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外源性TGF-β1诱导人乳腺癌MCF-7细胞的乙醛脱氢酶1 mRNA及蛋白表达

复旦学报（医学版） 2011年第4期38卷 340-342页

作者：韩明利吴诚义莫志强彭琼乐王艺梦屈洪波重庆医科大学附属第一医院内分泌外科重庆400016 重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学附属第一医院急诊科重庆400016

目的本研究旨在探讨外源性TGF-β1诱导人乳腺癌MCF-7细胞对乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase1,ALDH1)mRNA及蛋白表达的影响。方法用不同浓度(1、5ng/mL)的TGF-β1诱导体外培养的MCF-7细胞48h后,RT-PCR检测ALDH1mRNA的表达变化,Western blot检测ALDH1蛋白的表达变化。结果 TGF-β1(1、5ng/mL)诱导的MCF-7细胞的ALDH1mRNA及蛋白表达均高于未诱导的MCF-7亲本细胞,差异有统计学意义(P均<0.001);高浓度(5ng/mL)TGF-β1诱导的MCF-7细胞的ALDH1mRNA及蛋白表达均高于低浓度(1ng/mL)TGF-β1诱导的MCF-7细胞,差异有统计学意义(P均<0.001)。结论外源性TGF-β1可诱导人乳腺癌MCF-7细胞上调ALDH1mRNA及蛋白的表达,可能诱导ALDH1+乳腺癌肿瘤干细胞(cancer stemcell,CSC)的转化,并有一定的浓度依赖性。

关键词： TGF-β1 乙醛脱氢酶1 乳腺癌上皮-间质转化肿瘤干细胞

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人pEGFP-PKARIIβ重组质粒的构建及其在BGC-823胃癌细胞中的表达

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世界华人消化杂志 2011年第14期19卷 1446-1450页

作者：王桂玲姜佩佳王孝会陈薇中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁省沈阳市110001

目的:研究人的蛋白激酶A调节亚基RIIβ(PKARIIβ)基因的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体融合蛋白在胃癌细胞BGC-823内的表达和定位,初步探讨其在肿瘤细胞中的分子作用机制.方法:以pRSETB-PKARIIβ质粒为模板,PCR扩增出全长PKARIIβ编码序... 详细信息

目的:研究人的蛋白激酶A调节亚基RIIβ(PKARIIβ)基因的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体融合蛋白在胃癌细胞BGC-823内的表达和定位,初步探讨其在肿瘤细胞中的分子作用机制.方法:以pRSETB-PKARIIβ质粒为模板,PCR扩增出全长PKARIIβ编码序列,用XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后,亚克隆至含有GFP标签的融合表达载体pEGFP-C1中.测序正确后,将重组质粒转染到胃癌细胞BGC-823中,提取细胞蛋白进行Westernbolt检测.利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-PKARIIβ在人胃癌细胞BGC-823内的定位.结果:将人全长PKARIIβ编码序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1.2kb,在预期的位置产生条带.Western blot检测到了融合蛋白正确表达,分子量约为72000Da.并观察到GFP-PKARIIβ在HEK293和BGC-823细胞内都有表达,且定位以细胞质为主,在细胞核内少量表达.结论:成功构建了人全长PKARIIβ编码序列的pEGFP-PKARIIβ真核表达载体,证实GFP-PKARIIβ蛋白在BGC-823细胞质内特异表达,为进一步研究PKARIIβ的在胃癌中的功能提供了重要的实验材料.

关键词： PKARIIβ 真核表达绿色荧光蛋白基因转染胃癌细胞

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人源MAP3K7克隆及其GST融合蛋白的表达和鉴定

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中国医科大学学报 2011年第8期40卷 688-690页

作者：冯艳玲刘彩红朱亚勤中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室细胞病理生物学研究室沈阳110001

目的构建MAP3K7蛋白GST的融合表达载体,高效表达和纯化GST-MAP3K7融合蛋白,为GST Pulldown实验做准备。方法通过PCR扩增MAP3K7全长编码基因,经双酶切定向克隆至表达载体pGEX-5X-1,构建原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,通过酶切和测序... 详细信息

