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乙型肝炎病毒拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系建立及鉴定

国际免疫学杂志 2019年第4期42卷 347-352页

作者：徐维祯谷鸿喜郝美丽马延秀李皓乐汪颖楠哈尔滨医科大学微生物学教研室 150081 哈尔滨医科大学细胞生物学教研室 150081 杭州师范大学医学院病原和免疫学教研室 311121 加州大学圣地亚哥分校圣地亚哥92092

目的建立乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系。方法利用携带有HBV拉米夫定YVDD耐药株或YMDD野生株的全基因真核表达重组质粒分别稳定转染HepG2细胞,G418筛选后建立稳定表达细胞株;酶联... 详细信息

目的建立乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系。方法利用携带有HBV拉米夫定YVDD耐药株或YMDD野生株的全基因真核表达重组质粒分别稳定转染HepG2细胞,G418筛选后建立稳定表达细胞株;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测HBV抗原表达情况;FT-PCR检测HBV DNA载量;FH-PCR-MC验证细胞株拉米夫定耐药变异类型;测序分析细胞株内HBV的基因变异情况。结果成功建立HBV拉米夫定YVDD耐药株和YMDD野生株稳定表达细胞系;第1、10、30代细胞株HBsAg和HBeAg表达稳定;第30代细胞内及上清中HBV DNA载量高于10^4copies/mL;耐药株变异类型为YVDD;测序显示,细胞基因组携带的HBV耐药株基因存在A1762T/G1764A/rtM204V/rtL180M/rtV173L的多位点联合变异。结论成功建立HBV拉米夫定YVDD耐药株和YMDD野生株稳定表达细胞系,即HepG2-HBV/CV和HepG2-HBV/CM细胞,为筛选抗HBV拉米夫定耐药株的有效药物提供了理想的细胞模型。

关键词：乙型肝炎病毒 YMDD YVDD 稳定表达细胞系

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B组柯萨奇病毒诱导的细胞焦亡在心肌损伤中的作用

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国际免疫学杂志 2018年第3期41卷 256-259页

作者：史家宁黄怡可秦颖付军王燕史立军钟照华杨幼林赵文然哈尔滨医科大学附属第一医院内科 150001 哈尔滨医科大学细胞生物学教研室 150081 哈尔滨医科大学微生物学教研室 150081

目的利用caspase-1抑制剂抑制焦亡，评价细胞焦亡在B组柯萨奇病毒（Coxsackievirus B，CVB）所致心肌损伤中的作用，确定CVB能否通过诱导细胞焦亡导致心肌炎症。方法Balb/c乳鼠分为四组：对照组、CVB3感染组（腹腔注射CVB3）、1次抑制... 详细信息

目的利用caspase-1抑制剂抑制焦亡，评价细胞焦亡在B组柯萨奇病毒（Coxsackievirus B，CVB）所致心肌损伤中的作用，确定CVB能否通过诱导细胞焦亡导致心肌炎症。方法Balb/c乳鼠分为四组：对照组、CVB3感染组（腹腔注射CVB3）、1次抑制剂组（CVB3感染乳鼠后注射1次caspase-1抑制剂）和3次抑制剂组（CVB3感染乳鼠后在1、3、5天分3次注射caspase-1抑制剂），Western blot检测各组乳鼠心肌组织中的caspase-1表达，HE染色观察各组乳鼠心肌组织病理变化。HeLa细胞分为8组，前4组用CVB3感染不同时间，后4组CVB3感染的同时分别加入不同剂量caspase-1抑制剂，检测CVB3病毒蛋白表达量。结果CVB3感染组的乳鼠心肌组织中激活的caspase-1含量增加，与CVB3组相比，注射caspase-1抑制剂的小鼠心肌组织中激活的caspase-1含量明显减少。正常对照组乳鼠心肌细胞组织状态正常，CVB3感染组乳鼠心肌组织大面积变性、坏死，CVB3＋caspase-1抑制剂组乳鼠心肌组织发生病理变化但程度较轻。HeLa细胞中caspase-1与CVB3蛋白含量随caspase-1抑制剂剂量增大而降低。结论抑制细胞焦亡可有效减轻CVB3所致心肌损伤，CVB诱导的焦亡参与心肌致病过程。

关键词： B组柯萨奇病毒细胞焦亡抑制剂心肌损伤

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干扰素抗病毒效力影响因素的研究进展

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微生物与感染 2018年第1期13卷 43-48页

作者：甘霖赵俊陈敬贤王明丽安徽医科大学微生物学教研室合肥230032 安徽九川生物科技有限公司芜湖241009 美国哥伦比亚大学病理和细胞生物学系纽约10032

干扰素(interferon,IFN)是一类重要的细胞因子,具有多种抗病毒和免疫调节等作用。根据其结构特点、受体、细胞来源和生物学活性,可分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型。IFN与其特异性受体结合,通过一个复杂且部分重叠的基因转录过程来发挥作用,其核苷酸... 详细信息

