检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验动物学报 2010年第3期18卷 181-184,I0003页

作者：王波程萱刘庆军魏旭冉尹玉静高旭杨晓周虹军事医学科学院野战输血研究所北京100850 军事医学科学院生物工程研究所北京100071 哈尔滨医科大学生化教研室哈尔滨150081

目的建立血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)显性负性突变体G143H转基因小鼠模型。方法通过SalI/DraI酶切pCAGGHO-1G143H转基因表达载体,纯化回收HO-1G143H表达盒片段;通过显微注射把表达目的基因的DNA片段导入FVB小鼠受精卵原核,... 详细信息

目的建立血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)显性负性突变体G143H转基因小鼠模型。方法通过SalI/DraI酶切pCAGGHO-1G143H转基因表达载体,纯化回收HO-1G143H表达盒片段;通过显微注射把表达目的基因的DNA片段导入FVB小鼠受精卵原核,并移植给同期发情的假孕受体母鼠,获得子代小鼠;用PCR对子代鼠尾DNA进行鉴定,并用Southern blot对结果做进一步验证;通过RT-PCR、免疫组化和Western blot方法检测HO-1基因的表达。结果表达盒回收片段正确;假孕鼠出生的17只子代小鼠共有3只阳性,均为雄性;RT-PCR、免疫组化和Western blot结果表明,阳性小鼠体内的HO-1 mRNA与蛋白表达水平增高。结论成功建立HO-1显性负性突变体G143H表达的转基因小鼠,该模型为研究HO-1在体内的作用机制奠定了基础。

关键词： HO-1 显微注射法转基因小鼠

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肌肽对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

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哈尔滨医科大学学报 2010年第6期44卷 527-530页

作者：师岩房绍红周宏博哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江哈尔滨150081 齐齐哈尔医学院生物化学教研室黑龙江齐齐哈尔161006 教育部黑龙江省部共建心肌缺血机理与诊疗技术重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨肌肽对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法体外培养细胞,通过高糖(25mmol/L)诱导细胞凋亡模型,并给予肌肽(20 mmol/L)建立高糖加肌肽组,同时设立正常糖对照组和正常糖加肌肽组。应用电镜观察细胞超微结构;AnnexinV/PI... 详细信息

目的探讨肌肽对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法体外培养细胞,通过高糖(25mmol/L)诱导细胞凋亡模型,并给予肌肽(20 mmol/L)建立高糖加肌肽组,同时设立正常糖对照组和正常糖加肌肽组。应用电镜观察细胞超微结构;AnnexinV/PI流式细胞分析法检测细胞凋亡情况。结果电镜显示25 mmol/L葡萄糖诱导细胞呈凋亡早期形态,流式细胞仪检测高糖组细胞凋亡率显著高于正常糖组(P<0.05),而高糖加20mmol/L肌肽组与高糖组相比,具有显著抑制细胞凋亡的作用(P<0.05)。结论肌肽能够抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡。

关键词：肌肽高糖人脐静脉内皮细胞细胞凋亡

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血红素加氧酶-1对肝癌细胞细胞周期调控因子的影响

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医学分子生物学杂志 2010年第2期7卷 99-103页

作者：高涵邹朝霞刘文杰张宏宇高旭哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室哈尔滨市150081 齐齐哈尔医学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江省齐齐哈尔市161006

目的观察血红素加氧酶-1（heme oxygenase 1，HO-1）对人肝癌细胞HepG2细胞周期调控因子的影响。方法构建含有野生型和突变型HO-1基因的重组载体pcDNA3．1（＋）-wtHO-1和pcDNA3．1（＋）-mHO-1G143H。利用脂质体介导的方法将构建好的... 详细信息

目的观察血红素加氧酶-1（heme oxygenase 1，HO-1）对人肝癌细胞HepG2细胞周期调控因子的影响。方法构建含有野生型和突变型HO-1基因的重组载体pcDNA3．1（＋）-wtHO-1和pcDNA3．1（＋）-mHO-1G143H。利用脂质体介导的方法将构建好的重组载体转染肝癌细胞系HepG2，以空载体转染作为对照组。通过G418筛选建立稳定表达野生型和突变型HO-1的HepG2肝癌细胞系。经半定量RT—PCR、Western印迹检测转染细胞系中HO-1 mRNA和蛋白的表达水平。在HO-1表达改变的稳转细胞系中，利用Western印迹检测转染细胞系中P21、P27蛋白表达水平。结果成功实现了野生型和突变型HO-1在HepG2细胞中的过表达；野生型和突变型HO-1过表达均能诱导抑癌基因p21和p27的表达。结论HO．1过表达诱导抑癌基因p21和p27的表达与血红素分解产物无关。HO-1可能通过其它机制调节p21和p27的表达。

