检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医科大学学报 2011年第11期40卷 961-963,978页

作者：顾卉佟宇鑫刘彤李慧李丹妮袁正伟中国医科大学附属盛京医院实验研究中心沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物教研室/细胞生物学教育部重点实验室/细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001 中国医科大学第94期临床医学系沈阳110001

目的:构建***01融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法:以人胎脑文库为模板,用PCR方法法扩增出LM01基因全长及各个截短突变体,通过BamHI和EcoRI酶切位点分别将其定向插入pGEX-5X-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-... 详细信息

目的:构建***01融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法:以人胎脑文库为模板,用PCR方法法扩增出LM01基因全长及各个截短突变体,通过BamHI和EcoRI酶切位点分别将其定向插入pGEX-5X-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-5x-2-LM01及其截短突变体,通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定正确后,转入***21中,经异丙基硫代B-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot鉴定。结果:酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5x-2-LM01及其截短突变体,并用Westernblot方法证实了GST-LM01全长及各个截短突变体融合蛋白的表达。结论:成功构建了LM01全长及其截短突变体原核表达载体,并证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为LM01结构与功能的研究提供了前提基础。

关键词：大肠杆菌谷胱甘肽转移酶基因表达突变限制性内切酶图谱法遗传载体原核细胞重组融合蛋白质类人类

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Aβ诱导脑微血管内皮细胞高表达MHC-I分子促进T淋巴细胞跨内皮迁移

Aβ诱导脑微血管内皮细胞高表达MHC-I分子促进T淋巴细胞跨内皮迁移

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：杨一鸣赵伟东方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

免疫炎性反应被认为阿尔茨海默病(AD)发病的重要环节。我们首次发现Aβ可以诱导脑微血管内皮细胞高表达MHC-I,促进T细胞跨内皮迁移。脑切片免疫荧光染色显示,AD模型大鼠脑微血管表达MHC-I高于对照组。收集经过Aβ作用后的小胶质细胞(BV2... 详细信息

免疫炎性反应被认为阿尔茨海默病(AD)发病的重要环节。我们首次发现Aβ可以诱导脑微血管内皮细胞高表达MHC-I,促进T细胞跨内皮迁移。脑切片免疫荧光染色显示,AD模型大鼠脑微血管表达MHC-I高于对照组。收集经过Aβ作用后的小胶质细胞(BV2)培养上清液,作用于血脑屏障的体外模型人脑微血管内皮细胞(HBMEC),可以使HBMEC的MHC-I表达明显升高。细胞迁移实验表明Aβ刺激BV2的培养上清液可以促进T细胞穿过HBMEC单层,而这种促进作用可以被MHC-I的中和抗体所阻断。细胞粘附实验显示上清液促进了T细胞对HBMEC的粘附,MHC-I中和抗体可以阻断这种粘附作用。RNA干扰HBMEC的MHC-I后得到相同的结论。为了进一步研究HBMEC中高表达MHC-I促进T细胞跨内皮迁移的机制,我们采用TNF-α中和抗体预处理经过Aβ作用的BV2上清液后,再使之作用于HBMEC,发现可以阻断MHC-I的表达上调。细胞迁移和粘附实验也表明TNF-α中和抗体抑制了T细胞迁移和粘附的增多。结论:AD脑内沉积的Aβ刺激小胶质细胞分泌TNF-α,诱导脑微血管内皮细胞高表达MHC-I分子,从而促进外周血T细胞粘附于脑微血管内皮并迁移进入脑实质。

关键词：阿尔茨海默病 Aβ TNF-α MHC-I T细胞

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PLGF/VEGFR-1介导小细胞肺癌细胞穿过血脑屏障转移入脑的研究

PLGF/VEGFR-1介导小细胞肺癌细胞穿过血脑屏障转移入脑的研究

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：李波王淳张一赵晓云刘永烁曹立业方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

小细胞肺癌脑转移具有发生时间早,恶性度高的特点,目前无有效的治疗手段。因此,探讨小细胞肺癌脑转移的分子机制对其防治具有重要的意义。我们研究发现,胎盘生长因子(placental growthfactor,PLGF)在小细胞肺癌组织中的表达与患者的TNM... 详细信息