干扰素(interferon,IFN)是一类重要的细胞因子,具有多种抗病毒和免疫调节等作用。根据其结构特点、受体、细胞来源和生物学活性,可分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型。IFN与其特异性受体结合,通过一个复杂且部分重叠的基因转录过程来发挥作用,其核苷酸多态性和基因突变可影响IFN反应及对病毒感染的敏感性。几乎所有的病毒都有抵抗IFN的机制和效力,包括直接影响IFN产生和影响下游效应因子。不同型别IFN在行使抗病毒或免疫调节功能时具有拮抗或协同作用。本文就IFN基因变异、病毒抗IFN策略及IFN之间的协同/拮抗作用进行综述,以期能更好地理解IFN的抗病毒作用。

关键词：干扰素基因变异抗病毒作用协同和拮抗作用

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柯萨奇病毒B3型3D蛋白抗体的制备

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微生物与感染 2017年第3期12卷 172-178页

作者：王玉徐维祯穆宇松王天楹闫碧莹颜学勤赵文然钟照华哈尔滨医科大学微生物学教研室及伍连德研究所哈尔滨150081 哈尔滨医科大学细胞生物学教研室哈尔滨150081

肠道病毒3D蛋白是其RNA聚合酶。柯萨奇病毒B3型(coxsackievirus B3,CVB3)主要感染心脏,其3D蛋白在心肌表达中的时序和分布尚不清楚。本研究将通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)获得的CVB 3D片段插入pET28a(+)的表达框,获... 详细信息

肠道病毒3D蛋白是其RNA聚合酶。柯萨奇病毒B3型(coxsackievirus B3,CVB3)主要感染心脏,其3D蛋白在心肌表达中的时序和分布尚不清楚。本研究将通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)获得的CVB 3D片段插入pET28a(+)的表达框,获得pET28a(+)-3D重组质粒。异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导pET28a(+)-3D表达3D-His蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)后,切胶,获得3D-His蛋白。3D-His蛋白加佐剂免疫新西兰大白兔制备3D蛋白多克隆抗体,蛋白免疫印迹法检测抗体效价及特异性。结果显示,本研究获得了高效价且特异性好的抗CVB3 3D蛋白抗体,可用于CVB3 3D蛋白功能的后续研究。

关键词：柯萨奇病毒B3型 3D聚合酶抗体原核表达

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应激颗粒在肠道病毒感染的作用及机制研究

应激颗粒在肠道病毒感染的作用及机制研究

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第十一届全国病毒学学术研讨会暨第六届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：吴硕陈阳林乐勋王天楹钟晓岩赵文然钟照华哈尔滨医科大学微生物学教研室和细胞生物学教研室哈尔滨 150086

应激颗粒(stress granules,SGs)是细胞处于应激状态(包括病毒感染)下在胞浆中形成的颗粒,尤其是蛋白翻译受阻时。前期研究显示小RNA病毒科成员脊髓灰质炎病毒感染可以诱导细胞产生SGs,但小RNA病毒诱导产生SGs的机制不清楚。本研究观察了... 详细信息

应激颗粒(stress granules,SGs)是细胞处于应激状态(包括病毒感染)下在胞浆中形成的颗粒,尤其是蛋白翻译受阻时。前期研究显示小RNA病毒科成员脊髓灰质炎病毒感染可以诱导细胞产生SGs,但小RNA病毒诱导产生SGs的机制不清楚。本研究观察了B组3型柯萨奇病毒(Coxsaekievirus B3,CVB3)和肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染时的SGs产生及其对病毒复制和影响,进一步探讨了肠道病毒诱导SGs产生的分子机制。

关键词：应激颗粒 B组3型柯萨奇病毒肠道病毒71型 2A蛋白酶抗病毒应答

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表达海肾荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型质粒的构建及鉴定

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国际病毒学杂志 2015年第3期22卷 149-153页

作者：王慧武帅钦陈阳钟照华赵文然佟雷哈尔滨医科大学病原学实验教学中心哈尔滨150081 哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨医科大学细胞生物学教研室

目的构建能表达荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型（coxsackievirus B3,CVB3）,以实现定量检测CVB3.方法将荧光素酶基因克隆至CVB3基因组开放读码框起始位置,重组病毒基因组DNA转染HeLa细胞以恢复病毒、测序,评价重组病毒的荧光素酶表达... 详细信息