目的构建MAP3K7蛋白GST的融合表达载体,高效表达和纯化GST-MAP3K7融合蛋白,为GST Pulldown实验做准备。方法通过PCR扩增MAP3K7全长编码基因,经双酶切定向克隆至表达载体pGEX-5X-1,构建原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,通过酶切和测序鉴定后,导入*** BL21宿主菌中,IPTG诱导表达融合蛋白,经谷胱甘肽琼脂糖凝胶纯化表达产物,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定。结果经测序鉴定成功构建了原核重组表达载体pGEX-5X-1-MAP3K7,诱导后的GST融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot检测到分子量正确的特异性蛋白条带,经纯化后,得到了高纯度的融合蛋白。结论成功构建了MAP3K7全长的GST重组表达载体,确定了GST-MAP3K7融合蛋白表达的最佳条件,诱导成功并得到了高纯度的融合蛋白,为进一步研究MAP3K7蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词：人MAP3K7基因基因克隆融合蛋白原核表达

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雷公藤治疗大鼠类风湿性关节炎的效果及其免疫机制

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广东医学 2011年第20期32卷 2642-2644页

作者：赵太平邱佰房徐玉东朱勇杰广州医学院从化学院基础医学部广州510925 哈尔滨医科大学人体解剖学教研室哈尔滨150081

目的探讨口服雷公藤治疗大鼠类风湿性关节炎(rheumatoid arithritis)的效果并研究其免疫机制。方法通过建立大鼠类风湿性关节炎模型,采用关节评分法及X线片对关节进行评价,观察对照组、模型组、雷公藤给药组肠道淋巴细胞IEL和LPL的变化... 详细信息

目的探讨口服雷公藤治疗大鼠类风湿性关节炎(rheumatoid arithritis)的效果并研究其免疫机制。方法通过建立大鼠类风湿性关节炎模型,采用关节评分法及X线片对关节进行评价,观察对照组、模型组、雷公藤给药组肠道淋巴细胞IEL和LPL的变化规律,并进行统计学分析。结果口服雷公藤能明显降低类风湿性关节炎的关节评分;模型组鼠肠道各部分(十二指肠、空肠、回肠)上皮内淋巴细胞(IEL)、固有层淋巴细胞(LPL)与对照组、雷公藤给药组比较数量明显增多(P<0.05),对照组与雷公藤给药组数量差异无统计学意义(P>0.05)。结论口服雷公藤能有效减轻类风湿性关节炎大鼠的关节病变,肠道各部分淋巴细胞IEL、LPL可能在类风湿性关节炎致病及治疗过程中起着关键的生物学作用。

关键词：雷公藤类风湿性关节炎 IEL LPL

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自噬基因多态性与机体对结核病的敏感性

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国际免疫学杂志 2012年第5期35卷 409-409页

作者：杨永良潘新灵杨迪凌虹(审校者) 哈尔滨医科大学实验动物学部 150081 哈尔滨医科大学09级基础七年制学生哈尔滨医科大学附属第二临床医学院普外科五病房哈尔滨医科大学微生物学教研室

结核分枝杆菌是胞内病原体，主要感染巨噬细胞。最近的研究显示，自噬参与了胞内杀死结核分枝杆菌的过程。胞内结核分枝杆菌的存活与自噬的抑制有关，而自噬和自噬相关基因缺失鼠更容易受结核分枝杆菌感染。据报道，在一些地区，自噬基... 详细信息

结核分枝杆菌是胞内病原体，主要感染巨噬细胞。最近的研究显示，自噬参与了胞内杀死结核分枝杆菌的过程。胞内结核分枝杆菌的存活与自噬的抑制有关，而自噬和自噬相关基因缺失鼠更容易受结核分枝杆菌感染。据报道，在一些地区，自噬基因IRGM的高多态性与保护人们抵抗结核分枝杆菌的感染有关。此外，R2 RX7也与结核病相关。

关键词：基因多态性结核病自噬结核分枝杆菌感染敏感性胞内病原体抗结核分枝杆菌机体

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RNAi抑制ΔNp63表达对头颈鳞癌细胞增殖的影响

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国际遗传学杂志 2011年第3期34卷 135-140+152页

