检索结果-内蒙古大学图书馆

国际免疫学杂志 2018年第2期41卷 174-177页

作者：袁海燕黄磊高士豪田珍凌虹王甲业哈尔滨医科大学微生物学教研室、黑龙江省感染与免疫重点实验室、黑龙江省教育厅病原生物学重点实验室、哈尔滨医科大学伍连德研究所 150081

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4，CTLA-4）是免疫球蛋白超家族成员，主要表达于活化的T淋巴细胞表面，是重要的T细胞调节因子，其通过负调控作用调节T细胞功能和免疫应答。在HIV-1感染中，T... 详细信息

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4，CTLA-4）是免疫球蛋白超家族成员，主要表达于活化的T淋巴细胞表面，是重要的T细胞调节因子，其通过负调控作用调节T细胞功能和免疫应答。在HIV-1感染中，T细胞功能发生异常，免疫应答出现障碍，因此了解HIV-1感染后机体的免疫调控功能及对HIV-1感染后CTLA-4对病毒的作用及其机制是非常必要的。

关键词：细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 Ⅰ型人类免疫缺陷病毒感染免疫调控

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HIV-1gp120三聚体蛋白的小量表达与纯化的方法学研究

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中国病原生物学杂志 2017年第11期12卷 1084-1090,1094页

作者：张昊天凌虹哈尔滨市食品药品检验检测中心黑龙江哈尔滨150090 哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省教育厅病原生物学重点实验室

目的利用分子生物学方法获得HIV-gp120三聚体蛋白并进行纯化。以期建立一种适合中小型实验室获得HIV-1包膜糖蛋白(Env)的纯化方法。方法培养HEK 293T细胞,分别在2%和10%胎牛血清(10%FCS)两种浓度下表达pLH-06044gp120T-His质粒(gp120T-H... 详细信息

目的利用分子生物学方法获得HIV-gp120三聚体蛋白并进行纯化。以期建立一种适合中小型实验室获得HIV-1包膜糖蛋白(Env)的纯化方法。方法培养HEK 293T细胞,分别在2%和10%胎牛血清(10%FCS)两种浓度下表达pLH-06044gp120T-His质粒(gp120T-His),获取表达上清液,以pcDNA3.1(+)空质粒转染上清作对照进行SDS-PAGE电泳,根据BSA系列浓度SDS-PAGE电泳后绘制的标准曲线比较10%FCS与2%FCS培养转染细胞目的蛋白表达量的差异;利用Ni-IDA QTZ 6FF亲和层析以咪唑浓度梯度洗脱2%胎牛血清培养的上清液并以变性及非还原条件进行电泳验证,再降低上样量并以相同方法验证小量纯化的可行性;利用Native PAGE以已知浓度的gp120T为标准溶液绘制标准曲线,计算产量与得率;采用酶联吸附免疫试验(ELISA)与多种广谱中和抗体进行反应,分析产物的活性。结果通过小量表达与纯化得到较高纯度的06044-gp120三聚体(gp120T-His),纯化后每1ml转染上清液至少得到约0.5μg三聚体蛋白,得率约为20%。结论采用一步亲和层析法纯化少量gp120三聚体操作简单,试验成本较低,蛋白得率高,纯度高,活性好。该方法可用于备选免疫原的纯化。

关键词：人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白三聚体纯化

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Ⅰ型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白CD4结合位点修饰诱导小鼠体液免疫反应的实验研究

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国际免疫学杂志 2015年第3期38卷 214-218页

作者：郭彩霞王甲业于昊彤田丹庄敏凌虹哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省教育厅病原生物学重点实验室 150081 哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省教育厅病原生物学重点实验室 150081 哈尔滨医科大学寄生虫学教研室 150081

目的探讨Ⅰ型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）包膜糖蛋白（Env） gp120的CD4结合位点（CD4BS）核心区第423、425和431位氨基酸三联突变ING/MKE对其诱导体液免疫反应的影响.方法构建HIV-1原代毒株06044包膜gp120 ING/MKE三联突变表达载体pcT... 详细信息

目的探讨Ⅰ型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）包膜糖蛋白（Env） gp120的CD4结合位点（CD4BS）核心区第423、425和431位氨基酸三联突变ING/MKE对其诱导体液免疫反应的影响.方法构建HIV-1原代毒株06044包膜gp120 ING/MKE三联突变表达载体pcT22-06044 gp120T-ING/MKE（gp120T-ING/MKE）,在体外转染的HEK293T细胞表达三聚化野生型gp120Twt蛋白和突变体gp120T-ING/MKE蛋白.免疫BALB/c小鼠后检测结合抗体、中和抗体和骨髓抗原特异性浆细胞.结果获得真核表达载体gp120T-ING/MKE.转染后,在293T细胞培养上清中检测到了三聚化重组蛋白.末次免疫后14 d,gp120Twt和gp120T-ING/MKE免疫血清中结合抗体滴度都大于1∶1 000,但两组血清抗体滴度无显著差异.突变体组骨髓特异性浆细胞分泌水平和非特异浆细胞水平均低于野生型gp120免疫组.野生型和突变体免疫诱导血清抗体的中和活性均不强.结论 HIV-1包膜蛋白CD4结合区423、425和431位三联突变没有改善gp120蛋白的免疫原性.

