检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2008年第11期21卷 929-932页

作者：史立军王菁华徐克达曹振远孙博王广友王丹丹孔庆飞李呼伦哈尔滨医科大学附属第一医院哈尔滨150001 哈尔滨医科大学神经生物学教研室哈尔滨医科大学神经生物省重点实验室哈尔滨150081 黑龙江省双鸭山煤炭总医院消化内科双鸭山155100

目的探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)对大鼠肝纤维化细胞(CFSCs)凋亡的影响。方法常规培养BMSCs、CFSCs和大鼠肝细胞系BRL,并双层共培养CFSCs与BMSCs。用ELISA方法检测BMSCs培养上清中NGF、HGF和TGF-β1的浓度;RT-PCR检测与BMSCs共培养的CFSC... 详细信息

目的探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)对大鼠肝纤维化细胞(CFSCs)凋亡的影响。方法常规培养BMSCs、CFSCs和大鼠肝细胞系BRL,并双层共培养CFSCs与BMSCs。用ELISA方法检测BMSCs培养上清中NGF、HGF和TGF-β1的浓度;RT-PCR检测与BMSCs共培养的CFSCs及BRL的p75表达;TUNEL法检测BMSCs分泌的细胞因子封闭后对CFSCs凋亡的影响。结果BMSCs可分泌NGF、HGF、TGF-β1等细胞因子,且随着培养时间的延长,其分泌量逐渐增多;BRL不表达p75,CFSCs表达p75,且与BMSCs共培养后,其表达量增高;分别用p75的阻断剂TAT-Pep5、HGF的中和抗体和JNK的阻滞剂sp600125作用后,BMSCs诱导CFSCs凋亡的比例均明显降低;封闭TGF-β1后,BMSCs诱导CFSCs凋亡的比例增高。结论BMSCs能够通过分泌NGF和HGF促进CFSCs的凋亡,这种凋亡诱导作用依赖于JNK的活性,并且在封闭TGF-β1后增强。

关键词：骨髓基质干细胞肝纤维化细胞细胞因子凋亡大鼠

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重组人乳头瘤病毒16型E6蛋白的表达、纯化和动物免疫效果分析

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国际免疫学杂志 2008年第4期31卷 244-247页

作者：商庆龙王燕陈思佳李承刚韩聪邵迪李茉谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室150081

目的诱导表达人乳头瘤病毒16型（HPVl6）E6蛋白，制备可溶性蛋白，并通过动物免疫进行免疫效果评估。方法采用IPTG诱导pQE30-HPVl6E6／BL21（DE3）重组菌株，表达产物经SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定。提取包涵体进行变性处理，变性蛋... 详细信息

目的诱导表达人乳头瘤病毒16型（HPVl6）E6蛋白，制备可溶性蛋白，并通过动物免疫进行免疫效果评估。方法采用IPTG诱导pQE30-HPVl6E6／BL21（DE3）重组菌株，表达产物经SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定。提取包涵体进行变性处理，变性蛋白经Ni^2＋金属螯合层析纯化，将纯化产物用复性透析方法处理以获取可溶性蛋白。免疫BalB／c小鼠，检测血清抗体、CD4^＋／CD8^＋和IFN-γ。结果诱导后重组菌有相对分子量18000蛋白质表达，以不溶性包涵体为主要表达方式。目的蛋白可与HPV16E6多克隆抗体识别，纯化和透析处理后得到可溶性的蛋白。小鼠免疫后血清抗体滴度升高，淋巴细胞CD4^＋／CD8^＋升高，IFN-γ未见升高。结论成功表达了HPV16E6蛋白，同时处理包涵体并制备了可溶性目的蛋白。目的蛋白可刺激小鼠体内产生有效的免疫反应，该蛋白的成功制备为患者血清抗体的检测和肿瘤细胞杀伤的免疫研究奠定了坚实基础。

关键词：人乳头瘤病毒16型 E6蛋白纯化免疫

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5’-RACE法扩增抗人乳头瘤病毒16型L1蛋白单克隆抗体轻链可变区基因及序列分析

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国际免疫学杂志 2008年第4期31卷 247-250页

作者：王燕商庆龙陈思佳邵迪韩聪李茉谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室150081

目的获得抗人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白单克隆抗体的轻链可变区（VL）基因并分析序列。方法从分泌抗HPVl6L1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA，逆转录形成CD-NA，用5’-RACE策略扩增抗体轻链可变区基因，经琼脂糖凝胶电泳鉴... 详细信息

