检索结果-内蒙古大学图书馆

国际免疫学杂志 2015年第6期38卷 581-585页

作者：黄鸿鑫宋武琦张凤民哈尔滨医科大学微生物教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室150086

自身抗体是可以识别位于细胞内、细胞表面或细胞外的自身抗原的免疫球蛋白，其产生是自身免疫病重要的特征之一。现已发现，自身抗体除具有致病作用，参与自身免疫病的发生发展外，部分自身抗体的可变区具有酶的催化活性，可通过催化底... 详细信息

自身抗体是可以识别位于细胞内、细胞表面或细胞外的自身抗原的免疫球蛋白，其产生是自身免疫病重要的特征之一。现已发现，自身抗体除具有致病作用，参与自身免疫病的发生发展外，部分自身抗体的可变区具有酶的催化活性，可通过催化底物水解，发挥调节作用，还有一部分自身抗体具有治疗潜能。因此，自身抗体作用与相关机制的阐明，对进一步加深对自身抗体的理解具有重要意义。

关键词：自身抗体细胞损伤催化酶细胞调控

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博尔纳病病毒X基因真核表达载体的构建及鉴定

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中国微生态学杂志 2015年第4期27卷 379-381,385页

作者：孙岚刘翠玉纪羽婷李玉军李爱梅魏兰兰张凤民哈尔滨医科大学医学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省感染与免疫创新团队黑龙江省普通高校病原学重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的构建博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)X蛋白真核表达载体,为BDV X蛋白的功能研究奠定基础。方法从BDV持续感染的人少突胶质瘤细胞(oligodentrocyte,OL)的总RNA中,通过逆转录和PCR获得BDV X基因的完整序列,将其连接到pc DNA6-m... 详细信息

目的构建博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)X蛋白真核表达载体,为BDV X蛋白的功能研究奠定基础。方法从BDV持续感染的人少突胶质瘤细胞(oligodentrocyte,OL)的总RNA中,通过逆转录和PCR获得BDV X基因的完整序列,将其连接到pc DNA6-myc-His(A)载体上,转化至***感受态细菌后,提取质粒筛选阳性克隆,通过PCR法和DNA测序进行鉴定,并转染至OL细胞,通过Western blot方法验证重组蛋白的表达。结果测序鉴定目的基因序列正确插入至pc DNA6-myc-His(A)载体的酶切位点,PCR扩增的基因片段大小与目的基因相同,Western blot证明转染至OL细胞后可表达BDV X-His融合蛋白。结论成功构建了博尔纳病病毒X基因真核表达载体pc DNA6-myc-His(A)-BDV X。

关键词：博尔纳病病毒基因重组序列测定蛋白免疫印迹

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结核分枝杆菌Rv0073基因在大肠杆菌中的表达及纯化

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国际免疫学杂志 2015年第3期38卷 224-228页

作者：孙高翔潘新灵崔佳奕凌虹李迪哈尔滨医科大学医学微生物学教研室、黑龙江省感染与免疫重点实验室、黑龙江省感染与免疫创新团队、黑龙江省普通高校病原学重点实验室 150081

目的构建结核分枝杆菌（MTB） Rv0073基因原核表达载体并进行表达和纯化.方法以MTB H37Rv基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应（PCR）扩增目的基因片段,构建原核表达载体pET26b-Rv0073,经测序确定无误后转化至大肠杆菌（***）感受态细胞... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌（MTB） Rv0073基因原核表达载体并进行表达和纯化.方法以MTB H37Rv基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应（PCR）扩增目的基因片段,构建原核表达载体pET26b-Rv0073,经测序确定无误后转化至大肠杆菌（***）感受态细胞BL21中.用聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）方法检测重组蛋白表达,检测异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导不同时间、不同温度条件下重组蛋白表达量.采用His镍磁珠进行外源蛋白小量纯化.结果成功构建重组表达质粒,重组蛋白经IPTG诱导后,2h开始明显表达且表达量无时间依赖性,在不同温度诱导下,重组蛋白的表达量随温度的增高而减少.重组蛋白以包涵体形式存在,经His镍磁珠纯化后获得重组蛋白.结论成功构建并表达Rv0073蛋白,为后续Rv0073的大量纯化及其功能研究奠定了基础.

