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中国药理学与毒理学杂志 2017年第6期31卷 491-502页

作者：邢宇刘鑫林园张勇哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地心血管药物研究教育部重点实验室哈尔滨医科大学基础医学院哈尔滨医科大学中俄医学研究中心代谢疾病研究所黑龙江省医学科学院

小檗碱是从传统中药黄连和黄柏中提取出的一种异喹啉类生物碱,在我国拥有悠久的药用历史。小檗碱具有多种药理作用,包括抗病原微生物、抗炎、抗肿瘤、心脏保护、降血糖、调节脂质代谢以及免疫抑制等。多年以来,小檗碱用于肠道感染性疾... 详细信息

小檗碱是从传统中药黄连和黄柏中提取出的一种异喹啉类生物碱,在我国拥有悠久的药用历史。小檗碱具有多种药理作用,包括抗病原微生物、抗炎、抗肿瘤、心脏保护、降血糖、调节脂质代谢以及免疫抑制等。多年以来,小檗碱用于肠道感染性疾病的治疗取得显著疗效。近年来,随着研究的不断进展,其临床应用潜力不断被开发,对心血管系统疾病、代谢综合征及其并发症、肿瘤、腹腔黏连和沙眼衣原体感染等均具有较好的效果。本文针对小檗碱多方面的药理作用、分子机制及临床应用现状进行梳理总结,为小檗碱的临床应用和推广提供参考。

关键词：小檗碱抗炎抗病原微生物抗肿瘤心脏保护降血糖降血脂免疫抑制

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腹腔黏连病理生理机制及治疗研究现状

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中国现代应用药学 2017年第7期34卷 1057-1061页

作者：刘鑫李婧白雪张勇黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学药学院药理教研室哈尔滨医科大学中俄医学研究中心代谢疾病研究所哈尔滨150081 哈尔滨医科大学基础医学院哈尔滨150081

腹腔黏连是纤维结缔组织将腹膜与腹腔器官、腹膜之间、腹腔器官之间异常连接的一种病理现象,是腹部手术后常见并发症。然而腹腔黏连发生的病理生理机制尚不清楚,可能为多种机制共同作用的结果,主要包括:脉管壁受损和腹膜间皮层损害、炎... 详细信息

腹腔黏连是纤维结缔组织将腹膜与腹腔器官、腹膜之间、腹腔器官之间异常连接的一种病理现象,是腹部手术后常见并发症。然而腹腔黏连发生的病理生理机制尚不清楚,可能为多种机制共同作用的结果,主要包括:脉管壁受损和腹膜间皮层损害、炎症反应、缺血缺氧、免疫反应。目前临床采用的各种治疗方法如:手术方式的改进,放置生物膜屏障及治疗药物均效果不佳、局限性大。了解腹腔黏连发生的病理生理机制、分析现有研究治疗利弊对于发现新的药物靶点和有效的治疗措施有重要意义。

关键词：腹腔黏连间皮损伤炎症反应缺血缺氧免疫反应

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丝氨酸蛋白酶抑制剂PN-1的研究进展

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现代生物医学进展 2017年第5期17卷 989-992页

作者：郭振丰李天时其力木格周婉祎李雪连哈尔滨医科大学药理教研室黑龙江哈尔滨150081 内蒙古民族大学第二临床医学院内蒙古林业总医院内蒙古牙克石022150 心血管药物研究教育部重点实验室黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081

丝氨酸蛋白酶抑制剂PN-1,由SERPINE2基因编码,是丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族中的一员,是由多种细胞分泌的单链糖蛋白。PN-1在血浆中表达很少,但在多种器官和细胞类型中均有发现,在许多生物事件中发挥着重要的调节作用。PN-1在血液凝结、... 详细信息

丝氨酸蛋白酶抑制剂PN-1,由SERPINE2基因编码,是丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族中的一员,是由多种细胞分泌的单链糖蛋白。PN-1在血浆中表达很少,但在多种器官和细胞类型中均有发现,在许多生物事件中发挥着重要的调节作用。PN-1在血液凝结、免疫反应、纤溶、血管发生、炎症和肿瘤抑制等一系列生理病理过程中发挥着重要作用。近年来对PN-1的研究,日益受到人们的关注,本文将主要综述PN-1在循环系统、肿瘤、神经系统以及肺部相关疾病中的最新研究进展及作用。

