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细胞与分子免疫学杂志 2007年第1期23卷 52-55页

作者：徐欣孙博穆莉莉王广友金连弘李呼伦哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省高校重点实验室黑龙江哈尔滨150086

目的:探讨骨髓基质干细胞(BMSC)移植治疗实验性自身免疫性神经炎(experimentalautoimmuneneuritis,EAN)的疗效以及相应的作用机制。方法:用P0180-199多肽与弗氏完全佐剂的混合液免疫Lewis大鼠,建立EAN动物模型。治疗组在免疫后第10天,... 详细信息

目的:探讨骨髓基质干细胞(BMSC)移植治疗实验性自身免疫性神经炎(experimentalautoimmuneneuritis,EAN)的疗效以及相应的作用机制。方法:用P0180-199多肽与弗氏完全佐剂的混合液免疫Lewis大鼠,建立EAN动物模型。治疗组在免疫后第10天,尾静脉回输荧光染料PKH26标记的BMSC(2×106个细胞/只),通过临床评估、免疫组化及ELISA等方法,研究了BMSC对EAN的治疗作用。结果:回输的BMSC能向脱髓鞘神经组织周围迁移,减轻脱髓鞘的病理改变和炎性细胞浸润。与对照组比较,治疗组CD4+和CD8+T细胞的浸润显著减少(P<0.05),血清中IFN-γ和TNF-α的水平明显降低(P<0.05),培养上清中IL-4的水平显著增加(P<0.05)。结论:BMSC静脉移植治疗EAN有一定的疗效。BMSC通过调节细胞因子的表达逆转Th1/Th2型细胞之间的失衡而发挥治疗作用,并能够抑制T细胞活化增殖。

关键词：实验性自身免疫性神经炎骨髓基质干细胞 Th1/Th2型细胞细胞因子

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实验性自身免疫性神经炎中NKR-P1+细胞对IL-12和IL-18协同作用的影响

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中国生物制品学杂志 2012年第4期25卷 407-411,421页

作者：李呼伦闫彬彬李国忠刘希君王广友徐欣孙博曹京燕王丹丹王曙晨金连弘哈尔滨医科大学神经生物学教研室哈尔滨医科大学神经生物学黑龙江省高校重点实验室哈尔滨150081

目的探讨实验性自身免疫性神经炎(Experimental autoimmune neuritis,EAN)中IL-12和IL-18的协同作用以及NKR-P1+细胞对该作用的影响。方法用200μl免疫乳剂(含230μg特异性肽段P2 53-78、2 mg结核菌素、100μl PBS和100μl弗氏不完全佐... 详细信息

目的探讨实验性自身免疫性神经炎(Experimental autoimmune neuritis,EAN)中IL-12和IL-18的协同作用以及NKR-P1+细胞对该作用的影响。方法用200μl免疫乳剂(含230μg特异性肽段P2 53-78、2 mg结核菌素、100μl PBS和100μl弗氏不完全佐剂)免疫Lewis大鼠,建立EAN动物模型,在发病高峰期取出大鼠淋巴结,制备单核细胞悬液,在NKR-P1+细胞存在或不存在的条件下,分别或同时与IL-12(20 ng/ml)、IL-18(25 ng/ml)共培养,同时加入20μg/ml P2 53-78刺激,孵育24 h后,以1×107个活细胞/只鼠回输至正常Lewis大鼠体内,每天观察发病情况,并进行临床评分以及组织病理学检测,采用ELISA法检测细胞培养上清中IFNγ、TNF-α和IL-4的分泌水平,淋巴细胞增殖试验检测P2 53-78特异性淋巴细胞的增殖反应。结果 P2 53-78特异性淋巴细胞在IL-12或IL-18单独刺激下,可引发中等发病程度的EAN;而在IL-12和IL-18共同刺激下,引发EAN的发病程度明显加重;当删除淋巴细胞中的NKR-P1+细胞后,可引发严重的EAN;而NKR-P1+细胞删除后的P2 53-78特异性淋巴细胞与IL-12和IL-18共培养,其自身反应活性得到了抑制,并低表达IFNγ,从而抑制Th1细胞的分化。结论IL-12和IL-18的共同刺激能够增强P2 53-78特异性淋巴细胞的自身反应性;IL-12和IL-18能够诱导出高水平的IFNγ,从而促进Th1细胞的分化,其作用部分是通过NKR-P1+细胞实现的。

关键词：实验性自身免疫性神经炎白细胞介素-12 白细胞介素-18 协同作用 NKR-P1+细胞

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实验性自身免疫性脑脊髓炎发病过程中淋巴细胞相关因子及转录因子的表达

