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寄生虫与医学昆虫学报 2025年第1期32卷 1-9+15页

作者：张明明郝瑜琬程喻力黄京京贾智惠诸欣平首都医科大学基础医学院病原生物学系寄生虫学教研室中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心WHO热带病合作中心科技部国家级热带病国际联合研究中心国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室

目的本研究旨在探索旋毛虫Ts87蛋白是否可以通过对小鼠NETs DNA骨架的降解作用实施宿主免疫逃避。方法首先，利用生物信息学软件分析Ts87蛋白的理化性质，通过序列同源性比对确认其属于核酸酶家族。随后，通过分子克隆及蛋白纯化技术... 详细信息

目的本研究旨在探索旋毛虫Ts87蛋白是否可以通过对小鼠NETs DNA骨架的降解作用实施宿主免疫逃避。方法首先，利用生物信息学软件分析Ts87蛋白的理化性质，通过序列同源性比对确认其属于核酸酶家族。随后，通过分子克隆及蛋白纯化技术，获得高纯度的Ts87蛋白，并证实其具有核酸酶活性。将Ts87与已知酶活性位点的人溶酶体DNaseⅡα以及结构已解析的泰国伯克霍尔德氏菌DNaseⅡ的一级序列进行比对，预测出其可能的活性位点，并通过定点突变技术获得Ts87酶活突变体，酶活性实验证实其功能。在体外检测小鼠骨髓中性粒细胞胞外核酸量及免疫荧光染色小鼠NETs,来证实Ts87蛋白酶活突变体降解NETs能力是否有所下降。最后，Ts87免疫小鼠后，通过免疫荧光染色小鼠肠道NETs的MPO与CitH3表达量，观察小鼠体内NETs的降解情况及虫荷。结果成功获得高纯度Ts87蛋白，并证实其具有核酸酶活性，在体外可以降解小鼠NETs,且Ts87突变体降解NETs的能力下降。体内实验结果表明，免疫小鼠产生抗Ts87抗体后，体内NETs降解减少，利于NETs对虫体攻击，使小鼠体内虫荷降低。结论旋毛虫能利用Ts87核酸酶逃避NETs的捕获，该研究为旋毛虫病的防治提供潜在的疫苗与药物靶点。

关键词：旋毛虫核酸酶Ts87 中性粒细胞胞外捕获网免疫逃避

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日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3疫苗免疫保护性的观察

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2003年第5期21卷 257-260页

作者：刘庆中沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室

目的　研究日本血吸虫 (中国大陆株 )重组信号蛋白 14 3 3 (rSj14 3 3 )作为血吸虫病疫苗分子的潜能 ,并探讨rSj14 3 3、rSjGST两种重组蛋白作为疫苗的协同作用及结核杆菌低分子量耐热多肽 (Mtb)激活的γδ T细胞在抗血吸虫病中... 详细信息

目的　研究日本血吸虫 (中国大陆株 )重组信号蛋白 14 3 3 (rSj14 3 3 )作为血吸虫病疫苗分子的潜能 ,并探讨rSj14 3 3、rSjGST两种重组蛋白作为疫苗的协同作用及结核杆菌低分子量耐热多肽 (Mtb)激活的γδ T细胞在抗血吸虫病中的作用。　方法　用SDS PAGE、电洗脱和透析的方法制备rSj14 3 3和rSjGST抗原 ,将两种抗原 (分别用福氏佐剂和Mtb为佐剂 )分别免疫BALB/c小鼠后 ,进行尾蚴攻击感染实验。在攻击感染 6wk后 ,剖杀小鼠计算各组的减虫率。　结果　各组的减虫率为rSj14 3 3 +福氏佐剂组 3 2 .2 0 % ,rSj14 3 3 +rSjGST +福氏佐剂组 3 1.10 % ,rSj14 3 3 +Mtb佐剂组 2 7.96% ,rSj14 3 3 +rSjGST +Mtb佐剂组 2 6.0 0 % ,rSjGST +Mtb佐剂组 2 7.10 % ;各组的减卵率分别为 (按以上组序 ) 5 0 .40 %、5 3 .3 0 %、5 1.10 %、5 8.60 %和 5 1.3 0 %。　结论　rSj14 3 3具有一定的抗血吸虫潜能 ,有可能成为抗日本血吸虫疫苗 ,但未见rSj14 3 3和rSjGST的协同作用 ;Mtb激活扩增的γδ T细胞在抗血吸虫免疫中的效果与福氏佐剂产生的免疫作用类似。