关键词：蛋白连接酶-1 丝氨酸蛋白酶抑制剂肿瘤神经肺部相关疾病

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丹参酮ⅡA调节microRNA-1保护缺氧心肌细胞的作用研究

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现代生物医学进展 2014年第28期14卷 5463-5467页

作者：李雪连关会林王璐郭瑞赵丹丹郭振丰张佳琳单宏丽哈尔滨医科大学药理教研室黑龙江哈尔滨150081 心血管药物研究教育部重点实验室黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081 牡丹江医学院黑龙江牡丹江157011

目的:研究丹参酮Ⅱ A(TanshinoneⅡA)通过调节microRNA-1抗心肌细胞缺氧损伤的作用。方法:原代培养新生大鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧模型。MTT法检测心肌细胞存活率(%);TUNEL、流式细胞术测心肌细胞凋亡率;激光共聚焦检测心肌细胞内... 详细信息

目的:研究丹参酮Ⅱ A(TanshinoneⅡA)通过调节microRNA-1抗心肌细胞缺氧损伤的作用。方法:原代培养新生大鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧模型。MTT法检测心肌细胞存活率(%);TUNEL、流式细胞术测心肌细胞凋亡率;激光共聚焦检测心肌细胞内钙离子[Ca2+]i浓度的变化情况。结果:MTT结果显示丹参酮ⅡA对缺氧心肌细胞及过表达miR-1引起心肌细胞损伤具有保护作用。丹参酮ⅡA增加了缺氧心肌细胞的存活率(P<0.05),同时给予丹参酮ⅡA和miR-1组与单独miR-1损伤组相比较,存活率也明显升高,呈现剂量依赖性。TUNEL结果显示丹参酮ⅡA可以抑制缺氧诱导的细胞凋亡,丹参酮ⅡA可以明显降低由缺氧导致的细胞凋亡率(P<0.05)。共聚焦检测结果显示,缺氧损伤的心肌细胞内[Ca2+]i显著升高1322.72±5.16(vs正常对照组,P<0.05),丹参酮ⅡA则有效抑制由缺氧引起过高的[Ca2+]i。miR-1诱导的细胞内[Ca2+]i升高至1349.33±62.63,约为正常对照组的1.96倍,而丹参酮ⅡA则有效抑制胞内过高的[Ca2+]i,从而发挥心肌保护作用。结论:丹参酮ⅡA可能是通过抑制胞内miR-1的表达,参与对钙离子浓度的调控,发挥其对心肌细胞的保护作用。

关键词：丹参酮ⅡA 缺氧心肌细胞 miR-1 细胞内钙细胞凋亡

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mdr1基因转染的CIK细胞耐药性及杀伤活性的研究

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免疫学杂志 2010年第6期26卷 469-472页

作者：李淑艳师岩裴春颖刘兴汉黑龙江省齐齐哈尔医学院生化教研室齐齐哈尔161006 哈尔滨医科大学免疫教研室哈尔滨150086 黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨150086

目的:将多药耐药基因(mdr1)转入CIK细胞,观察转染前后其对紫杉醇的耐药性及对Lewis肺癌细胞杀伤活性的影响。方法:常规方法:培养CIK细胞,在细胞对数生长期,将mdr1的重组质粒转染CIK,通过RT-PCR鉴定耐药基因表达;MTT法检测CIK细胞对紫杉... 详细信息

目的:将多药耐药基因(mdr1)转入CIK细胞,观察转染前后其对紫杉醇的耐药性及对Lewis肺癌细胞杀伤活性的影响。方法:常规方法:培养CIK细胞,在细胞对数生长期,将mdr1的重组质粒转染CIK,通过RT-PCR鉴定耐药基因表达;MTT法检测CIK细胞对紫杉醇敏感性的变化,同时检测转染前后CIK细胞对Lewis肺癌细胞的杀伤活性变化;Western blot检测细胞中mdr1编码的P-gp蛋白的表达的变化;通过计算瘤重抑制率(TWI)检测转染前后的CIK细胞对Lewis肺癌移植瘤的抑制作用。结果:转染mdr1后的CIK细胞mdr1 mRNA阳性,同时P-gp的表达较转染前及转染空质粒的CIK细胞均有显著增高(P<0.05),转染后的CIK细胞对紫杉醇的耐药性有显著提高,但对Lewis肺癌细胞的杀伤活性无明显变化(P>0.05)。结论:将mdr1基因转入CIK细胞后,细胞获得了多药耐药性,同时保持了原有的对肿瘤细胞的杀伤活性。