目的获得抗人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白单克隆抗体的轻链可变区（VL）基因并分析序列。方法从分泌抗HPVl6L1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA，逆转录形成CD-NA，用5’-RACE策略扩增抗体轻链可变区基因，经琼脂糖凝胶电泳鉴定，并测序及进行序列分析。结果VL基因全长336bp，编码112个氨基酸，基因测序结果符合小鼠抗体轻链可变区特征。结论5’-RACE法成功获得了抗HPV16L1蛋白的单克隆抗体轻链可变区基因的真实序列，为基因工程抗体研究奠定了良好基础。

关键词：人乳头瘤病毒16型轻链可变区单克隆抗体

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骨髓基质干细胞抑制大鼠肝纤维化细胞生长的实验研究

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国际免疫学杂志 2008年第6期31卷 405-407页

作者：王淑芳唐印华薄挽澜徐克达曹振远王菁华李呼伦史立军哈尔滨医科大学附属第一医院消化内科 150001 黑龙江省双鸭山煤炭总医院消化内科 155100 哈尔滨医科大学附属第一医院介入科 150001 哈尔滨医科大学神经生物学教研室哈尔滨医科大学神经生物省重点实验室150081

目的探讨骨髓基质干细胞（BMSCs）对大鼠肝纤维化细胞（CFSCs）生长的抑制作用。方法采用不同培养时间BMSCs的培养上清培养大鼠正常肝细胞系（BRL）以及CFSCs，MTr法检测CFSCs的增殖情况；Transwell建立BMSCs与CFSCs的双层共培养体系，... 详细信息

目的探讨骨髓基质干细胞（BMSCs）对大鼠肝纤维化细胞（CFSCs）生长的抑制作用。方法采用不同培养时间BMSCs的培养上清培养大鼠正常肝细胞系（BRL）以及CFSCs，MTr法检测CFSCs的增殖情况；Transwell建立BMSCs与CFSCs的双层共培养体系，经TUNEL法检测与BMSCs按不同比例进行培养后的CFSCs凋亡情况。结果BMSCs培养上清作用于CFSCs后，其增殖能力明显低于对照组，有统计学意义（P〈0．05），并表现出剂量依赖性，而对BRL没有作用。CFSCs与BMSCs按不同比例共培养后，随着BMSCs比例的增加，CFSCs调亡率上升。结论BMSCs能够不可逆的抑制CFSCs生长而不影响正常的肝细胞，这种生长抑制是通过诱导CFSCs的凋亡发生的。

关键词：骨髓基质干细胞肝纤维化细胞生长抑制调亡

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氧糖剥夺条件下PC12细胞RAGE的表达及对其损伤的影响

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中国生物制品学杂志 2007年第11期20卷 793-797页

作者：徐望舒翟东旭赵鑫赵恺王丹丹王广友孙博王菁华李呼伦哈尔滨医科大学神经生物教研室黑龙江省高校神经生物重点实验室哈尔滨150081

目的探讨大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞在氧糖剥夺(OGD)的条件下,晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达及其对PC12细胞损伤的影响。方法PC12细胞随机分为3组:OGD培养组(PC12细胞在无血清无糖的DMEM培养液中厌氧培养);封闭RAGE的OGD培养组... 详细信息

目的探讨大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞在氧糖剥夺(OGD)的条件下,晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达及其对PC12细胞损伤的影响。方法PC12细胞随机分为3组:OGD培养组(PC12细胞在无血清无糖的DMEM培养液中厌氧培养);封闭RAGE的OGD培养组(PC12细胞在加5μg/mlRAGE抗体的无血清无糖DMEM培养液中厌氧培养);对照组(PC12细胞在无血清无糖DMEM培养液中培养)。免疫组化法检测RAGE表达。收集细胞上清液,检测乳酸脱氢酶(LDH)活性和一氧化氮(NO)含量,并对细胞死亡率进行检测。结果在OGD条件下PC12细胞培养8、11、20h均有RAGE表达,与对照组相比表达均明显增加,OGD培养组与封闭RAGEOGD培养组相比,LDH活性差异显著。随着厌氧时间的延长,PC12细胞死亡率明显增高,封闭RAGEOGD培养组与OGD培养组相比,PC12细胞死亡率明显降低。NO含量差异无显著意义,但与对照组相比差异显著。结论在OGD条件下,PC12细胞RAGE表达增高。RAGE的表达对细胞的损伤起促进作用。

关键词： PC12细胞晚期糖基化终产物受体氧糖剥夺细胞损伤

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骨髓基质干细胞治疗实验性自身免疫性神经炎的研究

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第1期23卷 52-55页

作者：徐欣孙博穆莉莉王广友金连弘李呼伦哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省高校重点实验室黑龙江哈尔滨150086