关键词：日本血吸虫重组信号蛋白 14-3-3 疫苗免疫保护性观察协同作用 γδ-T细胞

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弓形虫信号转导蛋白14-3-3基因的克隆与表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2003年第5期21卷 279-281页

作者：都建沈继龙汪学龙王维安徽医科大学病原生物学教研室

目的　体外扩增弓形虫RH株信号转导蛋白 14 3 3 (Toxo 14 3 3 )基因编码序列 ,构建原核表达质粒 ,并表达Toxo 14 3 3。　方法　收集、纯化弓形虫RH株速殖子 ,提取RNA ,在设计合成的引物中引入EcoRI和XhoI酶切位点。应用RT PCR扩增... 详细信息

目的　体外扩增弓形虫RH株信号转导蛋白 14 3 3 (Toxo 14 3 3 )基因编码序列 ,构建原核表达质粒 ,并表达Toxo 14 3 3。　方法　收集、纯化弓形虫RH株速殖子 ,提取RNA ,在设计合成的引物中引入EcoRI和XhoI酶切位点。应用RT PCR扩增Toxo 14 3 3基因片段 ,插入原核表达质粒 pET2 8a中 ,重组子双酶切、PCR和测序鉴定 ,转化大肠杆菌BL2 1并以异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。　结果　从弓形虫RH株RNA中扩增出 80 3bp的Toxo14 3 3基因片段 ,构建重组质粒 pET2 8a/14 3 3 ;IPTG诱导 ,SDS PAGE显示表达产物的大小约 3 0 .7kDa ,Western印迹鉴定为Toxo 14 3 3。　结论　成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了 14 3 3基因 ,构建了 pET2 8a/Toxo 14 3 3重组质粒 ,并获得高效表达。

关键词：弓形虫信号转导蛋白 14-3-3基因克隆表达

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医学院校大学生食源性寄生虫病知行信调查

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中国血吸虫病防治杂志 2019年第2期31卷 197-199,203页

作者：杨兴达李爽张任凡张小雪董春楠河北医科大学病原生物学教研室

目的了解医学院校大学生食源性寄生虫病知识、态度和行为现状,为制定健康教育方案提供依据。方法采用分层抽样的方法,2017年10-12月抽取河北省某医学院校内929名大学生,通过问卷调查了解其食源性寄生虫病相关知识知晓情况以及正确态度... 详细信息

目的了解医学院校大学生食源性寄生虫病知识、态度和行为现状,为制定健康教育方案提供依据。方法采用分层抽样的方法,2017年10-12月抽取河北省某医学院校内929名大学生,通过问卷调查了解其食源性寄生虫病相关知识知晓情况以及正确态度和行为形成情况等。结果不同专业大学生对食源性寄生虫病的了解程度和关注程度等方面存在差异(P均<0.05),非医学专业学生对食源性寄生虫病的知晓率和关注程度均低于医学专业学生,已接受过医学寄生虫学教育的学生对食源性寄生虫病的知晓率和关注程度明显高于未接受相关教育者。不同专业大学生在不喜猎奇方面的健康行为形成率差异有统计学意义(P<0.05),非医学专业学生健康行为形成率相对较低;不同专业大学生在建议他人不吃可能感染食源性寄生虫的食物、会改变自身可能存在的与食源性寄生虫感染相关的特殊喜好和生活习惯方面存在差异(P均<0.05),医学专业学生正确态度形成率相对较高。结论接受过医学寄生虫学教育的学生对食源性寄生虫病知识的知晓率、正确态度和行为形成率相对较高,在高校开设食源性寄生虫病相关课程十分必要。

