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宁夏地区汉族MTHFR基因C677T多态性与男性无精和严重少弱精的相关性分析

宁夏医科大学学报 2011年第7期33卷 625-628页

作者：邱晓峰胡小平李元杰党洁彭亮徐仙李永丽焦海燕宁夏医科大学总医院泌尿外科银川750001 生育力保持省部共建教育部重点实验室宁夏回族自治区生殖与遗传重点实验室银川750004 宁夏医科大学基础医学院医学遗传学与细胞生物学教研室银川750004 宁夏医科大学总医院生殖中心银川750001

目的研究宁夏地区汉族人群5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)C677T多态性与男性不育患者无精和严重少弱精的相关性。方法采用病例-对照研究方法,应用限制性片段长度多态性扩增技术(PCR-RFLP)分析宁夏地区汉族271例男性不育患者(其... 详细信息

目的研究宁夏地区汉族人群5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)C677T多态性与男性不育患者无精和严重少弱精的相关性。方法采用病例-对照研究方法,应用限制性片段长度多态性扩增技术(PCR-RFLP)分析宁夏地区汉族271例男性不育患者(其中无精患者158例、严重少弱精患者113例)和180例正常男性的MTHFR C677T等位基因频率及基因型分布特点。结果①不育患者与正常对照组MTH-FR C677T的各基因型分别为CC 27.7%vs 35.0%、CT 41.3%vs 47.2%和TT 31.0%vs 17.8%,两组间基因型分布及等位基因频率差异有统计学意义(P<0.01)。②将不育患者分为无精患者组和严重少弱精患者组后,两组MTHFR C677T基因型分布均仍与正常对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MTHFR C677T多态性可能是宁夏汉族男性不育的易感性风险因素。

关键词：无精症严重少弱精症 5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性

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非衍生-气相色谱-串联质谱法测定乳制品中三聚氰胺

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河北省科学院学报 2011年第4期28卷 26-28,31页

作者：宋晓立张岩吕品李强河北省食品质量监督检验研究院河北省食品安全重点实验室河北石家庄050091 河北医科大学河北省法医学重点实验室河北石家庄050017 河北医科大学基础医学院细胞生物学教研室河北石家庄050017

应用气相色谱-串联质谱仪(GC-MS/MS),建立了乳制品中三聚氰胺的非衍生检测方法。样品采用乙腈-水溶液提取,经MCX固相萃取柱进行净化和富集后,用GC-MS/MS检测,多反应监测(MRM)模式下进行定性、定量分析。结果表明:三聚氰胺在0～10mg/kg... 详细信息

应用气相色谱-串联质谱仪(GC-MS/MS),建立了乳制品中三聚氰胺的非衍生检测方法。样品采用乙腈-水溶液提取,经MCX固相萃取柱进行净化和富集后,用GC-MS/MS检测,多反应监测(MRM)模式下进行定性、定量分析。结果表明:三聚氰胺在0～10mg/kg的线性范围内具有良好的线性关系,方法检出限(LOD)为0.005mg/kg,三聚氰胺的平均回收率在88.7%～100.6%之间,相对标准偏差在2.7%～8.6%之间。本方法可用于乳制品中三聚氰胺含量的测定。

关键词：气相色谱-串联质谱非衍生乳制品三聚氰胺

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限制性片段长度多态性结合微流控芯片电泳检测大肠癌K-ras基因点突变

限制性片段长度多态性结合微流控芯片电泳检测大肠癌K-ras基因点...