目的:探讨骨髓基质干细胞(BMSC)移植治疗实验性自身免疫性神经炎(experimentalautoimmuneneuritis,EAN)的疗效以及相应的作用机制。方法:用P0180-199多肽与弗氏完全佐剂的混合液免疫Lewis大鼠,建立EAN动物模型。治疗组在免疫后第10天,... 详细信息

目的:探讨骨髓基质干细胞(BMSC)移植治疗实验性自身免疫性神经炎(experimentalautoimmuneneuritis,EAN)的疗效以及相应的作用机制。方法:用P0180-199多肽与弗氏完全佐剂的混合液免疫Lewis大鼠,建立EAN动物模型。治疗组在免疫后第10天,尾静脉回输荧光染料PKH26标记的BMSC(2×106个细胞/只),通过临床评估、免疫组化及ELISA等方法,研究了BMSC对EAN的治疗作用。结果:回输的BMSC能向脱髓鞘神经组织周围迁移,减轻脱髓鞘的病理改变和炎性细胞浸润。与对照组比较,治疗组CD4+和CD8+T细胞的浸润显著减少(P<0.05),血清中IFN-γ和TNF-α的水平明显降低(P<0.05),培养上清中IL-4的水平显著增加(P<0.05)。结论:BMSC静脉移植治疗EAN有一定的疗效。BMSC通过调节细胞因子的表达逆转Th1/Th2型细胞之间的失衡而发挥治疗作用,并能够抑制T细胞活化增殖。

关键词：实验性自身免疫性神经炎骨髓基质干细胞 Th1/Th2型细胞细胞因子

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IL-12和IL-18在实验性自身免疫性神经炎中的协同作用机制

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中国免疫学杂志 2007年第10期23卷 950-953,957页

作者：穆莉莉孙博王菁华赵恺吕桂香金连弘李呼伦哈尔滨医科大学神经生物教研室哈尔滨医科大学神经生物学黑龙江省高校重点实验室哈尔滨150081

目的:研究IL-12和IL-18分别在实验性自身免疫性神经炎(EAN)中的调节机制以及IL-12与IL-18的协同作用。方法:建立P0180-199特异性T细胞系。分别用IL-12或IL-18或者IL-12和IL-18进行体外干预,将不同处理组的T细胞回输到正常的大鼠体内,建... 详细信息

目的:研究IL-12和IL-18分别在实验性自身免疫性神经炎(EAN)中的调节机制以及IL-12与IL-18的协同作用。方法:建立P0180-199特异性T细胞系。分别用IL-12或IL-18或者IL-12和IL-18进行体外干预,将不同处理组的T细胞回输到正常的大鼠体内,建立过继免疫的EAN动物模型。应用国际分级标准和临床评分对发病鼠进行临床评定;通过免疫组化检测不同组EAN鼠坐骨神经淋巴细胞浸润;ELISA法检测相关细胞因子的变化。结果:①在IL-12和IL-18共同干预的条件下,特异性T细胞TNF-α和IFN-γ的产生均增加;②与IL-12或IL-18组相比,IL-12+IL-18组大鼠临床发病明显加重,发病时间提前;③在坐骨神经标本中,与对照组相比,IL-12+IL-18组CD4+淋巴细胞浸润数量较多,而IL-12和IL-18组CD4+淋巴细胞浸润较少。结论:经IL-12和IL-18体外干预的P0180-199特异性T淋巴细胞,通过过继免疫给正常大鼠后,诱导出严重的EAN动物模型,表现出协同增强作用。

关键词：实验性自身免疫性神经炎 IL-12 IL-18 协同作用

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骨髓基质干细胞对肝细胞与肝纤维化细胞增殖影响的体外研究

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中华肝脏病杂志 2007年第9期15卷 681-684页

作者：史立军李双星孙博王菁华李呼伦金连弘哈尔滨医科大学附属第一医院消化内科 150001 哈尔滨医科大学神经生物省高校重点实验室黑龙江省卫生厅

目的探讨微环境对骨髓基质干细胞（BMSCs）分化的影响以及BMSCs对肝纤维化细胞（CFSC）和肝细胞增殖的作用。方法分离、培养大鼠原代BMSCs和肝细胞,用PKH26荧光标记BMSCs,将标记后的BMSCs与肝细胞/CFSC进行接触和非接触共培养,用抗白蛋... 详细信息