关键词：结核分枝杆菌 Rv0073 表达纯化

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线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体的构建及鉴定

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国际免疫学杂志 2015年第2期38卷 120-123页

作者：刘翠玉李玉军孙岚纪羽婷张庆猛魏兰兰张凤民哈尔滨医科大学医学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省感染与免疫创新团队黑龙江省普通高校病原学重点实验室150081

目的构建线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体。方法通过聚合酶链反应（PCR）的方法扩增获得线粒体抗病毒信号蛋白基因的完整序列，进而纯化回收后连接到pMD^TM18-T载体上，将pcDNA6／***载体和带有目的片段的pMD^TM18-T载体同时进行双酶... 详细信息

目的构建线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体。方法通过聚合酶链反应（PCR）的方法扩增获得线粒体抗病毒信号蛋白基因的完整序列，进而纯化回收后连接到pMD^TM18-T载体上，将pcDNA6／***载体和带有目的片段的pMD^TM18-T载体同时进行双酶切，酶切产物过夜连接转化至大肠杆菌JMl09，挑取阳性克隆pcDNA6／myc—HisA—MAVS扩增后，提取重组质粒；利用PCR和核酸测序验证线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体构建的正确性；应用Western blotting的方法检测融合蛋白的表达。结果线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体构建成功，并且该载体能够在OL细胞中表达融合蛋白。结论成功构建线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体，为进一步研究该蛋白的功能和作用机制奠定基础。

关键词：线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体序列分析

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实验性自身免疫性脑脊髓炎发病过程中淋巴细胞相关因子及转录因子的表达

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中国生物制品学杂志 2014年第1期27卷 36-41页

作者：刘宇杨金凤詹晓霞王心悦孙博哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省高校神经生物学重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)发病过程中淋巴细胞相关因子及转录因子的表达情况。方法将C56BL/6小鼠分为免疫髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55)特异性免疫乳剂的EAE组与免疫未加MOG35-55多肽的免疫乳剂的CFA组,每组16只,分别取100μl免疫乳剂,经腋窝皮下免疫小鼠,于免疫当天及第2天经小鼠尾静脉注射200 ng百日咳毒素(pertussis toxin,PT),建立实验动物模型,并于免疫后进行临床评分;分别于免疫后第7、14和21天取小鼠的淋巴结和脾脏,RT-PCR法检测淋巴细胞相关因子及转录因子IL-17、IFNγ、RAR相关孤核受体γ(RAR-related orphan receptor gamma,RORγ)和T盒子转录因子be(tT-box transcription factor bet,T-bet)基因mRNA转录水平的变化。结果成功建立EAE模型,从免疫后第7天起出现临床症状,EAE组临床评分明显高于CFA组(P均<0.05);免疫后第7、14和21天,EAE组淋巴结和脾脏淋巴细胞中IL-17、IFNγ、RORγ、T-bet基因mRNA转录水平均明显高于CFA组。结论 IL-17、IFNγ、RORγ和T-bet参与EAE疾病的发生发展,且表达量的增加与疾病加重有相关性。

关键词：实验性自身免疫性脑脊髓炎淋巴细胞白介素-17 干扰素γ RAR相关孤核受体γ T盒子转录因子bet

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脑缺血发生后IP-10趋化NK细胞通过血脑屏障

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哈尔滨医科大学学报 2014年第6期48卷 449-454,459页

作者：张瑶冯涛祝鸿雁王广友王丹丹李呼伦哈尔滨医科大学神经生物学教研室神经生物学省重点实验室黑龙江哈尔滨150081 黑龙江省医院神经内科黑龙江哈尔滨150030

目的探讨脑缺血发生后IP-10对NK细胞的趋化作用。方法体内实验:免疫荧光染色观察永久性大脑中动脉栓塞小鼠模型(p MCAO)脑组织中NK细胞浸润情况以及IP-10、CXCR3表达情况;流式细胞术检测p MCAO小鼠模型脑中NK细胞浸润数目;RT-PCR检测p M... 详细信息

