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病毒学报 2012年第3期28卷 237-245页

作者：魏国超田文洪王刚柳云帆尉迟捷董小岩凌虹吴小兵哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨150081 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 吉林大学生命科学学院长春130012 北京五加和分子医学研究所北京100176

构建一种以分泌型荧光素酶基因(Gluc)作为报告基因的仙台病毒BB1株微小基因组质粒,比较了CMV启动子与T7启动子对仙台病毒微小基因组的拯救效率。首先设计并合成锤头状核酶序列,仙台病毒trailer、L基因非编码区、N基因非编码区和leader... 详细信息

构建一种以分泌型荧光素酶基因(Gluc)作为报告基因的仙台病毒BB1株微小基因组质粒,比较了CMV启动子与T7启动子对仙台病毒微小基因组的拯救效率。首先设计并合成锤头状核酶序列,仙台病毒trailer、L基因非编码区、N基因非编码区和leader序列以及丁型肝炎病毒核酶序列,插入含有CMV和T7双启动子的质粒pVAX1中,获得仙台微小基因组的通用型载体pVAX-miniSeV。将Gluc基因插入pVAX-miniSeV中,分别获得正向插入的仙台病毒微小基因组载体pVAX-miniSeV-Gluc(+)和反向插入的pVAX-miniSeV-Gluc(-)。用pVAX-miniSeV-Gluc(+)转染BHK21细胞能在上清中检测到高水平的Gluc活性,表明其中的CMV启动子具有正常转录功能。将pVAX-miniSeVGluc(-)和仙台病毒N、P、L蛋白表达质粒共转染BSR T7/5细胞(稳定表达T7RNA聚合酶的BHK-21细胞)检测到Gluc的高效表达,表明pVAX-miniSeV-Gluc(-)能够被有效拯救;但在BHK-21细胞中却未检测到Gluc的有效表达,提示该载体中的CMV启动子对仙台病毒微小基因组的拯救效率可能没有明显作用。为了进一步了解CMV与T7启动子各自对于仙台病毒微小基因组拯救的作用,本研究又构建了单独含有CMV或T7启动子的仙台病毒微小基因组载体pCMV-miniSeV-Gluc(-)和pT7-miniSeV-Gluc(-)。将这两种载体和仙台病毒N、P、L蛋白表达质粒分别共转染BSR T7/5细胞,结果pT7-miniSeV-Gluc(-)共转染组检测到了Gluc的高效表达,而pCMV-miniSeV-Gluc(-)共转染组未检测到,证实了通用型载体pVAX-miniSeV中仅T7启动子对仙台病毒微小基因组的拯救起了关键作用,而CMV启动子作用不明显。本研究成功构建了一种通用型双启动子仙台病毒微小基因组载体pVAX-miniSeV,并证明了T7启动子系统对仙台病毒微小基因组拯救的关键作用。本研究为下一步构建仙台病毒全基因感染性克隆打下了基础。

关键词： T7启动子 CMV启动子仙台病毒微小基因组

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肌肽对高糖环境下心肌成纤维细胞增殖的影响及机制

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哈尔滨医科大学学报 2012年第6期46卷 526-529页

作者：毕惠梅师岩崔云霞闫俊霞王利华周宏博哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江哈尔滨150081 齐齐哈尔医学院生物化学教研室黑龙江齐齐哈尔161006 黑龙江省传染病防治院呼吸二科黑龙江哈尔滨150500

目的探讨肌肽(carnosine)对高糖诱导的大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的影响及作用机制。方法以CFs为研究对象,采用WST-1法观察肌肽抑制高糖诱导CFs的增殖;乳酸脱氢酶(LDH)法检测肌肽对细胞膜的毒性作用;Western blo... 详细信息

目的探讨肌肽(carnosine)对高糖诱导的大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的影响及作用机制。方法以CFs为研究对象,采用WST-1法观察肌肽抑制高糖诱导CFs的增殖;乳酸脱氢酶(LDH)法检测肌肽对细胞膜的毒性作用;Western blot法观察细胞周期蛋白P21及MAPK通路相关蛋白P38、P-p38的表达水平。结果肌肽显著抑制了高糖诱导的CFs增殖,在5～30 mmol/L范围内呈一定的浓度依赖效应,且与p38 MAPK信号通路相关。结论肌肽可通过P38MAPK信号通路抑制高糖诱导的CFs增殖。

关键词：肌肽高糖心肌成纤维细胞细胞增殖 MAPK信号通路糖尿病心肌病

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肌肽对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖的影响及机制

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哈尔滨医科大学学报 2012年第1期46卷 14-18页