关键词：细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkiller,CIK) mdr1 多药耐药基因转染

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重组肿瘤抑素血管生成抑制相关肽对裸鼠移植性卵巢癌的抑制作用

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中华肿瘤杂志 2008年第3期30卷 170-173页

作者：张广美隋丽华贾彤赵育帧付松滨刘兴汉于雁哈尔滨医科大学附属第一临床医学院妇产科 150001 哈尔滨医科大学附属第三临床医学院妇科黑龙江中医药大学妇科哈尔滨医科大学基础医学院黑龙江省生物医药工程重点实验室.省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学附属肿瘤医院内科

目的观察肿瘤抑素改造后所得血管生成抑制相关肽（21肽）的抗血管生成活性及对裸鼠移植卵巢癌的抑制作用。方法用亲和层析法纯化21肽。观察接种SKOV，细胞系的裸鼠经21肽治疗后的肿瘤生长情况，检测21肽对肿瘤组织的微血管密度和免疫组... 详细信息

目的观察肿瘤抑素改造后所得血管生成抑制相关肽（21肽）的抗血管生成活性及对裸鼠移植卵巢癌的抑制作用。方法用亲和层析法纯化21肽。观察接种SKOV，细胞系的裸鼠经21肽治疗后的肿瘤生长情况，检测21肽对肿瘤组织的微血管密度和免疫组织化学指标的影响。结果经21d的治疗后，21肽组平均抑瘤率可达53．17％。21肽组肿瘤组织微血管密度（CD34表达）为6．324±1.643，与对照组（16．127±2．535）比较明显降低（P〈0．05）。21肽组肿瘤组织的增殖细胞核抗原（PCNA）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）呈低表达（P〈0．01），而基质金属蛋白酶抑制因子2（TIMP-2）呈高表达（P〈0．01）。结论21肽具有显著的抗血管生成活性，对卵巢癌具有较好的抑制作用，其抑制卵巢癌的作用机制可能与其降低新生血管形成和调解血管生成相关因子的表达有关。

关键词：卵巢肿瘤肿瘤抑素 21肽微血管密度血管内皮生长因子

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抗菌肽SMAP-29衍生物的原核表达及纯化

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哈尔滨医科大学学报 2008年第6期42卷 563-567页

作者：肇晓光马洪星张宇雯董兴丽刘兴汉哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学第五临医学院检验科黑龙江大庆163311 大庆油田总医院检验科黑龙江大庆163001

目的利用大肠杆菌表达系统表达具有抗菌活性的SMAP-29衍生物,一步亲和层析法进行纯化。方法化学合成经改造的抗菌肽SMAP-29衍生物,纸片扩散法检测抗菌活性后,人工并用合成抗菌肽SMAP-29衍生物基因序列,克隆到表达载体pTYB11上,转化大肠... 详细信息

目的利用大肠杆菌表达系统表达具有抗菌活性的SMAP-29衍生物,一步亲和层析法进行纯化。方法化学合成经改造的抗菌肽SMAP-29衍生物,纸片扩散法检测抗菌活性后,人工并用合成抗菌肽SMAP-29衍生物基因序列,克隆到表达载体pTYB11上,转化大肠埃希菌BL-21(DE3),酶切和测序鉴定后,用异硫代β-D-半乳糖昔(isopropylβ-D-thiogalactoside IPTG)诱导表达融合蛋白。经几丁质亲和层析柱纯化。结果化学合成的抗菌肽SMAP-29衍生物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌具有一定的抑菌作用,SMAP-29衍生物的编码基因按正确方向和序列插入表达载体,融合蛋白的表达量达到大肠杆菌蛋白总量的40%,几丁质亲和层析后获得了可溶性SMAP-29衍生物。结论成功构建了以融合蛋白形式表达的抗菌肽SMAP-29衍生物大肠杆菌基因工程菌,克服了抗菌肽对宿主菌的毒性,实现了用大肠杆菌高效表达和一步亲和层析纯化,为进一步检测活性及临床应用奠定了基础。