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中国生物制品学杂志 2014年第1期27卷 36-41页

作者：刘宇杨金凤詹晓霞王心悦孙博哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省高校神经生物学重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)发病过程中淋巴细胞相关因子及转录因子的表达情况。方法将C56BL/6小鼠分为免疫髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55)特异性免疫乳剂的EAE组与免疫未加MOG35-55多肽的免疫乳剂的CFA组,每组16只,分别取100μl免疫乳剂,经腋窝皮下免疫小鼠,于免疫当天及第2天经小鼠尾静脉注射200 ng百日咳毒素(pertussis toxin,PT),建立实验动物模型,并于免疫后进行临床评分;分别于免疫后第7、14和21天取小鼠的淋巴结和脾脏,RT-PCR法检测淋巴细胞相关因子及转录因子IL-17、IFNγ、RAR相关孤核受体γ(RAR-related orphan receptor gamma,RORγ)和T盒子转录因子be(tT-box transcription factor bet,T-bet)基因mRNA转录水平的变化。结果成功建立EAE模型,从免疫后第7天起出现临床症状,EAE组临床评分明显高于CFA组(P均<0.05);免疫后第7、14和21天,EAE组淋巴结和脾脏淋巴细胞中IL-17、IFNγ、RORγ、T-bet基因mRNA转录水平均明显高于CFA组。结论 IL-17、IFNγ、RORγ和T-bet参与EAE疾病的发生发展,且表达量的增加与疾病加重有相关性。

关键词：实验性自身免疫性脑脊髓炎淋巴细胞白介素-17 干扰素γ RAR相关孤核受体γ T盒子转录因子bet

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B细胞在MOG_(35-55)诱导的小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用

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中国生物制品学杂志 2013年第3期26卷 340-345页

作者：詹晓霞杨金凤刘宇王心悦谢晓丽孙博李呼伦哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省高校神经生物学重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨B细胞参与MOG35-55诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encelphalomyelitis,EAE)小鼠模型的可能机制。方法采用MOG35-55肽段免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型;采用临床评分检测EAE模型建立情况,HE和快蓝染色观... 详细信息

目的探讨B细胞参与MOG35-55诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encelphalomyelitis,EAE)小鼠模型的可能机制。方法采用MOG35-55肽段免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型;采用临床评分检测EAE模型建立情况,HE和快蓝染色观察脊髓炎性细胞浸润和脱髓鞘状况,流式细胞术检测B细胞活化程度,免疫组化法检测脾组织生发中心的形成,ELISA法检测IgG1、IgG2a和IgG2b的分泌水平。结果成功建立了MOG35-55诱导的EAE小鼠模型,EAE组临床评分明显高于弗氏完全佐剂(Complete Freund adjuvant,CFA)组(P<0.001),EAE组小鼠脊髓可见明显的炎性细胞浸润和脱髓鞘斑块;在EAE组发病起始期(免疫后第5天和第8天),外周免疫器官活化B细胞表达水平明显高于CFA组(P<0.01);在发病高峰期(免疫后第15天)EAE组小鼠脾中形成生发中心,而CFA组未见生发中心形成,且外周血抗MOG35-55抗体分泌水平明显高于CFA组(P<0.005)。结论 MOG35-33肽段可以诱导B细胞活化,进而可能通过发挥体液免疫作用介导EAE疾病的发生。

关键词： B淋巴细胞实验性自身免疫性脑脊髓炎多发性硬化

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转化生长因子-β在骨髓间充质干细胞治疗实验性自身免疫性重症肌无力机制中的作用

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中国生物制品学杂志 2010年第3期23卷 225-229页

作者：刘江恒韩志娟周明言李娜刘静穆莉莉孔庆飞李呼伦哈尔滨医科大学神经生物教研室黑龙江省神经生物学重点实验室哈尔滨150081

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)在骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)机制中的作用。方法分离培养健康Lewis大鼠BMSCs,并进行大量体外扩增;以大鼠来源的乙酰胆碱受体(R-AChR)2次免疫Lewis大鼠,建立EAMG模型... 详细信息

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)在骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)机制中的作用。方法分离培养健康Lewis大鼠BMSCs,并进行大量体外扩增;以大鼠来源的乙酰胆碱受体(R-AChR)2次免疫Lewis大鼠,建立EAMG模型;第2次免疫的同时,经尾静脉移植BMSCs,1×107个/只,依据Lennon评分标准,进行体重测量和临床体征评定。并通过体外实验进一步探讨TGF-β在治疗EAMG过程中的具体机制。结果BMSCs移植明显缓解了EAMG的临床症状,临床评分及体重变化差异均有统计学意义,表明治疗有效;体外实验结果显示,BMSCs能通过TGF-β的分泌影响AChR特异性Th17/Treg细胞亚群的分布及其相关因子的分泌,以anti-TGF-β抗体封闭后,这种调节作用在一定程度上被抑制。结论BMSCs通过细胞因子TGF-β,能在一定程度上调节AChR特异性Th17/Treg细胞亚群的平衡,从而起到治疗EAMG的作用。