作者：周宏博张慧姝齐晓丹王懿房绍红贾慧婕靳玉宏哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江哈尔滨150081 齐齐哈尔医学院临床生物化学教研室黑龙江齐齐哈尔161006 黑龙江省部共建心肌缺血机理与诊疗技术教育部重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨肌肽(carnosine)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cells,RMCs)增殖的影响及作用机制。方法以RMCs为研究对象,分别采用MTT法和BrdU-ELISA法观察肌肽对高糖诱导的RMCs增殖的影响;乳酸脱氢酶(LDH)法检测肌肽对细胞... 详细信息

目的探讨肌肽(carnosine)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cells,RMCs)增殖的影响及作用机制。方法以RMCs为研究对象,分别采用MTT法和BrdU-ELISA法观察肌肽对高糖诱导的RMCs增殖的影响;乳酸脱氢酶(LDH)法检测肌肽对细胞的毒性作用;酶生化法测定丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)含量及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性等。结果肌肽可显著抑制高糖诱导的RMCs增殖,在5～30 mmol/L范围内呈一定的浓度依赖效应,且与其抗氧化作用密切相关。结论肌肽通过抗氧化作用抑制高糖诱导的RMCs增殖,且有浓度依赖趋势。

关键词：肌肽高糖肾小球系膜细胞细胞增殖氧化应激糖尿病肾病

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血红素加氧酶-1对肺癌细胞失巢凋亡的影响

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医学分子生物学杂志 2012年第5期9卷 338-343页

作者：韩忠晶吴明娟毕武春张宏宇肖海凤魏惠妍邹朝霞高旭哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室哈尔滨市150081 黑龙江省中医研究院哈尔滨市150036

目的观察血红素加氧酶-1（remeoxygehase-1，HO-1）活性改变对人肺腺癌A549细胞失巢凋亡的影响。方法将野生型HO-1（wtHO-1）和失活突变体mHO-1G143H基因与质粒pcDNA3-1（＋）连接，构建野生型和突变型HO-1真核表达载体pcDNA3．1（＋）-... 详细信息

目的观察血红素加氧酶-1（remeoxygehase-1，HO-1）活性改变对人肺腺癌A549细胞失巢凋亡的影响。方法将野生型HO-1（wtHO-1）和失活突变体mHO-1G143H基因与质粒pcDNA3-1（＋）连接，构建野生型和突变型HO-1真核表达载体pcDNA3．1（＋）-wtHO-1和pcDNA3．1（＋）-mHO—1G143H。利用脂质体介导的方法将构建好的重组载体转染人肺腺癌A549细胞构建稳转细胞系，以空载体转染作为对照组。通过G418筛选建立稳定表达野生型和突变型HO-1的人肺腺癌A549细胞系。利用RT—PCR及Western印迹方法检测各稳转细胞系中HO-1mRNA和蛋白的表达水平。悬浮培养上述稳转细胞系，建立失巢凋亡模型：应用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与空载体对照组相比，野生型HO-1过表达细胞系中，细胞失巢凋亡率明显下降；突变型HO-1过表达细胞系中，细胞失巢凋亡率增高。结论HO-1过表达可能抑制肺腺癌A549细胞的失巢凋亡能力，这种作用可能与HO-1催化活性相关。

关键词：血红素加氧酶-1 肺癌细胞失巢凋亡

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聚焦超声单次治疗7027例宫颈炎症相关疾病患者疗效及影响因素分析

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中国循证医学杂志 2012年第4期12卷 406-412页

作者：李成志熊希李幼平彭斌蔡羽嘉杜亮李静王莉潘忠礼陈锦云肖筱陈文直王智彪重庆医科大学生物医学工程学院重庆400016 四川大学华西医院中国循证医学中心成都610041 重庆医科大学公共卫生学院卫生统计教研室重庆400016 超声医疗国家工程研究中心重庆401121

目的评价聚焦超声在农村基层医院治疗宫颈炎症相关疾病的有效性、安全性和适用性。方法在重庆市9区县80家乡镇医院进行多中心临床研究,采用CZF型超声波治疗仪,对8 352例宫颈炎症相关疾病患者行聚焦超声单次治疗后随访3个月,根据4级计分... 详细信息

目的评价聚焦超声在农村基层医院治疗宫颈炎症相关疾病的有效性、安全性和适用性。方法在重庆市9区县80家乡镇医院进行多中心临床研究,采用CZF型超声波治疗仪,对8 352例宫颈炎症相关疾病患者行聚焦超声单次治疗后随访3个月,根据4级计分法和疗效指数评价方法,分析和评价有完整记录的7 027例患者(轻度1 156例、中度5 312例、重度559例)的治疗效果、安全性和适用性,采用非条件logistic回归分析探讨疗效的影响因素。结果 7 027名患者中6 413例(91.26%)在5分钟内完成聚焦超声治疗。经3个月随访观察,总有效率为99.59%,5 012例(71.32%)治愈。656例(9.34%)治疗后有少-中量阴道出血,仅12例患者(占0.17%)的出血量与月经量相当,经压迫止血及对症抗炎治疗后血止。结论聚焦超声是治疗宫颈炎症相关疾病安全有效的新疗法,术后出血少,阴道排液时间短,适合在基层农村地区推广使用。