关键词：医学寄生虫学食源性寄生虫病医学生知行信

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匹多莫德抑制地塞米松诱导的小鼠隐性弓形虫感染的活化

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第5期31卷 385-389页

作者：王为为霍星星孔兰婷张倩陈鹤李敏沈继龙安徽病原生物学省级实验室.安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的观察匹多莫德(PT)对经地塞米松(Dem)诱导小鼠隐性弓形虫感染活化的抑制作用。方法96只BALB/c小鼠每鼠灌胃感染弓形虫TgCtwh6株包囊30个,感染后4周随机均分为3组:Dem组(A组)腹腔注射地塞米松6 mg/(kg·d),同时灌胃生理盐水200μl... 详细信息

目的观察匹多莫德(PT)对经地塞米松(Dem)诱导小鼠隐性弓形虫感染活化的抑制作用。方法96只BALB/c小鼠每鼠灌胃感染弓形虫TgCtwh6株包囊30个,感染后4周随机均分为3组:Dem组(A组)腹腔注射地塞米松6 mg/(kg·d),同时灌胃生理盐水200μl;Dem+PT组(B组)腹腔注射地塞米松6 mg/(kg·d),同时灌胃匹多莫德100 mg/(kg·d);对照组(C组)腹腔注射生理盐水200μl,同时灌胃生理盐水200μl。上述药物使用时均溶于200μl生理盐水中。3组小鼠均连续注射和灌胃5周。自治疗开始后每周各组随机处死3只小鼠,取小鼠眼窦血、脑组织和脾组织备用。荧光定量PCR检测小鼠虫血症出现时间,以及脑组织虫荷和弓形虫DNA拷贝数。流式细胞术(FCM)对小鼠脾单个核细胞Th1、Th2和调节性T细胞(Treg)进行检测。使用微量样本多指标流式蛋白定量术试剂盒(CBA)检测小鼠血清中Th1和Th2类细胞因子的表达情况。结果 A组小鼠在受治第2周时,虫血症再次出现,5周内有50%小鼠出现虫血症,死亡17只。而B组小鼠在受治第3周时,虫血症再次出现,5周内有25%小鼠出现虫血症,死亡7只。C组小鼠未见虫血症出现,生存状态良好。A组小鼠连续给予Dem 21 d后,脑组织中弓形虫DNA拷贝数为(209±12)×109,而B组接受PT治疗后弓形虫DNA拷贝数为(62±10)×109,前者显著高于后者(P<0.01);FCM检测显示,小鼠给予Dem 21 d后,小鼠脾脏Th1、Th2和Treg细胞占CD4+细胞百分比,A组的分别为(4.0±1.5)%、(0.6±0.1)%和(5.0±0.9)%,B组分别为(6.1±1.0)%、(0.5±0.2)%和(7.0±1.2)%,A组和B组小鼠Th1和Treg细胞百分比差异有统计学意义(P<0.01)。血清细胞因子检测结果显示,小鼠血清Th1型细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),A组的[(2.2±0.7)pg/ml、(20.1±5.0)pg/ml]均低于B组的[(3.6±0.6)pg/ml、(32.0±8.0)pg/ml](P<0.01)。Th2型相关细胞因子白细胞介素-4(IL-4)和IL-10,A组的[(2.6±0.4)pg/ml、(39.0±6.0)pg/ml]与B组的[(2.7±0.7)pg/ml、(40.0±8.0)pg/ml]相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论匹多莫德能够显著激活地塞米松诱导的免疫抑制,抑制地塞米松诱导的小鼠弓形虫隐性感染活化,其免疫调节机制有Th1和Treg细胞的参与。

关键词：弓形虫隐性感染匹多莫德地塞米松

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日本血吸虫表膜蛋白Tetraspanin 2-A基因的克隆、表达与鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第1期26卷 21-24页