关键词：转化生长因子-β 骨髓间充质干细胞实验性自身免疫性重症肌无力

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IL-12和IL-18在实验性自身免疫性神经炎中的协同作用机制

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中国免疫学杂志 2007年第10期23卷 950-953,957页

作者：穆莉莉孙博王菁华赵恺吕桂香金连弘李呼伦哈尔滨医科大学神经生物教研室哈尔滨医科大学神经生物学黑龙江省高校重点实验室哈尔滨150081

目的:研究IL-12和IL-18分别在实验性自身免疫性神经炎(EAN)中的调节机制以及IL-12与IL-18的协同作用。方法:建立P0180-199特异性T细胞系。分别用IL-12或IL-18或者IL-12和IL-18进行体外干预,将不同处理组的T细胞回输到正常的大鼠体内,建... 详细信息

目的:研究IL-12和IL-18分别在实验性自身免疫性神经炎(EAN)中的调节机制以及IL-12与IL-18的协同作用。方法:建立P0180-199特异性T细胞系。分别用IL-12或IL-18或者IL-12和IL-18进行体外干预,将不同处理组的T细胞回输到正常的大鼠体内,建立过继免疫的EAN动物模型。应用国际分级标准和临床评分对发病鼠进行临床评定;通过免疫组化检测不同组EAN鼠坐骨神经淋巴细胞浸润;ELISA法检测相关细胞因子的变化。结果:①在IL-12和IL-18共同干预的条件下,特异性T细胞TNF-α和IFN-γ的产生均增加;②与IL-12或IL-18组相比,IL-12+IL-18组大鼠临床发病明显加重,发病时间提前;③在坐骨神经标本中,与对照组相比,IL-12+IL-18组CD4+淋巴细胞浸润数量较多,而IL-12和IL-18组CD4+淋巴细胞浸润较少。结论:经IL-12和IL-18体外干预的P0180-199特异性T淋巴细胞,通过过继免疫给正常大鼠后,诱导出严重的EAN动物模型,表现出协同增强作用。

关键词：实验性自身免疫性神经炎 IL-12 IL-18 协同作用

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程序性死亡受体1在HIV感染和防治中的作用研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第6期41卷 473-478页

作者：刘晓晓庄敏凌虹王甲业哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室150081

程序性死亡受体1(programmed cell death-1,PD-1)是细胞表面的一种免疫抑制分子,与配体PD-L1或PD-L2相互作用,负向调控细胞和体液免疫应答。人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染后,PD-1在感染者外周血淋巴细胞表面... 详细信息

程序性死亡受体1(programmed cell death-1,PD-1)是细胞表面的一种免疫抑制分子,与配体PD-L1或PD-L2相互作用,负向调控细胞和体液免疫应答。人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染后,PD-1在感染者外周血淋巴细胞表面表达上调,高水平表达的PD-1不仅影响病毒对靶细胞的易感性和宿主的抗病毒免疫应答能力,还影响抗逆转录病毒治疗效果。体外阻断PD-1/PD-L通路可改善宿主细胞对HIV的特异性免疫应答水平,已作为辅助手段用于抗病毒治疗和HIV疫苗的研究中。本文概述了PD-1在HIV感染和防治中的研究进展。

关键词：程序性死亡受体1 人类免疫缺陷病毒感染防治

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骨髓间充质干细胞对大鼠脑胶质瘤C6细胞系分化的影响

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中国生物制品学杂志 2010年第8期23卷 793-796页

作者：王小冬穆莉莉戢玉环孙博王广友韩志娟刘婷婷李呼伦王菁华哈尔滨医科大学附属第二医院急诊科哈尔滨150086 哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省高校神经生物学重点实验室哈尔滨150081