关键词：宫颈炎症相关疾病聚焦超声 CZF单次治疗疗效评价

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MicroRNA与卵巢癌关系的研究进展

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国际免疫学杂志 2012年第3期35卷 205-208页

作者：王磊单良高旭哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室 150081 哈尔滨市红十字中心医院妇产二科 150076

MicroRNA（miRNA）是一类长度约20—25个碱基的小分子非编码单链RNA。最新研究发现microRNA可参与多种调节途径，包括细胞分化、细胞增殖凋亡、生殖以及肿瘤发病机制等。实验证据表明microRNA在卵巢癌中表达异常，提示它可能与卵巢癌的... 详细信息

MicroRNA（miRNA）是一类长度约20—25个碱基的小分子非编码单链RNA。最新研究发现microRNA可参与多种调节途径，包括细胞分化、细胞增殖凋亡、生殖以及肿瘤发病机制等。实验证据表明microRNA在卵巢癌中表达异常，提示它可能与卵巢癌的发生、发展、诊断和治疗有着密切的联系，为卵巢癌发病机制的研究和诊断治疗提供了新的思路。

关键词： MicroRNA 卵巢癌肿瘤

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奈替米星与丁胺卡那治疗下呼吸道感染的药理观察与疗效评价

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中国医药导报 2012年第27期9卷 84-85页

作者：杨慧玲王秀宏郑州大学第一附属医院药学部河南郑州450000 哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的研究奈替米星与丁胺卡那治疗下呼吸道感染的药理特点与临床疗效。方法选择下呼吸道感染患者,随机分为给予奈替米星200 mg静脉滴注的观察组和丁胺卡那600 mg静脉滴注的对照组,进行菌种鉴定、细菌敏感性实验、药代动力学分析以及疗效... 详细信息

目的研究奈替米星与丁胺卡那治疗下呼吸道感染的药理特点与临床疗效。方法选择下呼吸道感染患者,随机分为给予奈替米星200 mg静脉滴注的观察组和丁胺卡那600 mg静脉滴注的对照组,进行菌种鉴定、细菌敏感性实验、药代动力学分析以及疗效判定。结果观察组对细菌的敏感性均明显高于对照组(P<0.05);药物浓度峰值明显高于对照组、达到峰值的时间和半衰期均明显小于对照组(P<0.05);总有效率为94.29%,治疗效果明显好于对照组(P<0.05)。结论奈替米星吸收快,半衰期减短,敏感性高,适用于下呼吸道感染的治疗。

关键词：抗生素奈替米星丁胺卡那下呼吸道感染药代动力学

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肌肽对高糖环境下心肌成纤维细胞胶原表达的影响

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现代生物医学进展 2012年第14期12卷 2619-2622页

作者：闫俊霞郑海霞毕惠梅崔云霞房绍红周宏博哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江哈尔滨150081 教育部黑龙江省部共建心肌缺血机理与诊疗技术重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的:探讨肌肽对高糖环境下心肌成纤维细胞中胶原生成的影响及作用机制。方法:原代培养心肌成纤维细胞,将细胞分为正常糖组(NG,5.5mmol/L glucose)、高糖组(HG,25mmol/L glucose)、高糖+10mmol/L肌肽组、高糖+20mmol/L肌肽组、高糖+40mm... 详细信息

目的:探讨肌肽对高糖环境下心肌成纤维细胞中胶原生成的影响及作用机制。方法:原代培养心肌成纤维细胞,将细胞分为正常糖组(NG,5.5mmol/L glucose)、高糖组(HG,25mmol/L glucose)、高糖+10mmol/L肌肽组、高糖+20mmol/L肌肽组、高糖+40mmol/L肌肽组、高糖+SB组(HG+10μmol/L SB203580)、高糖+PD组(HG+10μmol/L PD98059)。ELISA检测胶原Ⅰ、Ⅲ的含量,Western blot检测TGF-β1、p-p38 MAPK和p-ERK(1/2)等蛋白的表达。结果:与正常糖组相比,高糖组中胶原Ⅰ和胶原Ⅲ含量增加(P<0.01);TGF-β1、p-p38和p-ERK等表达增加(P<0.01);与高糖组相比,高糖+肌肽组中胶原Ⅰ、Ⅲ、TGF-β1、p-p38、和p-ERK等均降低(P<0.05);高糖+SB组和高糖+PD组中胶原Ⅰ、Ⅲ表达减少(P<0.05)。结论:肌肽对心肌成纤维细胞中胶原生成具有抑制作用,且通过MAPK通路实现。