作者：张杰武李燕华聂春磊孔令宇徐晋哈尔滨医科大学第三附属医院头颈外科哈尔滨医科大学基础医学院细胞生物学教研室

目的研究ΔNp63促进头颈鳞癌细胞增殖及存活的作用及相关分子机制。方法筛选高表达ΔNp63的头颈鳞癌细胞系,采用RNAi方法分别抑制ΔNp63及P63表达。RT-PCR、Western印迹、MTT法、流式细胞术等检测细胞增殖和细胞周期等生物学行为改变;... 详细信息

目的研究ΔNp63促进头颈鳞癌细胞增殖及存活的作用及相关分子机制。方法筛选高表达ΔNp63的头颈鳞癌细胞系,采用RNAi方法分别抑制ΔNp63及P63表达。RT-PCR、Western印迹、MTT法、流式细胞术等检测细胞增殖和细胞周期等生物学行为改变;并检测相关周期调控蛋白的表达。结果ΔNp63在FaDu细胞中高表达,定位于细胞核。抑制ΔNp63及P63表达后,FaDu细胞增殖能力明显下降（t=3.66,P<0.01）,发生G;期细胞周期阻滞;CDK抑制物P21及P27蛋白表达上调,P53表达上调。结论ΔNp63对FaDu细胞增殖及存活发挥主导作用,ΔNp63通过抑制p21、p27的表达,促进肿瘤细胞的生长和增殖。

关键词： ANp63 RNA干扰头颈鳞癌细胞增殖

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载脂蛋白基因与空间记忆力及胆固醇代谢的相关性分析

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中华老年心脑血管病杂志 2011年第3期13卷 260-262页

作者：廖峥嵘吕雨虹王忠海张凤云赵俊霞琦祖和河北医科大学基础医学院细胞生物学教研室石家庄050017 中国医学科学院基础医学研究所

目的研究载脂蛋白E(apoE)基因在早老痴呆疾病中的作用。方法选取C57BL/6J鼠,通过显微注射法建立人突变apoE_4近交系转基因鼠,PCR初筛,再将首建鼠与正常C57BL/6J鼠繁育,将获得的6只转基因鼠作为转基因组,经Southern杂交鉴定,同时出生的... 详细信息

目的研究载脂蛋白E(apoE)基因在早老痴呆疾病中的作用。方法选取C57BL/6J鼠,通过显微注射法建立人突变apoE_4近交系转基因鼠,PCR初筛,再将首建鼠与正常C57BL/6J鼠繁育,将获得的6只转基因鼠作为转基因组,经Southern杂交鉴定,同时出生的结果为阴性的6只小鼠作为对照组,用酶法测定2组小鼠2、9和12月龄血清TC水平,Y迷宫测定2组小鼠9和12月龄空间记忆能力。结果 2组小鼠2和9月龄时,血清TC水平差异无统计学意义(P>0.05),12月龄时转基因组鼠血清TC水平(3.02±0.14)mmol/L较同龄对照组鼠明显升高(2.11士0.01)mmol/L,差异有统计学意义(P<0.01)。转基因组鼠9和12月龄时空间记忆力[(0.82±0.49)%,(0.82±0.05)%]较对照组鼠[(0.99±0.05)%,(0.98±0.03)%]明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 apoE_4基因与TC代谢可能具有相关性,同时apoE_4基因过渡表达损伤了转基因鼠的记忆能力。

关键词：载脂蛋白E类阿尔茨海默病突变转基因胆固醇记忆障碍

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联合应用高分辨率熔解曲线和多重连接依赖探针扩增技术对PAH基因突变筛查研究

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中华医学遗传学杂志 2011年第6期28卷 649-653页

作者：季春燕孙莉莉曹丽华胡煜黄宏王述森罗阳中国医科大学基础医学院医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001 沈阳市妇女儿童保健中心

目的联合应用高分辨率熔解曲线（highresolutionmelting，HRM）和多重连接依赖探针扩增（multiplexligation—dependentprobeamplification，MLPA）技术检测苯丙酮尿症（phenylketonuria，PKU）患者基因突变，并探讨两种技术联合运用对于突变筛查的价值。方法采用HRM和MLPA技术对26例临床诊断为PKU的患者苯丙氨酸羟化酶基因（phenylalaninehydroxylase，PAH）进行检测，并通过测序验证；针对未报道的基因改变进行聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析。结果在52个等位基因中检测到44个突变等位基因（共21种不同突变），包括第4外显子拷贝数的增加，总检出率达84．62％（44／52），其中C．584—585insA和IVSl0＋1G〉T突变在国内外未见报道。此外，R243Q（25％）突变为中国最常见的突变种类。结论应用HRM和MLPA技术相对提高了PAH基因突变筛查的检出率，检测结果丰富了基因突变数据库，并为临床诊断与产前诊断提供实验室依据。