作者：王阳阳刘淼朱绍春任翠平沈际佳安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的扩增并表达日本血吸虫表膜蛋白(SjTsp2-A)基因SjTsp2。方法根据与曼氏血吸虫表膜蛋白SmT-sp2基因同源的SjTsp2序列(编号为AY810722)设计引物,体外扩增目的蛋白基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,转化至大肠埃希菌(***)BL21株,... 详细信息

目的扩增并表达日本血吸虫表膜蛋白(SjTsp2-A)基因SjTsp2。方法根据与曼氏血吸虫表膜蛋白SmT-sp2基因同源的SjTsp2序列(编号为AY810722)设计引物,体外扩增目的蛋白基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,转化至大肠埃希菌(***)BL21株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用纯化的重组蛋白免疫小鼠,ELISA检测其血清抗体效价,蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定其免疫反应性。结果PCR扩增获得SjTsp2基因大环核苷酸序列为228bp,与曼氏血吸虫表膜蛋白(SmTsp2)的氨基酸序列同源性为52%。SjTsp2基因亚克隆入pET28a并可溶性表达,免疫小鼠可产生高滴度(最高1∶32000)特异性抗体。Western blotting分析结果表明,纯化的SjTsp2-A蛋白能被疫区居民血吸虫抗体阳性者血清、急性及慢性血吸虫病患者血清识别,与健康人血清无反应。结论日本血吸虫表膜蛋白基因SjTsp2在体外获得表达,其表达蛋白具有一定的抗原性。

关键词：日本血吸虫膜蛋白四跨膜超家族蛋白基因抗原性

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巨噬细胞在血吸虫病肝纤维化过程中的作用研究进展

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中国血吸虫病防治杂志 2015年第6期27卷 669-673页

作者：谢园园徐元宏储德勇沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

血吸虫病肝纤维化过程中,促纤维生成和促纤维溶解因素不平衡导致细胞外基质大量沉积。肝脏巨噬细胞和星状细胞的激活是肝脏纤维化的两个关键事件,两者形成一个复杂的调节纤维化平衡的网络。本文对巨噬细胞分泌的纤维化相关细胞因子的功... 详细信息

血吸虫病肝纤维化过程中,促纤维生成和促纤维溶解因素不平衡导致细胞外基质大量沉积。肝脏巨噬细胞和星状细胞的激活是肝脏纤维化的两个关键事件,两者形成一个复杂的调节纤维化平衡的网络。本文对巨噬细胞分泌的纤维化相关细胞因子的功能及其对星状细胞的激活、不同表型和不同激活状态的巨噬细胞在肝纤维化过程中的作用进行了综述,旨在为免疫调节防治肝纤维化研究提供参考。

关键词：血吸虫病肝纤维化巨噬细胞肝星状细胞

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日本血吸虫体表蛋白Tetraspanin 2-A核酸疫苗的构建及其对小鼠的免疫试验

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第6期27卷 534-536页

作者：张鹏张薇娜任翠平刘淼沈际佳安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

采用PCR法扩增日本血吸虫体表四跨膜家族蛋白2-A(SjTsp2-A)基因,构建重组质粒pcDNA3.1(+)/SjT-sp2-A,将其转至大肠埃希菌DH5α制备DNA疫苗pcDNA3.1(+)/SjTsp2-A。24只BALB/c小鼠均分3组,每鼠于左股四头肌注射0.5mg/ml盐酸布比卡因50μl。次日,A组同法注射DNA疫苗pcDNA3.1(+)/SjTsp2-A,B组注射重组质粒pcDNA3.1(+)/SjGST,C组注射空质粒pcDNA3.1(+)。注射剂量均为100μg/只。每隔2周注射1次,共3次,末次免疫后2周各组均经腹部皮下感染日本血吸虫尾蚴40±2条/鼠,45d后剖杀,计数减虫率和减卵率。ELISA检测抗体效价,A组化分析股四头肌局部组织蛋白表达情况。结果A组的平均检虫数和每克肝组织虫卵数均显著低于B组和C组(P值均<0.05),A组的减虫率和减卵率分别为44.4%和28.4%。A组血清抗体效价高达1∶25600。A、B两组局部组织均有特异性蛋白表达。DNA候选疫苗pcDNA3.1(+)/SjTsp2-A能诱导小鼠产生一定的免疫保护作用。