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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：张惠丹宋瑾任辉徐章润王晓楠方瑾中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室医学细胞生物学教育部重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳 110001 沈阳市肛肠医院大肠外科沈阳 110002 东北大学分析科学研究中心沈阳 110004

目的 K-ras基因点突变发生于早期腺瘤向中期腺瘤的转变阶段,可能是大肠癌恶变的始动基因.微流控芯片技术是近年迅速发展起来的新的微型分析系统,具有微型化、自动化、集成化及便携化的特点.本研究以K-ras基因点突变作为检测对象,将限制... 详细信息

目的 K-ras基因点突变发生于早期腺瘤向中期腺瘤的转变阶段,可能是大肠癌恶变的始动基因.微流控芯片技术是近年迅速发展起来的新的微型分析系统,具有微型化、自动化、集成化及便携化的特点.本研究以K-ras基因点突变作为检测对象,将限制性片段长度多态性(RFLP)与微流控芯片相结合,建立将样品进样、分离、检测和记录等步骤连续自动处理的基因突变检测平台.方法 PCR扩增含有K-ras基因第一外显子的第12位密码子的片段,并进行Mva Ⅰ酶切,酶切产物以微流控电泳系统进行检测.采用光刻及高温封接技术制作通道为十字交叉形的玻璃微流控芯片,结合激光诱导荧光检测系统,建立微流控毛细管电泳技术平台.采用该平台对6种已知突变类型的大肠癌细胞系及98例大肠癌石蜡包埋组织中的K-ras基因突变进行检测.同时将大肠癌K-ras基因野生型细胞株HT29和纯合突变细胞株SW480以不同比例混合,研究系统的检测灵敏度.结果 RFLP结合微流控芯片电泳平台可在5 min内实现对K-ras基因的高效检测,6种大肠癌细胞系中K-ras基因的纯合突变、杂合突变及野生型均被准确检出.对不同比例野生型/纯合突变型混合细胞的检测显示系统的检测灵敏度可达1/10 000.该系统对98例石蜡包埋组织标本中K-ras的突变检出率为28.6％(28/98),显著高于测序的检出率13.3％(13/98).结论本研究建立的RFLP结合微流控芯片电泳平台能够对K-ras基因突变进行高效检测,具有灵敏度高、特异性强、快速和低成本等优势,为快速进行肿瘤基因突变筛查及早期诊断提供了新的技术平台.

关键词：微流控芯片限制性片段长度多态性大肠癌 K-ras基因点突变

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散发性乳腺癌组织中BRCA1选择性调节黄体酮受体A的表达

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中华医学杂志 2010年第20期90卷 1399-1402页

作者：王辛赵彤赵嘉佳熊静波南方医科大学基础医学院病理学系广州510515 南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室

目的观察散发性乳腺癌组织中BRCA1、黄体酮受体A（progesterone receptor A,PRA）和黄体酮受体B（progesterone receptor B,PRB）的表达,并分析散发性乳腺癌BRCA1对PRA和PRB表达的影响.方法选择南方医科大学附属南方医院病理科乳腺腺... 详细信息

目的观察散发性乳腺癌组织中BRCA1、黄体酮受体A（progesterone receptor A,PRA）和黄体酮受体B（progesterone receptor B,PRB）的表达,并分析散发性乳腺癌BRCA1对PRA和PRB表达的影响.方法选择南方医科大学附属南方医院病理科乳腺腺病和散发性浸润性乳腺导管癌病例蜡块包埋组织各68例,应用免疫组织化学法检测散发性浸润性乳腺导管癌组织BRCA1、PRA和PRB蛋白及乳腺腺病组织BRCA1蛋白的表达,用Wilcoxon两样本检验比较浸润性导管癌和乳腺腺病BRCA1表达的高低,用x2检验分析浸润性导管癌BRCA1对PRA和PRB表达的影响.结果（1）浸润性导管癌组织BRCA1蛋白阳性表达率为60.3%（41/68）,低于乳腺腺病BRCA1蛋白阳性表达率85.3%（58/68）,两者之间差异有统计学意义（P〈0.01）;（2）浸润性导管癌组织中,BRCA1表达阴性标本PRA的阳性率为81.5%（22/27）,高于BRCA1表达阳性标本PRA的阳性率53.7%（22/47）,差异有统计学意义（P〈0.05）,提示BRCA1可影响PRA的表达.浸润性导管癌组织中PRB的表达率在BRCA1表达阳性标本与表达阴性标本之间差异无统计学意义（P〉0.05）,提示BRCA1不影响PRB的表达.结论在散发性乳腺癌组织中,BRCA1表达阴性选择性地与PRA的高表达相关联,但与PRB表达率不相关联,提示BRCA1在散发性乳腺癌组织中选择性地调节PRA的表达.