关键词：血红素加氧酶-1 肝癌细胞周期细胞周期调控因子

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硫苯酰胺对抑郁症大鼠海马区突触素Ⅰ基因表达的影响

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中国新技术新产品 2010年第4期 1-2页

作者：吴琦师岩刘秀财王梦醒李淑艳齐齐哈尔医学院医学技术学院黑龙江齐齐哈尔161006 哈尔滨医科大学生化教研室黑龙江哈尔滨150001

利用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学等方法，分别从RNA和蛋白质两方面对硫苯酰胺治疗的和未治疗的抑郁症大鼠海马结构内突触素Ⅰ的表达水平进行对比研究，为临床治疗抑郁症提供分子生物学依据。

关键词：抑郁症突触素Ⅰ 硫苯酰胺大鼠海马结构

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低氧条件下血红素加氧酶1过表达对人肝癌细胞的保护作用

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中华肿瘤杂志 2009年第8期31卷 587-591页

作者：梁飞朱晓洁王秀宏哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室 150086

目的探讨低氧条件下人肝癌细胞（HepG2）中血红素加氧酶1（HO-1）过表达对细胞的保护作用，及其与低氧诱导因子1α（HIF-1α）的关系。方法应用低氧气体（0．5％O2、94．5％N2、5％CO2）和化学模拟低氧（250μmol／LCoCl2）方法刺激HepG... 详细信息

目的探讨低氧条件下人肝癌细胞（HepG2）中血红素加氧酶1（HO-1）过表达对细胞的保护作用，及其与低氧诱导因子1α（HIF-1α）的关系。方法应用低氧气体（0．5％O2、94．5％N2、5％CO2）和化学模拟低氧（250μmol／LCoCl2）方法刺激HepG2细胞。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法，从mRNA水平上检测低氧条件下HO-1和HIF-1α的表达。采用Western bolt方法，从蛋白水平上检测低氧条件下HO-1和HIF-1α的表达及其相关性。采用四甲基偶氮唑蓝（MTF）方法，分析低氧刺激后细胞的存活率，以及低氧刺激同时抑制HO-1蛋白表达后细胞的存活率。采用超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒，检测低氧刺激细胞后总SOD的活性，以及抑制HO-1蛋白表达后细胞中总SOD的活性。结果低氧诱导的HepG2细胞中，HO-1mRNA和蛋白过表达。用锌原卟啉IX（ZnPPIX）抑制低氧条件下HO-1蛋白过表达，可导致HepG2细胞在低氧应激条件下存活率明显降低（P〈0．01）。低氧条件下，HepG2细胞中总SOD的活性显著升高（P〈0．05）；而在抑制低氧条件下HO-1蛋白过表达后，HepG2细胞中总SOD活性明显降低（P〈0．01）。低氧条件下，HIF-1α蛋白表达显著升高，抑制HIF—1α蛋白表达后，HO-1蛋白表达明显降低；而抑制低氧条件下HO-1的过表达后，HIF-1α蛋白表达没有明显改变。结论低氧诱导HepG2细胞中HO-1蛋白的过表达依赖或部分依赖HIF—1α；HO-1的过表达对HepG2细胞抵抗低氧应激发挥保护作用；HO-1的过表达对处于低氧应激条件下细胞的保护作用可能源于SOD。

关键词：血红素加氧酶1 低氧诱导因子1α HepG2细胞存活率超氧化物歧化酶

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血管内皮生长因子C及其受体3在人恶性黑色素瘤组织内的表达及意义

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解剖学报 2009年第2期40卷 219-222页

作者：马晶刘宝全王晓蕾宿菲李雪梅张雅芳哈尔滨医科大学解剖教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第二医院超声科哈尔滨150081 哈尔滨医科大学生物信息学系哈尔滨150081

目的观察人恶性黑色素瘤组织内血管内皮生长因子C（VEGF-C）及其受体3（VEGFR-3）的表达,探讨VEGF-C和VEGFR-3在恶性黑色素瘤淋巴管生成及淋巴道转移中的作用。方法取人恶性黑色素瘤组织48例（石蜡标本30例,术后新鲜组织18例）,应用免... 详细信息