目的构建能表达荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型（coxsackievirus B3,CVB3）,以实现定量检测CVB3.方法将荧光素酶基因克隆至CVB3基因组开放读码框起始位置,重组病毒基因组DNA转染HeLa细胞以恢复病毒、测序,评价重组病毒的荧光素酶表达,扩增重组病毒并测定重组病毒株毒力.结果成功构建2个重组病毒质粒,转染HeLa细胞,表达海肾荧光素酶（humanizedform of Renilla Luc,hRLuc）、荧火虫荧光素酶（firefly luciferase,Luc）的pCVB3-hRLuc和pCVB3-Luc转染后第1代均可检测到hRLuc和Luc活性,但只有pCVB3-hRLuc转染细胞有明显细胞病变.扩增和纯化的CVB3-hRLuc病毒感染HeLa细胞可见明显细胞病变及hRLuc活性.扩增的CVB3-Luc没有观察到明显的细胞病变,且从第2代病毒开始就未能检测到荧光素酶活性.用HeLa细胞经空斑形成试验进行毒力测定,CVB3-hRLuc的毒力为1.4（107 pfu/ml）.结论成功构建了表达hRLuc的重组CVB3毒株CVB3-hRLuc,为定量研究CVB3感染打下基础.

关键词：柯萨奇病毒B组3型海肾荧光素酶基因重组

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柯萨奇病毒B组3型2B蛋白诱导细胞自噬及其基序鉴定

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国际病毒学杂志 2014年第6期21卷 253-259页

作者：王瑞雪吴珩陈阳潘博佟雷王天楹赵文然钟照华哈尔滨医科大学机能学实验教学中心哈尔滨150081 哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学细胞生物学教研室哈尔滨150081

目的探讨柯萨奇病毒B组3型（CVB3） woodruff病毒2B蛋白对细胞自噬的诱导作用,及其自噬相关基序的鉴定.方法分别构建增强型绿色荧光蛋白（EGFP）与CVB3 woodruff病毒2B蛋白及其9种截短蛋白的融合蛋白（EGFP-2B、EGFP-2B1-249、EGFP-2B... 详细信息

目的探讨柯萨奇病毒B组3型（CVB3） woodruff病毒2B蛋白对细胞自噬的诱导作用,及其自噬相关基序的鉴定.方法分别构建增强型绿色荧光蛋白（EGFP）与CVB3 woodruff病毒2B蛋白及其9种截短蛋白的融合蛋白（EGFP-2B、EGFP-2B1-249、EGFP-2B1-201、EGFP-2B1-153、EGFP-2B1-105、EGFP-2B1-57、EGFP-2B106.201、EGFP-2B106-249、EGFP-2 B205-297、EGFP-2B106-201）真核表达载体,红色荧光蛋白（mCherry）与微管相关蛋白轻链3（LC3）的融合蛋白真核表达载体pmCherry-LC3;应用激光共聚焦与蛋白质免疫印迹（Western blot）检测病毒2B蛋白对宫颈癌细胞（HeLa） LC3表达的影响;荧光显微镜观察9种截短蛋白在HeLa细胞中的表达;Western blot检测pEGFP-2B和pEGFP-2B106-249转染细胞后LC3的表达;观察自噬抑制剂3-甲基腺苷（3-MA）处理后,pEGFP-2B和pEGFP-2B106-249诱导细胞自噬的情况.结果 CVB3攻击HeLa细胞后,mCherry-LC3呈现细胞核周点状聚集表达,Western blot检测出现清晰LC3-Ⅱ条带;pEGFP-2B与pmCherry-LC3共转染后也可见细胞核周围绿色荧光与红色荧光均成点状聚集并相互重叠,且LC3-Ⅱ条带明显;9种截短融合蛋白质粒分别转染HeLa细胞后,其中可见细胞核周围绿色荧光点状聚集的最短截短蛋白为EGFP-2B106-249;pEGFP-2B和pEGFP-2B106-249转染细胞后可检测出现清晰LC3-Ⅱ条带;3-MA处理后,pEGFP-2B和pEGFP-2B106-249分别与pmCherry-LC3共转染的细胞均未见绿色和红色荧光的核周点状聚集.结论 CVB3 woodruff病毒2B蛋白可以诱导宿主细胞发生自噬,其中截短蛋白2B106-249是病毒蛋白2B诱导HeLa细胞发生自噬的功能基序.