关键词：乳腺肿瘤 BRCA1基因黄体酮受体

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斑马鱼红系造血缺陷突变体的正向遗传学筛选

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南方医科大学学报 2010年第5期30卷 931-935页

作者：霍中军温宗华刘靖王鹍黄志斌戴朝霞马宁颜广陈英华陈小辉刘伟马品芸罗伟豪赵颖樊淑赵嘉佳黄红辉温子龙张文清南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 南方医科大学基础医学院病理学教研室广东广州510515 南方医科大学基础医学院病组织胚胎学教研室广东广州510515 南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室广东广州510515 香港科技大学生化系香港

目的化学遗传学方法大规模筛选并初步鉴定所获得具有不同红系造血缺陷表型的斑马鱼突变体。方法乙基亚硝基脲(ENU)诱导雄性斑马鱼突变(founder),将其与野生型AB雌性斑马鱼交配产生F1代,源自不同来源的founder的F1代杂交产生F2家族。在F... 详细信息

目的化学遗传学方法大规模筛选并初步鉴定所获得具有不同红系造血缺陷表型的斑马鱼突变体。方法乙基亚硝基脲(ENU)诱导雄性斑马鱼突变(founder),将其与野生型AB雌性斑马鱼交配产生F1代,源自不同来源的founder的F1代杂交产生F2家族。在F2代同家族内自交所产生的F3代胚胎中,用以βe1为探针,实施整体原位杂交实验,进行红系造血缺陷突变体筛选,并针对所筛选到的突变体在不同造血过程缺陷表型进行分类研究。结果和结论筛选得到4个βe1基因表达缺失突变体,其中2个为红系特异性造血缺陷突变体,另外2个突变体同时存在红系和淋系造血缺陷。

关键词：斑马鱼红系造血正向遗传学筛选 βe1-globin

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斑马鱼髓系造血细胞缺陷突变体的大规模遗传筛选

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南方医科大学学报 2010年第6期30卷 1230-1233页

作者：戴朝霞颜广陈英华刘伟霍中军温宗华刘靖王鹍黄志斌马宁陈小辉马品芸罗伟豪赵颖樊淑黄红辉温子龙张文清南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515 南方医科大学基础医学院组织胚胎学教研室广东广州510515 南方医科大学基础医学院病理学教研室广东广州510515 南方医科大学基础医学院医学遗传学教研室广东广州510515 香港科技大学生化系

目的通过大规模化学遗传学方法筛选斑马鱼髓系造血缺陷突变体。方法利用化学诱变剂乙基亚硝基脲(ENU)将雄鱼精原母细胞诱变,通过与AB野生型雌性斑马鱼交配产生F1代,源自不同founder(F0)的F1代同胞之间交配产生F2家族,F3代来F2家族同胞... 详细信息

目的通过大规模化学遗传学方法筛选斑马鱼髓系造血缺陷突变体。方法利用化学诱变剂乙基亚硝基脲(ENU)将雄鱼精原母细胞诱变,通过与AB野生型雌性斑马鱼交配产生F1代,源自不同founder(F0)的F1代同胞之间交配产生F2家族,F3代来F2家族同胞内交配,并分别以中性红和苏丹黑B染色筛选巨噬细胞和粒细胞缺陷突变体。结果我们筛选了350个F2家族,共1424对鱼。初步筛选到6个斑马鱼髓系造血系统的突变体,其中3个突变体为中性红染色异常,另3个突变体为苏丹黑染色异常,表明以上突变体可能存在巨噬细胞或粒细胞的发育障碍。结论 ENU化学诱变和中性红及苏丹黑B染色筛选斑马鱼髓系造血缺陷突变体是简单、价廉、有效的化学遗传学方法。通过保留突变体对后代进行进一步的研究分析,有望鉴定和克隆影响斑马鱼髓系造血新的基因或已知基因的新的调控途径。