关键词：抗菌肽 SMAP-29衍生物改造原核表达纯化

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抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第2期23卷 148-151页

作者：武正华唐晓波王志刚纪宏宇于磊刘慧文朱大岭哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室哈尔滨医科大学附属二院药学部哈尔滨医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室哈尔滨医科大学黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150086

目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。... 详细信息

目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,以Westernblot鉴定mAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptidemassfingerprint,PMF),再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原。结果获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系。杂交瘤细胞分泌的mAbIg的亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7。Westernblot分析显示,在Mr为62000处有1条清晰的带。免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合。该mAb免疫沉淀物的Mr为62000,与hCE-Ⅱ的Mr相符。对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ。结论制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。

关键词：人羧酸酯酶-Ⅱ 单克隆抗体基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱

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中国实用妇科与产科杂志 2007年第6期23卷 427-429页

作者：张广美隋丽华郑建华赵育帧刘兴汉哈尔滨医科大学附属第一临床医学院妇产科黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学附属第三临床医学院黑龙江哈尔滨150040 尔滨医科大学基础医学院黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150086

目的研究改造后的血管生成抑制相关肽(21肽)抗血管生成活性及对人宫颈癌Hela细胞皮下移植裸鼠模型的抑制作用,探讨其抑瘤作用机制。方法2005年8月至2006年2月哈尔滨医科大学第一临床医学院进行Hela细胞株皮下接种裸鼠造模,21肽治疗3周后... 详细信息

目的研究改造后的血管生成抑制相关肽(21肽)抗血管生成活性及对人宫颈癌Hela细胞皮下移植裸鼠模型的抑制作用,探讨其抑瘤作用机制。方法2005年8月至2006年2月哈尔滨医科大学第一临床医学院进行Hela细胞株皮下接种裸鼠造模,21肽治疗3周后,处死动物剥离肿瘤,称重并计算抑瘤率。免疫组化方法检测21肽对肿瘤组织的微血管密度(MVD)、增殖细胞核抗原(PCNA)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。结果21肽组平均抑瘤率可达51.89%,肿瘤组织微血管密度明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);21肽组肿瘤组织的PCNA、VEGF呈低表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论21肽具有显著的抗血管生成活性,可明显地抑制裸鼠宫颈癌细胞的生长,其抑制宫颈癌的作用机制可能与其降低新生血管形成和调解血管生成相关因子的表达有关。

关键词：宫颈癌肿瘤抑素 21肽肿瘤细胞增殖核抗原血管内皮细胞生长因子微血管密度

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TAT-凋亡素基因重组质粒的构建、蛋白的表达纯化及体内活性实验

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国际遗传学杂志 2006年第6期29卷 411-415页

作者：郑天虎陶站华刘兴汉哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地 150081 哈尔滨

目的构建TAT-凋亡素(TAT-Apoptin)质粒并提取融合蛋白,为进一步研究该蛋白功能奠定基础。方法PCR合成TAT-Apoptin基因,与pTYB2质粒连接后转入Rosetta菌,经IPTG诱导表达,几丁质亲和层析一步纯化目的蛋白,用昆明小鼠H22动物模型检测活性... 详细信息

目的构建TAT-凋亡素(TAT-Apoptin)质粒并提取融合蛋白,为进一步研究该蛋白功能奠定基础。方法PCR合成TAT-Apoptin基因,与pTYB2质粒连接后转入Rosetta菌,经IPTG诱导表达,几丁质亲和层析一步纯化目的蛋白,用昆明小鼠H22动物模型检测活性。结果克隆载体经过PCR筛选、测序鉴定,其核苷酸片段长度和序列与预期序列相符,诱导后融合蛋白出现在上清中,纯化出的TAT-Apoptin蛋白具有明显的抗肿瘤活性。结论该实验所构建的重组质粒pTYB2／TAT-Apoptin经诱导表达出了可溶性目的蛋白TAT-Apoptin,纯化后具有明显的生物活性,为TAT-Apoptin蛋白的进一步研究奠定了基础。

关键词： TAT-凋亡素基因重组纯化几丁质亲和层析

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