关键词：肌肽高糖培养胶原 TGF-β MAPK信号通路

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超声爆破微泡介导内皮抑素基因抑制兔颈动脉粥样硬化的实验研究

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中华超声影像学杂志 2011年第2期20卷 159-163页

作者：吴长君张春梅刘兴汉张士德张磊哈尔滨医科大学附属第一医院超声科 150001 哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室哈尔滨医科大学病理教研室哈尔滨医科大学附属第二医院放射线科

目的探讨利用超声爆破微泡介导内皮抑素（endostatin,ES）基因转染对兔颈动脉粥样硬化斑块内新生血管及斑块生长的抑制作用.方法 20只颈动脉粥样硬化模型兔随机分为三组：A组,微泡＋超声;B组,对照质粒＋微泡＋超声;C组,ES质粒＋微泡＋... 详细信息

目的探讨利用超声爆破微泡介导内皮抑素（endostatin,ES）基因转染对兔颈动脉粥样硬化斑块内新生血管及斑块生长的抑制作用.方法 20只颈动脉粥样硬化模型兔随机分为三组：A组,微泡＋超声;B组,对照质粒＋微泡＋超声;C组,ES质粒＋微泡＋超声.建模2周行超声爆破微泡介导基因转染,间隔3周时重复转染1次.建模14周时行超声及数字减影血管造影（DSA）检查,病理检测病变血管新生内膜、斑块内新生血管及ES表达情况.结果超声显示A组和B组内膜明显增厚,斑块较大,管腔明显狭窄,收缩期峰值流速（PSV）增加,C组上述指标明显较A组和B组低（P＜0.05）.病理检测C组内中膜厚度（IMT）、内膜厚度（IT）、内中膜厚度比（IT/MT）、内膜面积（IA）、内中膜面积比（IA/MA）及新生内膜狭窄率与A组和B组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）.C组颈动脉新生血管及血管内皮生长因子（VEGF）表达均较A组和B组低,内膜及胫前肌可见较多ES表达,而A组和B组无明显ES表达.结论一定超声辐照条件下,超声爆破微泡介导ES基因转染可抑制兔颈动脉粥样硬化病变的发展,有可能为动脉粥样硬化性疾病的基因治疗提供一种安全有效的方法 .

关键词：超声检查微气泡动脉粥样硬化基因疗法内皮抑素类

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携带Survivin-△3(T34A)的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗与抗肿瘤效果初探

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实用预防医学 2012年第1期19卷 8-12页

作者：陈英利祁冬冬李翀朴金花张霞苏晓杰林雪松张涛黑龙江省佳木斯大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江佳木斯154000 哈尔滨医科大学(大庆)医学检验与技术学院内蒙古林业总医院宁夏石嘴山市第二人民医院

目的探讨携带Survivin-△3(T34A)基因的减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗对乳腺瘤MCF-7注射细胞小鼠的保护作用及其效果。方法人工合成Survivin-△3(T34A)基因,先后将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1和pVAX1载体,获得pVAX1-Survivin-△3(T34A)-E... 详细信息

目的探讨携带Survivin-△3(T34A)基因的减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗对乳腺瘤MCF-7注射细胞小鼠的保护作用及其效果。方法人工合成Survivin-△3(T34A)基因,先后将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1和pVAX1载体,获得pVAX1-Survivin-△3(T34A)-EGFP真核表达载体,电转化至减毒鼠伤寒沙门菌;小鼠分别口服pVAX1-Survivin-△3(T34A)-EGFP转染沙门菌(实验组)、pVAX1-EGFP转染沙门菌(空质粒组)、沙门菌(对照组)和PBS(空白对照组)后,再皮下注射MCF-7乳腺癌细胞,采用Western-blotting检测Survivin-△3(T34A)蛋白水平,以及测定注射部位瘤块的体积大小。结果成功构建了真核表达载体pVAX1-Survivin-△3(T34A)-EGFP并转化到减毒鼠伤寒沙门菌得到表达;在空质粒组、细菌组、空白对照组和实验组小鼠中,肿瘤瘤块平均直径分别为(25.813±0.108)mm、(25.627±0.117)mm、(26.257±0.213)mm、(9.124±0.086)mm;实验组与其他组相比,差异有统计学意义(P<0.05),且能在血清中检测到Survivin-△3(T34A)-EGFP融合蛋白的存在。结论小鼠口服携带Survivin-△3(T34A)真核质粒的沙门菌后,能够抑制MCF-7乳腺瘤细胞的增殖和扩散。

关键词：存活素减毒鼠伤寒沙门菌 Survivin—△3 Survivin—△3(T34A) pVAX1

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