关键词：人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白 CD4结合位点突变免疫原性

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东北地区北部宫颈癌组织HPV16变异体E6、E7、L1基因和LCR序列分析

东北地区北部宫颈癌组织HPV16变异体E6、E7、L1基因和LCR序列分析

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第十届全国病毒学学术研讨会

作者：李仕燕商庆龙房勇魏兰兰张凤民谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省教育厅病原生物学重点实验室哈尔滨150081

人乳头瘤病毒16型(HPV16)在宫颈癌发生中起到了重要作用.HPV16在流行病学分布上存在一些序列变异，小于2％的序列变异成为变异体.HPV16变异体具有不同的地理分布和致癌潜力差异.本实验研究通过对来源东北地区北部的71例宫颈癌标本进行了... 详细信息

人乳头瘤病毒16型(HPV16)在宫颈癌发生中起到了重要作用.HPV16在流行病学分布上存在一些序列变异，小于2％的序列变异成为变异体.HPV16变异体具有不同的地理分布和致癌潜力差异.本实验研究通过对来源东北地区北部的71例宫颈癌标本进行了HPV型别鉴定，选取HPV16阳性组织标本，通过PCR直接测序的方法对HPV16中E6、E7、L1基因和LCR(长控制区)区域进行序列分析.实验数据与国内其他地区，以及邻近国家进行比较.

关键词：人乳头瘤病毒16型变异体宫颈癌东部地区

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I型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白120V4区氨基酸位点突变对感染细胞能力的影响

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中国地方病学杂志 2012年第4期31卷 401-404页

作者：张唯哲李妍王甲业杨丹王璐晶凌虹哈尔滨医科大学微生物学和寄生虫学教研室、黑龙江省感染与免疫重点实验室、黑龙江省教育厅病原生物学重点实验室 150081 哈尔滨医科大学法医学教研室 150081 哈尔滨医科大学生物化学教研室 150081

目的探讨I型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）包膜糖蛋白120V4区氨基酸位点发生突变对CCR5及CXCR4嗜性毒株感染靶细胞能力的影响。方法根据ADA株为CCR5嗜性毒株，只具有感染CCR5细胞的能力；HXB2株为CXCR4嗜性毒株，只具有感染CXCR4细胞的能... 详细信息

目的探讨I型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）包膜糖蛋白120V4区氨基酸位点发生突变对CCR5及CXCR4嗜性毒株感染靶细胞能力的影响。方法根据ADA株为CCR5嗜性毒株，只具有感染CCR5细胞的能力；HXB2株为CXCR4嗜性毒株，只具有感染CXCR4细胞的能力，通过重叠延伸剪接的方法，构建CCR5嗜性及CXCR4嗜性毒株V4区丙氨酸替换突变体。将突变体表达载体与带有荧光报告基因的HIV骨架基因表达载体共同转染真核细胞，制备假病毒颗粒。采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测假病毒中HIV-1P24抗原，对假病毒进行定量。将假病毒按20、40ng感染***5和***4细胞，以野生株ADA和HXB2毒株为对照，通过荧光素酶（RLU）测定，检测HIV-1V4区氨基酸386—417位点各突变体假病毒对细胞的感染能力。结果成功构建HIV-1ADA和HXB2株V4区丙氨酸替换突变体，各获得10株突变体。在ADA株和HXB2株，389—391及414—417位点均发生丙氨酸替换突变体，无论是用20ng，还是40ng假病毒感染，对CCR5及CXCR4细胞的感染能力均完全丧失[（0±0）％]；在ADA株，400-403和408--410位点发生丙氨酸替换突变体，当假病毒在20ng时，感染细胞的能力达到了（124±35）％和（182±29）％；在40ng时，感染能力达到了（127±8）％和（134±16）％；在HXB2株，395—397位点发生丙氨酸替换突变体，当假病毒在20ng时，感染能力达到了（144±42）％；在40ng时，感染能力达到了（121±18）％；两株在其他位点发生丙氨酸替换突变体，但仅保留部分感染细胞能力（15％-84％）。结论HIV—1包膜糖蛋白V4区389—391及414—417位点氨基酸发生丙氨酸突变．使病毒完全丧失感染靶细胞能力。