小细胞肺癌脑转移具有发生时间早,恶性度高的特点,目前无有效的治疗手段。因此,探讨小细胞肺癌脑转移的分子机制对其防治具有重要的意义。我们研究发现,胎盘生长因子(placental growthfactor,PLGF)在小细胞肺癌组织中的表达与患者的TNM分期、淋巴结转移及生存与否相关(P<0.05);发生脑转移患者的肺部癌组织中PLGF的表达高于未发生脑转移的患者(P<0.05);在发生脑转移的小细胞肺癌患者的血清及脑转移癌组织中PLGF的表达明显高于未发生脑转移的患者(P<0.01),这提示PLGF与小细胞肺癌脑转移有关。利用体外血脑屏障模型研究发现,PLGF通过结合脑微血管内皮细胞上VEGFR-1受体,激活细胞内Rho/ROCK及下游的MAPK/ERK1/2信号,使内皮细胞间紧密连接结构蛋白occludin和claudin-5的丝氨酸/苏氨酸磷酸化水平增加,改变紧密连接的完整性,促进小细胞肺癌细胞穿过体外血脑屏障模型。进一步利用RNAi、构建激酶表达缺陷的脑内皮细胞及激酶抑制剂抑制试验验证了上述实验结果。这表明,小细胞肺癌细胞表达的PLGF与人脑微血管内皮细胞上VEGFR-1相互作用,激活内皮细胞中RhoA/ROCK-MAPK/ERK1/2信号,影响了细胞间紧密连接的完整性,促进小细胞肺癌细胞穿过血脑屏障迁移入脑。

关键词： PLGF VEGFR-1 小细胞肺癌血脑屏障脑转移

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脑微血管内皮细胞膜蛋白P190是大肠杆菌侵袭因子IbeB的受体

脑微血管内皮细胞膜蛋白P190是大肠杆菌侵袭因子IbeB的受体

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：刘东鑫赵伟东方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

大肠杆菌K1株(*** K1)是引起新生儿细菌性脑膜炎最常见的病原体之一。*** K1的外膜蛋白IbeB参与了*** K1侵袭人脑微血管内皮细胞(HBMEC)、穿过血脑屏障。我们利用酵母双杂交技术从HBMEC的cDNA文库中筛选到与IbeB相互作用的P190膜蛋白,... 详细信息

大肠杆菌K1株(*** K1)是引起新生儿细菌性脑膜炎最常见的病原体之一。*** K1的外膜蛋白IbeB参与了*** K1侵袭人脑微血管内皮细胞(HBMEC)、穿过血脑屏障。我们利用酵母双杂交技术从HBMEC的cDNA文库中筛选到与IbeB相互作用的P190膜蛋白,并确认了IbeB蛋白胞外段229-342aa能够与P190蛋白胞外段203-355aa发生相互作用。细菌基因敲除试验显示,*** K1的IbeB(229-342aa)与*** K1侵袭HBMEC相关。我们发现,在*** K1侵袭HBMEC时,HBMEC细胞膜上的P190蛋白明显增多并向细菌侵袭部位聚集。RNA干扰P190后,能明显减少*** K1对HBMEC的侵袭,且可以被表达全长P190所恢复(rescue);P190胞内段缺失突变后,明显减少了*** K1对HBMEC的侵袭。重组的P190(203-355aa)短肽与*** K1预先孵育后,能够显著降低*** K1侵袭进入HBMEC。进一步研究发现P190能够与粘着斑激酶(FAK)形成复合物,促使FAK发生磷酸化,参与P190介导的*** K1侵袭HBMEC的过程,而cPLA2、Src、Cdc42以及Rac1都不参与该过程。结论:HBMEC上的P190作为细菌IbeB蛋白的受体参与*** K1侵袭HRMEC。

关键词： HBMEC E.coli K1 P190 FAK

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血管内皮细胞生长因子受体1参与*** K1侵袭人脑微血管内皮细胞

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：赵伟东刘东鑫刘巍方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

从细胞分子水平探讨病原体与宿主细胞相互作用的机理逐渐成为细胞生物学领域的新兴热点。研究表明,新生儿细菌性脑膜炎最常见的革兰氏阴性致病菌是带有K1抗原的大肠杆菌(即***1),*** K1导致脑膜炎的前提条件是播散入血的*** K1能够穿过... 详细信息

