸细胞DNA有持续损伤作用,并与染毒剂量明显相关。AA破坏精子核DNA的完整性,导致精子核成熟率降低,以致于精子受精能力降低。

关键词：丙烯酰胺生殖毒性 DNA损伤精子核成熟率

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hFAK基因重组质粒的构建及蛋白表达

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中国医科大学学报 2011年第7期40卷 584-586,591页

作者：李晓东郭冰玉朱戈李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建hFAK原核、真核表达载体,证实融合蛋白在原核细胞的诱导表达以及在胃癌细胞内的表达、定位。方法提取人胃癌细胞SGC-7901的总mRNA并进行反转。以反转录的cDNA为模板PCR扩增hFAK全长编码基因,分别克隆至pCDNA3.1-Flag以及pGEX-4... 详细信息

目的构建hFAK原核、真核表达载体,证实融合蛋白在原核细胞的诱导表达以及在胃癌细胞内的表达、定位。方法提取人胃癌细胞SGC-7901的总mRNA并进行反转。以反转录的cDNA为模板PCR扩增hFAK全长编码基因,分别克隆至pCDNA3.1-Flag以及pGEX-4T-2表达载体中。原核重组质粒鉴定后转入BL21细胞中并经过诱导表达及纯化,真核表达质粒转入胃癌SGC-7901细胞中,分别利用Western blot和激光共焦扫描显微技术检测重组质粒的表达以及在胃癌细胞中的定位。结果 hFAK全长基因序列克隆到原核、真核表达载体中,酶切鉴定片段为3200bp。原核诱导出GST-hFAK并进行纯化;Western blot检测到真核转染的Flag-hFAK表达,条带为130kD,免疫荧光显示蛋白定位于细胞质,并在细胞膜上有定位。结论成功构建了hFAK原核、真核表达载体,并验证了其表达。

关键词： hFAK 蛋白质印迹融合蛋白免疫荧光胃癌

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二甲双胍对肾癌细胞凋亡的影响及机制

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南方医科大学学报 2011年第9期31卷 1504-1508页

作者：李明刘俊胡卫列贾春宏李海燕温芝华邹志鹏白晓春罗深秋南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 广州军区广州总医院泌尿外科广东广州510010

目的探讨二甲双胍对肾癌细胞凋亡的影响及其机制。方法通过Annexin V-FITC/PI染色镜下观察及流式细胞仪检测观察二甲双胍对786-O细胞凋亡的影响,通过免疫印迹检测AMPK信号及Caspase 9表达探讨可能分子机制。结果二甲双胍能够诱导786-O... 详细信息

目的探讨二甲双胍对肾癌细胞凋亡的影响及其机制。方法通过Annexin V-FITC/PI染色镜下观察及流式细胞仪检测观察二甲双胍对786-O细胞凋亡的影响,通过免疫印迹检测AMPK信号及Caspase 9表达探讨可能分子机制。结果二甲双胍能够诱导786-O在低浓度血清环境凋亡,激活Caspase 9,二甲双胍能够激活786-O细胞中AMPK信号,但与其凋亡诱导效应无关。结论二甲双胍能够诱导肾癌细胞在低浓度血清环境凋亡,具有潜在治疗肾癌作用。

关键词：二甲双胍肾细胞癌细胞增殖细胞凋亡 AMPK

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C／EBPα不同截短功能域GST融合蛋白表达载体的构建及表达的研究

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中国医科大学学报 2011年第6期40卷 484-486页

作者：王桂玲陈薇姜佩佳王孝会中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建GST-C/EBPα融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-C/EBPα为模板,用PCR法扩增C/EBPα全长及各个截短片段,通过EcoRI和XhoI酶切位点将C/EBPα全长及各个截短突变体定向插入pGEX-5X-1中,构建原... 详细信息

目的构建GST-C/EBPα融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-C/EBPα为模板,用PCR法扩增C/EBPα全长及各个截短片段,通过EcoRI和XhoI酶切位点将C/EBPα全长及各个截短突变体定向插入pGEX-5X-1中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突变体,并转化*** DH5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入*** BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和SDS-PAGE鉴定。结果酶切及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突变体,并用SDS-PAGE方法证实了GST-C/EBPα全长及各个截短突变体融合蛋白的表达。结论成功构建了C/EBPα原核表达载体及其截短突变体,并证实了融合蛋白的表达,为进一步纯化C/EBPα蛋白和研究C/EBPα的生物学功能奠定了基础。

关键词： CCAAT增强子结合蛋白α 截短突变体质粒原核表达

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沉默核糖核酸酶抑制因子促进膀胱癌BIU-87细胞生长和转移潜能

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第三军医大学学报 2011年第22期33卷 2357-2360页

作者：陈俊霞高娟朱军姜蓉重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的研究沉默核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因表达,对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和侵袭能力及肿瘤生长的影响。方法通过用RI mRNA的特异性siRNA表达载体和无同源性的对照载体,在脂质体介导下稳定转染膀胱癌BIU-87细胞,... 详细信息

目的研究沉默核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因表达,对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和侵袭能力及肿瘤生长的影响。方法通过用RI mRNA的特异性siRNA表达载体和无同源性的对照载体,在脂质体介导下稳定转染膀胱癌BIU-87细胞,通过筛选、鉴定后,用Am-blue法检测细胞增殖能力及用Western blot分析细胞中MMP-2和MMP-9的表达。将siRNA RI BIU-87(实验组)及对照组细胞皮下注射到BALB/c裸鼠中,观察肿瘤的生长和肿瘤微血管密度的变化,以及nm23-H1和E-cadherin在肿瘤中的表达。结果 RI基因表达下调显著增加了细胞的增殖,而且显著增强了MMP-2和MMP-9的表达。动物实验结果显示,实验组显著促进了肿瘤的生长(促瘤增长率31.85%),具有更大的瘤质量和更高的肿瘤微血管密度以及更低的nm23-H1和E-cadherin的表达。结论抑制RI基因的表达能显著提高膀胱癌细胞的生长和侵袭潜能,RI可能作为治疗膀胱癌的靶蛋白。

关键词：核糖核酸酶抑制因子膀胱癌细胞肿瘤生长转移

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