目的观察人恶性黑色素瘤组织内血管内皮生长因子C（VEGF-C）及其受体3（VEGFR-3）的表达,探讨VEGF-C和VEGFR-3在恶性黑色素瘤淋巴管生成及淋巴道转移中的作用。方法取人恶性黑色素瘤组织48例（石蜡标本30例,术后新鲜组织18例）,应用免疫组织化学和RT-PCR技术,观察VEGF-C和VEGFR-3蛋白及mRNA在恶性黑色素瘤组织内的表达情况。以淋巴管内皮透明质酸受体（LYVE-1）标记淋巴管,计数恶性黑色素瘤组织淋巴管数密度。结果VEGF-C和VEGFR-3蛋白主要表达于恶性黑色素瘤细胞胞浆内,在肿瘤周围的血管和淋巴管内皮上也可见VEGFR-3蛋白表达,VEGF-C和VEGFR-3蛋白在淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织内的表达水平明显高于无淋巴结转移组（P〈0.05）。在18例新鲜恶性黑色素瘤中,淋巴结转移组VEGF-C和VEGFR-3mRNA的表达明显高于无淋巴结转移组（P〈0.01）。LYVE-1表达于肿瘤间质内的淋巴管内皮细胞,淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织中的淋巴管数密度（LMVD）为9.845±2.454,无淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织中的淋巴管数密度为6.534±2.193,淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织内的淋巴管数密度明显高于无淋巴结转移组（P〈0.01）。结论恶性黑色素瘤组织内VEGF-C表达明显增高,并通过上调其受体VEGFR-3的表达促进恶性黑色素瘤组织内淋巴管的生成,从而促进恶性黑色素瘤的淋巴道转移。

关键词：血管内皮生长因子C 淋巴管生成淋巴管内皮透明质酸受体恶性黑色素瘤免疫组织化学反转录-聚合酶链式反应人

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钴原卟啉对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

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中国药理学通报 2009年第3期25卷 352-356页

作者：朱晓洁梁飞王秀宏赵炜明高旭哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的研究钴原卟啉(COPP)预处理在H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用及分子机制。方法建立H9C2心肌细胞缺氧/复氧模型。在H9c2心肌细胞缺氧/复氧前用COPP预处理,并用锌原卟啉(Znpp),全反视黄酸(ATAR)分别抑制HO-1及Nrf2-ARE。检测细胞... 详细信息

目的研究钴原卟啉(COPP)预处理在H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用及分子机制。方法建立H9C2心肌细胞缺氧/复氧模型。在H9c2心肌细胞缺氧/复氧前用COPP预处理,并用锌原卟啉(Znpp),全反视黄酸(ATAR)分别抑制HO-1及Nrf2-ARE。检测细胞上清液中LDH、CK的水平变化;用RT-PCR法分析HO-1mRNA表达水平;Westernblot分析HO-1、Nrf2的蛋白表达水平。结果与缺氧/复氧组比,COPP预处理组中LDH和CK水平均明显降低,而HO-1mRNA水平,蛋白水平及细胞核的Nrf2蛋白水平均明显增加;Znpp的加入阻断了COPP预处理对心肌细胞的保护作用;ATAR的加入抑制了Nrf2在细胞核的聚集,进而抑制了COPP对HO-1的诱导。结论COPP预处理诱导H9c2心肌细胞HO-1过表达,具有抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用;其机制与Nrf2-ARE信号通路相关。

关键词：血红素加氧酶-1 钴原卟啉缺氧/复氧 Nrf2-ARE

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高糖环境下Trx1过表达对HBZY-1细胞中MMP9表达的影响

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中国生物化学与分子生物学报 2009年第5期25卷 465-472页

作者：房绍红刘心平靳玉宏贾慧婕那丽颖郑海霞周宏博哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属二院科研实验中心哈尔滨150086 哈尔滨医科大学生物技术实验教学中心哈尔滨150081

硫氧还蛋白1(thioredoxin1,Trx1)是细胞内一种重要的巯基-二硫键氧化还原酶,在细胞内氧化还原状态的调控及抵抗氧化应激损伤过程中发挥重要的作用.为了探讨高糖环境下Trx1过表达对肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells)HBZY-1中... 详细信息

硫氧还蛋白1(thioredoxin1,Trx1)是细胞内一种重要的巯基-二硫键氧化还原酶,在细胞内氧化还原状态的调控及抵抗氧化应激损伤过程中发挥重要的作用.为了探讨高糖环境下Trx1过表达对肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells)HBZY-1中基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)表达水平的影响,本实验采用脂质体介导的瞬时转染实现Trx1蛋白过表达;采用RT-PCR和明胶酶谱法检测HBZY-1中MMP9 mRNA及酶活性的变化;通过流式细胞仪检测细胞内活性氧的含量.实验结果显示,高糖状态下,细胞中MMP9的mRNA和酶活性分别在12 h、24 h、48 h时表达增加(P<0.05);HBZY-1细胞中转染正义Trx1组,MMP9 mRNA水平及MMP9酶活性,高糖组与正常糖组无明显差异(P>0.05),转染反义Trx1组和未转染组中,高糖组均比正常糖组表达增加,差异有统计学意义(P<0.01);细胞中活性氧含量,高糖作用12 h、24 h、48 h均较正常糖组明显增多(P<0.01),高糖环境下转染正义Trx1质粒较转染反义Trx1质粒,细胞中活性氧含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05).实验提示,高糖环境下,Trx1过表达对MMP9的抑制作用是通过减少细胞内活性氧含量来实现的.本实验为Trx1的抗氧化作用提供新的证据,也为继续探讨Trx1在糖尿病肾病的预防和治疗提供新的思路.