从细胞分子水平探讨病原体与宿主细胞相互作用的机理逐渐成为细胞生物学领域的新兴热点。研究表明,新生儿细菌性脑膜炎最常见的革兰氏阴性致病菌是带有K1抗原的大肠杆菌(即***1),*** K1导致脑膜炎的前提条件是播散入血的*** K1能够穿过血脑屏障进入脑内。我们利用分离培养的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)构建了体外血脑屏障模型,在此基础上探讨*** K1侵袭血脑屏障的分子机制。我们首次发现,HBMEC上的血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR1)参与了***1侵袭HBMEC。VEGFR受体抑制剂和针对VEGFR1的siRNA可以明显阻断***1侵袭所导致的HBMEC肌动蛋白微丝的重排,并可抑制*** K1侵袭HBMEC。在*** K1侵袭HBMEC时,VEGFR1和*** K1有明显的共定位。VEGFR1能够与PI3K的p85亚单位形成复合物,导致PI3K下游的Akt的活化。此外,Src激酶作为PI3K/Akt上游的信号分子也参与了Ecoli K1侵袭HBMEC。这些结果进一步揭示了大肠杆菌侵袭血脑屏障的分子机制。

关键词：大肠杆菌K1株人脑微血管内皮细胞信号转导

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褪黑素可能通过DNA甲基化修饰机制拮抗可卡因奖赏效应

褪黑素可能通过DNA甲基化修饰机制拮抗可卡因奖赏效应

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：韦佳祎张海波何威中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

褪黑素能减弱可卡因依赖大鼠的药物渴求行为和改善吗啡依赖大鼠的戒断症状,但是其作用机制尚不十分清楚。我们的前期工作发现,褪黑素对大鼠可卡因奖赏效应的形成有抑制作用;褪黑素抑制可卡因诱导的前额叶皮质和纹状体的CDK5、BDNF的三... 详细信息

褪黑素能减弱可卡因依赖大鼠的药物渴求行为和改善吗啡依赖大鼠的戒断症状,但是其作用机制尚不十分清楚。我们的前期工作发现,褪黑素对大鼠可卡因奖赏效应的形成有抑制作用;褪黑素抑制可卡因诱导的前额叶皮质和纹状体的CDK5、BDNF的三型组蛋白的高乙酰化表达,提示组蛋白乙酰化修饰途径可能是褪黑素对可卡因抑制作用的机制之一。本研究应用条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)和共聚焦激光扫描显微镜技术等检测了褪黑素对大鼠可卡因奖赏效应的作用并初步探索了其DNA甲基化修饰机制。结果显示:褪黑素的小剂量、慢性给药可抑制可卡因奖赏效应的表达强度;可卡因诱导海马神经元5-甲基胞嘧啶的高表达,而褪黑素抑制这种高表达。海马是中枢奖赏通路中的重要结构,其不但向前额叶皮层有直接或间接的纤维投射,还通过谷氨酸能神经元和伏核有直接联系,在药物成瘾记忆和突触可塑性变化中发挥重要作用。我们的实验结果提示,DNA甲基化修饰机制可能是精神活性药物引起精神和行为变化的一个重要的调节机制。

关键词：褪黑素可卡因条件性位置偏爱 DNA甲基化

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小鼠3D3/LYRIC基因重组质粒构建及蛋白表达和定位

小鼠3D3/LYRIC基因重组质粒构建及蛋白表达和定位

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第六次中国国际暨第九次全国口腔颌面外科学术会议

作者：代炜李彦姝李妍孙长伏中国医科大学中国医科大学附属口腔医院口腔颌面外科教研室口腔颌面头颈外科中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室

目的:构建小鼠3D3/LYRIC真核表达载体并证实融合蛋白在涎腺腺样囊性癌细胞内的表达及定位。方法:提取小鼠乳腺上皮细胞系C127的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增m3D3/L,YRIC全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序... 详细信息

目的:构建小鼠3D3/LYRIC真核表达载体并证实融合蛋白在涎腺腺样囊性癌细胞内的表达及定位。方法:提取小鼠乳腺上皮细胞系C127的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增m3D3/L,YRIC全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人腺样囊性癌细胞ACC-2中,提取细胞蛋白进行Westernblot检测。利用免疫荧光显微镜观察