关键词： I型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白点突变感染

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分枝杆菌临床分离株菌种的分子鉴定

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中国地方病学杂志 2012年第2期31卷 182-186页

作者：邵永珍范长龙王娟纪滨英全保燕李迪江洋深凌虹哈尔滨医科大学微生物学教研室、黑龙江省感染与免疫重点实验室、黑龙江省教育厅病原生物学重点实验室 150081 哈尔滨市胸科医院检验科 150081 哈尔滨市胸科医院内科 150081 哈尔滨市胸科医院科教科 150081 大连大学新华医院普外科150081

目的建立对临床分离分枝杆菌菌种快速、精确鉴定的方法学平台，了解分枝杆菌菌种的分布，为结核分枝杆菌（MTB）和非结核分枝杆菌（NTM）病临床精确诊断和有效治疗提供依据。方法330株分枝杆菌分离株来自于2007年5月至2008年12月在哈尔... 详细信息

目的建立对临床分离分枝杆菌菌种快速、精确鉴定的方法学平台，了解分枝杆菌菌种的分布，为结核分枝杆菌（MTB）和非结核分枝杆菌（NTM）病临床精确诊断和有效治疗提供依据。方法330株分枝杆菌分离株来自于2007年5月至2008年12月在哈尔滨市胸科医院诊断为结核病的住院患者。菌株灭活后提取基因组DNA．采用PCR方法，结合PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）和DNA序列测定方法进行菌种精确鉴定。结果330株临床分离菌株全部精确鉴定，其中328株[占99．4％（328／330）]为结核分枝杆菌复合群（MTBC），2株[占0．6％（2／330）]为NTM。328株MTBC中，MTB326株、非洲分枝杆菌（***）1株、田鼠分枝杆菌（舱microti）1株，分别占MTBC的99．4％（326／328）、O．3％（1／328）和0-3％（1／328）。经测序和基因组同源性分析发现，2株NTM为胞内分枝杆菌（MAC），与MAC的同源性分别为99％和93％，2株菌之间的同源性为93％。结论建立了临床分离分枝杆菌菌种快速鉴定的方法学平台，临床诊断为结核病的患者MTB比例占绝对优势。也发现有舱African、舱microti和NTM感染。

关键词：分枝杆菌属菌种鉴定聚合酶链反应序列比对

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原代HIV-1包膜糖蛋白修饰体诱导小鼠产生高滴度gp120抗体

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国际免疫学杂志 2011年第3期34卷 234-237页

作者：凌虹王甲业王开利李妍陈文江杨丹田丹焦娜周海舟哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省教育厅病原生物学重点实验室150081 黑龙江省疾病预防控制中心病毒病研究所哈尔滨医科大学第一临床医学院检验科

目的探索1型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）包膜糖蛋白修饰对包膜免疫原性的的影响。方法通过PCR扩增获得原代HIV-106044株包膜gp120基因及其突变体gp120／W427S基因，并构建gp120三聚体蛋白真核表达载体pcT—gp120和pcT—gp120／W427S，重... 详细信息

目的探索1型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）包膜糖蛋白修饰对包膜免疫原性的的影响。方法通过PCR扩增获得原代HIV-106044株包膜gp120基因及其突变体gp120／W427S基因，并构建gp120三聚体蛋白真核表达载体pcT—gp120和pcT—gp120／W427S，重组表达载体体外瞬时转染人胚肾HEK293T细胞，表达gp120三聚体蛋白。采取DNA初免-蛋白凝胶加强的策略免疫BALB／c小鼠，末次免疫后10d检测免疫血清中结合抗体的水平。结果获得真核表达载体pcT—gp120和pcT—gp120／W427S及gp120三聚体蛋白；末次免疫后10d，gp120免疫血清中结合抗体滴度大于1：1000，gp120／W427S免疫血清中结合抗体滴度大于1：10000，而且，gp120／W427S免疫组血清抗体结合活性显著高于gp120免疫组血清。结论HIV-1包膜第427位色氨酸突变为丝氨酸，改善了包膜的免疫原性，为包膜免疫原的设计和优化提供了新的线索。

关键词： Ⅰ型人类免疫缺陷病毒 gp120 BALB/c小鼠免疫原性

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宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型变异体E6、E7、L1和LCR序列分析

宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型变异体E6、E7、L1和LCR序列分析

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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：商庆龙王燕房勇魏兰兰陈思佳张凤民谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省教育厅病原生物学重点实验室哈尔滨150081

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