关键词：糖尿病肾病硫氧还蛋白1 基质金属蛋白酶9 活性氧

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鼠源成纤维细胞生长因子-21对脂肪细胞糖代谢的作用

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生物化学与生物物理进展 2009年第2期36卷 157-164页

作者：姜媛媛刘铭瑶任桂萍王文飞刘晓民李德山东北农业大学生命科学学院生物制药教研室哈尔滨150030 哈尔滨医科大学第一附属医院内分泌科哈尔滨150001

成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是FGF家族的成员之一.近年发现FGF-21是一种新的代谢调节因子.从小鼠肝脏克隆FGF-21cDNA,经测序正确后亚克隆至具有羟胺切割位点的小泛素相关修饰物表达载体上,转化宿主菌Rosetta,得到的转化子经IPTG诱导... 详细信息

成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是FGF家族的成员之一.近年发现FGF-21是一种新的代谢调节因子.从小鼠肝脏克隆FGF-21cDNA,经测序正确后亚克隆至具有羟胺切割位点的小泛素相关修饰物表达载体上,转化宿主菌Rosetta,得到的转化子经IPTG诱导后获得稳定、高效、可溶的表达产物.表达产物经羟胺切割、透析、复性、柱层析纯化后,在每升宿主菌中可获得4mg纯度为95%的成熟鼠源FGF-21蛋白,利用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(POD-GOD)法在小鼠3T3-L1脂肪细胞中进行生物学活性检测.结果表明,鼠源FGF-21具有促进脂肪细胞吸收葡萄糖的作用,短期作用(1h)与胰岛素相似,长期作用(8和12h)明显优于胰岛素.这一结果为以鼠源FGF-21为模型进一步研究FGF-21的生物学活性及其在糖代谢方面的作用机理奠定了基础.

关键词：成纤维细胞生长因子-21 糖尿病糖代谢 3T3-L1

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重组人内皮抑素提取方法的优化及其对膀胱癌的抑制作用

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中华医学杂志 2009年第46期89卷 3285-3288页

作者：任明华倪少滨陈起引徐万海王长林付宜鸣焦治兴麻立赵忠山刘兴汉哈尔滨医科大学第一临床医学院泌尿外科黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学第四临床医学院泌尿外科哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室

目的摸索重组人内皮抑素（rhES）蛋白的最佳表达条件。探索内皮抑素（ES）对膀胱癌实体肿瘤及细胞系的抑制作用。方法分别从不同异丙基-β-D硫代半乳糖苷（IPTG）浓度、加IPTG时机、表达时间等几个方面对rhES的蛋白表达条件进行摸索和... 详细信息

目的摸索重组人内皮抑素（rhES）蛋白的最佳表达条件。探索内皮抑素（ES）对膀胱癌实体肿瘤及细胞系的抑制作用。方法分别从不同异丙基-β-D硫代半乳糖苷（IPTG）浓度、加IPTG时机、表达时间等几个方面对rhES的蛋白表达条件进行摸索和优化。活性检测：（1）动物实验：观察内皮抑素对裸鼠皮下移植瘤的生长情况的影响。（2）细胞实验：MTT法、肿瘤细胞生长曲线观察内皮抑素对T-24膀胱癌细胞系的作用。结果rhES在大肠杆菌中的表达量占总菌体蛋白的58.65％，纯化后的蛋白纯度为96.22％。动物实验：rhES的抑瘤率为66.8％。细胞实验：MTT实验中rhES的半数抑制浓度IC50=22μg／ml；肿瘤细胞生长曲线表明第7天时rhES组的细胞数比对照组减少了58.75％。结论本实验所优化的最佳表达条件可获得高表达、高活性的rhEs蛋白，Es不但对裸鼠接种的膀胱癌有抑制作用，对膀胱癌细胞系也有抑制作用。

关键词：内皮抑素类膀胱肿瘤蛋白表达抗肿瘤

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