关键词： 3D3/LYRIC 涎腺腺样囊性癌 AEG-1

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EphA2受体参与维持脑微血管内皮细胞的紧密连接结构

EphA2受体参与维持脑微血管内皮细胞的紧密连接结构

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：赵伟东周娜梁悦方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

Eph受体与其配体ephrin参与调控多种生物学过程,如神经发育、血管发生和肿瘤生成等。目前,关于Eph受体与其配体ephrin在脑内皮细胞中的作用尚不清楚。我们利用分离培养的人脑微血管内皮细胞(HBMEC),检测了EphA受体和ephrin-A配体的表达... 详细信息

Eph受体与其配体ephrin参与调控多种生物学过程,如神经发育、血管发生和肿瘤生成等。目前,关于Eph受体与其配体ephrin在脑内皮细胞中的作用尚不清楚。我们利用分离培养的人脑微血管内皮细胞(HBMEC),检测了EphA受体和ephrin-A配体的表达谱,发现EphA1,2,3,4,6,7,10以及ephrin-A1,3,4,5在HBMEC中有表达。以重组ephrin-A1蛋白对HBMEC进行处理后,可以使HBMEC的EphA2受体发生明显的酪氨酸磷酸化,并使HBMEC单层的通透性升高,紧密连接蛋白ZO-1和occludin的分布发生改变(由连续、线状变为断续、紊乱)。RNA干扰HBMEC的EphA2后,可以改善HBMEC单层的通透性,并能促进紧密连接形成。将EphA2激酶缺失突变体转染至HBMEC后,也获得了与RNA干扰EphA2相似的结果。我们还发现,EphA2的功能失活后,可以削弱HBMEC的迁移能力,抑制HBMEC的血管生成能力。体内实验发现,EphA2特异性表达于脑微血管中。综上,我们认为EphA2受体是维持脑微血管内皮细胞紧密连接结构的重要分子。

关键词： EphA2受体脑微血管紧密连接血管生成

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hLMO3基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位

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解剖科学进展 2011年第4期17卷 347-350页

作者：顾卉佟宇鑫刘彤李妍李丹妮袁正伟中国医科大学附属盛京医院实验研究中心辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物教研室细胞生物学教育部卫生部重点实验室辽宁沈阳110001 中国医科大学临床医学系辽宁沈阳110001

目的构建hLMO3真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO3基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞HEK293细胞中,提取细胞蛋白进... 详细信息

目的构建hLMO3真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO3基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞HEK293细胞中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hLMO3在HEK293细胞内的定位。结果 hLMO3基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP中,酶切鉴定片段为440bp;Western blot检测到融合蛋白在HEK293细胞表达,分子量约为42kDa,pEGFP-LMO3在人HEK293细胞中主要定位于细胞核内。结论成功构建了hLMO3基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-LMO3蛋白在HEK293细胞中主要定位于细胞核内。

关键词： hLMO3基因质粒构建基因表达与定位人HEK293细胞

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构建具有学科特点的细胞生物学PBL教学模式

构建具有学科特点的细胞生物学PBL教学模式

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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：方瑾李丰张惠丹于敏王桂玲李想李晓东刘彤李妍邵阳光中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室医学细胞生物学教育部重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳 110001

以问题为基础学习(problem-based learning,PBL)的教学方法是目前发达国家普遍采用并被广泛认同的一种医学课程模式,它是将问题作为基本因素,将课程的内容相互联系起来,使学生在不断的提出问题和解决问题中完成教学内容的学习,并实现教... 详细信息

以问题为基础学习(problem-based learning,PBL)的教学方法是目前发达国家普遍采用并被广泛认同的一种医学课程模式,它是将问题作为基本因素,将课程的内容相互联系起来,使学生在不断的提出问题和解决问题中完成教学内容的学习,并实现教学思想和教学目标,这种方法在培养学生分析问题和解决问题的能力,培养学生自主学习能力,并养成终生学习习惯方面具有极大的促进作用。近20年,该方法得到了迅速的发展,并被广泛采用,已逐步形成了较为规范的基本教学过程并成为医学教学模式改革的大趋势。

关键词： PBL 细胞生物学教学模式

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