关键词：柯萨奇病毒B组3型自噬基序融合蛋白微管相关蛋白轻链3 Microtubule-associated protein light chain 3

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博尔纳病病毒感染与神经胶质瘤发生的相关性

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神经疾病与精神卫生 2013年第2期13卷 195-196页

作者：李均辉杨爱英刘洋张凤民黑龙江省医院脑神经外科 150086 哈尔滨医科大学细胞生物学教研室微生物学教研室

目的探讨博尔纳病病毒（BDV）感染与神经胶质瘤发生的可能相关性。方法用west—ern—blot方法，对114例神经胶质瘤患者和110例脑外伤患者血清中BDV—p24特异性抗体进行检测。结果114例神经胶质瘤患者血清中BDV—p24抗体阳性16例，阳性... 详细信息

目的探讨博尔纳病病毒（BDV）感染与神经胶质瘤发生的可能相关性。方法用west—ern—blot方法，对114例神经胶质瘤患者和110例脑外伤患者血清中BDV—p24特异性抗体进行检测。结果114例神经胶质瘤患者血清中BDV—p24抗体阳性16例，阳性检出率为14．03％；作为实验正常对照的脑外伤患者血清，阳性3例，阳性检出率为2．72％。两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论神经胶质瘤患者血清中存在BDV的感染；BDV感染可能与神经胶质瘤的发生相关。

关键词：神经胶质瘤博尔纳病病毒 Western--blot法

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黑龙江省桦川县华支睾吸虫病调查分析

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中华地方病学杂志 2013年第6期32卷 651-653页

作者：韩甦张晓丽董云霞凌虹张凤民葛涛哈尔滨医科大学基础医学院人体寄生虫学和微生物学教研室、黑龙江省感染与免疫重点实验室及普通高校病原生物学重点实验室 150081 黑龙江省疾病预防控制中心病媒寄生虫病防治所

目的探讨黑龙江省桦川县居民华支睾吸虫的感染情况，为制定防治策略提供依据。方法2011、2012年，在桦川县通过整群随机抽样，采集粪便标本，采用改良加藤厚涂片法粪检华支睾吸虫虫卵，通过问卷调查收集调查对象年龄、性别、职业、饮食... 详细信息

目的探讨黑龙江省桦川县居民华支睾吸虫的感染情况，为制定防治策略提供依据。方法2011、2012年，在桦川县通过整群随机抽样，采集粪便标本，采用改良加藤厚涂片法粪检华支睾吸虫虫卵，通过问卷调查收集调查对象年龄、性别、职业、饮食习惯等信息，分析感染特点。结果共计调查了2248名居民．华支睾吸虫感染患者884例，感染率为39.32％。男性感染率[47．15％（611／1296）]明显高于女性[28．68％（273／952），X^2=34．55，P〈0．01]。感染率随年龄增长而上升，20～69岁人群感染率较高，其中50～59岁人群感染率最高[45．34％（219／483）]。职业分布以农民感染率最高[47．24％（420／889）]，其次为干部职员[38．38％（190／495）]。有明确的食鱼生史的居民中，华支睾吸虫感染率为53．38％（150／281）。结论桦川县的华支睾吸虫感染率较高，建议积极开展健康教育和群体化疗为主的综合防治策略，降低人群感染率。

关键词：华支睾吸虫病寄生虫病数据收集

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317例华支睾吸虫病流行特征分析

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热带医学杂志 2013年第4期13卷 489-491页

作者：韩甦张晓丽文景山李懿宏舒晶董云霞凌虹张凤民哈尔滨医科大学基础医学院人体寄生虫学和微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室及普通高校病原生物学重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨华支睾吸虫病的临床流行病学特征变化,为制定进一步的防治策略提供理论基础。方法于2010年收集哈尔滨医科大学人体寄生虫病研究所就诊的疑似患者875人,采用Kato-Katz方法和酶联免疫方法分别对受检者的1 950份粪便样本和875份血... 详细信息

目的探讨华支睾吸虫病的临床流行病学特征变化,为制定进一步的防治策略提供理论基础。方法于2010年收集哈尔滨医科大学人体寄生虫病研究所就诊的疑似患者875人,采用Kato-Katz方法和酶联免疫方法分别对受检者的1 950份粪便样本和875份血清样本进行检测,同时收集患者的基本信息。结果受检者中华支睾吸虫感染患者317例,感染率为36.23%,该病的流行多为散发病例。男性感染率为39.94%,明显高于女性的26.36%,差异有统计学意义(P<0.001)。感染率随年龄增长而上升,20～69岁人群感染率较高,其中40～49岁人群感染率最高(42.71%)。农村患者感染率(42.27%)高于城市(20.33%),反复感染患者常见,吃生鱼(虾)习惯具有最高的感染风险(OR=28.507)。结论华支睾吸虫感染率较高,揭示该病流行病学特征和风险因素,将为加速控制和消灭华支睾吸虫病提供依据。

关键词：华支睾吸虫流行特征感染率

来源：评论

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