关键词：苯丙酮尿症苯丙氨酸羟化酶基因突变高分辨率熔解曲线多重连接依赖探针扩增

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甲状腺乳头状癌组织中DAPK1与RARβ的表达及临床意义

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癌变．畸变．突变 2011年第2期23卷 114-118页

作者：武爽古丽扎热叶.艾库拉纳菲沙.卡德尔阿布力孜.阿布杜拉夏米西努尔.伊力克新疆医科大学基础医学院细胞生物教研室新疆医科大学基础医学院生化教研室新疆乌鲁木齐830011

目的:通过检测新疆地区甲状腺乳头状癌组织及甲状腺良性病变组织中DAPK1和RARβ的蛋白表达特点,探讨其在甲状腺乳头状癌发生发展中的意义。方法:采用免疫组织化学S-P法,检测DAPK1与RARβ在新疆地区38例甲状腺乳头癌、21例甲状腺良性腺瘤... 详细信息

目的:通过检测新疆地区甲状腺乳头状癌组织及甲状腺良性病变组织中DAPK1和RARβ的蛋白表达特点,探讨其在甲状腺乳头状癌发生发展中的意义。方法:采用免疫组织化学S-P法,检测DAPK1与RARβ在新疆地区38例甲状腺乳头癌、21例甲状腺良性腺瘤、13例桥本氏甲状腺炎、6例结节性甲状腺肿和6例癌旁正常甲状腺组织中的蛋白表达,并分析其与临床病理因素间的关系。结果:DAPK1在甲状腺乳头状癌中的阳性表达明显低于甲状腺腺瘤、桥本氏甲状腺炎、结节性甲状腺肿和癌旁正常甲状腺组织(P<0.01);RARβ在甲状腺乳头状癌中的阳性表达明显高于在甲状腺良性腺瘤、桥本氏甲状腺炎、结节性甲状腺肿和癌旁正常甲状腺组织(P<0.01);DAPK1与RARβ在甲状腺乳头状癌中的表达与患者的年龄、性别、民族无明显相关关系(P>0.05)。结论:DAPK1可能参与了甲状腺乳头状癌的发生发展过程。检测DAPK1和RARβ的表达水平可作为判断甲状腺乳头状癌转移和预后的参考指标。

关键词： DAPK1 RARβ 甲状腺癌免疫组织化学表达

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肉桂醛抗腺病毒作用研究

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中国病理生理杂志 2011年第8期27卷 1467-1471页

作者：刘蕾曲章义王淑秋魏凤香高虹哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081 佳木斯大学基础医学院黑龙江佳木斯154007 广东药学院生物学教研室广东广州510006

目的:研究肉桂醛抗腺病毒(ADV)作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法和病毒增殖抑制实验观测肉桂醛抗ADV作用;免疫荧光法检测肉桂醛对ADV六邻体(hexon)蛋白表达的影响。结果:(1)MTT和病毒增殖抑制实验结果表明肉桂醛在3种作用方式(除细胞... 详细信息

目的:研究肉桂醛抗腺病毒(ADV)作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法和病毒增殖抑制实验观测肉桂醛抗ADV作用;免疫荧光法检测肉桂醛对ADV六邻体(hexon)蛋白表达的影响。结果:(1)MTT和病毒增殖抑制实验结果表明肉桂醛在3种作用方式(除细胞保护作用方式)下能够增强宿主细胞存活率,降低病毒滴度,且细胞存活率与药物浓度呈正相关,肉桂醛对宿主细胞无保护作用,不能阻断病毒进入细胞。(2)肉桂醛(除细胞保护作用方式)组与病毒组比较hexon蛋白的表达明显降低(P<0.05)。结论:肉桂醛有抗ADV作用,但却对宿主细胞无保护作用,肉桂醛抗ADV作用可能与调节hexon蛋白的表达有关。

关键词：腺病毒肉桂醛 Hexon蛋白质

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