目的探讨脑缺血发生后IP-10对NK细胞的趋化作用。方法体内实验:免疫荧光染色观察永久性大脑中动脉栓塞小鼠模型(p MCAO)脑组织中NK细胞浸润情况以及IP-10、CXCR3表达情况;流式细胞术检测p MCAO小鼠模型脑中NK细胞浸润数目;RT-PCR检测p MCAO小鼠模型脑中IP-10表达。体外实验:建立体外血脑屏障;ELISA检测氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)6 h后内皮细胞和神经细胞上清IP-10表达;将体外血脑屏障分成NK组、NK+IP-10 blockade组,上层加入BSA-FITC,OGD6 h后荧光分光光度计检测血脑屏障通透性,流式细胞术检测NK细胞迁移数目;向纯化的NK细胞中分别加入IP-10(10 ng/m L)、IP-10(50 ng/m L)和IP-10(100 ng/m L),流式细胞术检测CXCR3表达几何平均荧光强度。结果 p MCAO小鼠模型脑中有NK细胞浸润且表达CXCR3;NK细胞浸润缺血侧多于非缺血侧,12 h达到高峰(P<0.05)后逐渐下降,96 h开始略有升高;p MCAO小鼠模型脑中有IP-10表达,并于12 h达到高峰(P<0.001)后逐渐下降。体外实验:OGD后神经细胞表达IP-10较内皮细胞明显增多(P<0.001);与NK组相比,NK+IP-10 blockade组NK细胞迁移数目明显减少(P<0.05);NK细胞表达CXCR3水平随IP-10作用浓度升高而升高。结论 1NK细胞参与了脑缺血损伤过程;2脑缺血发生时IP-10通过与NK细胞表面表达的CXCR3结合,趋化NK细胞进入脑组织,并存在剂量依赖性。

关键词：脑缺血 NK细胞 IP-10 血脑屏障

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病毒与细胞的微生态学研究进展

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中国微生态学杂志 2014年第7期26卷 863-865,868页

作者：赵宏付英梅宋武琦张凤民哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086 黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室黑龙江哈尔滨150086

微生态学(microecology)是细胞水平或分子水平的生态学,它是研究微生物群的结构和功能,以及微生物与其宿主相互依赖、相互制约关系的科学。病毒(virus)是一种比细菌还要微小和简单的非细胞形态微生物(acellular microorganism),不仅可... 详细信息

微生态学(microecology)是细胞水平或分子水平的生态学,它是研究微生物群的结构和功能,以及微生物与其宿主相互依赖、相互制约关系的科学。病毒(virus)是一种比细菌还要微小和简单的非细胞形态微生物(acellular microorganism),不仅可寄生于动植物体的组织细胞表面或内部,还可寄生于细菌、真菌等微生物内部。作为宿主以及细胞内的寄生体,病毒除引起宿主多种类型的感染外,还可参与宿主组织细胞的微生态系的组成,赋予细胞干扰相关病毒增殖与复制、抵抗特定病毒感染感染的作用,并能引起宿主细胞产生特定毒素、获得新抗原性等改变。本研究通过微生态学角度,对病毒与细胞的相互关系及病毒与细胞微生态学在医学上的作用作一综述。

关键词：微生态病毒细胞的微生态学

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CD8^+CD122^+T细胞在脑缺血过程中作用的研究

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现代生物医学进展 2014年第1期14卷 77-81页

作者：刘婷婷张玥王丹丹张彤帅张瑶王菁华孙博尚小煜李呼伦王广友哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省高校神经生物学重点实验室黑龙江哈尔滨150081 牡丹江市第二人民医院耳鼻喉科黑龙江牡丹江157005

目的:探讨CD8+CD122+T细胞在脑缺血过程中的作用及其机制。方法:线栓法建立小鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO);激光共聚焦显微镜检测小鼠脑缺血组织中CD8+CD122+T细胞浸润情况;流式细胞仪检测脑缺血组织中CD8+CD122+T细胞/CD3+T细胞的比例... 详细信息