目的探讨骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)对大鼠脑胶质瘤C6细胞系分化的影响及其相关机制。方法用Transwell小室共培养BMSCs与C6细胞,采用细胞计数法检测C6细胞增殖水平;流式细胞术检测C6细胞的细胞周期;免疫荧光... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)对大鼠脑胶质瘤C6细胞系分化的影响及其相关机制。方法用Transwell小室共培养BMSCs与C6细胞,采用细胞计数法检测C6细胞增殖水平;流式细胞术检测C6细胞的细胞周期;免疫荧光与免疫组化法分别检测波形蛋白(vimentin)和胶质纤维酸性蛋白(Glia lfibrillary acidic protein,GFAP)的表达;生化法检测谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase,GS)的活性。结果 BMSCs对C6细胞的增殖具有抑制作用;与BMSCs进行双层培养72h的C6细胞出现G0/G1期细胞周期阻滞,双层培养组的C6细胞GFAP表达明显增强,同时vimentin表达减弱,并且这两种分化标志物在细胞内的分布及排列发生了改变;双层培养组C6细胞内GS活性升高。结论 BMSCs能诱导C6细胞向成熟星形胶质细胞分化,可能与BMSCs分泌的某些细胞因子有关。

关键词：间质干细胞 C6细胞系细胞分化

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辅助性CD4^+ T细胞亚群失衡在实验性自身免疫性重症肌无力大鼠发病机制中的作用

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中国生物制品学杂志 2010年第9期23卷 930-934页

作者：王小冬孙博王菁华孔庆飞谢晓丽周明言李娜李呼伦穆莉莉哈尔滨医科大学附属第二医院急诊科哈尔滨150086 哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省高校神经生物学重点实验室哈尔滨150081

目的研究实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)大鼠发病过程中辅助性CD4+T细胞亚型的变化。方法将Lewis大鼠分为完全弗氏佐剂(CFA)早、晚期发病时对照相和EAMG早期(初次免疫后13d)、高峰期(初... 详细信息

目的研究实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)大鼠发病过程中辅助性CD4+T细胞亚型的变化。方法将Lewis大鼠分为完全弗氏佐剂(CFA)早、晚期发病时对照相和EAMG早期(初次免疫后13d)、高峰期(初次免疫后50d)发病时相4组,各组分别给予相应的药物后,于发病早期和高峰期分离淋巴细胞,采用流式细胞术检测各组大鼠淋巴细胞中Th1、Th2、Th17和Treg细胞的比例,ELISA法检测淋巴细胞培养上清中各种细胞因子水平。结果在EAMG发病的早期时相,与CFA组比较,EAMG组Th1、Th2、Th17细胞的比例下降,而Treg细胞比例上升;淋巴细胞培养上清中IFNγ和IL-4水平显著下降(P<0.05),IL-6水平显著升高(P<0.05),IL-17和TGF-β水平略升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。在EAMG发病的高峰期,与CFA组比较,EAMG组Th1和Th17细胞的比例显著上升(P<0.05),而Th2和Treg细胞的比例显著下降(P<0.05),淋巴细胞培养上清中IFNγ和IL-17水平显著上升(P<0.05),IL-4和TGF-β水平显著下降(P<0.01),IL-6水平略上升,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论在EAMG发生过程中,4种辅助性CD4+T细胞亚型之间的平衡被打破,晚期时相中Th1和Th17细胞比例上升,而Th2和Treg细胞比例下降。

关键词：重症肌无力,自身免疫性,实验性 Th1细胞 Th2细胞 Th17细胞 Treg细胞

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正交试验在人乳头瘤病毒16型E2蛋白原核表达优化中的应用

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生物医学工程学杂志 2011年第5期28卷 988-991页

作者：商庆龙马延秀郭志伟李立群郝美丽孙宇辉魏兰兰谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省高校病原学重点实验室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第一医院妇产科哈尔滨150001

鉴定人乳头瘤病毒(HPV)16型E2蛋白的重组表达菌株,通过正交试验快速优化诱导表达条件,增加目的蛋白的表达量。应用SDS-PAGE及Western blot分析鉴定表达后的蛋白。选取诱导时间、诱导剂浓度、细菌密度OD600和诱导温度共4个主要外部因素... 详细信息

鉴定人乳头瘤病毒(HPV)16型E2蛋白的重组表达菌株,通过正交试验快速优化诱导表达条件,增加目的蛋白的表达量。应用SDS-PAGE及Western blot分析鉴定表达后的蛋白。选取诱导时间、诱导剂浓度、细菌密度OD600和诱导温度共4个主要外部因素。采用四因素两水平正交试验设计,以单位体积内HPV16 E2目的蛋白含量作为检测指标,结果用SPSS 13.0软件进行统计分析。结果表明,HPV16 E2菌株鉴定正确。HPV16 E2蛋白表达主要以不溶性蛋白为主,主要影响因素是诱导剂浓度和诱导温度,最佳诱导条件为37℃、1.0 mmol/L IPTG和OD600为1.0的条件下诱导7 h,正交试验对分子生物学反应的影响因素分析和条件优化有借鉴意义。

关键词：人乳头瘤病毒16型E2蛋白正交试验原核表达条件优化

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