关键词：斑马鱼髓系造血正向遗传学筛选苏丹黑中性红

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转化生长因子β1对口腔鳞状细胞癌脑转移细胞系Tb细胞生长抑制作用的研究

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中华口腔医学杂志 2010年第7期45卷 421-425页

作者：刘成敏张成仁王秀梅徐旭光傅松滨哈尔滨医科大学附属第二医院口腔科 150086 哈尔滨医科大学基础医学院遗传学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室

目的探讨转化生长因子（transforming growth factor,TGF）β1对口腔鳞状细胞癌脑转移细胞系Tb细胞的生长抑制作用及可能的机制.方法采用细胞计数法检测TGF-β1对Tb细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期的变化,微阵列分析法（su... 详细信息

目的探讨转化生长因子（transforming growth factor,TGF）β1对口腔鳞状细胞癌脑转移细胞系Tb细胞的生长抑制作用及可能的机制.方法采用细胞计数法检测TGF-β1对Tb细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期的变化,微阵列分析法（superarray）筛查smad蛋白介导的TGF-B（TGF-β-Smads）信号通路中基因表达水平的变化,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）验证差异表达基因.结果 TGF-β1对Tb细胞有明显的生长抑制作用（P〈0.05）.流式细胞仪检测显示,TGF-β1能够使Tb细胞周期阻滞于G1期（P〈0.05）.微阵列分析法筛查结果显示,TGF-β1作用后,活化素受体样激酶1（activin receptor-like kinase-1,ACVRL-1）、抗苗勒激素（anti-mullerian hirmine,AMH）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2B（cyclim-dependent kinase inhibitor-2B,CDKN-2B）、TGF-相互作用因子（indnced factor,TGIF）基因表达增加,而畸形肿瘤衍生生长因子1（teratocarcinomaderived growth factor-1,TDGF-1）基因表达降低.RT-PCR验证结果表明,ACVR-1（0.67±0.08）、CDKN-2B基因表达（2.16±0.95）与微阵列分析法结果一致,差异有统计学意义（P〈0.05）,AMH（0.38±0.07）、TDGF-1（0.44±0.06）及TGIF（0.52±0.10）基因表达水平无统计学意义（P〉0.05）.结论 TGF±β1对口腔鳞状细胞癌脑转移细胞系Tb细胞有明显的生长抑制作用,其机制可能与细胞周期调控及调节TGF-β1-Smads信号通路中ACVRL-1、CDKN-2B基因表达有关.

关键词：转化生长因子β1 癌鳞状细胞基因表达

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pCAGGs-miR-483重组质粒构建及miR-483转基因小鼠模型的建立

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中国生物化学与分子生物学报 2010年第5期26卷 478-483页

作者：马宁王曦迪乔瑜李福源杨宝峰吕延杰单宏丽郑晓飞高旭哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150086 哈尔滨医科大学药学院药理学教研室哈尔滨150086 北京放射与辐射医学研究所北京100850

miR-483是近年发现的一种编码于胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor2,Igf2)基因第2内含子的microRNA.研究表明,高脂饮食诱导的肥胖动物的心脏、肝脏及肝、肾肿瘤组织中miR-483表达异常,但其生物学功能尚待研究.建立稳定表达m... 详细信息

miR-483是近年发现的一种编码于胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor2,Igf2)基因第2内含子的microRNA.研究表明,高脂饮食诱导的肥胖动物的心脏、肝脏及肝、肾肿瘤组织中miR-483表达异常,但其生物学功能尚待研究.建立稳定表达miR-483并能够传代的miR-483转基因小鼠是研究其功能的重要环节.利用特异miR-483克隆引物,以小鼠基因组为模版,经PCR获得pre-miR-483片段,通过重组构建pCAGG-miR-483重组质粒.该质粒可在真核细胞中稳定表达成熟miR-483.再利用原核显微注射法建立miR-483过表达转基因小鼠.利用实时PCR检测各组织miR-483含量.结果显示,miR-483转基因小鼠心肌、骨骼肌、肝脏等组织可过表达成熟miR-483.此外,miR-483转基因过表达小鼠较野生型小鼠体重降低,提示miR-483可能在发育、代谢等方面具有调节作用.miR-483转基因小鼠模型的建立为microRNA功能研究提供了在体研究的平台.