目的:探讨CD8+CD122+T细胞在脑缺血过程中的作用及其机制。方法:线栓法建立小鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO);激光共聚焦显微镜检测小鼠脑缺血组织中CD8+CD122+T细胞浸润情况;流式细胞仪检测脑缺血组织中CD8+CD122+T细胞/CD3+T细胞的比例及脾和胸腺中CD8+CD122+T细胞数量变化;RT-PCR方法检测CD8+CD122+T细胞对氧糖剥夺(Oxygen-glucose deprivation,OGD)条件下星形胶质细胞表达TNF-α,IL-1β,IFN-γ的影响。结果:各时间点脑缺血组织中均有CD8+CD122+T细胞浸润,且随脑缺血时间延长,缺血侧脑组织中CD8+CD122+T细胞/CD3+T细胞比例逐渐增加,5 d和7 d组差异显著,与非缺血侧相比,P5d<0.05,P7d<0.05;MCAO小鼠脾及胸腺中CD8+CD122+T细胞呈现先增高后降低的趋势。星形胶质细胞经OGD处理后,与对照组相比,IFN-γ、TNF-α、IL-1β表达显著增高,PIFN-γ<0.01、PTNF-α<0.001、PIL-1β<0.01;CD122-blocked组与CD8+组相比,IFN-γ、TNF-α、IL-1β表达明显增高,PIFN-γ<0.05、PTNF-α<0.05、PIL-1β<0.01;CD8+组与HBSS组相比,IFN-γ表达降低,P<0.05;IL-1β表达有降低的趋势。结论:CD8+CD122+T细胞在脑缺血过程中发挥保护性作用,其保护作用通过CD122抑制星形胶质细胞TNF-α,IL-1β,IFN-γ炎症因子表达实现的。

关键词：脑缺血 CD8+CD122+T细胞氧糖剥夺星形胶质细胞

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B细胞在MOG_(35-55)诱导的小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用

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中国生物制品学杂志 2013年第3期26卷 340-345页

作者：詹晓霞杨金凤刘宇王心悦谢晓丽孙博李呼伦哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省高校神经生物学重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨B细胞参与MOG35-55诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encelphalomyelitis,EAE)小鼠模型的可能机制。方法采用MOG35-55肽段免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型;采用临床评分检测EAE模型建立情况,HE和快蓝染色观... 详细信息

目的探讨B细胞参与MOG35-55诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encelphalomyelitis,EAE)小鼠模型的可能机制。方法采用MOG35-55肽段免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型;采用临床评分检测EAE模型建立情况,HE和快蓝染色观察脊髓炎性细胞浸润和脱髓鞘状况,流式细胞术检测B细胞活化程度,免疫组化法检测脾组织生发中心的形成,ELISA法检测IgG1、IgG2a和IgG2b的分泌水平。结果成功建立了MOG35-55诱导的EAE小鼠模型,EAE组临床评分明显高于弗氏完全佐剂(Complete Freund adjuvant,CFA)组(P<0.001),EAE组小鼠脊髓可见明显的炎性细胞浸润和脱髓鞘斑块;在EAE组发病起始期(免疫后第5天和第8天),外周免疫器官活化B细胞表达水平明显高于CFA组(P<0.01);在发病高峰期(免疫后第15天)EAE组小鼠脾中形成生发中心,而CFA组未见生发中心形成,且外周血抗MOG35-55抗体分泌水平明显高于CFA组(P<0.005)。结论 MOG35-33肽段可以诱导B细胞活化,进而可能通过发挥体液免疫作用介导EAE疾病的发生。

关键词： B淋巴细胞实验性自身免疫性脑脊髓炎多发性硬化

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β-内酰胺酶抑制剂研究进展

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中国抗生素杂志 2013年第11期38卷 805-809页

作者：蔡文辉张文莉付英梅张凤民哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室黑龙江省医学科学院细菌学研究室哈尔滨150086 黑龙江中医药大学微生物与免疫学教研室哈尔滨150040

β-内酰胺酶抑制剂能抑制耐药菌产生的β-内酰胺酶,常与β-内酰胺类抗生素联合使用,能使抗生素中的β-内酰胺环免遭水解,保护抗生素的抗菌作用。1976年,英国从链霉菌中发现第一个β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸,其能抑制部分广谱和超广谱β... 详细信息

β-内酰胺酶抑制剂能抑制耐药菌产生的β-内酰胺酶,常与β-内酰胺类抗生素联合使用,能使抗生素中的β-内酰胺环免遭水解,保护抗生素的抗菌作用。1976年,英国从链霉菌中发现第一个β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸,其能抑制部分广谱和超广谱β-内酰胺酶,常与阿莫西林联合应用,可使阿莫西林对某些细菌的MIC值降低。随着抗生素的大量使用以及具有β-内酰胺酶相关的耐药性的细菌的增加,许多β-内酰胺酶抑制剂相继被发现。根据β-内酰胺酶抑制剂的结构,主要将其分为含有β-内酰胺环结构的抑制剂和不含β-内酰胺环结构的抑制剂。本文就目前国内外β-内酰胺酶抑制剂的研究现状进行综述。

关键词： β-内酰胺酶酶抑制剂细菌耐药

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