关键词：日本血吸虫体表蛋白核酸疫苗免疫保护

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外源性野生型p53基因在两个肺腺癌细胞系中表达及对p16和p21基因的调控

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中华医学遗传学杂志 2003年第5期20卷 409-412页

作者：金焰阎承慧吴焱刘艳张贵寅李璞傅松滨哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室 150086

目的　探讨 p 53基因在肺癌细胞周期中的作用机制 ,以及裸鼠体内基因治疗的作用。方法　用以腺病毒为载体的野生型 p53基因 p Ad CMV-p53 (Ad-p53 )感染高转移肺腺癌 95D细胞系和高浸润肺腺癌 L -18系 ,对感染前后各细胞系的细胞生长曲... 详细信息

目的　探讨 p 53基因在肺癌细胞周期中的作用机制 ,以及裸鼠体内基因治疗的作用。方法　用以腺病毒为载体的野生型 p53基因 p Ad CMV-p53 (Ad-p53 )感染高转移肺腺癌 95D细胞系和高浸润肺腺癌 L -18系 ,对感染前后各细胞系的细胞生长曲线、p 53、p16和 p2 1基因的表达以及调亡进行分析。此外 ,用 Ad-p53对两细胞系进行了裸鼠体内感染实验。结果　体外实验中 ,导入 p 53基因细胞系的生长均得到抑制 ,并且最终都出现凋亡 ,感染后的细胞中 p53和 p 2 1基因的 m RNA表达量明显增高 ,p16基因的m RNA表达量则无明显变化。p53基因治疗后的裸鼠 ,其中 95D细胞系的肿瘤全部消失 ;L-18细胞系的腹腔注射组肿瘤全部消失 ,而皮下注射组无明显变化。结论　 p53基因是一个有效的肿瘤抑制基因 ,其诱导细胞凋亡的途径与 p16基因不同。腺病毒介导的野生型

关键词：肺腺癌基因表达基因转染肿瘤抑制基因 p53 pl6 p21

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柯萨奇B组病毒VP1胞质表达系统的建立

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第1期19卷 46-48页

作者：陈洪刘晶星陈淑云何平胡宝瑜李振红上海第二医科大学病原生物学教研室 200025

目的　利用T7RNA聚合酶介导的胞质表达系统增加目的抗原的表达量 ,提高基因疫苗的免疫效果。方法　 (1)构建带有T7启动子、脑心肌炎病毒 (EMCV) 5′非编码区和柯萨奇B组病毒衣壳蛋白VP1的质粒pT7EMCVP1。将该质粒和编码T7RNA酶的pAR 313... 详细信息

目的　利用T7RNA聚合酶介导的胞质表达系统增加目的抗原的表达量 ,提高基因疫苗的免疫效果。方法　 (1)构建带有T7启动子、脑心肌炎病毒 (EMCV) 5′非编码区和柯萨奇B组病毒衣壳蛋白VP1的质粒pT7EMCVP1。将该质粒和编码T7RNA酶的pAR 3132共转染HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞 ;(2 )将上述质粒分别转化减毒鼠伤寒沙门菌SL72 0 7,让带有不同质粒的两种载体细菌共感染小鼠腹腔巨噬细胞。结果　 (1)经共转染 ,在HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞中 ,目的抗原VP1在胞质中的表达比单独转染真核表达质粒pcDNA3VP1增加 2～ 4倍 ;(2 )两种质粒载体细菌感染小鼠巨噬细胞后 ,目的抗原VP1也能在细胞中较好表达。结论　pT7EMCVP1和pAR 3132能在HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞胞质中表达。

关键词： VP1 小鼠腹腔巨噬细胞柯萨奇B组病毒 HeLa细胞抗原质粒共转染胞质种质表达量

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