关键词：内含子microRNA 转基因小鼠宿主基因

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IL-12基因联合吡柔比星治疗裸鼠膀胱癌移植瘤的实验

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肿瘤防治研究 2010年第11期37卷 1241-1244页

作者：王凤岐赵维明张诚金承俊张子健钟照华修有成哈尔滨医科大学附属第一医院泌尿外科哈尔滨150010 哈尔滨医科大学基础医学院微生物教研室

目的探讨联合应用白细胞介素12(IL-12)质粒和吡柔比星(THP)对人膀胱癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法将人EJ膀胱癌细胞株裸鼠腋下接种,成瘤后设4组(每组6只):联合组于骨骼肌注射IL-12真核表达质粒pcAGGS-mIL-12和腹腔注射THP;IL-12组... 详细信息

目的探讨联合应用白细胞介素12(IL-12)质粒和吡柔比星(THP)对人膀胱癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法将人EJ膀胱癌细胞株裸鼠腋下接种,成瘤后设4组(每组6只):联合组于骨骼肌注射IL-12真核表达质粒pcAGGS-mIL-12和腹腔注射THP;IL-12组骨骼肌注射pcAGGS-mIL-12;THP组腹腔注射THP;对照组肌肉及腹腔注射0.9%氯化钠溶液,以上注射每周2次,共4次。观察各组裸鼠肿瘤大小变化。4周后处死荷瘤鼠。免疫组织化学法检测肿瘤内VEGF表达。ELISA法测定血液及肿瘤组织中IL-12和γ-干扰素(IFN-γ)的表达。结果联合组肿瘤生长明显抑制,瘤重及体积明显小于其他组。ELISA法表明IL-12组和联合组IL-12和IFN-γ都高表达。免疫组织化学法表明联合组VEGF基因表达量明显低于其他组(P<0.05)。结论联合应用IL-12真核表达质粒pCAGGS-mIL-12和THP,对人膀胱癌裸鼠移植瘤的抑制作用明显强于单独应用IL-12和THP。

关键词：膀胱癌白细胞介素-12 吡柔比星基因治疗

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乳腺癌腋窝淋巴结转移与癌组织雌激素受体、黄体酮受体、Her-2表达的相关性分析

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解放军医学杂志 2010年第8期35卷 1010-1012页

作者：王辛赵彤梁文颖熊静波南方医科大学基础医学院病理学系广州510515 南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室广州510515

目的研究不同年龄乳腺癌患者腋窝淋巴结转移率与雌激素受体(ER)、黄体酮受体(PR)和Her-2表达的关系。方法回顾性分析259例乳腺癌的临床病理资料,按年龄分成老年组(>60岁)、中年组(36～60岁)和青年组(≤35岁),采用χ2检验分析不同年... 详细信息

目的研究不同年龄乳腺癌患者腋窝淋巴结转移率与雌激素受体(ER)、黄体酮受体(PR)和Her-2表达的关系。方法回顾性分析259例乳腺癌的临床病理资料,按年龄分成老年组(>60岁)、中年组(36～60岁)和青年组(≤35岁),采用χ2检验分析不同年龄组腋窝淋巴结转移率、ER、PR和Her-2表达率的差异。结果青年组乳腺癌腋窝淋巴结转移率虽高于中、老年组,但差异无统计学意义(P>0.05)。青年组ER表达率低于中、老年组(P<0.05)。青年组PR阳性率低于中、老年组,但各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。青年组Her-2阳性率高于中年组(P<0.05)。结论青年乳腺癌的高腋窝淋巴结转移率与ER低表达和Her-2高表达同时出现,提示前者可能与后二者相关联。

关键词：乳腺肿瘤发病年龄淋巴转移 Her-2受体

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