目的探讨微环境对骨髓基质干细胞（BMSCs）分化的影响以及BMSCs对肝纤维化细胞（CFSC）和肝细胞增殖的作用。方法分离、培养大鼠原代BMSCs和肝细胞,用PKH26荧光标记BMSCs,将标记后的BMSCs与肝细胞/CFSC进行接触和非接触共培养,用抗白蛋白抗体/抗α、平滑肌抗体对BMSCs进行检测;BMSCs条件培养液与CFSC共培养,倒置显微镜下计数CFSC的细胞数量变化。结果BMSCs与肝细胞共培养72h,白蛋白染色均出现阳性,且接触共培养的BMSCs白蛋白染色阳性率高于非接触共培养（P〈0.01）。肝细胞与BMSCs非接触共培养48h后,肝细胞的数量明显多于对照组（P〈0.01）。BMSCs与CVSC共培养体系中BMSCs的形态无明显变化,且αSMA染色未出现阳性。BMSCs条件培养液能抑制CFSC的增殖,作用时间越长,抑制作用越明显（P〈0.01）。结论肝细胞形成的局部微环境能诱导BMSCs向肝样细胞分化,BMSCs能够促进肝细胞生长并对CFSC的增殖有明显的抑制作用。

关键词：干细胞肝细胞共同培养肝纤维化细胞

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人乳头瘤病毒16型L1蛋白表达及其单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

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中国地方病学杂志 2007年第1期26卷 98-100页

作者：王燕商庆龙谷鸿喜韩聪邵迪李茉李承刚哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室150081

目的表达并纯化重组人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白，建立分泌抗HPV16 L1单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。方法以基因工程表达HPV16L1蛋白。用Ni—NTA技术进行纯化后免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经含次黄嘌... 详细信息

目的表达并纯化重组人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白，建立分泌抗HPV16 L1单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。方法以基因工程表达HPV16L1蛋白。用Ni—NTA技术进行纯化后免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经含次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶（HAT）的选择培养基及有限稀释法进行克隆化，用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，对获得的杂交瘤细胞株染色体进行计数．同时测定细胞培养上清mAb的效价。结果筛选出2株可分泌抗HPV16 L1 mAb的杂交瘤细胞，命名为AE3和AG7，染色体数分别为130条和98条。2株杂交瘤细胞AE3和AG7培养上清的效价分别为1：5120和1：80。结论成功建立了2株可分泌抗HPV 16 L1 mAb的杂交瘤细胞，为进一步研制HPV感染检测试剂盒提供实验基础。

关键词：宫颈肿瘤乳头状瘤病毒,人 L1蛋白抗体,单克隆

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NK1.1^+细胞在实验性自身免疫性重症肌无力疾病发病中的免疫调节作用

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第8期23卷 737-740页

作者：李呼伦王广友李国忠孙博赵吉成孔庆飞金连弘汪丹丹华中科技大学同济医学院附属同济医院湖北武汉430030 哈尔滨医科大学神经生物学教研室哈尔滨医科大学神经生物省高校重点实验室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第一临床医院黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨市国营香坊木材综合加工厂职工医院黑龙江哈尔滨150030

目的:探讨NK1.1+细胞在实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)疾病发病中的作用以及其调节机制。方法:腹腔注射抗小鼠NK1.1单克隆抗体(mAb)清除C57BL/6(B6)小鼠体内的NK1.1+细胞,建立NK1.1+细胞缺陷小鼠模型;用AChR+CFA免疫小鼠诱发EAMG,通... 详细信息

目的:探讨NK1.1+细胞在实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)疾病发病中的作用以及其调节机制。方法:腹腔注射抗小鼠NK1.1单克隆抗体(mAb)清除C57BL/6(B6)小鼠体内的NK1.1+细胞,建立NK1.1+细胞缺陷小鼠模型;用AChR+CFA免疫小鼠诱发EAMG,通过Lennon等的肌无力评分标准分析各组小鼠之间EAMG的发病情况和病情严重程度;应用ELISA法检测单核细胞(MNC)上清液中IFN-γ、IL-4的分泌和表达;应用放射免疫测定法检测血清中AChRIgG含量;用抗IFN-γmAb中和小鼠体内IFN-γ,观察发病情况及血清中AChRIgG的含量。结果:NK1.1+细胞缺陷的小鼠同正常免疫组小鼠相比,发病率和病情严重程度均明显降低(发病率:36%vs86%,P<0.01);免疫后NK1.1+细胞缺陷组和正常免疫组小鼠相比,发病率和病情严重程度无明显统计差异;NK1.1+细胞缺陷降低IFN-γ的表达,但是IL-4的分泌和表达无统计学意义;NK1.1+细胞缺失降低AChR特异性抗体的产生;中和体内IFN-γ后,EAMG的发病率和病情严重程度均减轻,并且AChR特异性抗体减少。结论:NK1.1+细胞在EAMG发病初期发挥重要作用。在EAMG发病中,NK1.1+细胞可以使AChR特异性T细胞产生IFN-γ,增加AChR特异性抗体产生,从而加重EAMG的发病。

关键词： NK1.1^+细胞 EAMG AChR IFN-γ

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